医学实验室的量值溯源性标准操作程序

SOP_04-1 医学实验室的量值溯源性标准操作程序

一、目的：确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠

的结果报告。

二、适用范围：检验项目的量值溯源。

三、操作人员：检验科授权工作人员

四、操作步骤：

溯源性(traceability)：

通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。[VIM：1993，定义6.10]溯源顺序往往采用溯源等级图(也称溯源性体系表)来描述，用以表明测量仪器的计量特性与给定量的测量基准之间的关系，是溯源性的证据。建立溯源等级图的目的，是要对所进行的测量在其溯源到计量基准的途径中，尽可能减少环节和降低测量不确定度，并能给出适当的置信度。为实现溯源性，用等级图的方式应给出：对不同等级测量标准的选择；等级间的连接及其平行分支；有关测量标准特性的重要信息，如测量范围、准确度等级或最大允许误差等；溯源链中比较用的装置和方法。

ISO 15189：2003(E)文件中的5.6.3指出：应设计并实施一套对测量系统的校准，真实性的检定程序，以保证测量结果可溯源到SI单位，或可参比到一个自然常数或其他规定的参考值。如果以上都无法实现，还可采用参加适当的实验室间的比对计划；使用相应的参考物质(有证书说明其材料的特性)；将供应商或制造商提供的关于试剂、程序或检验系统的溯源性的说明形成文件等。

“不间断的比较链”在医学实验室的化学测量中，它是指通过不同级别的测量程序，参考物质和校正物而实现的连续测量，用一个测量程序为某种物质定值，该物质用做下一级测量程序的校准物，依此类推。比较链也称溯源链。

“规定的参考标准”为参考测量程序和参考物质。与参考标准的联系可以是直接的，也可以通过中间测量程序和校准物间接进行，即溯源链可长可短，但理论上应使溯源链尽可能地短。

“不确定度”是评价溯源性的指标。检测系统与参考系统的联系有好有坏，故在给出溯源性时也要溯源性过程每一步的不确定度，以说明最终结果与参考系统联系的质量。溯源等级图应注意区别测量标准本身的复现量值的不确定度，以及经该测量标准校准所得结果的不确定度。对于普通等级的测量仪器，也可以指出其最大允许误差。等级图中所反映的信息，应与有关的法规、规程或规范的要求相一致。

1 可溯源至SI单位的分析物量值溯源：

1.1 可溯源到SI的分析物：物质结构清楚、均一(纯)、有明确分子量的，试验结果以 mol／L

表示的物质称分析物(analyte)。大约有100个临床化学项目可以应用参考测量系统，追踪到SI的分析参考物参考测量系统

注：(+)指潜在可利用性

分析物溯源中，决定性方法(一级参考测量程序)和二级参考测量程序及其研究单位见表

一级和二级参考测量程序，参考物及研究机构组成了参考系统(reference system)。 1.2 可溯源至SI 单位的分析物量值溯源方法：见图。

SI 单位

一级参考测量程序

一级参考物质

二级参考测量程序

二级参考物质

制造商的检测系统(master 试剂)

制造商主(master)校正物

制造商常规检测系统

制造商常规(routine)校正物

用户常规测量程序

生物源性样品

结果

溯源性 不确定度

溯源性链自上而下各环节的溯源性逐渐降低，而不确定性则逐渐增加。量值溯源中采用决定性方法(相当于一级参考测量程序)和参考方法(相当于二级参考测量程序)，在医学实验

室质量保证工作中发挥重要作用。

现场方法

现场应用

1.4 酶催化浓度的量值溯源性：酶催化浓度的量值是活性，而不是质量。目前多用连续监测

法利用下述公式计算酶活性：

△A/min T 60s

IU／L(37℃)= ×106··

NADH ·1cm S V t

ε340nm

实践表明，该法受众多因素影响，例如：仪器性能方面的波长准确性、加样准确性与精密度、温控准确性与稳定性等；试剂方面的样品体积分数、底物浓度、pH、缓冲液组成、运输、储存和使用环节等，造成同一样本在不同年限的同一检测系统的检测结果的差异，在不同检测系统中这种差异更显著。与溯源性的目标——超时空上的一致性的要求相距甚远。

据此IFCC和IRMM指定了EN ISO 17511的垂直标准ISO 15783体外诊断器具——生物源样本中量的测量——酶催化浓度校准物和质控物定值的计量学溯源性。

规定“每立方米溶液中每秒钟能够转化的每摩尔底物量”并用(mol/L·s)/m3或kat/m3表示是SI的导出单位，为酶催化浓度溯源链的最高等级。

IFCC工作组／分委员会组织多家国际实验室合作，对过去推荐的ALT，AST，Amy，CK，GGT，LD测量程序做了修改和优化，制定出了一级参考测量程序。对一级参考测量程序有明确的定义、描述和给出标准不确定度，并对原参考物重新定值，取得令人满意的结果。

1.5 酶催化浓度参考物：欧洲共同体参考物和测量研究所(IRMM)提供酶催化浓度参考物。

IRMM的酶参考物(37℃)

注：1.冻干品分装密封于玻璃安瓿瓶中，并充入氮气。

2.复溶在1.0ml酶稳定液中，该稳定液是人或牛血清白蛋白基质。

2 不能溯源到SI单位的物质的溯源性：

欲达EN ISO溯源性的目的，第一是在所选择的生物源性液体中定义被测量的量(分析物／物质)，一旦成分被确定，就保证了它们的临床相关性。

然而，对于数百种能够测量的量(估计500种)，例如：所有的蛋白质和糖化蛋白，常用某种免疫化学技术测定，试验结果不以SI单位表示，而用其他单位的术语表示，例如世界卫生组织(WHO)的国际单位或生产商指定的质量单位。

(1)有参考测量程序和参考物的项目，如HbAlc酶活性，由IFCC工作组／分委员会提供参考

测量程序(RMP)和参考物(RM)。

(2)只有参考测量程序而没有参考物的项目，该类项目以凝血因子的测定为多，凝血因子有

一定的生物学活性，常采用带“正常血浆”作为参考物的凝固试验进行测定(生物学效应)，也被WHO承认，这类项目大约有30项。

(3)仅有参考物而无参考测量程序的项目大约有300项。在过去的30年中，基于实践需要，

事实正如EN ISO 17511文件中所述：WHO采用“国际惯例参考物”来作为国际参考标准。

这个方法是真实的，全球协议一致的。但诸如该参考物的性质是什么尚不能完全被确定。

某物质是依据目前的技术方法状态在生物化学实验室实验台上制备的物质，自称是高纯的，但就糖化作用而论可能仍是不纯的，应被认为是纯化过程中的某一类型或者可能是已被选择的某一类型。对生物源性液体中我们“测量”所选定的非溯源到SI的物质来讲，可以断定，实际上可利用的参考物全部是代用品。这类物质多采用免疫学分析技术进行测定。

(4)既无参考测量程序(RMP)又无参考物(RM)可以利用的项目。在这种情况下生产商选择了

自己的或生产商之间的“候选参考方法(candidate reference method)”或自己的“参考物”，并基于所选定的制剂在量上指定数值，这种选定的制剂常常不能被他者利用。

许多蛋白质和糖化蛋白是无活性的，例如：CEA(癌胚抗原)和PSA(前列腺特异抗原)，人们虽可对其进行测定，但很难认识所测定的确切的结构，因为免疫化学技术是通过结合到不同种类的抗体来测量的，这些抗体表面上类似但在一定程度上难以鉴别。