血清钙Ca偶氮胂Ⅲ法测定-检验科生化室作业书

血清钙Ca偶氮胂Ⅲ法测定

1.实验原理

偶氮胂Ⅲ比色终点法。钙与偶氮胂Ⅲ在中性条件下形成蓝色复合物，显色强度与钙浓度成正比。加入8-羟基喹啉-5-磺酸掩蔽镁的干扰。

2.标本采集

2.1病人准备：无特殊要求。

2.2类型：血清、肝素血浆或尿液。

3.标本存放：血清/血浆稳定性：20～25℃保存可稳定7天；4～8℃保存可稳定3周；-20℃保存可稳定8个月。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定4天；-20℃保存可稳定3个月；对24h尿液标本加浓盐酸10ml，并加热标本，使草酸钙溶解。

4.标本运输：室温条件下运输

5.标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。

6.实验材料：

6.1上海申能钙测定试剂盒（货号：1111137170试剂：8×70ml）6.1.1试剂组成

磷酸盐缓冲液pH7.550mmol/L

8-羟基喹啉-5-磺酸5mmol/L

偶氮胂Ⅲ120mmol/L

表面活性剂适量

6.1.2试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后应避免污染。

6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5注意事项：由于钙离子到处都有，必须严加注意采取避免污染。只使用一次性检测用品。微量螯合剂(如EDTA等)都会阻碍显色复合物的生成。须严加注意。试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件

6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件

7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪

8.操作步骤

8.1项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件

9.检验结果的判断与分析

10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：以TruCalU复合校准品钙校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。

12.参考值范围

血清/血浆：2.15～2.57mmol/L

尿液：女性：<6.24mmol/24h

男性：<7.49mmol/24h

（注：各实验室应有自己的参考范围。）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13.临床意义：钙测量用于诊断和治疗副甲状腺病，某些骨病，慢性肾病和手足抽搐（间歇性肌肉收缩或痉挛）等。尽管体内超过99%的钙存在于骨骼和牙齿，临床上最关心血液里的钙。骨骼作为一个储存器，通过释放钙防止低血钙和吸收钙防止血清钙水平过高，保持血清钙的相对稳定。饮食中钙的含量增加，吸收钙的百分比就减少，因此，吸收钙的数量能够保持相对稳定。在高钙饮食中钙吸收的轻微增加被反映在增加的肾排泄中。钙在许多细胞功能中起着重要作用，细胞内如肌肉收缩和糖原代谢，细胞外如骨钙化、凝血以及神经冲动传递。血浆钙有三种不同的形式：游离离子、和蛋白结合以及与阴离子（如磷酸根、柠檬酸根和碳酸氢根等）形成复合物。总钙水平的降低与多种疾病有关，如骨病（尤其是骨质疏松症），肾病（特别是透析患者），肠道吸收不良以及甲状腺功能减退。总钙水平升高为甲状旁腺机能亢进，转移性恶性肿瘤及肉瘤样恶性病变。在预防骨质疏松进行钙的补充时，钙的检测有助于临床监控。

14.操作性能

14.1线性范围：0.01～6.25mmol/L。

14.2精密度：重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000

批内重复性小于3%，总不精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

14.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对70个样品进行Ca检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.02x-0.005mmol/L；r=0.999。

14.4灵敏度：本试剂的检测限为0.01mmol/L。

14.5病人结果可报告范围0.01～6.25mmol/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：1稀释，重新测定，结果乘以2。

15.超出范围结果处理：本法线性上限为6.25mmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：1稀释，重新测定，结果乘以2。

16.病危报警值的处理当血清钙测定值>3.5mmol/L或<1.6mmol/L 时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。

17.方法局限性

17.1本法线性上限为6.25mmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：1稀释，重新测定，结果乘以2。

17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L，镁浓度≤6.2mmol/L时没有观察到干扰。

18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19.参考文献

ThomasL.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt：TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.192-202.

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BauerPJ.AffinityandstoichiometryofcalciumbindingbyarsenazoIII.AnalBi ochem1981;110：61-72.

20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。