血清钙Ca偶氮胂Ⅲ法测定-检验科生化室作业书
钙(Ca2+) 偶氮砷III法生化检测方法
目录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂与校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理在中性条件下血清中的钙离子与砷酸盐反应，生成复合物。
此复合物在630nm有最大吸收，通过比色可求出钙的含量。
2．标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况。
孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。
此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。
2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司Ca试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下：3.2 校准血清：使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的±2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。
试剂颜色为紫色，当试剂变色，按照试剂失效处理。
实验十七 偶氮胂Ⅲ法测血钙
【计算】 计算】 测定管吸光度 样品钙含量（mmol/L） 样品钙含量（mmol/L）= ×2.50 标准管吸光度 参考范围】血清钙：2.1～ 【参考范围】血清钙：2.1～2.6mmol/L 临床意义】 【临床意义】 （1）低钙血症见于 ①摄入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹泻、阻 塞性黄疸；②需要增加：妊娠后期及哺乳期妇女；③吸收减少：佝偻 病、甲状旁腺功能减退症；④肾脏疾病：急、慢性肾衰竭、肾病综合 征、肾小管性酸中毒；⑤坏死性胰腺炎。 （2）高钙血症见于 ①摄入钙过多：静脉用钙过量、大量饮用牛奶 等；②原发性甲状旁腺功能亢进症、肾癌等使血钙升高；③服用维生 素D过多，钙吸收作用增强；④骨病：变形性骨炎、转移性骨癌、多 发性骨髓瘤等，骨溶解增加；⑤具有异位内分泌作用的肿瘤；⑥长期 制动引起骨骼脱钙。
【注意事项】 注意事项】 1. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。 2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应 保持反应体系恒温。 3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本 空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定1小时。 反应形成的色素可稳定1 5. 所用试验器材必须清洁，没有镁污染。 6. 所用试剂具有毒性和腐蚀性，请勿用口吸吸管， 如有污染，应立刻用大量流水冲洗。
பைடு நூலகம்
【评价】 评价】 1. 线性范围：0.00～6.00mmol/L，γ≥0.99。 线性范围：0.00～6.00mmol/L，γ≥0.99。 2. 精密度：批内、批间平均CV分别≤5.0% 精密度：批内、批间平均CV分别≤ 3. 准确度：不准确度≤10% 准确度：不准确度≤ 4. 试剂空白吸光度值≤0.35。 试剂空白吸光度值≤0.35。 【注意事项】 注意事项】 1. 样品中钙含量超过5.00mmol/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘 样品中钙含量超过5.00mmol/L，则用生理盐水稀释后测定，结果乘 以稀释倍数。 2. 测试温度无严格规定，但色素对温度敏感，应保持反应体系恒温。 3. 高脂样本会引起测定结果假性升高，可用样本空白管校正。 4. 反应形成的色素可稳定2小时。 反应形成的色素可稳定2 5. 所用试验器材必须清洁，没有钙污染。 6. 试剂与样品量可根据需要按比例改变。 7. 试剂使用后立即关紧瓶盖，避免污染。 8. 使用肝素作为抗凝剂时浓度不能太高，每毫升血液中肝素浓度应小 于50单位。不能使用草酸盐、枸橼酸盐、EDTA等作抗凝剂。 50单位。不能使用草酸盐、枸橼酸盐、EDTA等作抗凝剂。
偶氮胂Ⅲ—EDTA吸光度下降法测定血清钙
偶氮胂Ⅲ—EDTA吸光度下降法测定血清钙
蒋光亮
【期刊名称】《川北医学院学报》
【年(卷),期】1998(013)003
【摘要】目前，偶氮胂Ⅲ比色法测定血清钙由于方法简便，灵敏，快速等优点，已广泛用于临床实验室。
但此法无论是酸性条件下，还是在碱性条件下，均采用吸光度上升法，而无法扣除血清空白，尤其是脂血、溶血及黄疸时对测定的影响。
采用偶氮胂Ⅲ－ＥＤＴＡ吸光度下降法可克服上述...
【总页数】2页(P92-93)
【作者】蒋光亮
【作者单位】川北医学院附属医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R446.112
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5.血清钙的偶氮胂Ⅲ显色EDTA褪色测定法 [J], 郑建方;饶亚丽
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用偶氮胂Ⅲ比色测定血清钙
用偶氮胂Ⅲ比色测定血清钙
姚维业;常爱华
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】1995(0)S1
【摘要】用偶氮胂Ⅲ比色测定血清钙姚维业，常爱华（解放军第２７１医院，天
津３００１９１）本文用偶氮胂Ⅲ（简称ＡＳＡⅢ）试剂［１］作测定钙的显色剂，国外曾有人报道用该显色剂测定血清钙和其它一些金属元素。
我们参考Ｍｉｃｈａｙｌｏｖａ等方法［２］，结合实验室现有条件...
【总页数】1页(P41-41)
【关键词】偶氮胂Ⅲ;比色测定;显色剂;羟基喹啉;原子吸收法;血清钙;标准液;不同浓度;胆红素;血清蛋白
【作者】姚维业;常爱华
【作者单位】解放军第271医院
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
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血清钙(Ca)偶氮胂Ⅲ法测定
血清钙（Ca）偶氮胂Ⅲ法测定1. 实验原理偶氮胂Ⅲ比色终点法。
钙与偶氮胂Ⅲ在中性条件下形成蓝色复合物，显色强度与钙浓度成正比。
加入8-羟基喹啉-5-磺酸掩蔽镁的干扰。
2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 类型：血清、肝素血浆或尿液。
3. 标本存放：血清/血浆稳定性：20～25℃保存可稳定7天；4～8℃保存可稳定3周；-20℃保存可稳定8个月。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定4天；-20℃保存可稳定3个月；对24h尿液标本加浓盐酸10ml，并加热标本，使草酸钙溶解。
4. 标本运输：室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料：6.1 上海申能钙测定试剂盒（货号：111 1137170 试剂：8×70ml）6.1.1 试剂组成磷酸盐缓冲液pH7.5 50mmol/L8-羟基喹啉-5-磺酸5mmol/L偶氮胂Ⅲ120mmol/L表面活性剂适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：由于钙离子到处都有，必须严加注意采取避免污染。
只使用一次性检测用品。
微量螯合剂(如EDTA等)都会阻碍显色复合物的生成。
须严加注意。
试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
钙(Ca)(偶氮砷III法)试剂盒SOP
钙测定标准操作程序1. 摘要钙检测用于诊断和治疗甲状腺炎，骨病的一种，慢性肾病和手足抽搐（间歇性肌肉收缩或痉挛）。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中钙的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定Ca 浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的钙（Ca ）试剂盒采用的是偶氮胂Ⅲ法。
5. 原理偶氮胂Ⅲ在碱性条件下与钙离子结合形成稳定的有色络合物，在660nm 处，其吸光度与钙含量成正比。
有色络合物偶氮胂碱性−−→−++2a C III6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1，AMPDR2, 偶氮胂三，8-羟基喹啉，二甲基亚砜7.3 试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
工作液于2-8℃保存，可稳定7天。
7.4 试剂准备：试剂为即用式。
8. 标准品和质量控制8.1 校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
钙检测比色法作业指导书
钙检测比色法作业指导书1 检验目的规范钙（Ca）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法偶氮胂Ⅲ法。
3 检测原理在碱性条件下,样品中的钙能与试剂中的偶氮胂Ⅲ（Arsenazo Ⅲ）反应生成紫色复合物，可用比色法测定，其吸光度与样本中Ca的浓度成正比。
4 样本血清、肝素抗凝的血浆，处理方法见生化标本采集程序。
稳定性：2～8℃稳定7天；室温可稳定3天。
5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪、迈瑞BS800M生化分析仪。
5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂及迈瑞公司提供的生化试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。
5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。
5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照说明书。
6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。
7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。
8 参考范围2.0～2.65mmol/L。
9 警告/危急值未规定。
10 性能指标10.1 线形上限：4.5mmol/L。
10.2 精密度：≤2%。
10.3 准确度:不准确度≤5%。
10.4 空白吸光度:在650nm处应<0.8。
10.5 试剂贮存:2～8℃密闭贮存可稳定12个月。
11 干扰因素及变异的潜在来源血清或血浆标本不能溶血,血浆标本只能用肝素锂抗凝。
12 临床意义12.1.血清钙离子降低：见于原发性和继发性甲状旁腺功能减退、慢性肾衰、肾移植或进行血液透析患者、维生素D缺乏症、呼吸性或代谢性碱中毒、新生儿低钙血症以及外科手术后，脓毒血症或热烧伤的病人等。
12.2.血清钙离子增高：甲状旁腺功能亢进、代谢性酸中毒、肿瘤、维生素D过多症等。
偶氮胂Ⅲ分光光度法测定生物样品血清中的钙
偶氮胂Ⅲ分光光度法测定生物样品血清中的钙The SpectrophotometricDetermination of Calcium in Biological Samples with Arsenaz oⅢ化学与环境工程学院化学工程与工艺系（0507113班）学生：王喆导师：胡伟华翟庆洲摘要研究了偶氮胂(AS AⅢ)与Ca2+的显色反应最佳实验条件。
在pH 10.4 NH3-NH4Cl缓冲介质中，Ca（Ⅱ）与偶氮胂（AS AⅢ）形成蓝色络合物，该络合物的组成比为Ca（Ⅱ）：（AS AⅢ）＝1：1，最大吸收波长位于654nm 处，表观摩尔吸光系数ε654nm ＝3.92×104 L·mol-1·cm-1，钙量在2～10μg/10 mL范围内遵守比耳定律。
工作曲线回归方程：A = 0.0428 C + 0.148（C：μg Ca2+ /10 mL），相关系数γ = 0.9934。
本法用于生物样品中钙的测定，6次测定相对标准偏差小于2%，加标回收率为98.0%～100.5%.关键词：钙分光光度法偶氮胂血清.ABSTRACTCalcium(Ⅱ) reacts with DBM-arsenazo to produce a 1:2(M:R) blue complex in NH3-NH4Cl buffer solution medium at pH 10.4. The maximum absorption wavelength of the complex locates at 628 nm. The apparent molar absorptivity of the method is ε628nm ＝3.92×104 L·mol-1·cm-1. Beer’s law is followed over the range of 2 ～10 μg of calcium in 10 mL of solution. The method was used in the determination of calcium in biological samples. The relative standard deviations of six replicate determinations were less than 2% and the recoveries of the standard addition were 98.0%～100.5%.Key words: calcium，spectrophotometry，arsenaz oⅢ，biological sample目录摘要 (Ⅰ)ABSTRACT (Ⅱ)第一章分光光度法概述 (1)1.1 引言 (1)1.2 基本原理 (1)1.3 分光光度分析新方法 (6)1.4分光光度法测定与其他方法联用 (9)第二章钙 (15)3.1 钙的性质 (15)3.2 钙的应用 (15)3. 3 钙对人体的影响 (16)3. 4 钙的生产工艺 (17)3. 3 分光光度法测定钙的进展 (18)第三章偶氮胂分光光度法测定生物样品中的钙 (22)4.1 前言 (22)4.2 实验部分 (22)4.3结果与讨论 (23)4.4样品分析 (28)结论 (31)致谢 (32)参考文献 (33)第一章分光光度法概述1.1 引言分光光度法是获得物质吸收光特性及定性、定量信息的重要手段，在冶金、地质、生物、医学、农业、环境监测、食品卫生等领域得到了广泛应用[1]。
实验十七 偶氮胂Ⅲ法测血钙
【计算】 计算】 测定管吸光度 样品钙含量（mmol/L） 样品钙含量（mmol/L）= ×2.50 标准管吸光度 参考范围】血清钙：2.1～ 【参考范围】血清钙：2.1～2.6mmol/L 临床意义】 【临床意义】 （1）低钙血症见于 ①摄入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹泻、阻 塞性黄疸；②需要增加：妊娠后期及哺乳期妇女；③吸收减少：佝偻 病、甲状旁腺功能减退症；④肾脏疾病：急、慢性肾衰竭、肾病综合 征、肾小管性酸中毒；⑤坏死性胰腺炎。 （2）高钙血症见于 ①摄入钙过多：静脉用钙过量、大量饮用牛奶 等；②原发性甲状旁腺功能亢进症、肾癌等使血钙升高；③服用维生 素D过多，钙吸收作用增强；④骨病：变形性骨炎、转移性骨癌、多 发性骨髓瘤等，骨溶解增加；⑤具有异位内分泌作用的肿瘤；⑥长期 制动引起骨骼脱钙。
体重约见5%的无机盐主要有Ca、Mg、 体重约见5%的无机盐主要有Ca、Mg、K、Na、P和Cl， Na、 Cl， 这六种无机元素约占体内无机盐总量的60%~80%，主要存 这六种无机元素约占体内无机盐总量的60%~80%，主要存 在于体液。无机离子的测定方法主要有火焰光度法、化学 测定法、离子选择电极法、代谢物酶试剂法等。其中离子 选择电极法标本用量少（100μl全血）,1min出结果，快 选择电极法标本用量少（100μl全血）,1min出结果，快 而准确，操作简便，是目前广为临床使用的方法。
测定管（U 标准管（S 空白管（B 测定管（U） 标准管（S） 空白管（B） 试剂（ml） 试剂（ml） 2.0 2.0 2.0 37℃恒温5 37℃恒温5分钟 蒸馏水（ml） 蒸馏水（ml） --0.02 标准液（ml） 标准液（ml） -0.02 -血清 0.02 --混匀，37恒温2分钟，660nm波长，以空白管调零，测定 混匀，37恒温2分钟，660nm波长，以空白管调零，测定 各管吸光度。
实验12-2偶氮胂Ⅲ光度法络合物组成的测定
实验十二偶氮胂Ⅲ分光光度法测定络合物组成一、实验目的学习分光光度法测定络合物组成的方法(摩尔比法和连续变化法)；二、实验原理络合物组成的确定是研究络合反应平衡的基本问题之一。
金属离子M和络合剂L形成络合物的反应为M + nL====MLn式中，n为络合物的配位数，可用摩尔比法(或称饱和法)进行测定，即配制一系列溶液，各溶液的金属离子浓度、酸度、温度等条件恒定，只改变配位体的浓度，在络合物的最大吸收波长处测定各溶液的吸光度，以吸光度对摩尔比cL/cM作图，如图1所示，将曲线的线性部分延长相交于一点，该点对应的cL/cM值即为配位数n。
摩尔比法适用于稳定性较高的络合物组成的测定。
等摩尔连续变化法(等摩尔系列法) 是保持溶液中CM + cL 为常数,连续改变cR 和cM 之比,配制出一系列显色溶液。
分别测量系列溶液的吸光度A ,以A 对cM / (cM + cL )作图,曲线转折点所对应的cR / cM 值就等于络合物的络合比n。
当络合物很稳定时,曲线的转折点明显;而络合物的稳定性稍差时,可画切线外推找出转折点。
三、试剂：Gd标准储备液，10µg/mL；C Gd=6.53×10-5mol•L-1一氯乙酸-氢氧化钠缓冲溶液，（0.2mol/L）pH=2.82；偶氮胂Ⅲ溶液，0.01%水溶液；C偶=1.29×10-4mol•L-1四、实验步骤1、摩尔比法取9只25 mL比色管，按表1配制溶液.用去离子水稀至刻度.用1cm吸收池,以蒸馏水为参比,在650nm处测定各溶液的吸光度.以A对R作图(c L/c M作图),将曲线的两直线部分延长相交,确定络合物的配位数n值 651.6nm表1 摩尔比法中溶液的配制及吸光度的测定2、等摩尔连续变化法取12个25 mL比色管，,编号.按表2配制溶液, 用去离子水稀至刻度.用1cm吸收池,以蒸馏水为参比,在650nm处测定各溶液的吸光度.以A对R作图(cM / (cM + cL )作图),将曲线的两直线部分延长相交,确定络合物的配位数n值.表2 等摩尔连续变化法中溶液的配制及吸光度的测定。
SOP-Ca(偶氮砷Ⅲ法)
目录目录 (1)第1章目的和范围 (2)1.1 目的 (2)1.2 适用范围 (2)第2章操作规程 (2)2.1 测定原理 (2)2.2 试剂贮存与稳定性 (2)2.3 试剂与样本准备 (2)2.4 测定参数 (2)2.5 操作步骤 (3)2.6 校准和质控 (3)第3章结果计算 (3)3.1 吸光度变化的计算 (3)3.2 浓度的计算 (3)第4章方法学特性 (3)4.1 正常参考范围 (3)4.2 线性范围 (3)第5章临床意义 (4)第6章安全防护 (4)第1章目的和范围1.1目的为用户使用迈瑞公司Ca（偶氮胂Ⅲ法）试剂时，提供正确的操作流程和操作规范。
1.2适用范围适用于各级医疗机构的用户。
第2章操作规程2.1测定原理钙离子与偶氮胂Ⅲ在中性条件下形成蓝色复合物，显色强度与钙离子浓度成正比。
2.2试剂贮存与稳定性试剂贮存在2～8℃环境时，在试剂盒上规定的有效期前可以保持稳定。
2.3试剂与样本准备本试剂为液体单试剂，可以直接使用。
样本可以为血清、肝素血浆或尿液。
血清/血浆稳定性：20～25℃保存可稳定3天、4～8℃保存可稳定2周、-20℃保存可稳定6个月。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定1天、4～8℃保存可稳定2天、-20℃保存可稳定2个月。
对24h尿液标本加浓盐酸10 ml，并加热标本，使草酸钙溶解。
2.4测定参数测定波长：650nm；分析类型：终点法，扣除试剂空白；反应时间：5分钟；试剂/样本比例：100/1。
2.5 操作步骤μlR ：1000 μl2.6 校准和质控请使用迈瑞公司推荐的校准品和质控品。
第3章 结果计算3.1 吸光度变化的计算ΔA=A 校准品管或样本管–A 空白管3.2 浓度的计算C 样本=（ΔA 样本／ΔA 校准）×C 校准C 样本：为测定的样本浓度C 标准：为校准品的浓度第4章 方法学特性4.1 正常参考范围本法正常参考范围：成人：2.1 mmol/l ～2.9 mmol/l （8.5～11.6 mg/dL ）婴儿：2.5 mmol/l ～3.0 mmol/l （10～12 mg/dL ）4.2 线性范围本法线性范围上限为 3.75mmol/l （15mg/dl ），当样品测定值超过上限时，应将样品用生理盐水作1+ 1稀释后重测，结果乘以2。
偶氮胂ⅲ法
偶氮胂ⅲ法
偶氮胂Ⅲ法是一种基于偶氮胂Ⅲ的化学分析方法，主要用于检测和定量分析目标分析物。
以下是关于偶氮胂Ⅲ法的详细介绍：
1.原理：偶氮胂Ⅲ是一种显色剂，能与目标分析物发生氧化还原反应，产生
具有特殊吸收峰的红色化合物。
通过检测该红色化合物的吸光度值，可以确定目标分析物的含量。
2.优点：该方法具有较高的灵敏度和选择性，可用于检测微摩尔浓度的分析
物。
此外，偶氮胂Ⅲ法还具有操作简便、准确度高、重现性好等优点。
3.应用范围：偶氮胂Ⅲ法在多个领域都有广泛的应用，如环境监测、食品分
析、药物分析等。
例如，它可以用于测定水中的痕量元素、食品中的防腐剂含量以及药物中的有效成分等。
4.注意事项：在使用偶氮胂Ⅲ法时，需要注意避免外界因素的干扰，如避免
阳光、温度、pH值等因素的影响。
同时，也需要严格控制实验条件，以保证实验结果的准确性和可靠性。
总之，偶氮胂Ⅲ法是一种灵敏度高、操作简便的化学分析方法，在多个领域都有广泛的应用。
在使用该方法时，需要注意实验条件的控制和避免外界因素的干扰，以保证实验结果的准确性。
【检验医学】血清总钙检测
180umol/L
磷酸盐缓冲液 100mmol/L
表面活性剂及稳定剂
试剂的储藏和稳定性：试剂置18-25oC，避光 保存，可稳定18个月。
仪器：自动生化分析仪、分光光度计
生物参考区间： 参考值：2.1-2.6mmol/L
危急值： 总钙≤1.5mmol/L 或
≥3.5mmol/L
异常结果的处理
大量输入柠檬酸盐抗凝血后
血清离子钙测定
临床意义 增高：甲状旁腺功能亢进、代谢性酸
中毒、肿瘤、维生素D过多症等 降低：原发性和继发性甲状旁腺功能
减退、慢性肾衰竭、肾移植或进行血 透析患者、维生素D缺乏症、呼吸性或 代谢性碱中毒、新生儿低钙血症。
delay
4S
meas time 2S
volume
500
ref-low
2.1
ref-high
2.6
注意事项
严重的脂血标本测定结果不准确，应经高 速离心去脂后再测定；
标本溶血可使结果假性增高 标本采集后放置的环境温度过高、时间过
长； 试剂变质或过了有效期而未发现等。
临床意义
血钙增高见于下列疾病：
病。 阿狄森病 结节病：由于肠道过量吸收钙，而使血钙增高，血磷略高。
临床意义
血钙降低见于： 甲状旁腺功能减退症：原发性甲状旁腺
功能减退症；手术后甲状旁腺功能减退 症；假性甲状旁腺功能减退症：并非缺 乏甲状旁腺激素，而是肾脏缺乏对甲状 旁腺素起反应的腺苷酸环化酶。 佝偻病与软骨病：体内缺乏维生素D， 使钙吸收障碍，血清钙、磷均偏低。 孕妇：由于胎儿生长发育的需要，孕妇 钙和蛋白质的需要均增加，由于孕妇 Alb减低，引起结合钙和总钙减低。
结果异常的标本要先进行复查 必要时需与临床联系要求重抽血复
钙标准操作程序
钙标准操作程序1.目的规范钙（CA）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。
3.术语4．测定原理4.1测定方法：终点法。
4.2测定原理：偶氮胂Ⅲ比色终点法。
钙与偶氮胂Ⅲ在中性条件下形成蓝色复合物，显色强度与钙浓度成正比。
加入8-羟基喹啉-5-磺酸掩蔽镁的干扰5.标本5.1标本种类：新鲜无溶血血清。
5.2标本采集：见生化标本采集程序。
6.试剂6.1试剂来源：宁波瑞源试剂。
6.2宁波瑞源试剂6.2.1组成包装规格：R1 60ml×66.2.2试剂准备试剂为液体单试剂，开瓶即可使用。
6.2.3试剂稳定性原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12个月。
试剂开瓶载机2～8℃稳定18天。
7.仪器参数设定AU2700参数设定：宁波瑞源试剂.仪器参数设定具体参见试剂厂家提供的相应仪器参数说明书.8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。
8.1.2仪器经过大保养后。
8.1.3挪动仪器的安装地点。
8.1.4更换试剂批号。
8.1.5室内质控失控。
8．2 AU2700宁波瑞源试剂系统的校准：8.2.1 准备：宁波瑞源配套校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存一个月时间，-20℃稳定使用至有效期8.2.3保存位置：低温冰箱-20℃。
8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的9号位置放配套定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。
9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体指控品（批号：45612/45613）。
9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。
9．3质控规则：见生化室内质量控制程序。
9．4失控纠正：见室内质控失控记录本10．临床标本测定：按生化标本检测程序进行。
单一试剂偶氮胂Ⅲ比色法测定血清钙
单一试剂偶氮胂Ⅲ比色法测定血清钙
杨文初;李桂兰
【期刊名称】《徐州医学院学报》
【年(卷),期】1996(016)001
【摘要】建立了偶氮胂Ⅲ作显色剂比色测定血清钙的方法。
缓冲溶液为ｐＨ＝７．０的三乙醇胺盐酸缓冲系，工作波长为６６０ｎｍ，线性０￣４．８０ｍｍｏｌ／Ｌ，检测限为０．１１ｍｍｏｌ／Ｌ，批内、批间变异系数分别为３．２％、４．１％。
方法简便，稳定，精确度好，选择性高，不受标本溶血、黄疸、脂血的影响。
【总页数】3页(P26-28)
【作者】杨文初;李桂兰
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.11
【相关文献】
1.偶氮胂Ⅱ单一试剂测定血清钙 [J], 戚大梁
2.国产偶氮胂Ⅲ试剂自动比色法测定血清钙的研究 [J], 卢志明;刘春
3.半自动生化仪用偶氮胂Ⅲ单一试剂测定血清总钙 [J], 陈振浩;徐永国
4.灵敏的单一偶氮胂Ⅲ试剂测定血清总蛋白 [J], 李卓;连国军;赵长容;戚玉海;张锋;曹建明
5.自配偶氮胂Ⅲ试剂测定血清钙 [J], 余大厚;鲜胜;罗春华
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检验科生化血清钙测定的标准操作规程
检验科生化血清钙测定的标准操作规程【目的】体外检测血清钙（Ca）含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1．标本类型新鲜无溶血血清2.患者准备对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯。
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布。
3.容器、添加剂类型标本要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。
样品采集后要离心标本，吸出血清。
标本应立即测定。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理偶氮胂Ⅲ与钙离子结合生成紫红色钙-偶氮胂Ⅲ鳌合物，紫红色钙-偶氮胂Ⅲ鳌合物的生成量与样本中钙离子的浓度成正比，通过在660nm波长处测定吸光度的变化值，即可测得样本中钙离子的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科技有限公司Ca试剂盒，为液体单一试剂。
各组分如下：偶氮胂Ⅲ0.18 mmol/L 磷酸盐缓冲液100 mmol/L2.校准要求 2．1 校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号：4490050/4590050）对测定进行校准。
2．2 校准间隔2．2．1 试剂批号变更时，使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
2．2．2 室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。
三、 操作规程按生化分析仪操作要求结合长征试剂说明书输入测定参数，并按校准、质量控制、样本测定的顺序进行常规测定。
四、计算方法(mmol/L)(mmol/L)校准液浓度校准管吸光度样本管吸光度钙浓度⨯=五、质控程序 1.建议采用朗道水平2(正常范围质控）和 水平3（病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。
实验十三血钙测定(偶氮胂Ⅲ络合比色法)
×1.29
【临床意义】
❖ 1. 低磷血症见于 ①摄入不足和吸收减少：饥饿或恶病质、 吸收不良综合征、呕吐、腹泻、长期应用含铝的制剂等；② 磷转移入细胞内：静脉注射葡萄糖、胰岛素及碱中毒、妊娠 等；③丢失过多：血液透析、肾小管酸中毒、急性痛风等； ④其他：如酒精中毒、糖尿病酮症酸中毒、维生素D缺乏症 等。
佝偻病
一、目的
❖ 了解氯化物测定的原理、操作方法及临床 意义。
二、原理 ❖ 钙与偶氮胂Ⅲ反应生成复合物，在在600nm
或者650-660nm下（红外线区域）有强烈的 蓝色。 ❖ 吸光度与钙浓度成比例
❖ 而同样为二价的镁离子并不生成复合物。 ❖ 此波长下，能避免血清中的镁离子的干扰，
并且血脂或血红蛋白等有色物质也不会对测 试造成干扰。
❖ 2. 高磷血症见于 甲状旁腺功能减退症、维生素D过多症、 Addison病、肢端肥大症、多发性骨髓瘤等。
【参考值】
成人0.97 ～ 1.62 mmol/L 儿童1.45 ～ 2.10 mmol/L
❖ 体重约见5%的无机盐主要有Ca、Mg、K、Na、P和Cl，这 六种无机元素约占体内无机盐总量的60%~80%，主要存在于 体液。无机离子的测定方法主要有火焰光度法、化学测定法、 离子选择电极法、代谢物酶试剂法等。
❖ 有低血磷性和低血钙性两种。比较多见的是低血磷性抗维生素D佝偻病， 又称家族性低磷血症(familialhypophosphatemia)，或肾性低血磷性佝 偻病(renalhypophosphatemicrickets)。
❖ 该病主要是由于位于X染色体上的PHEX基因的突变，导致肾小管回吸 收磷减少所致，肠道吸收钙、磷不良。
❖ 血磷降低，一般在0.65－0.97/mmol/L(2－3mg/dl)之间，钙磷乘积多在 30以下，骨质不易钙化。
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血清钙Ca偶氮胂Ⅲ法测定
1.实验原理
偶氮胂Ⅲ比色终点法。
钙与偶氮胂Ⅲ在中性条件下形成蓝色复合物，显色强度与钙浓度成正比。
加入8-羟基喹啉-5-磺酸掩蔽镁的干扰。
2.标本采集
2.1病人准备：无特殊要求。
2.2类型：血清、肝素血浆或尿液。
3.标本存放：血清/血浆稳定性：20～25℃保存可稳定7天；4～8℃保存可稳定3周；-20℃保存可稳定8个月。
尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定4天；-20℃保存可稳定3个月；对24h尿液标本加浓盐酸10ml，并加热标本，使草酸钙溶解。
4.标本运输：室温条件下运输
5.标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6.实验材料：
6.1上海申能钙测定试剂盒（货号：1111137170试剂：8×70ml）6.1.1试剂组成
磷酸盐缓冲液pH7.550mmol/L
8-羟基喹啉-5-磺酸5mmol/L
偶氮胂Ⅲ120mmol/L
表面活性剂适量
6.1.2试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5注意事项：由于钙离子到处都有，必须严加注意采取避免污染。
只使用一次性检测用品。
微量螯合剂(如EDTA等)都会阻碍显色复合物的生成。
须严加注意。
试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7.仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪
8.操作步骤
8.1项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件
9.检验结果的判断与分析
10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法：以TruCalU复合校准品钙校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。
12.参考值范围
血清/血浆：2.15～2.57mmol/L
尿液：女性：<6.24mmol/24h
男性：<7.49mmol/24h
（注：各实验室应有自己的参考范围。
）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13.临床意义：钙测量用于诊断和治疗副甲状腺病，某些骨病，慢性肾病和手足抽搐（间歇性肌肉收缩或痉挛）等。
尽管体内超过99%的钙存在于骨骼和牙齿，临床上最关心血液里的钙。
骨骼作为一个储存器，通过释放钙防止低血钙和吸收钙防止血清钙水平过高，保持血清钙的相对稳定。
饮食中钙的含量增加，吸收钙的百分比就减少，因此，吸收钙的数量能够保持相对稳定。
在高钙饮食中钙吸收的轻微增加被反映在增加的肾排泄中。
钙在许多细胞功能中起着重要作用，细胞内如肌肉收缩和糖原代谢，细胞外如骨钙化、凝血以及神经冲动传递。
血浆钙有三种不同的形式：游离离子、和蛋白结合以及与阴离子（如磷酸根、柠檬酸根和碳酸氢根等）形成复合物。
总钙水平的降低与多种疾病有关，如骨病（尤其是骨质疏松症），肾病（特别是透析患者），肠道吸收不良以及甲状腺功能减退。
总钙水平升高为甲状旁腺机能亢进，转移性恶性肿瘤及肉瘤样恶性病变。
在预防骨质疏松进行钙的补充时，钙的检测有助于临床监控。
14.操作性能
14.1线性范围：0.01～6.25mmol/L。
14.2精密度：重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000
批内重复性小于3%，总不精密度小于3%。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
14.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对70个样品进行Ca检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.02x-0.005mmol/L；r=0.999。
14.4灵敏度：本试剂的检测限为0.01mmol/L。
14.5病人结果可报告范围0.01～6.25mmol/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：1稀释，重新测定，结果乘以2。
15.超出范围结果处理：本法线性上限为6.25mmol/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：1稀释，重新测定，结果乘以2。
16.病危报警值的处理当血清钙测定值>3.5mmol/L或<1.6mmol/L 时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。
17.方法局限性
17.1本法线性上限为6.25mmol/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1：1稀释，重新测定，结果乘以2。
17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L，镁浓度≤6.2mmol/L时没有观察到干扰。
18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19.参考文献
ThomasL.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt：TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.192-202.
EndresDB,RudeRK.Mineralandbonemetabolism.In：BurtisCA,AshwoodER.editors.Tietztextbookofclinicalchemistry.3rded.Phil adelphia：W.B.SaundersCompany；1999.p.1395-1457. MichaylovaV,IlkovaP.Photometricdeterminationofmicroamountsofcalci umwitharsenazoIII.AnalChimActa1971;53：194-8.
BauerPJ.AffinityandstoichiometryofcalciumbindingbyarsenazoIII.AnalBi ochem1981;110：61-72.
20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。