生物制药技术作业
生物技术制药课程作业 (一)
生物技术制药课程作业（1）一、单选题1.(4分)关于基因治疗的叙述，不正确的是（）A. 基因治疗可以有效地改善患者的生理状况，其操作对象是基因B. 进行基因治疗时，基因的受体细胞是受精卵C. 基因治疗并不是对患者体内细胞的缺陷基因进行改造D. 基因治疗时可只对患者部分细胞输入正常基因答案B2.(4分)下列是应用动物细胞工程获取单克隆抗X抗体的具体操作步骤，其中对单克隆抗体制备的相关叙述错误的是( )①从患骨髓瘤的小鼠体内获取骨髓瘤细胞②将X抗原注入小鼠体内，获得能产生抗X抗体的B淋巴细胞③将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔内培养④筛选出能产生抗X抗体的杂交瘤细胞⑤利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞⑥从小鼠腹水中提取抗体⑦利用促细胞融合因子促使细胞融合A. 实验顺序应该是①②⑦⑤④③⑥B. ③过程产生多个杂交瘤细胞的过程称为克隆C. ⑦过程获得的细胞均可无限增殖D. 利用细胞融合生产单克隆抗体的过程中通常要经过两次筛选答案C3.(4分)在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是（）。
A. 人工合成目的基因B. 目的基因与运载体结合C. 将目的基因导入受体细胞D. 目的基因的检测和表达答案C4.(4分)DNA的琼脂糖凝胶电泳方向为（）。
A. 正极向负极B. 负极向正极C. 浓度高向浓度低D. 浓度低向浓度高答案B5.(4分)采用液氮冻存微生物菌种、细胞株，对这些遗传材料进行保藏，你知道液氮的保存温度是（）A. -20℃B. -30℃C. -50℃D. -80℃E. -196℃答案E6.(4分)当基因组DNA长度为野生型入噬菌体基因组多少时，不会明显影响存活能力（）。
A. 78％-90％B. 60％-78％C. 78％-105％D. 105％以上答案C7.(4分)下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大？A. 粘粒B. 质粒C. 酵母人工染色体D. λ噬菌体答案C8.(4分)动物细胞融合决定于（）。
A. 细胞膜的流动性B. 细胞膜的选择透过必性C. 细胞质的流动性D. 细胞质中酶的活性答案A9.(4分)进行动物细胞培养时，最好选用的培养材料是( )A. 衰老退化的动物组织细胞B. 成熟动物个体的体细胞C. 动物的受精卵细胞D. 健康动物、胚胎或幼龄动物个体的体细胞答案D10.(4分)基因治疗的基本程序中不包括（）A. 选择治疗基因B. 选择载体C. 选择靶细胞D. 将载体直接注射体内E. 将治疗基因导入靶细胞答案D11.(4分)下列关于基因工程的叙述，错误的是（）。
生物制药学(大作业)
2015-2016学年第二学期期末考试《生物制药学》大作业一、名词解释（每题6分，共60分）1.生物技术制药：生物技术制药是指运用微生物学、生物学、医学、生物化学等的研究成果，从生物体、生物组织、细胞、体液等，综合利用微生物学、化学、生物化学、生物技术、药学等科学的原理和方法进行药物制造的技术。
2.疏水层析：疏水层析也称疏水作用下层析（hydrophobic interaction chromatography HIC）从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类。
疏水层析和反相层析（reversed phase chromatography）分离生命物质的依据是一致的，利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离。
该方法基于的是蛋白质的疏水差异，在高盐溶液中，蛋白质会与疏水配基相结合，而其他的杂蛋白则没有此种性质，利用此种性质，可以将蛋白质初步的分离，用于盐析之后的蛋白质进一步提纯。
3.生物反应器：生物反应器（英语：Bioreactor）是指任何提供生物活性环境的制造或工程设备。
在一种情况下，生物反应器是一个进行涉及到生物或生物化学活性物质由特定的生物生产出来的化学过程的容器。
此过程既可以有氧进行也可以无氧进行。
这些生物反应器通常呈圆筒状，其体积从几升到几立方米不等，常由不锈钢制成。
4.贴壁培养：也称为细胞贴壁，贴壁后的细胞呈单层生长，所以此法又叫单层细胞培养。
大多数哺乳动物细胞的培养必须采用这种方法。
5.悬浮培养：非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。
细胞悬浮于培养基中生长或维持。
某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。
增加悬浮培养规模相对比较简单，只要增加体积就可以子。
深度超过5mm，需要搅动培养基，超过10cm，还需要深层通入CO2和空气，以保证足够的气体交换。
通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。
6.单克隆抗体：单克隆抗体是指仅识别单一抗原表位的B细胞杂交瘤产生的同源抗体，特异性好，效价高，生物活性单一，理化性状高度均等特点。
《生物技术制药》题库
《生物技术制药》作业题什么是cDNA文库？以mRNA为模板, 经反转录酶催化, 在体外反转录成cDNA, 与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌, 则每个细菌含有一段cDNA, 并能繁殖扩增, 这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。
构建cDNA文库的基本步骤？1、mRNA的纯化:2、cDNA第一链的合成；3、cDNA第二链的合成；4、cDNA的克隆；5、将重组体导入宿主细胞；6、cDNA文库的鉴定: 抗性基因失活法、噬菌斑颜色改变法1、基因工程药物制药的主要程序有哪些？4、目的基因的克隆2.构建DAN重组体3、DAN重组体转入宿主菌构建工程菌5.工程菌发酵6.表达产物的分离纯化7、产品的检验等什么是生物技术制药？采用现代生物技术,借助某些微生物、植物、动物生产医药品, 叫作生物技术制药。
举例生物技术药物, 6例干扰素、白细胞介素、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素、胰岛素、乙肝疫苗新型生物反应器有哪些？新型生物反应器有:1.气升式生物反应器2.流化床式生物反应器3.固定床式生物反应器4.袋式或膜式生物反应器5.中空纤维生物反应器生物技术药物按照医学用途有哪些分类？按照医学用途分类:1.治疗药物2.诊断药物3.预防药物生物技术药物的特性有哪些？1.分子结构复杂2.具有种属特异性3.治疗针对性强, 疗效高4.稳定性差5.基因稳定性6.免疫原性7.体内t1/2短8.受体效应9.多效性和网络性效应10.检验的特殊性1、适合目的基因表达的宿主细胞应满足哪些要求？4、容易获得较高浓度的细胞；2.能利用易得廉价原料；3、不致病、不产生内毒素；5、发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态；5.容易进行代谢调控；容易进行DNA重组技术操作；7、产物的产量、产率高, 产物容易提取纯化宿主细胞分为哪两大类？第一类为原核细胞: 常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等；第二类为真核细胞: 常用有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。
生物制药实验操作作业指导书
生物制药实验操作作业指导书一、实验目的生物制药实验操作作业旨在使学生掌握生物制药相关实验操作技能，了解生物制药的基本原理和实践应用。
二、实验材料和仪器1. 材料：- 细菌培养基- 酵母- 细胞培养基- 抗生素- 溶液和缓冲液- 蛋白质纯化试剂盒- 电泳试剂- 试剂盒等2. 仪器设备：- 培养皿和培养皿架- 培养箱- 离心机- 超声波处理仪- 十分摄氏计- 离子交换层析仪- 高效液相色谱仪（HPLC）- 电泳仪等三、实验操作步骤1. 细菌培养实验a. 准备培养基：按照实验要求配制细菌培养基。
b. 接种细菌：使用无菌技术将待测的细菌接种到培养基中。
c. 培养细菌：将接种好的培养皿放入培养箱中，设置适当的温度和培养时间。
d. 观察细菌生长：根据培养后的结果进行观察和记录。
2. 酵母发酵实验a. 准备培养基：按照实验要求配制酵母培养基。
b. 接种酵母：使用无菌技术将待测的酵母接种到培养基中。
c. 培养酵母：将接种好的培养皿放入培养箱中，设置适当的温度和培养时间。
d. 观察酵母发酵：根据培养后的结果进行观察和记录。
3. 细胞培养实验a. 准备培养基：按照实验要求配制细胞培养基。
b. 接种细胞：使用无菌技术将待测的细胞接种到培养基中。
c. 培养细胞：将接种好的培养皿放入培养箱中，设置适当的温度、湿度和培养时间。
d. 观察细胞生长：根据培养后的结果进行观察和记录。
4. 抗生素敏感性实验a. 准备培养基：按照实验要求配制含有不同浓度抗生素的培养基。
b. 接种细菌：使用无菌技术将待测的细菌接种到培养基中。
c. 观察菌液浑浊度：根据培养后的结果观察菌液的浑浊程度，判断细菌对抗生素的敏感性。
5. 蛋白质纯化实验a. 细胞破碎：使用超声波处理仪等方法破碎细胞，释放目标蛋白质。
b. 离心分离：使用离心机将细胞碎片和其他杂质分离出来，获得上清液。
c. 层析纯化：使用离子交换层析仪等方法对上清液进行纯化，得到目标蛋白质。
d. 浓缩和储存：使用适当的方法将目标蛋白质浓缩并储存，以便后续的研究或应用。
《生物制药学》作业考核试题及答案
《生物制药学》作业考核试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 下列哪个不是生物制药的主要类型？A. 抗生素B. 疫苗C. 酶类药物D. 人工合成药物2. 下列哪种生物技术不是生物制药的关键技术？A. 基因工程B. 细胞工程C. 酶工程D. 精细化工3. 下列哪种蛋白质药物属于生物制药？A. 青霉素B. 胰岛素C. 阿司匹林D. 镇痛药4. 下列哪个是生物制药中的基因工程药物？A. 干扰素B. 红霉素C. 青霉素D. 氯霉素5. 下列哪个不是生物制药中的疫苗类型？A. 减毒疫苗B. 灭活疫苗C. 重组疫苗D. 化学疫苗二、填空题（每题2分，共20分）6. 生物制药学是利用______技术和______技术，研究生物药物的生产、制备、质量控制及应用的学科。
7. 重组DNA技术是生物制药中的核心技术，它包括______、______和______三个基本过程。
8. 下列生物药物中，______属于免疫调节剂，______属于抗肿瘤药物。
9. 生物制药中的疫苗主要包括______疫苗、______疫苗和______疫苗三种类型。
10. 生物制药的质量控制主要包括______、______、______和______四个方面。
三、简答题（每题10分，共30分）11. 简述生物制药的基本流程。
12. 简述基因工程药物的生产过程。
13. 简述生物制药的质量控制要点。
四、论述题（每题25分，共50分）14. 论述生物制药在现代医药领域的地位和作用。
15. 论述我国生物制药产业的发展现状及展望。
### 答案一、选择题1. D2. D3. B4. A5. D二、填空题6. 生物技术、工程技术7. 基因克隆、基因表达、蛋白质纯化8. 干扰素、紫杉醇9. 减毒、灭活、重组10. 物理检查、化学分析、生物活性测定、安全性评价三、简答题11. 生物制药的基本流程包括：生物材料的选择与制备、生物药物的生产、生物药物的提取与纯化、生物药物的质量控制、生物药物的剂型制备和包装。
中国医科大学2022年7月《生物技术制药》作业考核试题答卷
中国医科大学2022年7月《生物技术制药》作业考核试题试卷总分:100 得分:30一、单选题 (共 20 道试题,共 20 分)1. ADC药物为了避免干扰抗原识别，药物分子应该连接在单抗的，不影响单抗与抗原的结合A. 轻链区B. 可变区C. 恒定区D. 框架区E. 重链区答案:E2.以下选项不属于实现基因工程的主要条件的是A. 工具酶B. 目的基因C. 载体D. 宿主细胞E. 供体答案:E3.肿瘤特异质抗原A. 是细胞癌变过程中过度表达的抗原物质B. 非肿瘤细胞所特有，在正常细胞上也有微量表达C. 是细胞癌变过程中出现的新抗原及过渡表达的抗原物质的总称D. 是仅存在于肿瘤细胞表面而不存在于正常细胞的抗原E. 有明显的病毒特异性答案:D4.目前应用最广泛的病毒载体是A. 腺病毒B. 反转录病毒C. 慢病毒D. 杆状病毒E. 噬菌体答案:A5.ADC的抗体部分不必须具有的作用是A. 有效地把偶联物输送到靶向细胞表B. 诱导细胞吞噬C. 保持裸抗体的全部或部分性质D. 高活性E. 以上答案不全正确答案:D6.低温保藏菌种的目的或原理正确的是A. 低于最低温度，微生物胞内酶均会变性B. 保持优良菌种的活力及性能C. 高于最高温度，微生物很快死亡D. 低于最低温度，微生物代谢受到很大抑制，并不马上死亡E. 以上都不是答案:D7.具有高投入、高风险、高收益的产业特性，技术依赖、知识密集、产品多样等特点突出，国内外医药制造业中发展最快、活力最强、技术含量最高的领域是A. 化学合成药物B. 生物技术药物C. 微生物药物D. 天然药物E. 疫苗答案:B8.反义药物通常指的是人工合成的长度为多少个碱基的寡核苷酸药物A. 10～30B. 30～50C. 50～70D. 70～90E. 90～110答案:A9.下列关于干扰素（IFN）的描述错误的一项是A. 是由病毒或其他IFN诱生剂刺激单核细胞和淋巴细胞所产生B. IFN是具有多种功能的分泌性蛋白质（主要是糖蛋白）C. IFN在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长与分化，以及调节免疫功能等多种生物活性D. IFN是一种广谱抗病毒剂，可以直接杀伤或杀死病毒E. 以上选项不全正确答案:D10.Ig分子是由什么连接起来的4条多肽链构成的A. 共价键B. 疏水作用C. 氢键D. 二硫键E. 离子健答案:D11.以下不属于常用的抗生素筛选剂的是A. 氨苄青霉素B. 青霉素C. 氯霉素D. 卡那霉素E. 四环素答案:B12.不能分泌细胞因子的细胞是A. T淋巴细胞B. B淋巴细胞C. 单核细胞D. 浆细胞E. 以上都不是答案:D13.与传统小分子药物相比，生物样品中多肽药物的检测面临的难度较大，其主要原因有A. 多肽药物多为生理活性物质，结构特殊，稳定性差B. 生物体内存在大量干扰物质，如结构相同或相似的内源性蛋白多肽类物质C. 多肽药物生理活性强，用药剂量小，因此要求检查方法灵敏度高D. 以上都是E. 以上都不是答案:D14.发酵过程中的化学参数有A. 空气流量B. 基质浓度C. 菌丝形态D. 黏度E. 以上都不是答案:B15.以下不是生物技术制药特点的是A. 高技术B. 高投入C. 短周期D. 高风险E. 高收益答案:C16.从研究的发展历史看，动物细胞培养基可以分成四类，其中不包括A. 天然培养基B. 合成培养基C. 无血清培养基D. 化学限定性培养基E. 营养添加物答案:E17.不属于理想的动物细胞生物反应器应具备的基本要求是A. 对细胞的剪切力要高B. 具有良好的传质、传热和混合的性能C. 与培养基及细胞直接接触的材料对细胞必须无毒性D. 密封性能良好E. 可长期连续运转答案:A18.不属于细胞因子类药物的是A. 白细胞介素B. 干扰素C. 辅酶Q10D. 生长因子E. 肿瘤坏死因子答案:C19.TNF-β主要是由哪种细胞产生A. 单核-巨噬细胞B. T淋巴细胞C. B淋巴细胞D. 树突状细胞E. 以上都不是答案:B20.能直接杀伤肿瘤细胞的细胞因子是A. IFN-γB. TGF-βC. IL-4D. TNFE. 以上都不是答案:D二、名词解释 (共 3 道试题,共 10 分)21.减毒活疫苗答案:<p>减毒活疫苗：通过不同的方法手段，使病原体的毒力即致病性减弱或丧失后获得的一种由完整的微生物组成的疫苗制品。
生物制药技术作业
生物制药技术作业生计班142、生物制药的特性及应用生物制药的特性：1、投资大。
国际上一个新药的研制一般需2—3亿美元以上，我国生物制药业虽起点较高，但从基础技术开始研制新药也需5000～10000万元以上。
2、回报高。
生物制药的高收益是引人注目的，一个新药回报可在10倍以上，一般上市2～3年就可收回投资。
3、风险大。
从刚开始有价值的理论研究，到转化为可生产的产品只有10％左右能成功，即一个有实用前途的技术项目，如有10家企业独立研究开发，能成功的只有一家左右。
4、周期长。
一个生物技术产品从投入研制，到获得技术开发成功，最少需6—7年时间，再到临床运用、广泛推广还需2～3年时间，可见其开发周期相当漫长。
据美国1997年度调查结果显示，生物技术公司平均每个产品开发投人为1．5～2 0亿美元，周期8～15年。
5、低污染。
生物药品的生产制造一般在常温常压下进行，能源、原材料的消耗量极少，对周围环境几乎不产生污染。
生物制药的应用：1.基因工程制药（1）基因工程药物品种的开发（2）基因工程疫苗（3）基因工程抗体（4）基因诊断与基因治疗（5）应用基因工程技术建立新药的筛选模型（6）应用基因工程技术改良菌种，产生新的微生物药物（7）基因工程技术在改进药物生产工艺中的应用（8）利用转基因动、植物生产蛋白质类药物2.细胞工程制药（1）单克隆抗体技术（2）动物细胞培养（3）植物细胞培养生产次生代谢产物3.酶工程制药4.发酵工程制药:工艺改进，新药研制，菌种改造生物制药的研究发展趋势：1.基因组学成果促进生物技术新药的研发2.蛋白质工程药物的开发3.新型疫苗的研制4.新的高效表达系统的研究与应用5.生物技术药物新剂型6.生物资源的综合利用与扩大开发7.抗生素和氨基酸的新型生产工艺8.中西结合创制新型生物药物3、生物药物筛选模型和方法✓生物药物的筛选是针对特定的要求，通过适当的方法和技术（主要的技术有基因组学、蛋白质组学、代谢组学、信息生物学、生物芯片技术等），在一定的可选择范围内进行药物优选的过程。
生物技术制药课程作业C
生物技术制药课程作业C一、单选题1.(4分)利用反义核酸阻断基因异常表达的基因治疗方法是A. 基因置换B. 基因替代C. 基因矫正D. 基因失活E. 免疫调节答案D解析2.(4分)理论上讲，基因治疗最理想的策略是A. 基因置换B. 基因替代C. 基因失活D. 免疫调节E. 导入“自杀基因”答案A解析3.(4分)在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是（）。
A. 用mRNA为模板逆转录合成DNAB. 以4种脱氧核苷酸为原料人工合成C. 将供体DNA片段转入受体细胞中，再进一步筛选D. 由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA答案B解析4.(4分)能使X—gal变蓝的条件是（）。
A. 有α-片段B. α-受体片段C. 同时具有α-片段和α-受体片段D. 同时具有β-片段和β受体片段答案C解析5.(4分)下列与动物细胞培养技术无密切关系的是( )。
A. 细胞全能性的揭示B. 噬菌体的研究C. 细胞周期调节控制机理的分析D. 对癌变机理和衰老原因的研究答案B解析6.(4分)关于动物细胞培养的叙述不正确是( )。
A. 用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B. 将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C. 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D. 动物细胞培养只能传50代左右，50代后所培育的细胞全部衰老死亡答案D解析7.(4分)下列关于基因表达载体的构建，叙述不正确的是( )A. 目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传和表达发挥作用B. 一个基因表达载体的组成含有目的基因、标记基因、启动子、终止子等C. 终止子位于mRNA的尾端，使转录在所需要的地方停止下来D. 由于不同的受体细胞及目的基因导入的方法不同，基因表达载体的构建也有所差别答案C解析8.(4分)关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确？A. 在不同的宿主中具有不同的复制机制B. 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起始点C. 在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶D. 在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率答案B解析9.(4分)1953年Watoson和Crick提出（）。
生物制药作业
生物制药思考题1、基因工程药物制造的主要程序有哪些？主要程序：制备目的基因→构建重组质粒→构建基因工程菌或细胞→培养基因工程菌→分离纯化产物→过滤除菌→半成品鉴定→成品鉴定→包装2、对由基因重组技术所获得的蛋白质药物产品进行鉴定时，常做哪些项目分析？常做的项目分析：①生物活性测定，即效价测定和蛋白质的比活性的测定②理化性质鉴定（包括非特异性鉴别、特异性鉴别、相对分子质量测定、等电点测定、肽图分析、氨基酸成分分析、蛋白质二硫键分析）③蛋白质含量测定④蛋白质纯度测定⑤杂质检测⑥稳定性考察⑦产品一致性的保证3、动物基因工程药物的研究前沿和热点是什么？研究的前沿和热点：①改进表达载体，提高表达水平和产量②改进培养工艺，降低生产成本③抑制细胞凋亡，延长培养周期④采用糖基化工程，提高产品质量⑤转基因动物的研究⑥组织工程的研究4、什么是单克隆抗体？单克隆抗体有哪些不足？单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。
不足之处：①单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。
由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。
②单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。
③制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。
5、什么是分子靶向药物？分子靶向药物是一类作用在细胞的分子水平上，利用肿瘤细胞与正常细胞之间的分子细胞生物学上的差异，采用封闭受体、抑制血管生长、阻断信号传导通路等方法作用于肿瘤细胞特定的靶点，特异性地抑制肿瘤细胞的生长，促使肿瘤细胞凋亡，同时还降低了对正常细胞的杀伤作用的药物。
浅谈酶法制药及其应用酶，指具有生物催化功能的高分子物质。
几乎所有的细胞活动进程都需要酶的参与，以提高效率。
没有酶的参与，新陈代谢几乎不能完成，生命活动就根本无法维持。
酶有如此重要作用，也因此得到重视与开发。
酶作为一种高效生物催化剂，具有高度的特异立体选择性及区域选择性，并在常压、常温和pH值中性附近条件下具有十分高效的催化活力。
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单克隆抗体
一、制备过程
1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠
产生致敏B淋巴细胞的过程。
2、细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取
出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。
将准
备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。
在聚乙二醇作用下，各种淋
巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。
3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤
细胞，一般采用HAT选择性培养基。
在HAT培养基中，
未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转
移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。
只
有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟
嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的
特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。
4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生
长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗
体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。
通常采用有
限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。
采用灵敏、快
速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体
的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。
经过全面鉴定其
所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。
5、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。
二、单抗应用
自1975年Kohler和Milstein报道，通过细胞融合建立能产生单克隆抗体的杂交瘤技术以来，这个最基础的具有开创性的理论在生物科学的基础研究以及医学，预防医学，农业科学等领域的广泛应用和实践，充分显示它对生命科学各领域产生的巨大而深远的影响，由于单抗有着免疫血清或抗体无法比拟的优点，迄今全世界已研制成数以千计的单抗，有的已投入市场，有的正在进行应用考核和深入观察。
2.1单抗在诊断学中的应用
单抗应用最广泛的是诊断，主要用于病原诊断，病理诊断和生理诊断，随着微生物学、寄生虫学，免疫学的研究进展，人类对感染性和寄生虫性疾病有了新的认识，一个病原体存在着许多性质不同的抗原，在同一抗原上，又可能存在许多性质不同的属，种，群，型特异性抗原，采用杂交瘤技术，可以获得识别不同抗原或抗原决定簇的单抗，从而可以对感染性疾病和寄生虫病进行快速准
确的诊断，同时可以用于调查疾病流行情况，流行毒株或虫株的分类鉴定，为病原的防疫治疗提供资料。
目前应用单抗诊断试剂诊断的人，畜禽，植物等病毒、细菌或寄生虫病已上百种，其中乙肝，狂犬病，乙型脑炎等人兽共患病三十余种；鸡新城疫，马立克，猪瘟等畜禽病二十余种；植物病毒病十余种；人，畜禽细菌病二十余种，弓形虫、疟疾、旋毛虫等寄生虫病三十余种另外，单抗还成功应用于含量极微的激素、细菌毒素、神经递质和肿瘤细胞抗原的诊断。
2.2 单抗应用于临床治疗
用单抗治疗肿瘤是医学界寄于厚望的一项研究，目前已研制出的肿瘤单抗有：胃肠道肿瘤、黑色素瘤、肺癌等数十种，用单抗可能的治疗途径是采用高亲和并特异的单抗，偶联药物或毒素后以定向杀伤肿瘤，目前该研究在实验动物中已获得成功，而单独使用单抗治疗人恶性肿瘤获得成功的例子也有报道。
使用单抗治疗畜禽传染病，尤其是病毒病如鸡传染性法氏囊病，成效十分显著。
近年来采用基因工程技术将抗体基因转入植物可以生产大量的单抗，另外具有不同用途的嵌合抗体、人源单抗、重构抗体、小分子抗体的出现，为应用单抗治疗各类疾病拓宽了道路。
2.3 单抗是生物学研究的有力工具
目前，单抗已广泛应用于不同学科，其中一部分是为基础理论研究服务的，在病原方面可用于分类、分
型和鉴定毒株，可用于探查抗原结构以及用于抗感染，
免疫机制和中和抗原的研究，结合分子生物学方法，
可以确认病毒抗原蛋白的编码基因，基因突变和转译
产物的加工、处理、组装过程，从而进一步研制基因
重组疫苗。
作为一种特异的生物探针，通过单抗的的
免疫组化定位，研究细胞的生理功能和疾病的病因，
发病机制，对激素和受体可采用单抗的免疫分析，免
疫细胞化学定位，大大促进了激素和受体结构与功能，
激素作用机理以及内分泌自身免疫性疾病病因的研究
进展，另外单抗已应用于神经系统，血液系统，药理
学和系统发育学，畜牧育种及性别控制等学科的研究
工作中，从而极大的推动了整个生物学科的发展。
三、发展现状
单克隆抗体药物发展经历了四个阶段，分别为：鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆抗体、人源化单克隆抗
体和全人源化单克隆抗体，而在全球的单克隆抗体市场，第四个阶段的全人源化单克隆抗体是其未来的发展方
向。
在第一个阶段中，鼠源单克隆抗体是用老鼠制备的普通单克隆抗体药物，但是鼠源单抗应用于人类有较强的免疫原性，主要缺陷是诱发人抗鼠抗体反应，大大限制了其临床应用价值，而且，鼠源性抗体在人体内半衰期短，生物活性降低。
而第四阶段中它与人体结合性最好，也是最安全和有效的单克隆抗体。
最新研究技术：
1.如用人脾细胞与鼠骨髓瘤细胞杂交
2.用EB病毒转化人的B淋巴细胞
3.用基因工程方法制备嵌合抗体（困难）
4.噬菌体技术和转基因技术
以分子生物学技术提取、扩增编码人抗体的DNA，构建质粒，建立组合抗体文库，再利用工体文库建立针对某一特定抗原的子文库。
以该技术制备的抗体片段Fab是人源抗体，具有建库简单、抗体表达稳定等特点。
迄今已有多种抗体产生。
该技术具有良好的发展前景和应用前景。