免疫标记技术及其在食品安全检测中的应用
[整理版]免疫学检测技术在食品安全中的应用
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免疫学检测技术在食品安全中的应用杨明（甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州 730070）食品安全问题在21世纪的今天已经成为全世界关注的重大问题，对国家的经济发展和消费者的身体健康产生了重大影响。
随着我国市场经济的的不断完善和发展，食品行业对外贸易与日剧增，食品的质量与安全问题已成为影响农业和食品工业产品竞争力的关键因素。
同时，由于我国人民生活已由温饱型食物结构转向营业健康型食物结构，全民食品营业卫生知识得到普及。
人民的饮食消费观念也由数量型转向质量型，对食品卫生质量标准的要求越练越高，这就对食品检测技术提出更高的要求。
由于食品种类丰富，食品中检测的有毒有害物质种类和组分繁多，需要检测的物质质量极低，样品中待检物的浓度常为μg、ng甚至pg级，除此之外，许多检测物除需检测物质本身，还涉及其衍生物和降解物测定。
区别同位异构体以及元素的价态等。
因此食品检测要求检测方法更加准确、快速、方便，也使得其他学科的先进技术不断应用于食品检测领域中来，由于新技术的引入，食品行业开发出了许多自动化程度和精确度很高的检测仪器，这不仅缩短了分析时间，减少了人力误差，也大大提高了食品分析检测的速度、灵敏度和准确度。
现代食品检测技术主要包括以下几个方面：①计算机视觉技术；②现代仪器分析技术；③食品物性的力学、声学和电学检测技术；④电子传感检测技术；⑤生物传感技术；⑥核酸探针检测技术；⑦PCR基因扩增技术；⑧免疫学检测技术。
免疫学检测技术是食品检测技术中的一个重要组成部分，特别是三大免疫技术——荧光免疫技术、酶免疫技术、放射免疫技术在食品检测中得到了广泛应用。
利用免疫学检测技术可检测细菌、病毒、真菌、各种毒素、寄生虫等，还可用于蛋白质、激素、其他生理活性物质、药物残留、抗生素等的检测，其检测方法简便、快速、灵敏度高、特异性强，特别是单克隆抗体的发展，使得免疫检测方法特异性更强，结果更准确。
免疫分析是抗原与抗体的特异性、可逆性结合为基础的分析技术。
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用发布时间：2021-02-02T15:38:57.237Z 来源：《基层建设》2020年第27期作者：陆春梅[导读] 摘要：胶体金免疫层析法（GICA）是一种以胶体金为示踪剂的新型免疫标记技术，在抗原和抗体方面有着广泛的应用。
茂名市食品药品检验所广东茂名 525000摘要：胶体金免疫层析法（GICA）是一种以胶体金为示踪剂的新型免疫标记技术，在抗原和抗体方面有着广泛的应用。
胶体金免疫层析法（GICA）具有快速、简便等优点，已广泛应用于食品检测、临床、环境污染等定性或半定性快速免疫分析。
本文介绍了胶体金免疫层析法在食品检测中的应用。
关键词：胶体金免疫层析技术；食品检测；应用食品安全已成为当今社会的热门话题。
为了提高食品卫生安全水平，保障人民群众的生活质量，开展食品卫生安全检查十分重要。
在此基础上，胶体金免疫层析技术应运而生，并应用于食品检测，取得了良好的效果。
因此，研究胶体金免疫层析法在食品检测中的应用具有重要意义。
一、胶体金免疫层析技术概述胶体金免疫层析技术是一种有效结合胶体金标记、免疫检测和层析分析等技术为一体的免疫检测固相标记技术，在20世纪80年代得到发展。
胶体金免疫层析技术作为一种应用形式，是利用抗原抗体反应和免疫金标记技术的相互结合，它是以条带状在膜上固定特异性的抗体或抗原，使在层析条上的样品溶液依靠毛细作用产生泳动，使样品中的待测物和待测物在层析材料上的抗原或抗体等受体发生亲和性与特性较高的免疫反应，在层析的过程中材料的检测带通过截留或富集免疫复合物，通过直接使用或酶促显色反应可对着色标记物进行目测，在5～10min内可直接获取试验结果[1]。
二、胶体金免疫层析技术的特点（一）具有较广的检测范围该技术既可以对食品中的农药、兽药残留及微生物和真菌毒素进行检测，还可快速诊断动物的疫病，在许多领域得到广泛的应用。
（二）操作过程相对简单该技术操作比较简单，不涉及大型的设备仪器，只用简单地对检测样品进行处理，便可直接观察到检测结果，不用具备较强的专业知识也可操作。
免疫学技术在食品微生物检测中的应用
的感 染状 况 。下 面从 以下 六个 方面 逐 一介 绍在 食 品微 生 物检测 中常用 的免疫学 检测 方法 。
１酶 免疫测 定技 术
ｆ． Ｋｅ ａ ｏａｏｙ ｏ ｏ ｄ Ｓ ｉｎ ｅ ｏ ｎｓｒ ｆ １ ｙ Ｌ ｂ ｒｔｒ ｆＦ ｏ ｃｅ ｃ ｆＭｉｉｔ ｏ ｙ
维普资讯
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１ 南昌大学 食品科 学教 育部重点实验 室 ， 南昌 ３０ ４ ３ ０７ ２南昌大学 中德联合研 究院 ， 南昌 ３ ０４ ） ３０ ７
品微 生 物 检 测 中应 用 。
用 单 克 隆抗体 检测 微生 物 的特异 抗 原 ，也 可利 用微 生 物
抗 原 检测 体 内产 生的特 异抗 体 ，两 种方 法 均能 判 断机体
关键 词 ： 品微 生物 ； 测 ； 疫 学 食 检 免
Ｔｈ Ａｐ ｉａ ｉｎ ｆ ｍｍｕｎ ｌ ｇ ｃ ｌ ｅ ｐｌｃ ｔｏ ｏ Ｉ ｏｏ ｉａ Ｄｅ ｅ ｔｏ Ｔｅ ｈ ｔ ｃｉ ｎ ｃ— ｎｑｕ ｏ Ｆｏ ｄ Ｍｉ ｒ ｏ ｇ ｎｉｍ ｉ ｅ ｎ ｏ ｃｏ ｒａ ｓ Ｔｏ ｇ ｉ ， Ｃｈ ｎ Ｈｏ ｇ ｉ ｇｌ２ ｎ Ｐ ｎｇ ２ ｌ ｅｇ ｎ ｂ ｎ ，
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胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用胶体金免疫层析技术（Colloidal Gold Immunoassay，CGIA）是一种新型的快速检测技术，在食品安全现场快速检测中的应用越来越广泛。
该技术结合了免疫学、生物学、化学和物理学等多个学科的知识，利用高度特异的抗体与检测物之间的结合反应，通过胶体金标记的信号转化为目标物质的定量信息，从而实现快速、准确、灵敏的检测。
本文将探讨CGIA技术在食品安全现场快速检测中的应用情况。
1. CGIA技术的优点在食品安全检测中，CGIA技术具有以下几个优点。
（1）快速：CGIA技术的检测时间通常为几分钟到十几分钟，远远快于传统的检测方法。
同时，该技术的检测过程简单，不需要复杂的操作步骤，适合在现场快速检测。
（2）高度特异性：CGIA技术采用高度特异的抗体与检测物结合，能够快速准确地检测目标物质。
与传统的检测方法相比，CGIA技术能够避免其他物质的干扰，提高检测的准确性。
（3）灵敏度高：CGIA技术能够检测非常小的目标物质浓度，通常能够达到ppb（百万分之一）或更低的浓度，能够满足食品安全领域中对高灵敏度检测的需求。
（4）操作简单：CGIA技术的操作步骤简单，不需要专业的技术人员，能够在现场进行。
2. CGIA技术在食品安全中的应用（1）奶制品中的快速检测奶制品是人们日常食品中的重要组成部分。
但是，由于奶制品中可能含有大肠杆菌、沙门氏菌、乳酸杆菌等有害细菌和药物残留等物质，会对人体造成不良影响。
因此，奶制品的品质安全检测非常重要。
CGIA技术能够对奶制品中的有害细菌和药物残留等物质进行快速检测，并能够快速得到检测结果。
饮料作为人们日常饮食中的一部分，也需要进行安全检测。
根据国家有关食品安全法律法规，饮料中不得含有违禁药物和添加剂等有害物质。
CGIA技术能够对饮料中的有害物质进行快速检测，并能够快速得到检测结果。
CGIA技术的应用还存在一些局限性。
（1）需要抗体：CGIA技术需要高度特异的抗体与目标物质结合，因此需要事先获得目标物质的抗体。
荧光免疫分析技术在食品安全中的应用
荧光免疫分析技术在食品安全中的应用随着人们对食品安全的关注度越来越高，食品安全检测技术也逐渐被人们所重视。
荧光免疫分析技术是一种非常先进和精准的检测技术，其应用在食品安全领域能够有效地保障人们的饮食健康。
本文将从荧光免疫分析技术的基本原理、在食品安全中的应用及其优势和不足等方面进行探讨。
一、荧光免疫分析技术的基本原理荧光免疫分析技术是指利用特异性抗体与抗原结合的特性，使标记有荧光物质（如荧光素、硫化铟等）的抗体与抗原结合，从而通过荧光测定技术实现对抗原或抗体的高灵敏、高特异性检测的一种技术。
它主要是利用荧光激发与发射特性、异物的免疫原性与抗原识别能力，以及特异性抗体与抗原之间的结合性质相结合，通过对荧光剂的检测和显示，来定量分析某一特定抗原或抗体物质的技术。
在荧光免疫分析技术中，一般将检测物标记为荧光标记物，它可以是荧光素或其他不同的荧光标记物。
一旦与目标抗原或抗体结合，标记物则会生成一个特定的荧光信号。
在检测中，荧光光源会用荧光化学染料或者荧光素激发，然后通过滤光器选择性地分离目标物的荧光信号，最后通过检测仪器测量荧光强度，以此来确定目标物的存在与否及其浓度。
二、荧光免疫分析技术在食品安全中有很多的应用，如对食品中的农药残留、兽药残留、毒素、细菌等有害物质的快速检测。
这些有害物质的残留会对人类健康造成严重的危害，因此及时检测和控制这些有害物质是食品安全的一个重要内容。
1. 荧光免疫分析技术在农药残留检测方面的应用农药残留是指危害儿童健康的一类有害物质。
现行的农药残留检测方法有GC-MS和HPLC等，但是这些方法繁琐、费时，且需要高精密的仪器设备，因此价格较高。
荧光免疫分析技术在农药检测中的优势在于其高度的灵敏度和快速性。
荧光免疫分析技术可以检测多种不同农药的残留，同时又不需要对样品进行复杂的处理，因此是一种非常有效和经济的检测方法。
2. 荧光免疫分析技术在食品中毒素检测方面的应用毒素是指某些微生物代谢产物，它们存在于某些食物种类中，当人体食用该种食物中毒素过多时，会对人体健康造成很大的危害。
免疫检测技术在食品检验中的应用
用酶联免疫分析检测的方法检测奶粉 中黄曲霉毒素的含量，经多次反复测 定得到的最大变异系数为 １５．２％，可知 该方法测得的结果较准确，且总体重 现率较高，达到 ９２％ 以上。另外酶联 免疫分析检测法还可用于蛋白质、激 素、食品含量成分、劣质食品的检测。 王勇利用该法测定黄瓜梨子等食 品中三唑酮的含量，得出最小检出量 为 ４０ ｎｇ／ｇ，检验结果的回收率总体保 持在 ９２％ 以上，实验结果与气相色谱 仪检测的结果基本一致。这些研究均 表明酶联免疫分析检测技术具有灵敏 度高、特异性强、应用范围广的特点， 因此具有十分广阔的应用前景。 放射免疫技术 放射免疫技术检测是利用放射性 核素对标记物进行标记的一种分析方 法，最早于 ２０ 世纪 ６０ 年代发现并开 始使用。该种免疫检测方法具有灵敏
焦雪丽 河南省驻马店市质量技术监督检验测试中心
免疫检测技术的基本涵义及原理
免疫检测技术是利用抗原抗体的 特异性反应对物质进行定性或定量检 测的方法，该检测方法诞生之初主要 用于医学临床检测，如检测人体中蛋 白质、激素、病原体和抗原抗体的水 平等，随着应用程度和认识水平的不 断加深，在食品的安全检测分析中也 已开始使用，并在食品安全检验中发 挥着越来越重要的作用，为提高食品 安全检验分析水平作出重要贡献。 免疫检测技术的基本原理是利用 抗原抗体反应的特异性和可见性的特 点，通过凝集反应、沉淀反应、补体 参与反应、 抗原抗体反应等检测方法， 进行某种物质的定性和定量测定。
Oct. 2016
CHINA FOOD SAFETY
81
S
pecial cial
专题
行业聚焦
单克隆抗体技术 单克隆抗体技术诞生于 １９７５ 年， 为人体打开了一扇研究领域新的大门， 也成为免疫学技术创新的重大技术前 提。单克隆抗体技术在食品中的应用 具有极强的特异性，很少出现假阳性 的情况。目前使用单克隆抗体技术已 可用于检测食品中细菌、真菌、病毒、 寄生虫、农药残留和激素等物质，并 对于不同的物质有着专门的检测方法。 相关研究中使用戊二醛和青霉素进行 不同的免疫学检测，对小鼠体内的 β－ 内酰胺类抗生素进行检测，其最低的 检测灵敏度为 ２．５ ～ ５ ｎｇ／ｍＬ。在吴建 祥的研究中，通过单克隆抗体杂交试 验，得出单克隆抗体技术可用于青霉 素类抗生素的残留检测。 对于目前十分热门的克伦特罗（瘦 肉精）的检测的研究众多，采用单克 隆抗体技术可进行瘦肉精含量的快速 检测。目前已有相关的克伦特罗残留 检测的试剂研究出来，该试剂具有检 测速度快、特异性强、操作简单等优 点，有效地填补了国内对于瘦肉精的 检测空白。此外单克隆抗体对于各种 农药残留量的检测的技术已十分成熟， 能保证检测结果安全准确和快捷。 目前，单克隆抗体技术常用于有 机磷、有机氯、氨基甲酸酯类、拟除 虫菊酯类农药和激素类农药的检测。 国外还对与某种细菌进行了专门的单 克隆抗体检测方法的研究，研制出特 异的单抗，能极大地满足肉制品生产 过程中对于食品安全检测的要求。 其他新型检测技术 脂质体免疫检测法利用了磷脂双 分子层的固有特点，在磷脂层表面的 脂质体进行抗原抗体的检测，通过膜 的稳定性判断标记物的含量。由于脂 质体免疫测定法对于检测结果具有极 大的放大作用，因此该方法能较敏锐 的检测出食品中待测物的含量。目前 在脂质体的稳定性和异常溶解的问题 上还有待进一步研究解决。 克 隆 酶 给 予 体 免 疫 测 定 法， 该 方 法 通 过 重 组 ＤＮＡ 获 得 独 立 的 蛋 白 质 片 段， 并 进 行 催 化， 最 终 游 离 的 酶片段的增加则表明待测物的含量增 加，该方法是目前检测灵敏度较高的 一种方法。
食品免疫学免疫检测技术与食品安全检测
第八章免疫学技术第一节抗原抗体的制备一、抗原的制备制备特异性的抗原是制的合格抗体的前提条件，而作为检测诊断的抗原也必须是纯化的抗原。
抗原的物质很多，很少是单一成分，必须从复杂的组分中提取分离。
按抗原的物理状态，可分为天然抗原、人工抗原和合成抗原三类。
1、天然抗原的制备（1）颗粒性天然抗原常见的颗粒抗原包括动物、植物、微生物的细胞，和有关的细胞组成结构，如细胞的细胞壁、线粒体，细菌的鞭毛和菌毛等。
一般步骤为：首先收集抗原细胞或（和）扩增培养，然后离心或过滤收集细胞或细胞组成结构物，再进行病原微生物灭活。
（2）可溶性抗原的分离纯化蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原，免疫前常需纯化。
细胞破碎方法有：冻融法；超声破碎；高速组织捣碎机法；研磨法；溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶处理可溶性蛋白抗原的分离方法：离心分离法：差速离心、密度梯度离心选择沉淀法：盐析沉淀法；有机溶剂沉淀法，常采用乙醇或丙酮核酸去除法，DNA酶、RNA酶处理；水溶性非离子型聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物为分子量为2000～6000的聚乙二醇（PEG）凝胶过滤法：又称分子筛层析。
通过凝胶分子筛作用，可将大、中、小三类分子分开，选择凝胶柱时应注意选用适于分离范围内的凝胶。
离子交换层析法：离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。
亲和层析法：亲和层析是利用生物分子间所具有的专一性亲和力而设计的层析技术。
如抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体、DNA和RNA等之间有特殊亲和力，一定条件下，两者可紧密结合成复合物，如将复合物的一方固定于固相载体上，则可从溶液中分离和提纯另一方。
纯化抗原的鉴定主要对纯化抗原的含量、理化性质、纯度及免疫活性进行鉴定，常用方法有酚试剂法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、免疫电泳法、免疫双扩散法等。
2、人工抗原的制备人工抗原指经过人工修饰的半抗原，即将半抗原与载体连接后形成的完全抗原。
标记免疫分析技术在食品分析中的应用
后者又可分为液相酶免疫测定和固相酶免疫测定。 【 发 光免疫 分析技 术 （ ｌｍｌｎｎｓｅｅ ｎ ｕｏ ｙ Ｌ— ４ Ｃ ｉ ｉｅ ｎｅｉｒ ｎ￣ａ ，Ｃ Ｉ ￣ ｍ ｅ ｔａ Ａ 发光免疫分析是将发 光分析 和免疫 反应相结合而建立 的 ）
一
介绍 了酶联免疫吸附分 析拄 术在食品分析 中的应用进展
和 粒 子 浓缩 法 ３种 Ｆ 必须 具 备 荧 光 紊 、 记 蛋 白 质 和 荧 光 ｛ 仪 三 个 条 Ｉ Ａ 标 殳测
２ 酶免疫测定技术 厦其应用 ２ 【 酶免疫技 术的基 本概惫和基 本原理 ． ２１ Ｉ 酶 免 疫 檀 木 的 基 本 概 念 酶 免疫 测 定 （２ ｙ ｅｉ－ ． Ｆ１ｍ ｍ ｚ
种 新 的 免疫 分 析 拄 术 ． Ｓｈｏｌ 和 № ｌ ａ 在 ２ 由 ｅｒｅ ｔ ｅ ｒ ｎ － ｏ世 纪 ７ ０年
代末期 建立 ， 陵方 法兼有 发 光分析 的高 灵敏度 和抗 原抗体 反
应 的高 特 异 性 ， 为化 学 发 光 免 疫 分 析 、 学 发 光 酶 免 疫 分 分 化 析 、 物 发 光 免疫 分析 三大 类 生 １５ 免 疫 电 镜技 术 （ｍ ｔｏｌｃｏ／ｍ ｅｐ ， Ｍ） ＩＭ 技 术 ， Ｉｍｍ ｅ ｔ ｎｃ ｓ ｙｌ Ｅ ｅｒ ｏ Ｅ 又称 为 免疫 细 胞化 学 技 术 ，ｉ ｒ １５ Ｓ ｅ 于 ９９年 首 创 此 技 术 ， 将 电 ． ｇ 它
不断改进与完善 ， 已成 为一种 不可替 代 的普 遍运 用 的分 析方 法。该类 拄术的基本原理相 同， 仅标记物 质不 同， 而最终 定 所发 出的信号不 同而 已， 文献报道 已有 １ 余 种． 据 ０ 但有推Ｊ价 值 或已广泛运用 的主要有 ６ 。 类
子 社微 下直 从 接划抗原或抗体在分子水平上进 行定位 。由于它是分 子水平
胶体金免疫层析技术在食品检测中的作用分析
民□口腊测胶俥金免疫层析技朮在食品检测中的作用分析■文I 路明张庆雨孙琛路伦衡水市综合检验检测中心着国民的生活水平不断提高，食品质量与安全成为 公众高度关注的社会问题。
为保证大众的饮食安 全，提高人们的生活品质，必须对食品安全检测工作予以 高度重视，而合理应用免疫胶体金技术就变得十分重要。
一、 免疫胶体金技术简述免疫胶体金技术是免疫技术与色谱层析技术相结合的分 析技术，拥有易操作、判断且分析清楚的优势，通过免疫胶 体金技术可以完成免疫检测工作，提高检测结果的准确性。
胶体经常被大众称为氯金酸水溶液，氯金酸在柠檬酸 三钠与白磷等还原剂的作用下发生聚合反应，在反应中产 生大小特定的固体颗粒，并在静电作用下变成性质稳定的 胶体溶液。
在颗粒密集密度超过特定阀值后会形成粉红色 斑点，此类斑点可用肉眼观察到，而胶体金试剂出现粉红 色斑点，满足免疫层析试验的要求，可以作为试验的指示 物，应用在食品免疫检测工作中具有良好的工作效果。
二、 免疫胶体金技术在食品检测中的应用保障食品安全。
食品安全问题已经被广大民众所关 注，在以往乃至现在仍有不法经营者为了获取高额的经济 利益，使用违规方式加工生产食品或是贩卖超过保质期限 的食品，一旦人们使用此类产品会严重损害自身健康。
现如今，食品安全存在的问题主要有兽药残留、违禁 药物、有害微生物等，此类物质会通过食物进入人体，对 人体造成一定的危害，一旦食品内有害物质数量超过人体可承受的范围，食用者就会出现不良反应，可能患上各类疾病：比如，常见的食品有害物质主要为布氏杆菌、葡萄球菌、大肠杆菌与各种毒菌毒素，此类物质可能导致食用者患上各类疾病，严重影响到人体的健康。
在对有害物质进行检测时通常使用生化鉴定分离的方式，但是其操作过于繁杂且灵敏度较低，所以并不适合在现场进行，而免疫胶体金技术可以避免上述问题，在现场就能快速检测出食品内的有害物质，且具有检测高效、便 捷的优势，同时不需要使用过多仪器，为食品安全现场执 法提供数据支撑2.提高食品质量。
免疫学技术在食品安全检测应用
多残留同时检测
发展多残留同时检测技术，实现在一 次检测中同时识别多种有害物质，提 高检测效率。
免疫学技术与其他技术联用
将免疫学技术与色谱、质谱等分离分 析技术相结合，提高检测的准确性和 可靠性。
自动化和智能化
开发自动化和智能化的免疫学检测技 术，降低人为操作误差，提高检测效 率和准确性。
检测方法
化学发光免疫分析法是一种新兴的免疫学检测方法，具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽等优点，适用于 粮食作物中多种真菌毒素的同时检测。
应用实例
国内外多个粮食检测机构已采用免疫学技术对粮食作物进行真菌毒素检测，有效防止了受污染粮食进入市场 和食品链。
05 免疫学技术优缺点及改进 方向
免疫学技术优点
发光免疫技术等。
根据应用领域分类
可分为临床诊断免疫学技术、生 物制品学免疫学技术、食品免疫
学技术和环境免疫学技术等。
02 食品安全检测现状及挑战
食品安全检测意义
保障公众健康
01
食品安全检测能够及时发现并防止食品中的有害物质对消费者
造成健康危害。
维护市场秩序
02
通过对食品的安全检测，可以确保市场上流通的食品符合国家
应用
用于食品中微生物、毒素、重金属等的快速检测。
优点
快速、简便、可现场检测。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
1 2
原理
将抗原或抗体与酶结合，形成酶标抗原或抗体， 通过酶与底物的显色反应来检测目标物质。
应用
用于食品中过敏原、激素、抗生素等的定量检测。
3
优点
高灵敏度、高特异性、可定量检测。
免疫标记技术在食品安全检测中的应用
食 品安 全问题是关 系全 民健 康和社会稳定 的一大
问题 ， 年来发 生 的食源 性 有害微 生 物 中毒 和药 物残 近
１ 免 疫 荧 光 技 术
免疫荧光 技术 又称 荧光 抗 体法 （ｌｏ ｅｃｎ ｎｉ ｆ ｒｓｅ ｔａ ｔ ｕ —
留等事件 ， 已引起 了人 们对 食 品安 全 的高度 重视 。加 快 发展快速 、 敏 、 便 的免 疫标 记 技术 ， 灵 简 并及 时进 行 现场 检测 ， 防止 各种食 源性疾病 ， 是食 品安全检测发展 的必 然趋势 。免疫标记 技术是指将 抗原或抗体用 小分 子 的标 记剂 ， 荧光 素 、 如 放射 性 同位 素 、 、 酶 铁蛋 白、 胶 体金及 化学 （ 生物） 或 发光 剂等 作 为追 踪物 ， 并借 助 于
为标记物 ， 已知抗 体结 合 ， 与 但不 影 响其 免疫 学 特性 。
然 后将荧光 素标 记 的抗体 作 为标 准试 剂 ， 以检测 和 用 鉴 定未知抗原 。在荧光 显 微镜 下 ， 以直 接观 察呈 现 可
特 异荧光 的抗原 抗体复合 物以及其存 在部位 。
随着分 子生物 学 、 础 免疫 学及 免疫 化 学等 学科 基
应灵敏度 和适合显微镜 观察 的免 疫标记技 术 。该法具 有灵敏度 高 、 特异性强 的特点 。 免疫荧光 技术 的原理 是将抗原 抗体反应 的特异性
免疫检测技术在食品检验中的应用分析
食品科技免疫检测技术在食品检验中的应用分析刘 猛，郑博士，程金新（中国人民警察大学，河北廊坊 065000）摘 要：传统检测方法检测程序复杂、检测周期长，对检测环境、检测设备、检测人员要求较高，而免疫检测技术能快速、灵敏地对食品进行检测，且不需要特殊环境和设备，操作简便，是目前食品安全领域使用最多、应用最广的一种检测方法。
因此，本文对近年来多种食品安全免疫检测技术进行归纳概述，以期为建立完善的食品安全标准快速检测体系提供经验。
关键词：食品安全；免疫检测技术；食品安全快速检测标准体系Application Analysis of Immune Detection Technique in FoodInspectionLIU Meng, ZHENG Boshi, CHENG Jinxin(China People’s Police University, Langfang 065000, China)Abstract: Traditional detection methods have complex detection procedures, long detection period and high requirements for detection environment, detection equipment and detection personnel. The immunodetection technology can quickly and sensitively detect food in a short time, and does not need special environment and equipment. The operation is relatively simple. It is a detection method with the most use and the most extensive application in the field of food safety. Therefore, this paper summarizes a variety of food safety immune detection technologies in recent years, in order to provide experience for the establishment of a sound rapid detection system for China ’s food safety standards.Keywords:food safety; immunoassay technology; standard system for rapid food safety testing随着科技的进步和全球化的发展，食品的种类越来越丰富，食品安全问题也越来越多，如食品添加剂的滥用、药物残留等问题严重危害人们的身体健康、生命安全。
论免疫检测技术在食品检验中的应用
论免疫检测技术在食品检验中的应用发表时间：2018-06-09T11:32:42.920Z 来源：《中国蒙医药》2018年第3期作者：郎静[导读] 免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、检测成本低、安全可靠等优点，己成为现代生命科学的重要研究手段郎静黑龙江首食测试科技有限公司哈尔滨 150000【摘要】免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、检测成本低、安全可靠等优点，己成为现代生命科学的重要研究手段，在食品安全检测中有着良好的应用前景。
本文主要论述了近年来出现的免疫分析新方法，简单介绍了它们的特点及在食品安全检测中的应用。
【关键词】免疫分析；食品安全；优化；应用。
前言：随着全球食品安全问题的关注程度越来越高，食品中污染物和危害物的检测越来越重要，这就需要快速、准确、灵敏、能进行多组分析的检测技术。
免疫检测技术是近几年发展起来的新技术，是将免疫反应和现代测试手段相结合而建立的超微量测定技术。
免疫分析法就是基于抗原、抗体的特异性识别和结合反应为基础的分析方法，具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、分析容量大、检测成本低、安全可靠等优点，己成为21世纪最具竞争性和挑战性的检测分析技术，应用到食品安全检测领域的免疫分析方法除了传统的放射免疫分析、酶联免疫分析、荧光免疫分析、发光免疫分析外，还出现了分子分析方法，多元化免疫检测技术必将提高食品检验效率及准确性。
1.免疫检测技术在食品检验中的应用现状近几年，中国政府开始高度重视食品安全和药物残留，先后颁布了许多关于食品安全的法律，严禁在动物源食品中使用某些兽药，又详细规定了其他药物的合理使用方法，并据此规定了兽药的检验要求。
除此之外，食品中的药物问题还对我国畜禽、水产品、农副产品的外贸出口造成严重影响。
所有这些都为与食品相关的检验试剂和手段的产业化提供了机会。
现今，在畜禽水产养殖业中，抗生素使用非常普遍。
除氯霉素外，还有硝基呋喃，二甲基咪唑，青霉素，磺胺药，喹诺酮，四环素等等。
免疫检测技术在食品检验中的应用分析
免疫检测技术在食品检验中的应用分析内蒙古呼和浩特 010020摘要：免疫检测是一种检疫技术，基于对抗原抗体的特定识别和相关组合反应。
文章首先介绍了食品中免疫检测的俩个方向一是抗生素、二是有害微生物方向；其次讲述了免疫检测原理以及单克隆抗体检测技术、酶联免疫检测技术、放射免疫技术等检测方法在食品检测中的应用；最后展望了免疫检测技术在食品检测中的应用前景。
关键词：免疫检测技术；食品检验；应用；前言：食品安全问题的出现，让人们对食品安全的关注程度得到了一定的提升。
免疫检测技术的发展，使得越来越多的标准化抗体和检测方法出现，免疫检测的发展变得越来越具有优势，商业免疫检测也进入了市场，促进了食品检测免疫检测的发展和应用，免疫检测将在食品检测中扮演越来越重要的角色，可以为食品安全提供一定的保障。
一、食品免疫检测的方向食品免疫检测的方向多，本文着重介绍俩种：1.抗生素药物。
在抗生素药物检测中，以新酶胺为免疫原构建的酶联免疫法能够一次性对牛奶中的卡那霉素、庆大霉素以及新霉素这三种药物残留进行检测，也可采用竞争性酶联免疫技术检验出蜂蜜、牛奶、动物内脏等食品中四环素的含量；在农药残余检测中，主要运用酶联免疫检测技术对水果蔬菜中的的杀虫剂，除草剂以及杀菌剂的残余量进行测定，具有很高的灵敏度，测量结果精确可靠。
2.有害微生物。
有害微生物不仅会对食品的质量与存储带来严重的破坏，而且它们产生的病源与毒素会直接严重影响人们的身体健康。
免疫检测技术能够安全，快速地实现食品中有害微生物的检测。
其中，采用酶联免疫分析法对食品细菌检测的研究最为广泛，该技术在检测结果，检测周期以及灵敏度方面均优于常规检测方法。
二、免疫检测技术原理及在食品检验中的应用原理：免疫学是一门基于特定鉴定和抗原反应组合的学科，在这种学科中，刺激动物免疫系统并使其免疫的物质被称为产生淋巴细胞和抗体的抗原。
对于抗原物质来说，最应该具备的特性就是高分子量，异物性以及复杂的分子结构。
免疫学技术在食品安全检测应用
双抗体夹心法
双抗体夹心法常用于测定大分子及颗粒多价抗原。将已 知抗体A吸附于固相载体上，加入待检标本（喊相应抗原） 与之结合形成固相抗体抗原复合物。温育后洗涤，加入酶标 抗体B形成固相抗体抗原-酶标抗体B夹心式复合物，固相载 体上带有的酶量与标本中待测物质量成正比。最后加入底物， 夹心式复合物的酶催化底物成为有色产物，颜色的深度与抗 原的量成正比。
试验操作图和试验专用仪器
试验所需试剂
法在食品安全监测中的应用
1977年首先采用了法来检测了黄曲霉毒素，目 前食品中许多致病菌如沙门氏菌、大肠杆菌O157等 微生物都可用此方法来进行检测。另外主要的药物 残留如抗生素类，碘胺药类、呋喃类、抗球虫类， 激素药类和驱虫药类等的检测方法都已经建立。其 中2毒素、黄曲霉毒素B1、脱氧雪腐镰刀烯醇等的检 测方法已列入我国标准方法。基于方法的检测抗生 素、农药、食品添加剂等的残留检测试剂盒已经实 现了产业化。
免疫芯片构建步骤
一、确定检测目标，建立抗原抗体库 二、载体及抗原或抗体的固定 三、抗原抗体反应与分析检测
免疫传感器是以抗原抗体作为分子感应器的生 物传感器，利用抗原与抗体专一性结合引起的直接 或间接物理化学变化，通过一定的信号转化，大多 转化为光信号，再经过放大处理即可检测出反应物 量的变化，通过相关仪器可以进行某些物质的分析 检测。
免疫传感器一般有三部分组成：分子感应器、 转导体、电子滤波放大器
免疫传感器类型：非标记பைடு நூலகம்疫传感器和标记免 疫传感器
竞争法
将抗原连接到固相载体上，样品中待测抗体与之结合 成固相抗原-受检抗体复合物，再用酶标二抗(针对受检抗 体的抗体，如羊抗人抗体)与固相免疫复合物中的抗体结 合，形成固相抗原-受检抗体-酶标二抗复合物，测定加底 物后的显色程度，确定待测抗体含量。
elisa在食品检验中的应用
酶标抗原或抗体的质量直接影响到ELISA实验的 灵敏度和特异性，因此制备过程中需要严格控 制条件和纯化步骤，确保产品质量。
03
ELISA在食品检验中的应用
食品中农药残留检测
总结词
ELISA技术广泛应用于食品中农药残留的检测，通过抗体与抗原的特异性结合， 实现对农药残留的灵敏检测。
适用范围广
ELISA方法可以用于检测各种食品中 的有害物质，如蔬菜、水果、肉类、 乳制品等。
局限性
样品处理要求高
ELISA方法对样品处理的要求较高，需要去 除干扰物质，以免影响检测结果。
检测时间较长
ELISA方法的检测时间较长，需要一定的等 待时间才能获得检测结果。
成本较高
ELISA方法的成本较高，需要购买昂贵的试 剂和设备。
ELISA简介
定义
ELISA是酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的简称，是一种基 于抗原-抗体反应的检测方法。
工作原理
将抗原或抗体与固相载体结合，使待测样本中的目标物质与固相载体上的抗原或抗体结合 ，再加入酶标记的抗体或抗原，最后通过底物显色反应，达到检测目标物质的目的。
03
未来可以通过改进ELISA方法，提高其特异性，减少假阳性或假
阴性的出现。
05
实际应用案例分析
案例一：ELISA在农药残留检测中的应用
总结词
ELISA在农药残留检测中具有高灵敏度和 特异性，能够快速准确地检测出食品中 农药残留量，保障食品安全。
VS
详细描述
ELISA技术利用抗原与抗体的特异性结合 ，通过酶标记物对信号的放大作用，实现 对食品中农药残留的定量或定性检测。该 方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好 等优点，可广泛应用于蔬菜、水果、粮食 等农产品中农药残留的检测。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用随着社会快速发展，人们对食品安全的关注度也越来越高。
食品安全问题直接关系到每个人的健康，而快速有效的食品安全检测技术就显得尤为重要。
胶体金免疫层析技术是一种先进的生物分析技术，具有快速、灵敏度高、操作简便等优点，因此在食品安全现场快速检测中得到了广泛的应用。
一、胶体金免疫层析技术原理及优势胶体金免疫层析技术是一种基于免疫反应的快速检测技术，其原理是将标记了胶体金颗粒的抗体与待测样品中的靶分子发生特异性识别结合，形成抗原-抗体-胶体金复合物。
随后将复合物加载到免疫层析膜上，待样品在膜上流动时，复合物将随之流动，并在免疫层析膜上形成一个特定的条带，最终通过观察胶体金颗粒在免疫层析膜上的聚集情况来判断待测物质的存在与浓度。
（1）快速性：该技术检测时间短，通常在30分钟以内即可得到结果，适用于快速现场检测。
（2）灵敏度高：胶体金颗粒作为标记物质，具有良好的散射光学性能，检测灵敏度高，可达到ppb或ppm级别。
（3）特异性强：抗体的高特异性保证了该技术对靶物质的特异性识别能力，可准确判断待测样品中目标分子的存在与浓度。
（4）操作简便：仪器设备简单，不需要复杂的实验步骤和条件，操作简便，适合于现场快速检测。
1. 农药残留检测：2. 食品中有害物质检测：食品中有害物质如重金属、致癌物质等对人体健康造成严重威胁，通过胶体金免疫层析技术，可以对食品中的这些有害物质进行快速准确的检测，及时发现并处理食品安全隐患。
3. 食品真伪鉴别：胶体金免疫层析技术还可以用于食品的真伪鉴别，通过对食品成分中的特定分子进行快速检测，判断食品原料的真实性，避免假冒伪劣产品对消费者健康造成危害。
4. 生物毒素检测：食品中的生物毒素是一种常见的食品安全隐患，而胶体金免疫层析技术可以用于生物毒素的快速检测，保障食品安全，防止食品中毒事件的发生。
随着人们对食品安全意识的提高和食品安全检测技术的不断进步，胶体金免疫层析技术将在食品安全现场快速检测中发挥越来越重要的作用。
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新疆农业大学专业文献综述题目: 免疫标记技术及其在食品安全检测中的应用姓名: 陈泽学院: 食品科学与药学学院专业: 食品质量与安全班级: 食品质量与安全112班学号: 114033207指导教师: 王子荣职称: 教授2014 年6 月10 日新疆农业大学教务处制免疫标记技术及其在食品安全检测中的应用作者：陈泽指导老师：王子荣摘要：文章介绍了免疫标记技术的发展以及免疫标记技术在食品安全检测中的应用，包括免疫荧光技术、免疫酶技术、放射免疫测定法、免疫胶体金技术和发光免疫测定法，并概述这些检测技术对食品安全的重要作用及影响。
关键词：免疫标记技术；食品安全；检测免疫分析法是以抗原抗体特异性结合生成抗原抗体免疫复合物为基础，用来检测生物样品中较低含量活性物质的检测方法。
此种分析方法的基础是抗原抗体反应的高度专一性和反应灵敏性。
进行免疫分析的前提是获得与检测物质相对应的抗体或抗原，抗体的特异性和亲和性都是决定免疫分析能力的重要影响因素。
免疫标记技术:泛指使用荧光素、放射性同位素、酶、胶体金以及化学(或生物)发光剂等作为标记物，标记的抗体或抗原和与之对应的抗原或抗体进行特异性的抗原抗体反应，最终借助各种精密的检测仪器对实验结果进行观察和测定。
免疫标记技术可以为样本定性研究，或为样本定量或者半定量检测技术，也可以在细胞或者组织中进行定位研究。
一、免疫分析发展的历史20 世纪50年代，免疫分析方法最初应用在体液中生物大分子的检测。
1959年，美国学者Yalow和Bersou建立检测糖尿病患者血浆中胰岛素的免疫标记方法，巧妙地将放射性同位素125I示踪技术和传统的免疫方法相结合，使免疫分析技术从定性技术转变为定量技术，开创免疫标记的先河。
1971年，瑞典学者Eugvai和Perlmauu用酶代替放射性同位素进行标记，创建了酶联免疫吸附试验（ELISA）。
1982年，Neurmau在免疫分析的基础上发展了一种新型免疫分析技术——时间分辨荧光免疫测定(TRFLA)。
1976年，Tsuji等基于酶与其特异性发光物质与免疫反应相结合，建立化学发光免疫测定(CLIA)。
1990年，Leland建立电化学发光(ECLIA)，是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫, ELIA以后的新一代标记免疫测定技术。
二、免疫荧光技术免疫荧光技术又称荧光抗体法(fluorescent antibody technique, FAT)，是一种将结合有荧光素(异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯二嗓基氨基荧光素)的荧光抗体作为分子探针与抗原进行反应，借以提高免疫反应灵敏度和适合显微镜观察的免疫标记技术。
该法具有灵敏度高、特异性强的特点。
免疫荧光技术的原理是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微小踪的精确性相结合，以有荧光素作为标记物，与已知抗体结合，但不影响其免疫学特性。
然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用以检测和鉴定未知抗原。
在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物以及其存在部位。
张冬青等采用膜溶解、密度梯度分离纯化结合免疫荧光技术对饮用水中的“两虫”(隐抱子虫和贾第鞭毛虫)进行定性定量分析检测，其回收率分别为56%和35%，均高于EPA 1623方法的质量控制要求。
采用免疫荧光技术操作方法简便且经济，适合在国内水源检测中推广使用。
有报道首次将微菌落技术同免疫荧光技术相结合，建立了微菌落免疫荧光技术(M-CIF) 。
M-CIF法敏感性和重复性好，用已知沙门氏菌浓度做最低检出限量实验，常规法检出限为10个/mL，而该法为5个/mL;阳性对照和阴性对照重复10次，阳性菌落均荧光明亮，颜色稳定，阴性菌落均荧光很弱。
用M- CIF法对不同菌落进行特异性的荧光染色鉴别细菌，仅需5- 6 h，在食品有害微生物检测方面有着非常大的应用前景。
三、免疫酶技术免疫酶技术又称酶免疫测定法，是将抗原和抗体的特异免疫反应和酶催化反应的高效性和专一性相结合而建立的一种新技术，常用的酶是辣根过氧化物酶。
其原理和免疫荧光技术相似，不同的是用酶代替荧光剂做标记，以及酶的特殊底物处理标本来显示酶标记的抗体，以检测标记物的有无及含量间接反映被测物的存在与多少。
该技术具有操作简单、敏感性高、准确性好、易于商品化等特点，正被广泛应用于微量物质检测、免疫相关物质检测等各个领域的分析检测。
免疫酶技术方法很多，最主要的方法为酶联免疫吸附法(ELISA)，简称酶标法，被广泛用于检测抗原或抗体，可进行定性和定量分析。
ELISA法可检测食品中的病原菌沙门氏菌、大肠杆菌等，食品中的微量农药残留，以及酱油生产中能引起中毒的霉菌次级代谢产物黄曲霉毒素、超曲霉毒素等方面。
用该法进行李斯特氏菌的快速检测，用三株针对单核细胞增生仅需48 h，在人工模拟肉中检测下限为5 cfu/ g样品。
陈琦等采用酶联免疫试剂盒及绘制以氯霉素浓度为半对数坐标的标准曲线对牛肉和蜂蜜中氯霉素残留量进行测定，变异系数为3. 1%一8. 6% ,重复性好，精确度高。
有报道用酶联免疫吸附酶标仪分析法和免疫亲和微检荧光仪分析法分别对粮油样品中黄曲霉毒素B1进行测定，对其检测条件和结果进行差异性分析，比较发现酶联免疫吸附分析法适宜大批量样品快速筛选，检出限为0.1μg/kg，可在广大基层实验室推广应用。
四、放射免疫标定法放射免疫测定法(radioimmuno- assay, RIA)是采用放射性同位素的抗原或抗体来检查相应抗体或抗原的高灵敏度免疫分析方法，此法具有高灵敏度(达10-9或10-12）可进行超微量分析，敏感性高等优点。
本法常用的同位素有3H，14C，125I和131I等。
放射免疫分析法应用范围广泛，在食品安全检测中可用来检测肉类药物残留，黄曲霉毒素等。
徐美奕等人用125 I标记的放射免疫试剂盒测定养殖红笛酬与野生红笛酬肌肉中雌二醇、孕酮、睾酮三种性腺激素残留量。
在养殖红笛酬与野生红笛酬肌肉中均检出三种激素，野生红笛酬中的激素残留量较低，但仍能被检出，放射免疫分析法放射性活度低、毒性小、样品处理简单、灵敏度高，检出限高于液相色谱法，可达ng-pg级，可作为水产品中激素残留量的有效检测手段。
有文献应用Charm II放射免疫分析方法测定猪尿样的磺胺类残留，检测限为200μg/kg，符合欧美等国磺胺类最大残留限量的检测要求，同时快速简便，在30 min内可出初筛结果，假阴性率为0%，有助于大批量样品的初筛，同时本方法为动物养殖过程中的用药监控提供了一种快速检测方法。
五、胶体金免疫技术采用电子致密物质(通常用辣根过氧化物酶和铁蛋白)标记的抗体与其相应抗原发生特异性结合，借电镜检出这一标记复合物的技术称为免疫电镜技术。
近年来逐渐发展到用胶体金作为非放射性示踪剂，即胶体金免疫技术。
胶体金免疫技术是20世纪80年代继三大标记技术(荧光素、放射性同位素和酶)后发展起来的固相标记免疫测定技术。
有关胶体金免疫技术的最旱报道是1971年Faulk和T aylor将胶体金与抗体结合，用于电子显微镜水平的免疫细胞化学研究。
此后，胶体金作为一种新型免疫标记技术发展很快。
目前在微生物学检验中应用的主要是免疫层析法和快速免疫金渗滤法。
胶体金是由氯金酸在还原剂作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。
胶体金标记实质上是蛋白等高分子被吸附到胶体金表面的包被过程，利用它在碱性环境中带负电荷的性质，与蛋白质分子或其他生物大分子的正电荷基团借静电吸引而形成牢固结合。
由于胶体金标记蛋白质是物理结合过程，结合牢固，很少引起蛋白质活性改变，所以试剂非常稳定，不受温度等外界因素影响，可在办公室、家中甚至野外进行检测，试验结果也可长期保存。
还具有很强的动力学稳定性，可放置数年。
胡孔新等人以被列为I类潜在重要生物恐怖因子鼠疫杆菌作为诊断对象，建立了适合于现场快速检测鼠疫杆菌抗原用的胶体金标记免疫层析方法，其检测灵敏度达到1 x 105 cfu/ mL，并对常见的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌无明显非特异作用，该法对出入境口岸的样品安全检测有重要意义。
有文献建立了一种简便快速的胶体金免疫层析法来检测沙门氏菌。
致病菌污染食物并在其中大量繁殖或产生毒素是细菌性食物中毒发生的首要原因，食入含106-107cfu/ g沙门菌的食品即可发病。
该法制备的免疫层析条检测灵敏度为2. 1 x 106cfu/ mL，在沙门菌食物中毒菌量范围内。
吉坤美等采用简易快速胶体金免疫层析法(GICA)检测食品中花生蛋白成分。
通过胶体金标记建立快速检测花生过敏原GICA试条，具有高灵敏度，GICA测试条与花生蛋白抗原呈特异性反应，检测自制的花生抗原标准品的灵敏度可达50 ng/ mL。
可有效地快速检测各种样品，满足我国进出口食品贸易的需求，同时为制定我国食品过敏原标签管理奠定了技术基础。
同时，胶体金技术还可用于肉类、蛋类中抗生素残留、激素残留的检测。
六、发光免疫分析技术一种把化学发光或生物发光反应与免疫测定结合后的高灵敏度分析方法，兼具有发光分析的高灵敏性和抗原抗体反应高度特异性。
化学发光剂有荧光醇、光泽精等。
利用化学发光反应进行检测是从20世纪60年代中期开始的，20世纪70年代后期将化学发光反应与免疫测定方法结合而建立的化学发光免疫分析法可对多种物质进行微量分析，灵敏度比ELISA高1000倍，且无毒、简便快速。
发光免疫技术可用于激素类的检测和抗生素残留检测，同时也可用于肉毒素等微生物代谢物检测，可定量分析也可定性，且无放射性物质污染，在食品安全检测中有广泛前景，但由于其应用时间不长，在方法上仍需进一步探索。
七、发展及展望免疫标记技术是一类不断发展和改进的技术，有很多新的方法正在被研究。
在实际操作中几种免疫标记技术可结合使用，例如可将荧光技术和酶免疫技术结合成荧光酶免疫分析技术，大大提高了敏感性。
随着各种研究技术的不断进步，在将来的食品安全检测中，简便、灵敏、快速的联用技术、免疫技术能为食品安全检测提供快捷方法，也为人们的营养健康做出保证，为疾病预防做出贡献。
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