微生物遗传育种学试卷

3、何谓基因工程？简述基因工程操作的基本步骤。
基因工程又称重组DNA技术，是将不同生物的基因在体外人工剪切组合并和载体（质粒、噬菌体、病毒）DNA连接，然后转入微生物或动植物细胞内，进行扩增，并使转入的基因在细胞内表达，产生所需要的蛋白质。基因工程操作的主要步骤：（1）目的基因的获得；分离或合成基因。（2）通过体外重组将基因插入载体。（3）将重组DNA导入细胞。（4）扩增克隆的基因。（5）筛选重组体克隆。（6）对克隆的基因进行鉴定或测序。（7）控制外源基因的表达。（8）得到基因产物或转基因动物、转基因植物。（或答微生物学书上的五个方面说明也可以）
4、两株具有不同营养缺陷型标记的霉菌进行准性生殖时，所形成的杂合二倍体的分生孢子在基本培养基上不能生长。（×）
5、细菌细胞的遗传物质染色体成分是由DNA和组蛋白组成。（×）
6、在细胞进行有丝分裂时，着丝粒发生分裂；在细胞减数分裂Ⅰ，着丝粒不发生分裂，在细胞减数分裂Ⅱ，着丝粒才分裂。（√）
7、所有限制性核酸内切酶都可以识别特定的序列并在识别序列内将DNA分子切开。（×）
5、原生质体融合育种：通过人为方法，使遗传性状不同的两细胞的原生质体发生融合，并产生重组子的过程。其优点：基因重组频率提高、重组的亲本范围扩大、融合子集中两亲本优良性状的机会增大。
6、抗反馈调节突变株：是指一种对反馈抑制不敏感突变株或对阻遏有抗性的组成型突变株，或兼而有之的突变株。（或从原理的角度阐述也行）。
《微生物遗传育种学》试卷（A）
一、填空题〖每个1分，共计20分〗
1、设A、B分别对a、b为完全显性，则对于aabb×AABB杂交，其F2表型有4种，基因型有9种。
2、基因突变的规律有自发性、不对应性（随机性）、稀有性、独立性、诱变性、稳定性/可遗传性和可逆性。
3、确立遗传物质化学本质的经典实验有肺炎链球菌的转化实验、噬菌体感染实验和病毒的拆分和重建实验。
4、试讨论按表型效应将突变型进行分类的情况。
（1）形态突变型：引起细胞个体形态和菌落形态发生改变的突变型。（2）生化突变型：引起特定生化功能的丧失而无形态学效应的突变型。包括营养缺陷型、抗性突变型、糖代谢突变型等。（3）致死突变型lethalmutant：由于基因突变造成个体死亡或生命力下降的突变型。（4）条件致死突变型conditionlethalmutant：在某一条件下具有致死效应，而在另一条件下没有致死效应的突变型。如：温度敏感突变型。（5）调节突变型regulatorymutant：丧失对某一基因或操纵子表达能力调节的突变型。
8、SOS修复系统是诱导产生的一种修复体系，它属于一种倾向差错的修复。（√）
9、属于同一不亲和群的细菌质粒结构上具有更多的相似性。（√）
10、F+×F—杂交后，F—细胞转变为F+细胞同时F+细胞转变为F—细胞（×）
三、名词解释〖每小题2分，共计20分〗
1、Hfr菌株：高频重组菌株，含有整合态的F因子，细胞表面有性纤毛。
2、试述紫外诱变筛选E、colistrr突变株的一般步骤，并说明主要步骤的目的及注意事项。
一般步骤：同步、对数期培养液→菌悬液的制备→UV诱变处理→后培养→strr突变株的筛选→菌种保藏。
（1）对数期：生长旺盛，细胞浓度较高；同步培养物：诱变剂处理后，群体中变化一致。（2）菌悬液的制备，玻璃株打散形成单细胞悬液，有利于诱变剂的处理。（3）诱变处理，利用UV诱变作用，提高突变频率。照射以后要避免光复活现象，红灯下操作、避光培养。（4）后培养（液体完全培养基中培养）：突变基因纯合并且表达，消除表型延迟现象。（5）strr突变株筛选：str药物平板筛选（药物浓度可以用临界浓度或采用梯度平板）。以一定浓度的str作为筛子，检出突变株。
1、Ames试验是利用细菌突变来检测环境中存在的致癌物质，是一种简便、快速、灵敏的方法。可以通过某待测物质对微生物的诱变能力间接判断其致癌能力。（√）
2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ普遍性转导产生的转导子一般都是非溶源菌。（√）
3、5-溴尿嘧啶都能诱发碱基置换，因此在大多数情况下，它诱发的突变都可以被它们自己诱发而得以回复。（√）
四、问答题〖每小题10分，共计50分〗；
1、在营养缺陷型突变株筛选过程中，淘汰野生型的目的是什么？并写出3种主要方法及其原理。
目的：降低野生型细胞的数量和比例，使营养缺陷型细胞得以相对浓缩，便于营养缺陷型菌株的筛选。
（1）抗生素法：青霉素能杀死生长态的细菌而对休止态的细菌无作用。细胞经饥饿培养、加抗生素处理、注意高渗保护原理限制营养成分使缺陷型细胞生长受到抑制，野生型细胞在生长过程中被杀死。（2）菌丝过滤法：适用于丝状真菌。将诱变后的孢子接种至MM中，控制培养时间，使野生型长成菌丝体，通过过滤而除去菌丝体，反复几次后，剩余的多为缺陷型孢子。（3）差别杀菌：利用芽孢或孢子比营养细胞更耐热的特点。将诱变处理的细菌形成芽孢，把芽孢在基本培养液中培养一段时间，然后加热杀死营养体。由于野生型芽孢能萌发所以被杀死，而营养缺陷型不能萌发不被杀死。
4、由于一对碱基为另一对碱基所取代会造成密码子的变化，根据突变后密码子与原密码子所表示的意义的关系可将这种突变分为错义突变、同义突变和无义突变。
5、DNA损伤的修复机制有光复活、切补修复（暗修复）、重组修复、SOS修复和N-糖基酶修复。
二、判断题〖每小题1分，共计10分。正确打（√）、错误打（×）〗
2、PCR：聚合酶链式反应，一种体外DNA扩增技术，用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段(靶序列)。过程：变性、退火、延伸。
3、pUC18：质粒载体，p——plasmid质粒，UC——发现者或实验室名称缩写，18——编号；（或只提质粒载体，并说明该质粒的特点）。
4、HindⅢ：一种Ⅱ型限制性内切酶，Hin：菌名的缩写Haemophilusinfluenzae，d：菌株名的缩写，Ⅲ——编号。
7、移码突变：由于一对或少数几对（不是三的倍数）核苷酸的插入或缺失，而造成此后一系列遗传密码子的阅读框发生移位错误的突变。
8、感受态：受体细菌能吸收外源DNA（接受转化）时，所处的生理状态称为感受态。
9、前突变：物理或化学诱变剂接触细胞后，对遗传物质造成的损伤。
10、等位基因：在同源染色体上占有相同位置，控制一对相对性状的两个基因。