免疫学试验设计2012-10
免疫学实验
免疫学实验免疫学实验是一项非常重要的研究领域，它涉及到研究人体免疫系统的机制和功能，并通过实验手段来深入了解和探索免疫系统对疾病的防御和治疗作用。
在本文中，我们将介绍免疫学实验的一些基本概念和常见的实验方法，以及它们在研究和治疗免疫相关疾病中的应用。
首先，我们来了解一下免疫学实验中常用的一些基本概念。
免疫学实验主要涉及到免疫细胞、抗体和抗原的相互作用。
免疫细胞是人体免疫系统的重要组成部分，包括巨噬细胞、淋巴细胞等。
抗体是由免疫细胞产生的一种特殊蛋白质，它可以识别和结合到体内外入侵的病原体，激活免疫系统进行防御。
而抗原则是一种能够引起免疫系统反应的物质，可以是细菌、病毒、真菌等。
在免疫学实验中，常见的实验方法包括免疫组化、流式细胞术、ELISA等。
免疫组化是一种用于检测组织或细胞中某一种特定蛋白质的方法，它可以通过使用特异性抗体来标记和检测目标蛋白质的位置和表达水平。
流式细胞术则是一种通过流式细胞仪进行细胞表面标记和分析的方法，它可以对不同类型的免疫细胞进行鉴定和分类。
ELISA是一种用于检测和分析抗体和抗原相互作用的方法，它基于酶标记免疫吸附技术，可以测定目标物质的浓度和活性水平。
除了这些基本方法，免疫学实验还可以进一步应用于研究和治疗免疫相关疾病。
免疫学实验可以帮助我们深入了解免疫系统在疾病中的作用机制，例如自身免疫疾病、感染性疾病等。
通过实验手段，我们可以研究免疫细胞的活性和功能，并探索潜在的治疗策略。
例如，在免疫细胞治疗中，我们可以通过实验手段提取、修饰和培养免疫细胞，并将其用于治疗癌症、自身免疫疾病等疾病。
此外，免疫学实验还有助于研发和评估新型的免疫药物和疫苗。
通过实验方法，我们可以研究药物在免疫系统中的作用机制和疗效，并评估其用于治疗疾病的潜力。
免疫学实验在疫苗研发中也发挥着重要的作用，通过评估免疫细胞对疫苗的反应和效果，我们可以确定疫苗的安全性和有效性。
总结起来，免疫学实验是一项非常重要且广泛应用的研究领域。
医学免疫学实验教学设计
医学免疫学实验教学设计免疫学是医学中非常重要的科目之一，它研究人体与生物体之间的相互作用和免疫机制。
为了更好地教授免疫学，实验教学也是必不可少的一部分。
本文将介绍医学免疫学实验教学的设计思路和具体实施方案。
实验教学的目的和意义1.帮助学生更好地理解课堂上学习的免疫学理论知识；2.培养学生的实验操作能力和科学研究精神；3.培养学生的团队合作意识和学术交流能力；4.提高学生的综合素质。
实验教学的设计和实施医学免疫学实验教学应该是以课程中学过的相关免疫学理论知识为基础，加以实际操作进行的。
实验教学的设计1.实验主题的确定。
根据免疫学课程的安排和教学目标，确定合理的实验主题；2.实验方案的制定。
在确定好实验主题后，需要考虑实验的各种操作流程、试剂和仪器的选择等方面的问题；3.实验材料和设备的准备。
根据实验方案需要准备好所需要的各类材料和设备；4.分组和分工。
对参加实验的学生进行分组和分工，分工明确，任务清晰；5.实验流程的讲解。
在实验开始前，对整个实验流程进行讲解，学生了解实验目的、流程和要求；6.操作的讲解。
对每个步骤进行具体的操作讲解，学生了解每个步骤的操作方法、注意事项和安全措施；7.实验数据的采集和分析。
在实验完成后，及时对实验数据进行收集和分析，对实验结果进行统计；8.报告书写和演讲。
学生完成实验后，需要按照规定撰写实验报告，并进行实验成果的汇报和演讲。
实验教学的实施1.分步骤一步一步进行。
实验教学的实施需要从简单易操作的步骤开始引导学生进行实验，逐步加大难度，以便让学生更好地理解和掌握每一个操作步骤；2.加强安全教育。
在实验教学的过程中要时刻注意学生的安全，加强安全教育，学生需要遵守实验室的规章制度，正确佩戴实验室个人防护用品和操作设备，保证实验的顺利进行；3.培养实验操作能力。
实验教学要注重学生实验操作的独立性和能力的培养，让学生在实践中更好地锻炼自己的操作技能，同时也加深对免疫学理论知识的印象和理解；4.督促学生完成实验报告。
免疫学实验方案设计——证明某产品具有免疫增强作用(从淋巴细胞数目及活性的角度考虑)
免疫细胞的计数
1. 直接计数 2. 检测细胞表面特征性标记分子 膜表面分子免疫荧光检测法 流式细胞分析法 免疫细胞化学法 抗体致敏细胞花环法 3. 检测细胞特定功能（微量细胞毒试验、细胞因子检测）
直接计数
细胞计数
数上不数下，数左不数右。
细胞计数板
细胞计数并检测活性
用Hank’s液重悬细胞 取10ul细胞悬液与90ul台盼蓝液混合
单次密度梯度分离法 单一密度 连续密度梯度
血浆
PBMC 分离液 多形核白细胞 红细胞
取PBMC
玻璃平皿
单核细胞吸附； 未吸附的为淋巴细胞
淋巴细胞及其亚群的分离
✓尼 龙 毛 分 离 法 ✓E 花 环 沉 降 法 （ 课 本 内 容 ） ✓免 疫 吸 附 分 离 法 ✓磁 珠 分 离 法 ( I M B ) ✓流 式 细 胞 术 ( F C M ) ✓抗 原 肽 - M H C 分 子 四 聚 体 技 术
• 免疫细胞的种类：
淋巴细胞：T细胞、B细胞、NK细胞 单核/巨噬细胞、树突状细胞、中心粒细胞
• 免疫细胞的分布：
• 外周血 • 免疫器官： • 组织
胸腺、骨髓 脾脏、淋巴结 粘膜相关淋巴组织
4
免疫细胞检测
免疫细胞数量与功能检测是判断机体免疫功能状态的重要指标
• 免疫细胞及亚群的分离、鉴定与计数 • 单核-吞噬细胞功能测定 • T淋巴细胞功能测定 • B淋巴细胞功能测定 • NK细胞功能测定 • 其他免疫细胞功能测定
取10ul于细胞计数板上 镜检
死细胞染成蓝色，活细胞不着色
Thank you!
磁珠分离法
• 在磁珠表面包被具免疫 反应性的抗体进行抗原 抗体反应，在细胞表面 形成玫瑰花结
免疫学实验技术教学设计
04
实验技术在教学中的意义
01
提高学生的实践能力
0 2 培 养 学 生 的科学素养 和创新能力
03
帮助学生理解免疫学的基本原理和 概念
提高学生的实验操作技能和实验设 计能力
04
05
培养学生的团队合作精神和沟通能 力
实验技术发展现状与趋势
免疫学实验技术在医学、生物学等 领域的应用越来越广泛
实验技术的发展与创新，推动了免 疫学研究的深入
教师姓名：李明 教学经验：10年 教学成果：发表多篇论文，获得多项教学奖项 教学方法：注重实践操作，注重学生动手能力的培养 教学特色：注重实验技术的创新和应用，注重培养学生的创新思维和实践能力
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免疫学实验技术教学设计
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目录
01 02 03 04 05 06
免疫学实验技术概述
免疫学实验技术教学目标与内容
免疫学实验技术教学方法与手段
免疫学实验技术教学评价与反馈
免疫学实验技术教学资源与平台 免疫学实验技术教学师资队伍与建
设
01
免疫学实验技术概述
实验技术定义与分类
实验技术的自动化、智能化趋势明 显，提高了实验效率和准确性
实验技术的标准化、规范化，提高 了实验结果的可靠性和可比性
实验技术的绿色化、环保化趋势， 减少了对环境的污染和破坏
02
免疫学实验的基本原理和方法
添加 标题
掌握免疫学实验的数据分析和结果 解释
01
免疫学实验技术：研究免疫反应和 免疫机制的实验方法
03
细胞免疫学实验技术：研究细胞免 疫反应的实验方法，如细胞培养、 细胞融合等
05
免疫学实验设计
少数位于中央
偏
疏松，呈粒状 较疏松
清晰，可见 1～3个
有或无
有时可见
无
丰富，核之一 侧较宽广
稍宽
++++ 常可见
+++～++ 有或无
未转化的淋巴细胞
表3-5
转化淋巴细胞的判断标准
6～8µm
多位于中央 致密团聚
无 无
较少，常呈一窄环 ++～+ 无
伪足
常可见
有或无
无
素100单位每毫升 链霉素100微克每毫升）
• PHA（每毫升含100单位） • 无菌注射器及枪头 试管 吸管等
实验步骤：
• 1 采肝素抗凝血1-2毫升（1毫升血中加肝素20单位）充分
混匀。37℃静置1-2h。红细胞沉淀后，吸取血浆层并捎
带些红细胞，移入另一无菌试管中。计算淋巴细胞数并离 心10分钟，弃上清液。用199培养液将沉淀的淋巴细胞配 成1*107每毫升细胞悬液。
免疫学：创新实验设计
T淋巴细胞转化试验
小组成员：王志高 李河川 李世学 刘有为 李天才 孟晓光
实验原理：
正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中受 到特异性抗原或有丝分裂原刺激，可转化 为淋巴母细胞。细胞免疫缺陷时，患恶性 肿瘤或某些其他疾病时，转化率显然降低。 目前最常用植物血凝素（PHA）作为分裂原 检测受试者的淋巴细胞转化率，从而判定 其细胞免疫功能。
• 2 取细胞悬液0.6毫升加入含有2.4毫升199培养液的培养
瓶中。
• 3 按每毫升30微克PHA加入PHA。 • 4 37℃ 67-72h，培养过程中每天翻动培养瓶1-2次。
实验步骤：
免疫学实验教学备课教案免疫实验的设计与操作
免疫学实验教学备课教案免疫实验的设计与操作免疫学实验教学备课教案一、实验目的本实验旨在通过设计与操作免疫学实验，让学生了解免疫学的基本理论知识与实验操作技巧，培养学生的实验思维能力和科学实验的技能。
二、实验原理免疫学实验是通过模拟真实的免疫反应过程来研究机体对抗疾病的机制。
实验中常用的技术包括免疫沉淀、免疫印迹、酶联免疫吸附试验等。
通过这些技术，可以检测抗原和抗体的相互作用，研究疫苗效果以及诊断免疫相关疾病等。
三、实验仪器与材料1. 电泳仪2. 分析天平3. 电源供应器4. 显微镜5. 细胞培养装置6. 活体小鼠7. 抗原和抗体标记试剂盒四、实验操作步骤1. 实验前准备a. 准备所需材料，并确认实验仪器的正常工作状态。
b. 为实验室提供良好的实验环境，确保安全与卫生。
c. 细心阅读实验操作步骤，了解实验的整体流程。
2. 抗原与抗体的制备a. 根据实验要求，选择合适的抗原并进行提取与纯化。
b. 制备抗体，可以通过免疫小鼠获得，或选择商业试剂盒。
3. 免疫沉淀实验a. 准备测试样品和控制样品。
b. 将抗原与抗体混合，反应一定时间。
c. 加入免疫沉淀试剂，沉淀免疫复合物。
d. 用电泳将复合物分离，观察结果。
4. 酶联免疫吸附试验(ELISA)a. 准备ELISA板，涂覆抗原。
b. 加入标准品和待测样品，与包被的抗体反应。
c. 加入辣根过氧化物酶结合的二抗，形成抗原-抗体-酶复合物。
d. 加入底物，观察颜色变化，并使用酶标仪测定吸光度。
五、实验结果与分析根据实验所得数据和观察结果，进行免疫实验的定量与定性分析。
通过对比实验组与对照组的结果，判断实验的有效性以及所研究问题的回答。
六、实验注意事项1. 在实验过程中，保持实验台面整洁，避免交叉污染。
2. 操作实验仪器时，注意安全操作规范，避免发生事故。
3. 确保实验操作符合伦理要求，保护动物的福利。
4. 结果分析时，要考虑实验可能存在的误差与不确定性。
七、实验拓展在完成基本免疫实验的学习后，可以进一步拓展实验内容，比如进行免疫细胞活性检测、蛋白质互作研究等。
免疫检验技术实验设计
免疫检验技术实验设计一、背景介绍免疫检验技术是检测生物体内特定抗原或抗体的一种方法。
它基于抗原与抗体之间的特异性结合反应，通过标记化学物质来检测这种结合反应，并进行定量或定性分析。
免疫检验技术广泛应用于医学、生命科学、环境监测等领域，是现代生物学研究和临床诊断中不可或缺的工具。
二、实验目的本实验旨在通过免疫检验技术，掌握ELISA法和Western Blot法的实验操作步骤和原理，并了解其在生命科学研究中的应用。
三、实验材料1.小鼠血清样品（含有目标蛋白）2.目标蛋白标准品3.ELISA试剂盒（包括酶联免疫板、酶标记二抗、底物等）4.Western Blot试剂盒（包括SDS-PAGE凝胶、转膜器、一抗和二抗等）5.洗涤缓冲液、稀释缓冲液等四、实验步骤A. ELISA法1.制备样品和标准曲线将小鼠血清样品和目标蛋白标准品分别稀释至一定浓度，制备不同浓度的样品和标准曲线。
2.涂覆酶联免疫板将目标蛋白标准品溶液加入酶联免疫板孔中，孵育一定时间，使其吸附在板上。
3.加入一抗和二抗将稀释后的小鼠血清样品加入各个孔中，与目标蛋白结合。
再加入酶标记的二抗，与一抗结合形成复合物。
4.洗涤和底物反应洗去未结合的试剂后，加入底物反应产生颜色变化。
根据颜色变化程度测定样品中目标蛋白的含量，并绘制标准曲线。
B. Western Blot法1.制备SDS-PAGE凝胶将分子量不同的蛋白质按照大小顺序分离在SDS-PAGE凝胶上。
2.电泳分离蛋白质将样品加入电泳槽中进行电泳分离，使其按照分子量大小逐渐移动到凝胶的不同位置。
3.转膜将分离后的蛋白转移到聚丙烯酰胺薄膜上，使其与薄膜结合。
4.孵育一抗和二抗将一抗加入孵育液中，与目标蛋白结合。
再加入酶标记的二抗，与一抗结合形成复合物。
5.洗涤和底物反应洗去未结合的试剂后，加入底物反应产生颜色变化。
根据颜色变化程度测定样品中目标蛋白的含量，并绘制标准曲线。
五、实验注意事项1.实验过程中要注意洁净卫生，避免交叉污染。
免疫反应实验设计
免疫反应实验设计免疫反应实验是一种重要的实验方法，用于研究生物体对外源抗原的免疫应答过程。
本文将介绍一种免疫反应实验的设计。
实验目的：本实验旨在研究小鼠对特定抗原的免疫反应及其效果。
实验材料和仪器：1. 小鼠（实验组和对照组各10只）；2. 特定抗原（抗原A）；3. 细胞培养培养基（RPMI 1640）；4. 透明化学药品及试剂；5. 免疫检测设备：ELISA板读取器、流式细胞仪等。
实验步骤：1. 小鼠实验组和对照组的处理：- 实验组：将实验组小鼠每天注射一定剂量的抗原A，连续注射10天；- 对照组：对照组小鼠注射生理盐水，与实验组一样的注射时间和剂量。
2. 血样收集：- 在注射结束后的第11天，分别从实验组和对照组的小鼠尾静脉采集血液样本；- 血样收集后，离心血液，收集上清液即血清。
3. 血清处理：- 将血清分装到离心管中，加入透明化学药品与试剂，如洗涤缓冲液和抗体及底物；- 根据实验需要，进行酶联免疫吸附试验（ELISA）或其他相关实验。
4. 数据分析：- 通过ELISA板读取器等设备，测量和记录实验组和对照组小鼠血清中特定抗原相关指标的光密度或浓度；- 使用统计软件（如SPSS）进行数据处理和相关统计分析，比较实验组和对照组的实验结果。
实验控制：1. 保证实验组和对照组的小鼠来源、年龄、性别和饲养环境等条件的统一；2. 控制实验组小鼠注射抗原A的剂量和时间，确保每只小鼠注射剂量的准确性和一致性；3. 相同的操作程序和处理方法，以减少实验误差和结果的差异。
结果分析：通过实验得到的数据可以对比实验组和对照组小鼠的免疫反应情况。
如果实验组小鼠的免疫反应明显高于对照组，可以说明该抗原在小鼠体内诱导了特异性的免疫反应。
实验数据的统计学分析将进一步验证实验结果的可靠性和显著性。
实验应用：免疫反应实验设计可以应用于各种研究领域，如疫苗研发、自身免疫疾病研究、药物免疫学评价等。
通过实验设计，可以深入了解生物体对特定抗原的免疫应答机制，为疾病预防和治疗提供理论基础和实验依据。
免疫学实验设计(从影响淋巴细胞功能、T细胞增殖角度考虑)
原理：
T淋巴细胞有植物血凝素( PHA)受体，在体外受刺激后， 可发生形态改变而转化为淋巴母细胞。用姬姆萨染色后，计算 200个淋巴细胞中转化为母细胞的细胞数(包括过渡型、母细胞 和分裂相淋巴细胞),依转比的百分率判定T淋巴细胞的功能。 细胞免疫缺陷时，患恶性肿瘤或某些其他疾病时，转化率显然 降低。
方法一：
头
体
尾
每张玻片计数200—400个细胞，计算转化率其中头部50—100，体部50—100，
尾部100—200细胞。
淋巴细胞转化率
转化淋巴细胞数 转化淋巴细胞数 未转化淋巴
100 %
一般认为转化率的正常值为60—70%
方法二：
（1）采肝素抗凝血1-2 毫升(1毫升血中加肝素20单位)充分混匀。37℃静置1- 2小时。红细胞沉淀 后，吸取血浆层并捎带些红细胞。移人另一无菌试管中。计算白细胞数然后2000rpm离心10分钟。弃上 清液。用199培养液将沉淀的白细胞配成1x107/毫升细胞悬液。
问题背景
市场上有一广告产品，据说有免疫增强作用请设 计一个方案证实之。（从影响淋巴细胞功能、T淋巴 细胞增殖的角度考虑。）
淋巴细胞转化实验
原理：
T淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性抗原(PHA、PWM和 ConA )刺激均能使细胞发生转化。T淋巴细胞转化率的高低可反 映人体细胞免疫功能水平，常被作为细胞免疫功能指标之一。淋 巴细胞转化试验可从周围血中分离出淋巴细胞，也可采用全血试 验。试验方法主要有形态学方法和3H胸腺嘧啶核甘酸(3H-TdR) 掺人法二种。前法简单易行，不需特殊设备，本试验介绍这种方 法。
原理：
形态法
刺激物 PHA
淋巴细胞
增殖分化、DNA等大分子 物质合成增加
免疫学实验设计
目的气道炎性细胞浸润与粘附分子的关系近几年日益受到重视。
而细胞粘附分子受多种因素的调节，其中细胞因子起至关重要的作用。
嗜酸性粒细胞表面粘附分子L-选择素（L-selectin，CD62L）和极迟抗原-4（very late antigen-4，VLA-4，CD49d）是介导其与血管内皮细胞粘附的重要因素。
L-选择素介导白细胞与血管内皮细胞的初始粘附；VLA-4介导嗜酸性粒细胞与血管内皮细胞的牢固粘附，从而构成了哮喘时嗜酸性粒细胞气道浸润的重要条件。
【1,2】TNF α可调节嗜酸性粒细胞与脐静脉血管内皮细胞之间的粘附，TNF α活化的血管内皮细明显增强其与嗜酸性粒细胞的粘附【3】。
我们已往的实验发现【4】：TNF α能刺激气道平滑肌细胞分泌内皮素-1，而内皮素-1又可诱导肺的成纤维细胞分泌GM-CSF，初步证实了TNF α及其与气道基质细胞的相互作用在哮喘中的价值。
但是，TNF α是否为哮喘时特异细胞因子尚未有确切的结论。
为此，实验采用双色免疫荧光流式细胞技术观察了TNF α对人外周血嗜酸性粒细胞表面粘附分子L-选择素和VLA-4表达的影响，并与嗜中性粒细胞作以比较，以了解TNF α对嗜酸性粒细胞粘附分子表达是否有选择性作用及TNF α在气道炎症中的意义。
实验步骤材料与方法1.1仪器和单抗FACScan流式细胞仪。
荧光素直接标记的抗人CD15-FITC，CD49d-PE，CD62L-PE及Isotype单抗,TNF α。
1.2实验分组与处理取健康人外周肝素抗凝血，按以下分组进行处理：对照组（Control group）；TNFα 1组：TNF α终浓度为100u／ml；TNFα 2组：TNF α终浓度为1 000u／ml。
100μl 外周抗凝全血经TNFα 37°C30min温育后，分别加入CD15-FITC／CD62L-PE和CD15-FITC ／CD49d-PE单抗10μl，室温孵育30min，用红细胞裂解液（0．155mmol／L NH4Cl，0．01mol ／L KHCO3，0．1mmol／L EDTA，pH7．4）裂解红细胞，至透明时离心获取有核细胞，用PBS（pH7．4）洗2次，1％多聚甲醛固定，3d内上机测定。
免疫学实验教案
[键入公司名称]免疫学实验教案研究生教育实习潘熙萍(Y20090201)2011/1/14[在此处键入文档的摘要。
摘要通常是对文档内容的简短总结。
在此处键入文档的摘要。
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]实验一免疫血清的制备一、实验目的熟悉免疫血清的制备过程；了解动物实验的基本知识。
二、实验原理将抗原物质经适当途径，按照预先制定的免疫方案免疫动物，经过一定时间，可刺激机体产生特异抗体并释放入血液，当血中抗体达到一定效价时采血，分离血清，即为特异性免疫血清（又称为抗血清）。
因抗原具有多种表位，可激活多个克隆的B细胞活化产生抗体，因此，这种免疫血清又称为多克隆抗体。
本实验以绵羊红细胞（SRBC）作为免疫原，以家兔为免疫动物，制备兔抗养红细胞免疫血清（也称为溶血素）三、器材和材料1.动物健康成年家兔，雄性，体重2-3kg；健康成年绵羊。
2.试剂生理盐水、碘酒、75%酒精。
3.器材剪刀、镊子、无菌注射器、量筒、无菌毛细滴管、无菌试管、离心管、三角烧瓶（200ml）、动物固定架、手术器械一套、塑料放血管等。
四、实验步骤1.抗原制备（1）用碘酒和75% 消毒绵羊皮肤，抽取颈静脉血液，注入含有等量阿氏液的三角烧瓶内，混匀。
阿氏液既有抗凝作用，又适于储存SRBC。
分装后置4℃冰箱内，可使用3周。
（2）无菌取上述绵羊血于离心管中，用无菌生理盐水洗涤红细胞，2000r/min，离心5min，吸弃上清液和白细胞层，再用无菌生理盐水与SRBC混匀， 2000r/min，离心5min，重复3次。
最后一次离心10min，以使血细胞沉积于管底，弃去上清液。
（3）根据红细胞积压，用生理盐水配成20%SRBC悬液。
2.免疫动物（1）全班分为4组，每组选择健康雄性兔1只，用于免疫。
（2）用全血和SRBC悬液按下述方案免疫兔子。
（3）试血末次注射后第7天，耳静脉采血1ml ,分离血清，用试管凝集试验滴定效价。
（1：2000以上可用）3、分离血清（1）颈动脉放血（心脏采血）并收集于无菌三角烧瓶中凝固后4℃冰箱过夜，分离上层血清。
免疫学实验
免疫学实验免疫学实验是研究生物体对抗病原体或其他异物的免疫反应过程的重要手段。
通过实验，我们可以了解免疫系统的基本原理、免疫应答的机制，以及各种免疫相关疾病的发生和治疗方法等。
本文将介绍免疫学实验的一般步骤和常用技术，以及它们在免疫学研究和临床应用中的重要性。
免疫学实验的一般步骤通常包括：实验设计、实验材料准备、实验操作、数据分析和结果讨论等环节。
首先，研究者需要根据研究目的和问题，设计一系列能够回答问题的实验方案。
实验设计应该明确实验的假设、实验对象和实验过程中可能涉及的参数，以及实验结果的预期。
接下来，研究者需要准备实验所需的材料，包括实验动物、抗原、抗体、试剂和仪器设备等。
实验材料的选择和准备要根据实验的具体需求和方法进行，并确保实验所需的材料的质量和纯度。
实验操作是免疫学实验的核心部分。
根据实验的具体目的和方法，研究者可以选择不同的实验技术进行操作。
常用的免疫学实验技术包括：免疫组化、流式细胞术、酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹、免疫沉淀、免疫荧光和细胞毒性实验等。
这些实验技术可以用来检测和分析抗原和抗体的相互作用、细胞免疫应答、免疫相关基因的表达和调控等免疫学研究中的重要问题。
在实验操作中，研究者需要严格按照实验方案进行实验，并注意实验条件的控制和操作细节的注意。
实验数据的分析和结果的讨论是免疫学实验的最后一步。
研究者需要对实验获得的数据进行统计和分析，并据此得出可靠和有效的实验结果。
实验数据的分析方法和统计学原则应根据实验的具体需求和数据的特点来选择。
在结果讨论中，研究者应该对实验结果进行分析和解释，并将结果与已有的研究成果进行比较和讨论，以得出科学和合理的结论。
免疫学实验在免疫学研究和临床应用中具有重要的意义。
通过免疫学实验，我们可以揭示免疫系统的工作原理和免疫应答的机制，进而为免疫相关疾病的预防和治疗提供理论和实验依据。
例如，在免疫学研究中，可以利用免疫学实验技术研究不同种类的免疫细胞和免疫分子，以及它们在免疫调节、炎症反应和免疫记忆等方面的作用机制。
免疫学实验设计_证实某产品的免疫增强作用(考虑淋巴细胞活性及功能)
设计思路1
E花环沉降法： 免疫学上用来检测T细胞数量的一种实验方法，T细胞表面具有能与绵羊红细 胞(SRBC)表面糖肽结合的受体，称为E受体(CD2)。CD2 是一种糖蛋白，相 对分子质量为30 000~60 000，已证实E受体是人类T细胞所特有的表面标志。 当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。通过花 环形成检查T细胞的方法，称为E花环形成试验。根据花环形成的多少，可测 知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态
中的单核巨噬细胞 ,再分别以脱脂棉柱或尼龙棉柱纯化T淋巴细胞。纯化的T 淋巴细胞经流式细胞仪检测T淋巴细胞纯度 ,台盼蓝排斥实验检测纯化T细胞 活力 • 脱脂棉柱滤过分离法可以代替尼龙棉柱法获得高纯度高活性的T淋巴细胞
Thanks.
箱固定15分钟。 • 5.取出后，轻轻旋转试管，使沉淀细胞重新悬浮;取1滴涂片，自然干燥后，瑞
氏染色，高倍下观察。
设计思路1
• 结果处理 • 凡能结合3个SRBC者即为E花环阳性细胞。计数200个淋巴细胞，算出花环
形成细胞百ห้องสมุดไป่ตู้率。
E-花环
设计思路2
• 尼龙棉分离法 • 密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞 ,通过玻璃器皿黏附的方法去除其
设计思路1
• 操作方法 • 1.用分层液密度梯度离心法分离淋巴细胞，计数后，用Hanks液配成107个/ml
细胞悬液。 • 2.取0.1 ml淋巴细胞悬液，加入0.1 ml 1% SRBC及0.05 ml灭活小牛血清，混匀。 • 3.37℃静置5分钟，500 rpm低速离心5min后，放入冰箱，2小时或过夜。 • 4.取出试管，吸弃上清液，加0.8%戊二醛溶液1 滴，轻轻旋转混匀，置4℃冰
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免疫学实验实验⼀凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成⾁眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥⽽呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发⽣特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分⼦间的静电排斥⼒，此时已有凝集的趋向，在电解质（如⽣理盐⽔）参与下，由于离⼦的作⽤，中和了抗原抗体复合物外⾯的⼤部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥⼒，分⼦间相互吸引，凝集成⼤的絮⽚或颗粒，出现了⾁眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进⾏定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两⼤类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[⽬的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作⽅法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻⽚，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），⽛签或⽕柴棒，记号笔。
2. 灭菌的⽣理盐⽔，灭菌的0.5%⽯炭酸⽣理盐⽔。
3. 布⽒杆菌病试管凝集抗原，布⽒杆菌病平板凝集抗原，布⽒杆菌病虎红平板凝集抗原，布⽒杆菌病阳性⾎清，布⽒杆菌病阴性⾎清，被检⾎清（⽜、⽺或猪）。
4. 鸡⽩痢平板凝集抗原，鸡⽩痢阳性⾎清，鸡⽩痢阴性⾎清，被检鸡⾎清。
[实验内容及操作⽅法]（⼀）试管凝集试验以⽜布⽒杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份⾎清⽤试管4⽀，另取3⽀试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检⾎清有多份，对照只需做1份。
2. 被检⾎清稀释：第1管加⼊2.3ml 0.5% ⽯炭酸⽣理盐⽔，第2、3、4管加⼊0.5 ml 0.5% ⽯炭酸⽣理盐⽔；然后⽤加样器或刻度吸管吸取被检⾎清0.2 ml，加⼊第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加⼊第2管中，混匀后吸取0.5 ml加⼊第3管，依此类推⾄第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
免疫学课程技术实验方案汇总
【注意事项】 1. 注意分离液与脾细胞悬液的比例，一般以 1:2~1:3 为宜； 2. 注意离心温度，最适温度为 18～20 ℃。 3. 加入脾细胞悬液时应十分小心,注意保护分离液的界面,勿使混淆 影响分离效果； 4. 每个吸取细胞悬液的步骤，均要混匀细胞； 5. 做细胞活力检查时，锥兰染色后应尽快计数完毕,时间过长则细胞活力可能降低。
【实验步骤】：
取已知浓度的抗体蛋白溶液，用 pH9.5，0. 5M 碳酸缓冲液稀释至浓度为 20mg/ml。置
于包黑纸的小烧杯中，并放入磁棒。(1ml Ab + 1.25ml CB )
↓
称取适量 FITC：FITC 的量(mg)=待标记抗体蛋白总量(mg)×0.01
↓
将称好的 FITC 放在试管中，并用黑纸包好，取相当于稀释后抗体蛋白溶液体积 1/10 的
沉淀再溶于 2ml PBS (0.01mol/L，PH7.0 )中 ↓
边搅拌边滴加饱和硫酸铵溶液加饱和硫酸铵溶液 1 ml ，使溶液的饱和度达 33% ↓
4℃， 静置，30min ↓
3000r/min，离心，15min 弃去上清液，即获得粗制的 IgG 沉淀。 ↓
将获得的粗 IgG 沉淀溶于 1.5-2 ml PBS 中,装入透析袋中，对 PBS 透析
免疫学技术实验（五）
【实验五：Western Blot】 【原理】：免疫印迹是由 SDS-PAGE、蛋白质转印和免疫杂 交三项技术结合而成。是一个 用于蛋白质分析的 常规技术，在电场的作用下将电泳分离的蛋白从 凝胶转移至一种固相 支持物，然后利用抗原-抗体 的特异性反应，从蛋白混合物中检测出目标蛋白,从而定量或 定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。
免疫实验设计
一、课题名称：细胞因子诱导的杀伤细胞对淋巴瘤荷瘤鼠的抗肿瘤作用的研究二、立题依据：恶性肿瘤是危害人类健康的严重的疾病之一，近年来恶性肿瘤的发病率呈逐渐上升趋势。
随着分子生物学研究的不断深入和综合治疗方法的不断完善，肿瘤的诊治水平得到了很大的提高。
目前，生物治疗已成为继手术、化疗及放疗之外的第四种治疗肿瘤的手段，是目前研究肿瘤治疗的热点之一。
迄今为止，CIK 细胞对淋巴瘤细胞株体外研究的报道较多，但对荷瘤鼠的体内研究及 CIK 细胞对肿瘤血管生成的影响研究较少。
三、实验目的：细胞因子诱导的杀伤细胞是一种异质细胞群，从外周血、骨髓或脐带血中分离出的单个核细胞在多种刺激因子（IL-2、IL-1、IFN-γ、抗 CD3 单克隆抗体）作用下,经过一定时间的培养而获得的一种免疫活性细胞。
CIK 细胞同时具有 T 细胞的抗肿瘤活性和 NK 细胞的非 MHC 限制性杀瘤的特点。
因其在体外扩增速度快，杀伤活性高，杀瘤谱广，不良反应少，可提高患者的免疫功能，消除微小残留，被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。
本实验通过应用 CIK 细胞治疗淋巴瘤荷瘤鼠，应用免疫组化法比较治疗组与对照组的淋巴瘤组织的VEGF、MVD 的差异，探索 CIK 细胞抗肿瘤的新机制，为 CIK 细胞在儿童淋巴瘤的临床应用提供依据。
四、实验对象：淋巴瘤荷瘤鼠。
建立淋巴瘤荷瘤鼠并分组：在 Balb/c-nu/nu 裸鼠左上肢肩胛处皮下接种 T 细胞淋巴瘤 Jurkat 细胞 1.2×108/ml，0.2ml/只。
建立淋巴瘤荷瘤鼠模型。
待裸鼠成瘤后，随机分为两组，每组 5 只，治疗组予瘤旁注射体外培养 2 周的 CIK 细胞 3×107/ml，0.2ml/只，对照组予瘤旁注射 0.2ml 的生理盐水，隔日注射 1 次，连续注射 3 次。
五、实验材料:1.试剂及仪器：RPMI-1640 培养基、胎牛血清、二甲基亚砜、注射用链霉素、基因重组人IL-2、鼠抗人CD3Mcab、基因重组人INF-γ、人淋巴细胞分离液、兔抗人VEGF多克隆抗体、兔抗人vWF因子相关抗原抗体、生物素标记抗兔IgG 抗体、DAB显色液检测试剂盒、SP检测试剂盒。
免疫学实验课程设计技巧
免疫学实验课程设计技巧免疫学作为生命科学的重要分支，对于理解生物体的免疫防御机制、疾病的发生发展以及免疫治疗的原理具有至关重要的意义。
而免疫学实验课程则是培养学生实践能力、创新思维和科学素养的重要环节。
本文将探讨免疫学实验课程的设计技巧，以期为提高教学质量和学生的学习效果提供有益的参考。
一、明确课程目标在设计免疫学实验课程之前，首先需要明确课程目标。
课程目标应与专业培养方案相契合，同时要考虑学生的知识水平和能力层次。
一般来说，免疫学实验课程的目标包括以下几个方面：1、使学生掌握免疫学实验的基本操作技能，如细胞培养、免疫染色、ELISA 等。
2、帮助学生理解免疫学的基本理论和概念，通过实验验证和巩固课堂所学知识。
3、培养学生的科学思维和实验设计能力，能够独立设计和完成简单的免疫学实验。
4、提高学生的团队合作精神和沟通能力，培养学生严谨的科学态度和创新意识。
二、合理选择实验项目实验项目的选择是免疫学实验课程设计的关键。
实验项目应具有代表性、实用性和可操作性，同时要涵盖免疫学的主要研究领域和技术方法。
以下是一些常见的免疫学实验项目：1、免疫细胞的分离与鉴定外周血单个核细胞的分离：通过密度梯度离心法分离外周血中的单个核细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。
T 淋巴细胞和 B 淋巴细胞的表面标志物检测：采用流式细胞术或免疫荧光染色法检测 T 淋巴细胞（如 CD3、CD4、CD8）和 B 淋巴细胞（如 CD19、CD20）表面标志物的表达，以鉴定免疫细胞的类型和比例。
2、免疫球蛋白的检测血清免疫球蛋白的定量测定：采用单向免疫扩散法、免疫比浊法或ELISA 法测定血清中免疫球蛋白（如 IgG、IgM、IgA）的含量，了解机体的体液免疫功能。
免疫球蛋白的电泳分析：通过血清蛋白电泳分离免疫球蛋白，并观察其电泳图谱，用于诊断免疫球蛋白异常增殖性疾病。
3、细胞免疫功能检测淋巴细胞增殖实验：采用 MTT 法或 CFSE 标记法检测淋巴细胞在丝裂原（如 ConA、PHA）刺激下的增殖反应，评估细胞免疫功能。
医学免疫学实验设计
实验后应对实验结果进行严格 的审核和分析，确保实验结果
的准确性和可靠性。
安全管理制度完善及执行情况检查
免疫学实验室应建立完善的安全管理制度，包括实验室安全、生物安全、化学品安 全等方面的管理制度。
实验室人员应严格遵守安全管理制度，加强安全意识教育，提高安全防范能力。
定期对实验室进行安全检查，及时发现和排除安全隐患，确保实验室的安全运行。
数据分析方法
根据实验目的和数据特点，选择合适的数据分析方法，如 描述性统计、假设检验、方差分析等。
结果呈现
将分析结果以图表、表格等形式呈现，使结果更加直观和 易于理解。同时，撰写实验报告或论文，将实验结果和结 论进行交流和分享。
05
免疫学实验结果解读与讨论
结果呈现方式选择及优缺点比较
表格呈现
适用于展示大量数据，便于比较和分析，但可能 缺乏直观性。
医学免疫学实验设计
汇报人：XX 2024-01-23
contents
目录
• 实验设计概述 • 免疫学实验技术 • 实验动物与模型选择 • 免疫学实验方案设计与实施 • 免疫学实验结果解读与讨论 • 免疫学实验质量控制与安全管理
01
实验设计概述
实验目的与意义
01
02
03
探究免疫学机制
通过实验手段深入探究免 疫系统的组成、功能及调 控机制，为免疫学理论研 究提供实验依据。
设计实验方案
制定详细的实验计划，包括实 验分组、样本处理、观察指标 、数据收集与分析等。
结果分析
对实验数据进行统计分析，验 证实验假设并得出结论。
02
免疫学实验技术
抗原抗体反应技术
酶联免疫吸附试验（ELISA）
免疫学实验课程设计
免疫学实验课程设计1、合同主体11 甲方（委托方）：＿___________________111 法定代表人：＿___________________112 地址：＿___________________12 乙方（受托方）：＿___________________121 法定代表人：＿___________________122 地址：＿___________________2、合同标的21 本合同的标的为免疫学实验课程的设计服务。
211 乙方应根据甲方的需求和教学目标，设计一套完整的、具有创新性和实用性的免疫学实验课程。
212 课程设计应包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验材料和设备、实验注意事项等详细内容。
3、权利义务31 甲方的权利义务311 甲方有权对乙方的课程设计提出修改意见和建议。
312 甲方应按照合同约定的时间和方式向乙方支付设计费用。
313 甲方应向乙方提供必要的教学资料和相关信息，以便乙方顺利开展课程设计工作。
32 乙方的权利义务321 乙方有权根据专业知识和经验，自主确定课程设计的方案和方法。
322 乙方应按照合同约定的时间和质量要求完成课程设计工作。
323 乙方应保证课程设计的内容具有科学性、准确性和可行性，且不侵犯他人的知识产权。
324 乙方应保守在课程设计过程中知悉的甲方的商业秘密和教学机密。
4、违约责任41 若甲方未按照合同约定支付设计费用，每逾期一天，应按照未支付金额的X%向乙方支付违约金。
逾期超过X天的，乙方有权解除合同，并要求甲方支付已完成工作的费用及相应的违约金。
42 若乙方未按照合同约定的时间完成课程设计工作，每逾期一天，应按照设计费用的X%向甲方支付违约金。
逾期超过X天的，甲方有权解除合同，并要求乙方返还已支付的费用及支付相应的违约金。
43 若乙方设计的课程内容存在严重错误或不符合合同约定的质量要求，乙方应负责免费修改和完善，直至达到合同要求。
若给甲方造成损失的，乙方应承担相应的赔偿责任。
免疫学实验设计
细胞CD4+CD25+调节性T（Treg）细胞 分选提取大鼠脾脏和淋巴结CD4+CD25+调节性T（Treg）细胞 并进行纯度和活性检测。用免疫磁珠两步法既阴性选择和阳性 选择分选提取小鼠CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞仪检测细胞 纯度,台盼蓝染色法观察计算细胞存活率。
统计学处理分析 应用实验常用统计学软件（SAS,SPSS等）进行大量数据的后 处理，整理待分析。
参考文献
• • • • • • • • • 【1】 金伯泉·医学免疫学· 第五版·北京：人民卫生出版社，2008 【2】 宋文刚·免疫学实验教材·北京：北京大学医学出版社，2010 【3】 孙黎飞·细胞免疫学实验研究方法·北京：人民军医出版社，2009 【4】 王培林，傅松滨·医学遗传学·第三版·北京科学技术出版社2011 【5】 哈佛医学院Brigham and Women’s医院，eBioscience公司的科学家·Nature·罕见的 抑制性因子·美国·2007 【6】 王嘉军·微生物学免疫学新进展·第37卷，第4期·2011 【7】 周国庆，唐琴，黄丽，孙保亮·泰山医学院学报，Treg的免疫磁珠提取纯化方 法 【8】 姜小丽，杨婷 等·中国免疫学杂志·2013年第四期·哮喘小鼠中Foxp3+Treg/Th17的 失衡及意义 【9】 王建华·糖尿病自我管理全书·北京：北京科学出版社·2010
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检测胸腺肽能否增强人的免疫力
实验目的：1，检测胸腺肽这种药物能否增强机体的免疫了。
2，选择合适的指标来评估机体的免疫力。
3，熟练掌握NK细胞活性检测的实验原理以及实验方法。
实验原理：测试胸腺肽（给药途径为肌肉注射）是否能增强人体的免疫力。
本实验采用配对设计：随机抽取10名健康的男性和10名健康的女性。
首先抽取每个人的血液样本（20份）作为对照组。
然后，肌肉注射胸腺肽。
一小时后，抽取每个人的血液样本（20份）作为实验组。
由于，考虑到实验的繁琐以及短时间内（1个小时）免疫细胞的数目可能并没有产生明显的变化。
因此，这里采用测量NK细胞的活性来对免疫力进行评估。
测量NK细胞的活性的实验原理：NK细胞作为一种重要的非特异性免疫细胞能杀伤侵入机体的细菌以及病毒，它的活性可以用来评估机体免疫力的强度。
实验中，我们首先采取血液标本（混有抗凝剂），然后加入淋巴细胞分离液，通过离心处理来分离出淋巴细胞层。
然后，将NK细胞与靶细胞孵育，让他们充分作用。
靶细胞被杀伤后，会释放乳酸脱氢酶。
我们根据对乳酸脱氢酶浓度的测量来间接评估NK细胞的活性。
实验步骤：
一配对设计
1，从同济医学院招募10名健康的男性与10名健康的女性作为志愿者。
抽取他们的血液样本（共20份）作为对照组并编号。
2，然后，分别对20名志愿者注射胸腺肽。
由于，胸腺肽是一些小分子的多肽而且我们采取的给药途径是肌肉注射，因此我们采用给药后1小时的血液样本作为实验组来评估机体的免疫力。
抽取的实验组标本同时要进行编号处理。
二测量NK细胞的活性
1，首先吸取2ml的淋巴细胞分离液于试管中，然后将试管倾斜45°，沿管壁缓缓注入2ml 的抗凝血标本。
然后离心2000rpm，20min。
2，将毛细吸管直接伸到灰白色层（在血浆和分层液间），轻轻地吸取该层细胞（即为PBMC）。
然后将所得PBMC用5倍体积的1640洗涤一次，将混悬液2000rpm×5min。
3，弃去上清液，加入0.2ml完全RPMI-1640 ，混匀。
4，按照下表加入各种试剂
5，将板子放入温箱中孵育1个小时。
6，从各孔中吸取100ul溶液转移至新的小孔中。
然后将平板置于37℃的温箱中预温10min, 再向其中加入新鲜配制的底物溶液0.1ml, 37℃避光反应10～15min。
7，终止酶促反应，在各个小孔中用毛细吸管滴一滴1mol/L柠檬酸30μl。
8，用酶标检测仪在570nm波长下读取各孔OD值, 并计算NK细胞活性。
NK细胞活性（%）=（实验组OD值-自然释放对照组OD值）/（最大释放对照组OD值-自然释放对照组OD
值）×100%。
结果的处理：
性
别
男女
编号1 2 3 4 5 6 7 8 9 1
11 1
2
1
3
1
4
1
5
1
6
1
7
1
8
1
9
2
对
照
组
实
验
组
差
值
我们得到的数据进行处理，即取实验组与对照组的差值。
我们得到20个差值，d1，d2，d3 (20)
对其进行统计学处理，得到P值。
同时，我们也可以只对男性（或者女性）的数据资料进行统计学分析，同时可以得到P（男性）或者P（女性）。
获得的P值与0.05进行比较。
注意：由于注射胸腺肽不会降低人体的免疫力，因此这里得到的P值应该是单侧的值。