微生物制片显微观察及检测技术
微生物学实验一 微生物制片及形态观察
实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物大小的测定及显微镜直接计数法微生物的大小测定与显微计数生32 程雨婧 2013012406一、实验目的1. 学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。
3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理1. 显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺的长度.目镜测微尺的中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度(见图1),再以后作为测量微生物细胞的长度。
2. 球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示(μm)图一:测微尺的校正3. 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。
计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
计数区由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm，其面2积为lmm，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体3积为0.1mm。
使用血球计数板计数时，通常测定四或五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以16或25，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。
设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则: A441mL菌液中的总菌数= ×25×10×B=5×10×A?B (25个中格) 5图二:血细胞计数室构造三、实验器材1. 菌种:啤酒酵母2. 器材:普通光学显微镜、目镜测微尺镜头、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、试管、无菌水、血细胞计数板、计数器、吸管、生理盐水、移液器。
微生物纯培养和显微技术
● 扫 描 隧 道 显微镜（STM） ：利用隧道效 应，通过扫描 样品表面，获 取样品表面的 形貌和结构信 息。 ● 原子力显微镜（AFM）：利用原子力显微镜探针与样品表面的相互作用，通过扫描样品表面，获取样品表面的形貌和结构
谢过程。
纯培养的应用： 在医学、生物 学、食品工业 等领域都有广
泛的应用。
纯培养的方法： 包括稀释法、 平板划线法、 液体培养法等。
培养基制备：制备适合微 生物生长的培养基
培养：在适宜的温度、湿 度和光照条件下培养微生
物
分离：将不同种类的微生 物分离开来，如使用划线
法、涂布法等
取样：从环境中采集微 生物样品
电子探针（EPMA）：利用电子束激发样品表面，通过分 析电子信号获得样品的化学成分和结构信息。
电子能谱仪（ESCA）：利用电子束激发样品表面，通过 分析电子信号获得样品的化学成分和电子结构信息。
电子束诱导电流（EBIC）：利用电子束激发样品表面，通 过分析电流信号获得样品的电学性质和结构信息。
缺点：需要较高的 技术水平和设备， 操作难度较大
优点：可以观察到 微观世界的动态变 化，如细胞分裂、 生长、死亡等
缺点：需要较长的 时间进行观察，需 要耐心和细心
显微镜的种类和 原理
光学显微镜的种类：普通光学显微镜、荧光显微镜、相差显微镜、偏光显微镜等
光学显微镜的原理：利用光的折射和反射原理，通过透镜将微小物体放大
观察微生物生长： 通过光学显微镜可 以观察到微生物的 生长过程、生长速 度等特征。
观察微生物繁殖： 通过光学显微镜可 以观察到微生物的 繁殖方式、繁殖速 度等特征。
观察微生物形态：电子显微镜可以清晰地观察到微生物的形态、大小和结构，为微生物分 类和鉴定提供依据。
微生物检验技术
微生物检验技术显微技术显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
而在食品微生物检验中最常用的还是普通光学显微镜。
一、普通光学显微镜的结构和基本原理：1.结构：光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等。
（图３－１）标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光阑可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
图３－１光学显微镜结构图2.原理：显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
二、普通显微镜的使用方法1、低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
微生物化验方法
微生物化验方法
微生物化验的方法有很多，以下为您推荐：
１．琼脂平板培养法：因培养基不同，琼脂平板法分为选择性培养基检测法和显色培养基检测法。
选择性培养基是在培养基中加入选择性抑制剂来抑制非目标微生物生长；显色培养基是在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物，以菌落颜色区分目的菌落与非目的菌落。
２．显微镜镜检法：将待测样品中的微生物富集后，于油镜下直接计数。
显微镜镜检法通常与琼脂平板培养法结合使用，通过琼脂平板培养法对菌落进行定性分析，再用显微镜进行定量计数。
３．微生物测试片检测技术：一般情况下，微生物测试片由印有网格的聚丙烯薄膜和覆盖有培养基和显色物质的聚乙烯薄膜组成。
待测样品经过处理后可直接接种在微生物测试片上，然后放置在适宜的温度下培养——使固定在测试片上的显色物质与待检微生物生长产生的特异性酶发生显色反应，形成有颜色的菌落，通过对这些菌落进行计数便可实现检测。
微生物制片显微观察及检测技术
微生物制片显微观察及检测技术微生物是一类不能看见的生物体，它们很小、很微弱。
为了观察和检测微生物，科学家们开发出了多种显微观察和检测技术。
本文将介绍一些常用的微生物制片技术及显微观察和检测技术。
微生物制片技术主要是将微生物样本制备成薄片以便进行显微观察。
常用的制片技术包括固定、包埋和切片。
固定是将微生物样本中的细胞或细菌固定在载玻片上，常用的方法有热固定、酒精固定和甲醛固定等。
包埋是将固定的微生物样本包裹在固体介质中，通常用于切片前的处理，常用的方法有冰冻包埋和石蜡包埋。
切片是将包埋的微生物样本切成薄片，常用的方法有冷冻切片和石蜡切片。
显微观察技术是利用显微镜观察微生物样本的细节和特征。
常用的显微观察技术包括光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜是利用光线通过样本并经过透镜放大观察，主要适用于观察细菌、真菌、原生动物等较大的微生物。
电子显微镜是利用电子束通过样本并经过电磁透镜放大观察，主要适用于观察细菌、病毒等较小的微生物。
电子显微镜分为扫描电子显微镜和透射电子显微镜两种，扫描电子显微镜适用于表面观察，透射电子显微镜适用于内部观察。
检测技术是用于检测微生物样本中的特定组分或特定物质。
常用的检测技术有免疫荧光检测法、酶联免疫吸附检测法和聚合酶链反应检测法等。
免疫荧光检测法是利用荧光染料标记的抗体与特定抗原结合形成复合物，通过显微镜观察荧光信号来检测微生物样本。
酶联免疫吸附检测法是利用酶标记的抗体与特定抗原结合形成复合物，通过显色反应来检测微生物样本。
聚合酶链反应检测法是利用特定的引物和酶来扩增微生物样本中的特定基因片段，通过电泳分析来检测扩增产物。
除了上述的微生物制片技术、显微观察和检测技术，还有一些其他的辅助技术可以提高微生物观察和检测的效果。
例如，染色技术可以通过染色一些特定物质来突出显示微生物样本中的细节和结构。
常用的染色技术有普鲁士蓝染色、格拉姆染色和伊汀染色等。
荧光标记技术可以通过标记荧光染料来突出显示微生物样本中的特定组分。
微生物基本操作规范制片染色和显微观察
➢§ 1 清洗、消毒和灭菌操作 ➢§ 2 培养基的制备 ➢§ 3 采样和取、制样 ➢§ 4 接种、分离纯化
➢§ 5 制片、染色及显微观察
➢§ 6 实验室安全基础知识
5.1
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
显微操作
显微镜是微生物检验中最常用的精密 光学仪器。
显微镜的种类很多，在实验室中常用 的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、 相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
2.草酸铵结晶紫染液、碘液、95％乙醇、蕃红染 液、石炭酸复红染液
3.菌株：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
实验内容与步骤
(一)细菌的简单染色步骤 涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
1．涂片 取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一
滴无菌蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从 斜面挑取少量培养物与玻片上的水滴混匀后，在载玻 片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2．干燥
细菌带负电荷多，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱 性染料染色的较多。
微生物中细菌、致病菌是很小的生物体，必须通过染色的方 法，在显微镜下才能看得清楚，并且还可以通过染色的方法鉴别 革兰氏染色特性，以及是否长有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等。
细菌的大小与形态 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
细菌的测量单位： 微米(μm)
2.左眼注视 （注意右眼应该同时睁着），并转动粗调焦 螺旋，使镜筒徐徐上升，直到看清物象为止；
3. 再用微调焦螺旋调至清晰。
注意：粗调调焦螺旋只用于上调载物台，如观察 显微镜时，用粗调节器调节，有压碎载玻片、损坏物 镜的危险。因此，用细调焦螺旋调节视野使其更清晰
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
微生物学检验基本技术
微生物学检验基本技术随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学依据。
第一节微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。
一、显微镜检查由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。
一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电子显微镜才能看清楚。
常用显微镜有如下几种。
1．普通光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜的分辨率为波长的二分之一，即0.2μm，而肉眼可见的最小形象为0.2mm。
故用油（浸）镜放大1 000倍，能将0.2μm的微粒放大成肉眼可见的0.2mm。
普通光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等的观察。
2．暗视野显微镜常用于观察不染色微生物形态和运动。
在普通显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边缘斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观察到光亮的微生物如细菌或螺旋体等。
3．相差显微镜相差显微镜利用相差板的光珊作用，改变直射光的光位相和振幅，将光相的差异转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位的密度不一致而引起光相的差异，可观察到微生物形态、内部结构和运动方式等。
4．荧光显微镜荧光显微镜与普通光学显微镜基本相同，主要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前大多数使用的是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸收滤光片二种。
用蓝光的荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景的对比。
微生物学检查方法
微生物学检查方法
微生物学是研究微生物的生物学科学，其检查方法主要包括以下几种：
1. 复数染色法：利用染色方法将微生物标记出来，常用的染色方法有革兰氏染色法、抗酸染色法等。
2. 培养法：将微生物样本放入适当的培养基中，提供适合其生长的营养物质和环境条件，以培养和分离微生物。
3. 普通显微镜观察法：通过普通显微镜观察微生物的形态、结构和运动情况，常用于初步识别微生物。
4. 分子生物学方法：利用PCR、酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术检测微生物的基因或蛋白质，以确定其种属和性质。
5. 直接读数法：通过显微镜观察、流式细胞术等方法直接计数微生物数量和活性，用于研究微生物的数量和生理状态。
6. 分子识别方法：利用16S rRNA和18S rRNA等基因序列进行分子鉴定，快速准确地识别微生物。
7. 免疫学方法：通过免疫反应检测微生物中的抗原或抗体，以确定其存在和性
质。
除了以上常用的方法外，还有一些特殊的检测方法，如荧光显微镜观察、蛋白质鉴定、质谱分析等，用于特定的微生物检测需求。
微生物快速检测技术
细胞生物传感器
利用微生物细胞与传感器表面的特异 性受体结合，引起传感器电信号的变 化，从而实现对微生物的快速检测。
免疫生物传感器
将特异性抗体固定在传感器表面，通 过待测样品中微生物与抗体的结合， 引起传感器电信号的变化，进而实现 微生物的快速检测。
其他方法
流式细胞术
利用流式细胞仪对单个微生物细 胞进行快速检测和分类。该技术 具有高通量、高灵敏度和多参数
应用领域
该技术已广泛应用于食品安全、环境监测、医疗卫生等领 域，为保障公众健康和生态环境安全发挥了重要作用。
挑战与问题
尽管微生物快速检测技术取得了显著进展，但仍面临一些 挑战和问题，如检测方法的标准化、检测设备的便携性、 检测结果的准确性等。
对未来发展的展望与建议
加强技术创新
继续加大研发力度，推 动微生物快速检测技术 的创新和发展，提高检 测方法的灵敏度和特异 性，降低检测成本和时 间。
成本效益
传统检测方法成本较低，但耗时较长；快速检测 技术虽然成本较高，但能够缩短检测周期，提高 检测效率。在实际应用中，需要根据具体需求和 条件选择合适的检测方法。
05
微生物快速检测技术的发展趋势 与挑战
发展趋势分析
多元化检测方法
01
随着科技的进步，微生物快速检测技术正朝着多元化方向发展
，包括免疫学、分子生物学、生物传感器等多种方法。
实时荧光定量PCR
在PCR反应体系中加入荧光基团，实时监测荧光信号的变 化，实现微生物核酸的定量检测。该技术具有操作简便、 快速准确的优点。
基因芯片技术
将大量特异性寡核苷酸固定在芯片上，通过与待测样品中 微生物核酸的杂交反应，实现对多种微生物的同时检测。
生物传感器方法
微生物检验技术项目七微生物染色及显微形态观察技术
二、染色技术
【报告内容】 1.简述普通光学显微镜的构造及工作原理； 2.简述普通光学显微镜的使用过程及保养方法； 3.分别绘出你在低倍镜、高倍镜和油镜下观察到的 金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的状态，包括在三 种情况下视野中的变化，同时注明物镜放大倍数和 总放大率。
二、染色技术
任务7-2细菌的染色及形态结构观察
Thank you
二、染色技术
任务7-3 酵母菌、霉菌的染色及形态结构观察
7-3-1酵母菌的形态观察 【任务验收标准】 1.了解自然存在的酵母菌及其形态结构、出芽生殖方式 2.学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。
二、染色技术
【任务完成条件】 1.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、热带假丝 酵母(Candida tropicalis)斜面菌种； 2.PDA培养基 3. 0.05％美蓝染色液(以pH 6.0的0.02mol/L磷酸缓冲 液配制)、碘液、0.04％的中性红染色液； 4.显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环等。
二、染色技术
【工作任务】 1.观察酵母菌个体形态 以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌 的活体染色观察及死亡率的测定。 2.观察自然状态的酵母菌 以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任 务。
二、染色技术
【工作任务】 1.观察酵母菌个体形态 以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌的活 体染色观察及死亡率的测定。 2.观察自然状态的酵母菌 以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任务。
二、染色技术
【工作任务】 1.细菌荚膜染色制片的制作及观察； 2.细菌芽孢染色制片的制作及观察。
二、染色技术
【任务指导】 （一）细菌的荚膜染色 1.负染色法 2.湿墨水法 3.干墨水法
显微鉴别制片流程
显微鉴别制片流程一、引言显微鉴别制片是一种常用的实验方法，用于观察和鉴定样品的微观结构和组成。
本文将介绍显微鉴别制片的流程和步骤。
二、材料准备在进行显微鉴别制片之前，需要准备一些基本的材料和设备，包括显微镜、载玻片、盖玻片、显微镜镜片液、吸水纸、刮片器等。
确保这些材料都是干净的，并做好消毒处理。
三、样品制备1. 样品的选择：根据需要鉴定的对象，选择合适的样品进行制备。
可以是生物组织、细胞、昆虫、植物等。
2. 样品的固定：将样品进行固定处理，常用的方法有乙醛固定、福尔马林固定等。
固定处理的目的是保持样品的形态结构和化学组成。
3. 样品的切片：将固定的样品切成薄片，常用的方法有手工切片和切片机切片。
切片的厚度通常在几微米到几十微米之间，根据需要进行调整。
4. 制片：将切好的样品片放在载玻片上，加入适量的显微镜镜片液，然后用盖玻片盖住样品，使样品均匀分布在载玻片上。
四、制片处理1. 倒置法：将制好的载玻片倒置放在吸水纸上，使吸水纸吸去多余的显微镜镜片液，然后轻轻擦拭载玻片的边缘，以去除多余的显微镜镜片液。
2. 加热法：将制好的载玻片置于加热板上，加热一段时间，使显微镜镜片液快速挥发，加快制片的干燥速度。
3. 固定法：将制好的载玻片放置在通气干燥器中，使其自然干燥，确保样品的完整性和稳定性。
五、显微镜观察1. 调节显微镜：将制好的载玻片放在显微镜的载物台上，调节显微镜的倍数和焦距，使样品清晰可见。
2. 观察样品：通过显微镜观察样品的细节和结构，可以使用不同的显微镜技术，如亮场显微镜、荧光显微镜、相差显微镜等，以获取不同的信息。
3. 记录结果：将观察到的结果进行记录和描述，包括样品的形态特征、细胞结构、组织构成等。
六、鉴别分析根据观察到的结果和已有的知识，对样品进行鉴别分析。
可以比对数据库中的标准样品，进行相似性分析和对比，确定样品的种类和属性。
七、结果解释根据鉴别分析的结果，对样品的性质和特点进行解释和阐述。
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
FOR PERSONAL USE ONLY IN STUDY AND RESEARCH; NOT FOR COMMERCIAL USE微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
常见的微生物检测方法
常见的微生物检测方法微生物检测是生物科技领域中非常重要的一个环节，广泛应用于食品、药品、环境等领域。
随着科技的发展，微生物检测的方法也在不断进步，从最初的定性检测到现在的高通量、高精度检测，为各个行业提供了强有力的支持。
下面，我们将介绍几种常见的微生物检测方法。
1、显微镜直接观察法显微镜直接观察法是一种通过显微镜直接观察样本中微生物形态和数量的方法。
该方法操作简单，但需要专业的显微镜操作技能。
显微镜直接观察法可用于食品、药品、化妆品等领域的微生物检测。
2、培养法培养法是一种将样本接种到培养基上，通过培养基提供营养物质和适宜的生长环境，使微生物生长繁殖的方法。
培养法可对样本中的微生物进行计数和鉴定，是一种广泛应用于食品、药品、环境等领域的方法。
3、免疫学方法免疫学方法是利用抗原-抗体反应的特异性，对样本中的微生物进行检测和鉴定的一种方法。
免疫学方法具有快速、灵敏度高、特异性强的特点，但可能会因为交叉反应而出现假阳性结果。
免疫学方法广泛应用于食品、药品、环境等领域。
4、分子生物学方法分子生物学方法是一种利用DNA或RNA的特异性序列进行检测和鉴定微生物的方法。
该方法具有高灵敏度、高特异性、高精度等特点，可对微生物进行亚型分析，适用于食品、药品、环境等领域的微生物检测。
5、质谱技术质谱技术是一种利用离子源将微生物的蛋白质或代谢物电离，然后通过质量分析器将离子按质量/电荷比分离，由离子检测器进行检测的方法。
质谱技术具有高灵敏度、高分辨率和高重现性的特点，可用于食品、药品等领域的微生物检测。
总结：微生物检测是各个领域中非常重要的一个环节，不同的检测方法具有不同的特点和应用范围。
在实际应用中，应根据具体的情况选择合适的检测方法，以保证检测结果的准确性和可靠性。
随着科技的不断进步，相信未来还会有更多新的微生物检测方法出现，为各个领域的发展提供更加强有力的支持。
微生物快速检测方法在食品工业中，微生物的快速检测对于保障食品安全和防止疾病传播至关重要。
显微镜观察微生物的实验原理
显微镜观察微生物的实验原理显微镜是一种用来放大微小物体的光学仪器，广泛应用于生物学、医学等领域。
在微生物学中，显微镜扮演着至关重要的角色，帮助科学家观察和研究微生物，揭开微生物世界的神秘面纱。
实验原理：1. 样本准备：在进行显微镜观察微生物的实验前，首先需要准备样本。
样本可以是从自然环境中采集的微生物，也可以是培养在实验室中的微生物。
为了观察清晰，样本需要进行染色处理，使微生物的结构更加明显。
2. 调节显微镜：在观察微生物之前，需要正确调节显微镜的焦距和光源，确保可以获得清晰的图像。
通常需要先使用低倍镜（一般为4倍或10倍）初步观察样本，然后再切换到高倍镜（通常为40倍或100倍）进行详细观察。
3. 观察和记录：通过显微镜，可以看到微生物的形态、结构和运动方式。
观察时需要注意调节焦距和光源，以获得清晰的图像。
同时，可以通过目镜上的刻度尺来估算微生物的大小。
观察完成后，需要及时记录观察到的现象和结论。
4. 数据分析：观察完微生物样本后，科学家需要对观察到的数据进行分析和解读。
他们可以根据微生物的形态特征、数量分布等信息，推断微生物的种类、生长状态以及与环境的关系等。
5. 结论和讨论：最后，根据观察和数据分析的结果，科学家可以得出结论，并进行讨论和进一步研究。
他们可以探讨微生物的生态功能、对人类健康的影响等问题，为微生物学领域的研究提供重要参考。
显微镜观察微生物的实验原理包括样本准备、显微镜调节、观察和记录、数据分析以及结论和讨论等步骤。
通过这些步骤，科学家可以深入了解微生物的世界，揭示微生物在自然界和人类生活中的重要作用。
希望通过不断的研究和探索，可以更好地认识和利用微生物资源，造福人类和地球的未来。
微生物学检验常用的重点技术方法
微生物学检查常用旳技术措施随着现代医学及有关科学技术旳发展，各学科互相交叉和渗入，医学微生物学检查技术已进一步到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新措施已在临床微生物实验室得到广泛应用。
医学微生物学实验室旳基本任务之一是运用微生物学检查技术，精确、迅速检查和鉴定临床标本中旳微生物，并对引起感染旳微生物进行耐药性监测，为临床对感染性疾病诊断、治疗、流行病学调查及研究等提供科学根据。
微生物形态学检查细菌形态学检查是细菌检查旳重要措施之一，它是细菌分类和鉴定旳基本，可根据其形态、构造和染色反映性等，为进一步鉴定提供参照根据。
一、显微镜检查由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜旳放大才干看到。
一般形态和构造可用光学显微镜观测，其内部旳超微构造则需用电子显微镜才干看清晰。
常用显微镜有如下几种。
1.一般光学显微镜采用自然光或灯光为光源，其波长约为0.4μm。
显微镜旳辨别率为波长旳一半，即0.2μm，而肉眼可见旳最小形象为0.2mm。
故用油(浸)镜放大1 000倍，能将0.2μm旳微粒放大成肉眼可见旳0.2mm。
一般光学显微镜可用于细菌、放线菌和真菌等旳观测。
2.暗视野显微镜常用于观测不染色微生物形态和运动。
在一般显微镜安装暗视野聚光器后，光线不能从中间直接透入，视野呈暗色，当标本接受从聚光器边沿斜射光后可发生散射，因此可在暗视野背景下观测到光亮旳微生物如细菌或螺旋体等。
3.相差显微镜相差显微镜运用相差板旳光珊作用，变化直射光旳光位相和振幅，将光相旳差别转换为光强度差。
在相差显微镜下，当光线透过不染色标本时，由于标本不同部位旳密度不一致而引起光相旳差别，可观测到微生物形态、内部构造和运动方式等。
4.荧光显微镜荧光显微镜与一般光学显微镜基本相似，重要区别在于光源、滤光片和聚光器。
目前实验仪器中大多数使用旳是落射光装置，常用高压汞灯作为光源，可发出紫外光或蓝紫光。
滤光片有激发滤光片和吸取滤光片二种。
用蓝光旳荧光显微镜除可用一般明视野聚光器外，也可用暗视野聚光器，以加强荧光与背景旳对比。
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革兰氏染色图解
革兰氏染色试剂
步骤1：用蒸馏水滴瓶滴一小滴蒸馏水于洁净的载玻片上
步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上
步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层
步骤4：风干
步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定
步骤6：结晶紫染色1分钟
步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片
步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗
低倍镜操作方法
1.两眼从侧面注视 低倍物镜对准通光孔，使用粗调焦螺旋将镜筒 自上而下的调节，避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破 玻片。当物镜镜头与载物台的玻片相距2～3mm时停止； 2.左眼注视 （注意右眼应该同时睁着），并转动粗调焦螺旋，使 镜筒徐徐上升，直到看清物象为止； 3. 再用微调焦螺旋调至清晰。 注意：粗调调焦螺旋只用于上调载物台，如观察显微镜时 ，用粗调节器调节，有压碎载玻片、损坏物镜的危险。因此， 用细调焦螺旋调节视野使其更清晰
微生物检测技术介绍
检测技术的重要性
一、微生物检验技术介绍
微生物检测
传统筛选系统 免疫凝集/免疫沉淀实验 Mini VIDAS筛选系统 实时荧光定量PCR 革兰氏染色镜鉴 按照标准进行 传统的生化反应鉴定 API试剂条 菌鉴定国际金标准
微生物鉴定
半自动细菌鉴定仪 （ATB Expression）
(二)细菌的革兰氏染色步骤
涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗 →干燥→观察
1 ．取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单 染色的相同。 2．用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3．加碘液媒染1min后水洗。 4 ．斜置载玻片，滴加 95 ％乙醇脱色，至流出的乙醇不 现紫色 为止，大约需时20~30s，随即水洗。 5．用蕃红染液复染1min，水洗。 6．用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用 低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细 胞的颜色。
微生物检测限可能达 到1 copy，抗杂菌干 扰能力强
免疫磁珠技术
由于受到抽样数量、检验方法和 试验取样量的限制，无法将全部 样品进行检查。磁珠分离技术， 能简单快速地捕捉特异的蛋白、 遗传物质和其他生物分子。通过 免疫磁珠富集手段，将微量的目 标物质通过磁珠富集到可检测的 水平。 这一技术不仅可应用于致病微生 物的检测，还可用于食品中致敏 原蛋白质、核酸以及各类细菌毒 素的富集，应用范围广阔，适宜 高通量、全自动操作。
高倍镜操作方法
1.将低倍镜观察到的目标移动至视野中央； 2.将低倍镜镜头转换成高倍镜镜头。换用高倍 镜后，视野内亮度变暗，因此一般选用较大 的光圈并使用反光镜的凹面； 3.用微调焦螺旋调至清晰。观看的物体数目变 少，但是体积变大。 注意：高倍镜观察时，光线需增强。
油镜操作方法
1.将高倍镜观察到的目标移动至视野中央； 2.将高倍镜镜头挪开，于载玻片上滴一滴香柏油； 3.将油镜镜头移动至视野，让油镜镜头浸入香柏油（至油晕不再 扩大为止）； 4.用微调焦螺旋调至清晰。 注意：油镜的操作需要较强的关线，故需将光线调至最 强。 用10倍和/或40倍物镜为随后的高倍油镜（90倍或100倍 ）选择合适的视野（油镜镜筒上通常刻有H.I.OIL或OEL等标 志）
L.
y to n oc mo
es gen
Bio tin
Streptavidin
Bio tin
Bio tin
scFv
Immunomagnetic Bead
Principle: Immunomagnetic Microparticle Separation/Concentration of Bacterial Cells
全自动细菌鉴定仪 （VITEK 2）
分子生物 学技术
微生物的检测技术
a) b) c) d) e)
常规培养鉴定法—显色培养基法
乳胶凝集反应 酶联免疫荧光技术 实时荧光定量PCR 免疫磁珠技术
显色培养基
显色培养基检测基本原理：利用不同种属细菌代谢所产
生的酶的特异性，在培养基中加入相应的特异性酶底物 和抑制剂，当具有某特异酶的细菌与酶底物作用时，使 显色基团游离出来附着于菌落上，形成颜色独特的菌落 。根据菌落的颜色直接对菌属（种）作出鉴定。
N
BioLumixTM微生物实时快速检测系统是最 新推出的用于食品、保健品、乳制品、肉 制品、饮料、化妆品、洗化产品和制药等 工业领域和监管部门等使用的微生物快速 检测系统。可以快速确定样本中细菌总数 、大肠菌群/大肠杆菌、致病菌、霉菌等 的存在与数量。
BioLumixTM实时快检系统----简便、快速并可 降低微生物试验的操作成本。
灵敏度高、特异性强，大大减少了后续的鉴定步骤（确证
试验）。
显色培养的缺陷
假阳性： 97%的大肠埃希菌含有β-葡萄糖苷酶，约10%的沙门氏 菌属中也含有此酶。
假阴性：
O157：H7大肠埃希菌没有β-葡萄糖苷酶，在MUG-LST 上呈阴性反应。
不是所有具有特征性酶的微生物均在含底物的培养基中呈 阳性反应。
兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如
脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏 阳性菌。因此必须 严格把握脱色时间。 2 ．选用培养18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老， 由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应 。 3.干净的玻片、热固定、每一步水洗要彻底并且吸干等 也是实验成功的关键。
GB4789-2008、2010 中新技术的应用-显色培养基
沙门氏菌 志贺菌 副溶血性弧菌 O157：H7大肠埃希菌
单增李斯特菌
阪崎肠杆菌 大肠杆菌计数
显色培养基的优势
快速、简便、节省时间-大多数显色培养基只需在样品增 菌后，分离培养18~24h，即可根据菌落的颜色作出初步 的鉴定。（阴性-弃去；阳性-进一步鉴定）。 结果直观，一目了然（根据颜色判定结果）。
实验内容与步骤
(一)细菌的简单染色步骤 涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检 1．涂片
取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一滴无菌蒸 馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少量培养 物与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层， 涂布面不宜过大。
2．干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更快些 ，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯 上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过 长，以防标本烤枯而变形。
，用于筛选可疑菌。
常用Microgen乳胶凝
沙门氏菌（salmonella） 弯曲杆菌（camylobacter） 大肠杆菌O157（E.coli O157） 军团菌（legionella）
葡萄球菌（staph）
观察凝集结果
全自动荧光免疫分析仪(VIDAS-mini或30)
荧光定量PCR
聚合酶链式反应技术（PCR）是分子生物学技术最 具有代表性的技术。它是一种能在体外将微量生物 DNA分子进行数百万倍放大的新型检测技术。 荧光定量PCR技术在普通PCR技术基础上，通过荧 光染料的结合，将检测信号进一步放大，其灵敏度 是普通PCR的几百倍，扩增和检测过程由仪器自动 完成，检测同量高，速度快 除去样品前增菌时间，2-4小时内可得到检测结果
染色方法
(一)简单染色法
简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染 料使细菌染上颜色，观察细菌的形态。
(二)复染色法
用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质 的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰 氏染色法和抗酸性染色法。 革兰氏染色法：不仅能观察到细菌的形态，而且
还可将所有细菌区分为两大类：
步骤9：酒精脱色至下滴液为无色，立即用蒸馏水冲洗
步骤10：番红复染1分钟，用蒸馏水轻轻冲洗
大肠杆菌（Escherichia coli）革兰氏染色图
革兰氏染色阴性杆菌（红色）
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）革兰氏染色
革兰氏染色阳性球菌（紫色）
注意事项
1．革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革
卫生监控 保质期预测 腐败菌检测 无菌检验 挑战实验 微生物限定检测 嗜热菌计数 嗜冷菌计数 抗生素残留检测
提示：这是任何选择性培养基都无法避免的问题。与普 通选择性培养基比较，显色培养基的假阳性、假阴性的 机率相对要低得多。
乳胶凝集反应
原理：
乳胶凝剂试验是以乳胶微粒为载体的间接凝集试验。
用人工方法将抗体包被于与免疫无关的大分子聚苯乙烯 或羧化聚苯乙烯乳胶颗粒上。
利用抗原抗体特异性结合的特性，当敏感的乳胶颗粒与 待检细菌菌悬液混合后，迅速形成肉眼可见的凝集团块
染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示
染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G―表示
细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞
壁的成分和结构不同而造成的。
实验材料
1. 显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接 种环、载玻片、酒精灯、蜡笔等。 2. 草酸铵结晶紫染液、碘液、 95 ％乙醇、蕃红染液 、石炭酸复红染液 3.菌株：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌
3．固定 手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰 外层尽快的来回通过2~3次，共约2~3秒钟，并不时 以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超 过60℃）,放置待冷后，进行染色。 4．染色 在涂片薄膜上滴加染色液 ( 石炭酸复红、草酸铵 结晶紫或美蓝任选一种)一滴，使染色液覆盖涂片， 染色约1min。 5．水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗， 直至洗下的水呈无色为止。 6．干燥 用吸水纸吸去涂片边缘的水珠，置于室温下自 然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。 7．镜检