红细胞裂解液的配制
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer ,10×)简介： 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为NH 4Cl 。
RBC Lysis Buffer(10×)配方经过优化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
使用1×RBC Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测，尤其适用于流式细胞检测或需要高浓度裂解液的情况。
组成：操作步骤(仅供参考)：注意：绝大多数情况下，应使用无菌去离子水稀释RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式细胞术除外。
(一)组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
3、离心: 4℃离心，弃红色上清。
本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。
4℃，离心，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。
6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。
7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)1、制备细胞悬液：新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，制备细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解：加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×)
红细胞裂解液(RBC Lysis Buffer ,10×)简介： 红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)是一种从人、鼠或其他哺乳动物等体内的组织样品或血液中裂解并去除无核红细胞的溶液，其主要有效成分为NH 4Cl 。
RBC Lysis Buffer(10×)配方经过优化不同于ACK Lysis Buffer ，在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。
使用1×RBC Lysis Buffer 处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测，尤其适用于流式细胞检测或需要高浓度裂解液的情况。
组成：操作步骤(仅供参考)：注意：绝大多数情况下，应使用无菌去离子水稀释RBC Lysis Buffer(10×)至1×使用，流式细胞术除外。
(一)组织细胞样本的常规操作1、制备细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
3、离心: 4℃离心，弃红色上清。
本步骤亦可在室温下操作。
4、如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3各一次。
5、洗涤：根据实验要求加入适量PBS 、HBSS 、生理盐水或无血清培养液，轻柔混匀重悬沉淀。
4℃，离心，弃上清，该离心步骤亦可在室温下操作。
6、如有必要，重复上述步骤5一次，共洗涤1～2次。
7、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀，进行计数、培养等后续实验。
(二)组织细胞样本的快速操作(无需洗涤)1、制备细胞悬液：新鲜组织经胰蛋白酶或胶原酶等消化处理，制备细胞悬液，离心弃上清。
2、裂解：加入1×RBC Lysis Buffer ，轻柔吹打混匀，裂解。
本操作步骤在4℃条件下操作更佳，亦可在室温下操作。
ACK红细胞裂解液(ACKLysisBuffer)
改良Barth溶液(含钙)
氯化钾-EDTA溶液(0.15mol/L)
阿氏液(2×Alsever液)
STM溶液(0.25M）pH7.4)
蔗糖-CaCl2溶液(0.25M:3mM)
蔗糖-CaCl2溶液(1M:1mM)
碘化丙啶PI溶液(20ug/ml）含RNase)
上海远慕科技专业供应：ACK红细胞裂解液(ACKLysisBuffer) 100ml 上海远慕生物科技有限公司生产的: ACK红细胞裂解液(ACKLysisBuffer) 主要用于：去除细胞悬液中的红细胞,属于溶解红细胞方法的一种 产品组成及特殊说明：注意无菌操作,主要由氯化铵、碳酸氢钾、EDTA等组成。 "产品名称：ACK红细胞裂解液(ACKLysisBuffer)，
说明书请致电我公司销售人员，（ACK红细胞裂解液(ACKLysisBuffer) ）其他相关产品信息：
现本公司成立周年之际，为了回馈新老客户，在此期间特价供应： ACK红细胞裂解液(ACKLysisBuffer)"
远慕试剂-打造最具性价比试剂品牌！
远慕生物咨询电话：021-51829250 13310162040 在 线QQ：953483277 183118024
规格：100ml
分类：细胞组分分离
储存条件：4℃,过滤除菌,6个月
产品用途：去除细胞悬液中的红细胞,属于溶解红细胞方法的一种
产品说明：注意无菌操作,主要由氯化铵、碳酸氢钾、EDTA等组成。
产品编号： YM-S1225 ,
供货能力：现货 作为实验用品，供研究用，不能直接用于人体。
染色液相关产品信息：
G418溶液(geneticin）20mg/ml)
裂解液配制方法
裂解液配制方法 The manuscript was revised on the evening of 20211、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。
保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。
2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） mlAprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。
2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。
联科生物科技有限公司流式细胞仪红细胞裂解液说明书
Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: Lysing solution for FACS (10×)I.产品信息目录号: LSB01, LSB02, LSB03 规格: 100T,250T, 500T保存: 室温效期: 一年II.产品简介本产品可在哺乳动物外周血细胞经荧光素标记的抗体染色后，将红细胞裂解，随后进行流式分析。
当抗体加入到全血中，与白细胞特异性的表面抗原结合。
染色的样品随后用流式红细胞裂解液处理，在温和的低渗条件下裂解红细胞，从而保留住白细胞。
III.使用方法1.用蒸馏水将10×红细胞裂解液稀释为1×，稀释后的工作液可在室温保存一个月。
2.用合适的抗凝管收集全血。
3.取100 μl混匀的抗凝血到流式管。
4.按照抗体说明书加入合适的剂量，混匀后孵育适当时间。
5.加入2 ml 1×红细胞裂解液，涡旋振荡混匀。
6.室温避光孵育10分钟。
7.300 - 400 g离心5分钟，弃上清。
8.加入2 ml PBS，300 - 400 × g离心5分钟。
9.弃上清，加入0.5 ml PBS重悬细胞沉淀。
10.在流式细胞仪上进行分析。
如不能马上检测，请将样品避光保存于2 - 8℃。
IV. 结果示例图. FSC/SSC散点图。
全血细胞经1×红细胞裂解液裂解后，在Becton Dickinson FACSCalibur TM流式细胞仪。
通过FSC和SSC可以清晰地区分出淋巴细胞、单核细胞和粒细胞，几乎很少细胞碎片产生。
Toll Free: 400 6721 600 (China Only) Website: V. 注意事项1.本产品经优化，专门针对临床实验室所用的流式细胞仪，包括Becton Dickinson FACSCalibur TM和CoulterEPICS® XL®。
红细胞裂解液使用说明书
红细胞裂解液红细胞裂解液红细胞裂解液是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞或其它有细胞核的细胞。
本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解，例如鸟或禽类的红细胞。
本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
应用对于组织细胞样品1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2. 加入3~5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4~5min。
例如细胞沉淀的体积为1mL，则加入3~5mL的红细胞裂解液。
3. 1000g离心5 min，弃红色上清。
4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤1~2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，1000g离心2~3 min，弃上清。
可再重复1次，共洗涤1~2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2. 对于0.2mL细胞沉淀加入1mL红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4~5min。
3. 加入15~20mL PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4. 1000g离心5min，弃红色上清。
5. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。
快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。
红细胞裂解液使用说明书
红细胞裂解液使用说明书产品货号：SL1070储存条件：2-8度保存，有效期1年。
产品内容：产品内容SL1070-100ml SL1070-500ml 红细胞裂解液100ml500ml说明书1份产品简介：红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)，也称ACK Lysis Buffer，是一种用于从人或鼠等的血液或组织样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
本产品经过优化配方，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞（lymphocyte）或其它有细胞核的细胞。
不适用于鸟或禽类等有细胞核红细胞的裂解。
本产品主要成分为氯化铵，经过无菌处理。
经过处理的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合，核酸或蛋白的提取，及各种常规的分析和检测。
使用说明：组织细胞样品常规操作步骤：.1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
室温或4度操作均可。
3、400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4、如果红细胞裂解不完全，可以重复步骤2和步骤3。
一般极微量的红细胞不影响后续检测。
5、加入5-8倍细胞体积的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
4℃离心效果更佳。
洗涤1-2次。
6、根据实验需要，选用适当溶液重悬细胞沉淀，随后进行计数等后续实验。
组织细胞样品快速操作步骤：1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2、加入5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
室温或4度操作均可。
3、加入15-20倍红细胞裂解液体积的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4、400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
5、如果红细胞裂解不完全，可以重复步骤2和步骤3。
红细胞裂解液的配制
红细胞裂解液的配制我在一个公司的网站上看到的红细胞裂解液的说明书上说操作要点是：1.在37度预热；2.充分混匀细胞我就是这样做的，效果还可以。
不过我只做流式细胞仪的检测，活性没测。
我的裂解液是0.16M NH4Cl，0.13mM EDTA，12mM NaHCO3我用的方法：全血：裂解液=1：3，如2ml的全血加上6ml的红细胞裂解液，充分混匀后，室温静置5mim，1000rpm离心6~10min。
红细胞裂解得非常充分。
0.15 M NH4CL, 0.01 M NaHCO3 and 1 mM EDTA (Sigma)Ammonium chloride (NH4Cl) 8.29 g 0.155 MPotassium bicarbonate (KHCO3) 1 g 10mMEDTA 0.37 g 1mMH2O 1l.Filter with 0.45µm filteraliquot in 100 ml aliquotsfilter the solution to be used with 0.2µm filter.我们用的是Tris-NH4Cl,具体配方如下:NH4Cl:4.15克加双蒸水500ml,取450ml;Tris:1.0297克加双蒸水50ml,再加上上面的450ml,共计500ml,高压灭菌,用时加10-20ml,静置5min,效果蛮好.9月29日我用的配方氯化铵3.735g，tris 1.3g，加在500ml水中，ph约7.2。
将全血约5ml加入配好的加入30ml裂解液的50ml试管中5分钟或15分钟，发现5分钟组细胞要多些，15分钟组细胞要少些，而且红细胞仍然有。
红细胞裂解液使用说明书
红细胞裂解液使用说明书
产品简介红细胞裂解液是一种专门设计用来裂解红细胞的新型试剂。
它是一种经过精心制备的化学试剂，能有效地溶解红细胞，以便进一步进行血液样本的处理和分析。
本产品具有使用方便、裂解效果好、安全性高等优点。
使用目的使用红细胞裂解液的主要目的是裂解红细胞，释放其中的血红蛋白和其他细胞内成分，以便进行后续的生化、免疫或分子生物学分析。
同时，该试剂也可以用于分离和纯化血红蛋白，以进行更深入的研究。
成分与特性红细胞裂解液的主要成分包括溶血剂、稳定剂、防腐剂等。
其中溶血剂可以破坏红细胞的细胞膜，使细胞内物质释放出来。
稳定剂和防腐剂则可以保持试剂的稳定性和延长保存时间。
本试剂具有高效率、高纯度、低毒性的特点。
操作流程使用红细胞裂解液的操作流程如下：
(1)准备实验样品：将需要裂解的红细胞悬液准备好。
(2)加入红细胞裂解液：按照样品与红细胞裂解液的比例加入适量的红细胞裂解液。
(3)充分混合：轻轻旋转或摇动混合器，使红细胞裂解液与样品充分混合。
(4)静置：将混合物静置一段时间，让红细胞充分裂解。
(5)离心：将混合物离心，分离出上清液和沉淀物。
(6)处理上清液：根据后续分析的需要，处理上清液，如进行蛋白质沉淀、蒸发、纯化等。
安全性及注意事项(1)请在实验前仔细阅读说明书并穿戴实验服和手套。
(2)请在通风良好的实验环境中进行实验操作。
(3)避免皮肤接触试剂，如不慎接触，请立即用清水冲洗。
(4)请将试剂存放在儿童触及不到的地方，并放在通风、干燥、避光的地方保存。
(5)请勿将试剂与其他物质混合使用。
红细胞裂解液配方
红细胞裂解液配方
1.裂解液：的确是ACK裂解液作用更柔和些
配方：
NH4CL 8.29g
KHCO3 1.00g
Na2EDTA 37.2mg
溶于1000mL蒸馏水，pH 7.2-7.4，效果一直很好。
注意：
（1）裂解液如果放在冰箱里，一定要预热，37度即可。
裂解期间试管也可水浴，但如果是夏天室温比较高则不必；
（2）裂解5min后立刻离心（从所有管都混匀后计时间）；
（3）PBS离心洗涤2次；
（4）裂解液pH值很重要，最好一次不要配多，时间长效果不好，我一般一次配100mL，避光保存。
2.离心速度：800-1000rpm，5min
3.研磨轻柔很重要
4.培养淋巴细胞的最佳培养液是RPMI 1640，因为是原代细胞，要用10%胎牛血清。
还有非常重要的一点，要想让细胞增殖得好，必须加二巯基乙醇（beta-2ME）
5.细胞密度1－2X10^6/mL。
红细胞裂解液法操作
红细胞裂解液法分离脐带血单个核细胞实验设计
操作步骤：
将新鲜采集的脐血在2小时内送至实验室并开始分离操作。
↓
无菌室内75％酒精喷射表面消毒注射器、操作台及操作涉及到的相关器具。
↓
用50ml一次性注射器将采血袋内脐血转至50ml离心管n管（每管血液体积不大于30ml），血袋交计数组进行有核细胞(NC)计数（NC计数1）。
余下用于分离的血液4℃冰箱预温30min。
↓
2000rpm 10℃10min离心，取血浆到一个50ml离心管（NC计数2 ），（找时间500g 10min 离心血浆余下细胞单独冻存），用PBS还原体积混匀。
每450ml红细胞裂解液加入还原体积的血液50ml（室温避光计时10min准时开始离心）充分混匀并立刻分装到12个50ml离心
管中放入离心机400g 10℃5min离心。
↓
用血浆配制10%DMSO冻存保护剂（血浆体积/9=需要DMSO量，精确到微升）5℃预温
↓
去上清，加入过量PBS混匀400g 10℃5min
↓
去上清，尽量将细胞集中到1个离心管加入PBS至40ml混匀，交计数组有核细胞(NC)计数
（NC计数3）然后400g 10℃5min
↓
去上清，根据NC计数2NC计数3与血浆管B一并加入配制好的冻存保护剂（5℃），混匀，分装至n（细胞总数/1.8×107）个冻存管中，每管1.8ml（控制终浓度在0.5～1 ×107 /ml）。
↓
手工冻存或程序降温，转液氮保存
备注：试验操作可根据具体情况进行适当修改
蔡一村王瑛
2005-7-19。
北京普利莱基因技术有限公司红细胞裂解液说明书
北京普利莱基因技术有限公司 电话：************,62027915 Email:*****************.cnApplygen Technologies Inc. DocRev: 201308 Page 1 of 1 红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer ） C1311描述：我们提供的红细胞裂解液可直接与血液或脾细胞悬液混合，也可用于重悬离心收集的血细胞，其能够选择性裂解样品中的红细胞，而不破坏白细胞。
通过低速离心的方法去除红细胞裂解碎片和血小板，收集白细胞，回收率可达90%以上。
被富集的白细胞的生物学活性不受影响，可用于各种后续的细胞实验。
当从得到的白细胞中提取DNA 、RNA 、和蛋白质时，可免除红细胞成分如血红素等的不利影响。
适于裂解人全血、小鼠全血或脾细胞悬液中的红细胞。
规格：100 ml储存： 4ºC ， 24个月与全血混合直接裂解红细胞:1. 采取0.35 ml 人或小鼠全血，加入1.5 ml 离心管2. 加1 ml 红细胞裂解液，颠倒混合，室温放置10 min 。
3. 1500g 离心5分钟，弃上清。
细胞沉淀应为白色。
如果裂解不完全，可用1 ml 裂解液重悬细胞沉淀，室温静置10 min 。
1500g 离心5分钟，弃上清。
4. 用1.5 ml PBS 缓冲液或生理盐水重悬细胞，1500g 离心5分钟，弃上清。
重复洗涤2次。
重悬细胞沉淀后裂解红细胞:1. 采取1 ml 人全血或小鼠全血，枸橼酸钠或EDTA 或肝素抗凝。
或用1个小鼠脾脏制备的细胞悬液，1500g 离心10分钟收集所有细胞。
弃上清。
2. 加3 ml 裂解液重悬细胞(约100~200万个细胞)。
颠倒混合，室温放置10 min 。
3. 1500g 离心5分钟，弃上清。
细胞沉淀应为白色。
如果裂解不完全，应重复步骤2-34. 用1.5 ml PBS 或生理盐水重悬细胞，1500g 离心5分钟，弃上清。
红细胞裂解
对于组织细胞样品：1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2. 加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。
本步骤在室温或4度操作均可。
3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。
可再重复1次，共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4℃离心效果更佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2. 对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
本步骤在室温或4度操作均可。
3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。
4℃离心效果更佳。
5. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。
快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的离心管。
对于血液样品：1. 取新鲜抗凝血，400-500g离心5分钟，离心弃上清。
2. 加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。
红细胞裂解液使用方法
红细胞裂解液使用方法
红细胞裂解液是一种常用的实验室试剂，它可以用来破坏血液红细胞膜从而释放出血红蛋白。
红细胞裂解液使用方法很简单，只要按照以下步骤进行即可。
第一步，准备材料和设备。
需要准备的材料包括红细胞裂解液和待处理的血液样品，需要准备的设备包括离心管、离心机、移液管等。
第二步，制备血浆。
将血液样品放入离心管中，以3000rpm的速度离心10分钟，将血细胞和血浆分离。
将血浆转移到另一个离心管中。
第三步，加入红细胞裂解液。
在离心管中加入适量的红细胞裂解液，根据不同的实验要求可以添加不同的浓度。
第四步，混匀。
使用移液管将红细胞裂解液和血浆充分混合，然后放置在室温下静置30分钟。
第五步，离心。
将混合液置于离心机中，以3000rpm的速度离心10分钟，离心之后可以直接利用上清液继续进行实验。
注意事项：
1、最好在使用前检查红细胞裂解液的药物有效期，避免因为过期而导致实验结果不准确。
2、在制备血浆的过程中一定要避免将红细胞破坏，否则可能会影响到实验数据的准确性。
3、离心过程中要注意离心管的平衡性，避免因为离心速度不均匀而使血细胞重新沉淀。
总之，红细胞裂解液是一种常用的实验试剂，其使用方法不仅简单易行，而且操作方便，适用于各种血液学和生物学实验。
但是在使用时需要注意一些细节问题，遵守操作规程，确保实验结果的准确性。
组织裂解液和细胞裂解液如何配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。
2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。
二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。
加入足够的冷的 PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。
在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。
2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。
3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。
4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。
如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。
5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。
4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。
Y-Tec 红细胞裂解液说明书
上海七纯生物科技有限公司网址：产品说明书品名：Y-Tec 红细胞裂解液货号：YLC0500规格：500ml ➽产品特色：●本裂解液经过优化配方，在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞；●本裂解液的主要有效成分为氯化铵；●本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解，例如鸟或禽类的红细胞。
；➽操作步骤：对于组织细胞样品：1.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2.加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml 的红细胞裂解液。
本步骤在室温或4度操作均可。
3.400-500g 离心5分钟，弃红色上清。
4ºC 离心效果更佳。
4.如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g 离心2-3分钟，弃上清。
可再重复1次，共洗涤1-2次。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
4ºC 离心效果更佳。
6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品（无洗涤）：1.新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2.对于0.2ml 细胞沉淀加入1ml 红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。
本步骤在室温或4ºC 操作均可。
3.加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4.400-500g 离心5分钟，弃红色上清。
4ºC 离心效果更佳。
5.如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
上海七纯生物科技有限公司网址： 说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一些，同时不需要大体积的离心管。
组织裂解液和细胞裂解液的配制
组织裂解液和细胞裂解液如何配制一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 去垢剂0.1% SDS 去垢剂2ug/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂使用前加入2ug/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂使用前加入1 mM PMSF 蛋白酶抑制剂1.5 mM EDTA 蛋白酶抑制剂1mM NaVanadate 磷酸脂酶抑制剂任选以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中;2、冷的PBS 中加入1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate 钒酸钠任选3、对数期生长状态佳的细胞,75cm至少3-4瓶90%以上生长面积;二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上, 用吸液管吸出培养液;加入足够的冷的PBS 在培养瓶中充分洗涤细胞表面,以洗去瓶中残留的培养基,倒掉PBS ,重复以上操作2-3遍;在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS,尽量在冰上操作;2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液每75cm2 培养瓶加1ml. 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞,如果所需要刮的同种细胞有多瓶,则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮由于处理后的细胞裂解液较粘稠,所以宜用直径大点的吸液管吸取;3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中置于冰上,然后重复步骤2以刮取剩下的细胞;4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中,样品插入冰盒进行超声,超声强度以不产生泡沫为准,超声每次2-3秒,重复3-4次;如仍有细胞碎片或沉淀,应离心10000rpm,10分钟,留取上清;5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计,在A280测定,分装保存在-70℃;4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl pH 8.0 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF苯甲基磺酰氟0.1mmol/L100µg/mlPepstatin胃蛋白酶抑制剂1 µmol/L0.7µg/mlLeupeptin亮抑制肽0.5mg/mlAprotinin抑蛋白酶肽0.3µmol/L1µg/ml注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPESpH8.0;Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存裂解操作程序：离心收集1×107个细胞加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀如为组织进行匀浆4℃放置15~30min4℃离心,15 000rpm,10min,取上清备用;方法三•细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；2. 溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性•推荐RIPA buffer:•. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系•· 150 mM NaCl 等渗体系•· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂•· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂•· 5 µg/ml Aprotinin 抑肽酶蛋白酶抑制剂•· 5 µg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂•· 1% Triton x-100 破坏细胞•·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂•细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；2. 溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性•推荐RIPA buffer:•. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系•· 150 mM NaCl 等渗体系•· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂•· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂•· 5 µg/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂•· 5 µg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂•· 1% Triton x-100 破坏细胞•·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂•·0.1% SDS 强变性剂和蛋白溶解剂••其中PMSF等蛋白酶抑制剂最好另外配制,－20℃保存,用前混合;蛋白酶抑制剂较贵,如果你的经费有限,可以仅用PMSF试一试,能出结果就可以;•用于普通的Western、IP或co-IP,我们推荐使用Western及IP细胞裂解液P0013,该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用,用户普遍反映很好;裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作;另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测;对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液P0013效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液强、中或弱或NP-40 裂解液;如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液强或中;如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液弱或NP-40裂解液;对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液,例如RIPA裂解液强、中或SDS裂解液; ••RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl, 1.0% NP-40或Triton-x-100 ,0.5%脱氧胆酸钠, 0.1% SDS, 50 mmoL/L Tris ph8.0;•一、组织裂解液配制组织裂解液配方：`7M Urea60. 06 4.2042 g2M thiourea76.12 1.5224 g100mM DTT 0.1543 g4% CHAPS 0.4 g0.5mM EDTA 0.00146 g40Mm Tris 0.0485 g2%v/v NP-40 0.2 ml1%v/v Triton X-100 0.1 ml5mM PMSF用前加0.00871 g2%pharmalyte 0.2ml共10ml分装成400µl/每管可应用于30-80毫克组织裂解注：已配好分装成400µl/每管可供应用不需另配细胞裂解液配方：6M Urea60. 06 1.8018 g2M thiourea76.12 0. 7613 g65mM DTT 0.050 g4% CHAPS 0.2 g40Mm Trisbase 0.02425 g共5ml分装成200µl/每管可应用于50-100ml培养瓶内的细胞裂解细胞裂解液：组织裂解液配方：7 mol/L 尿素、7M Urea60. 06 4.2042g2 mol/L硫脲、 2M thiourea76.12 1.5224 g2% NP-40、2%v/v NP-40 0.2 ml1% Triton X-100、1%v/v Triton X-100 0.1 ml65 mmol/L DTT、0.1003g 100mM DTT 0.1543 g 5 mmol/L PMSF、5mM PMSF用前加0.00871 g 4% CHAPS、4% CHAPS 0.4 g40 mmol/L Tris、40Mm Tris 0.0485 g2% pharmalytepH3-10、2%pharmalyte 0.2ml0.5mM EDTA 0.00146 g25 mg/L DNase I、7 mg/L RNase A、20 mg/L aprotinin、20 mg/L leupeptin、2 mmol/L Na3VO4、Phosphatase Inhibitor Cocktail 1Phosphatase Inhibitor Cocktail 21ml水化液配方：8M Urea60.06 0.48048 g2% CHAPS 0.02 g痕量溴酚兰0.4 µl1%的痕量溴酚兰10mg+1000µl双蒸水450µl水化液加DTT 0.00135mgor 400µl水化液加DTT 0.00126mg各种细胞裂解液的功用都分别是什么,SDS ,NP-40 ,TritonX-100有何作用SDS ,NP-40 ,TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的,或者说作用力量强弱不同;SDS属于离子型去垢剂,最厉害,基本可以把细胞完全破掉,DNA会释放出来,裂解液变得很粘稠;NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白;TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间,偏向于NP40,也是常用的细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用SDS基本会使蛋白变性失活;但是去垢剂属性只是一方面,buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素,建议参考分子克隆来做;。
红细胞裂解液说明书
产品说明书红细胞裂解液产品货号：H9032产品规格：100mL储存条件常温避光保存，有效期见产品外包装。
产品介绍本裂解液有别于市场上销售的其它红细胞裂解液，其配方经过本公司优化在裂解红细胞的同时不损伤并在一定程度上保护淋巴细胞（lymphocyte）或其它有细胞核的细胞，所获得的细胞可保持完好的生物活性和完整的细胞形态。
另外，本裂解液中无DNA及RNA酶，配合细胞分离液使用所提细胞可广泛用于细胞培养及分子生物学实验，请广大用户从优选择。
红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer），也称ACK Lysis Buffer，是一种用于从人或鼠等的血液或组织细胞样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。
本裂解液不适用于有细胞核红细胞的裂解，例如鸟或禽类的红细胞。
本裂解液经过无菌处理，处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的原代培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。
使用方法裂解过程及离心需在4℃的条件下进行。
对于细胞悬液样品：1.第一次裂解，加入5-8倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解2min。
2.300g离心10min，弃红色上清。
3.如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤1、2步进行短时多次裂解。
但后续每次加入的红细胞裂解液为上一次的一半，但最少不能低于2mL。
裂解液减少到只剩余2mL 时，每次裂解结束，需先加入10mL PBS进行终止，并300g 离心10min，弃红色上清。
直至红细胞裂解完全，裂解结束。
通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
4.洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，300g离心5min，弃上清。
洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
5.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于血液样品：1.取新鲜抗凝血，400-500g离心5min，离心弃血浆。
2.第一次裂解，加入5-8倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解2min。
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红细胞裂解液的配制
我在一个公司的网站上看到的红细胞裂解液的说明书上说操作要点是：1.在37度预热；2.充分混匀细胞我就是这样做的，效果还可以。
不过我只做流式细胞仪的检测，活性没测。
我的裂解液是0.16M NH4Cl，0.13mM EDTA，12mM NaHCO3
我用的方法：
全血：裂解液=1：3，如2ml的全血加上6ml的红细胞裂解液，充分混匀后，室温静置5mim，1000rpm离心6~10min。
红细胞裂解得非常充分。
0.15 M NH4CL, 0.01 M NaHCO3 and 1 mM EDTA (Sigma)
Ammonium chloride (NH4Cl) 8.29 g 0.155 M
Potassium bicarbonate (KHCO3) 1 g 10mM
EDTA 0.37 g 1mM
H2O 1l.
Filter with 0.45µm filter
aliquot in 100 ml aliquots
filter the solution to be used with 0.2µm filter.
我们用的是Tris-NH4Cl,
具体配方如下:
NH4Cl:4.15克加双蒸水500ml,取450ml;
Tris:1.0297克加双蒸水50ml,再加上上面的450ml,共计500ml,高压灭菌,
用时加10-20ml,静置5min,效果蛮好.
9月29日我用的配方
氯化铵3.735g，tris 1.3g，加在500ml水中，ph约7.2。
将全血约5ml加入配好的加入30ml裂解液的50ml试管中5分钟或15分钟，发现5分钟组细胞要多些，15分钟组细胞要少些，而且红细胞仍然有。