抗体筛选和鉴定

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抗体筛选操作步骤

红细胞血型抗体筛选、鉴定操作规程(SOP)目的:规范红细胞血型抗体筛选、鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。

职责: 输血科技术人员负责红细胞血型抗体筛选、鉴定。

适用范围: 适用于输血科抗体筛选血标本、疑难血型标本及疑难配血标本。

所需材料和设备:抗球蛋白试剂、筛选细胞、谱细胞、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管、普通离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱、显微镜。

抗体筛选操作步骤1.取试管三支，分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ；各加入患者血清2滴，再分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞2滴。

2.混匀，37ºC孵育1h。

离心15s。

4.轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。

若肉眼不见凝集，以显微镜检查。

5.对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。

6.最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。

7.按试剂说明书加最适稀释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。

离心15s。

轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。

抗体鉴定操作步骤1.抗体筛选阳性，应作抗体鉴定试验已确定其特异性。

2依据谱细胞数量的多少(一般由8—16个单人份的已知血型表型的0型红细胞组成)取相应数目的试管，分别标记序号，各加入患者血清2滴，再分别加入谱细胞2滴。

3.混匀，37ºC孵育1h。

离心15s。

5.轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。

若肉眼不见凝集，以显微镜检查。

6.对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。

7.最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。

8.按试剂说明书加最适稀释度球蛋白试剂1滴，充分混合。

离心15s。

轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。

凝胶凝集技术筛选和鉴定抗体

凝胶凝集技术
1 原理
在微柱凝胶试验中，用特制的微柱代替普通试管，微柱内注入葡聚糖、蛋白G或玻璃微珠等物质，并可在这些物质上预先分别结合上抗球蛋白抗体。

由于凝胶颗粒具有分子筛作用，抗原抗体反应后的红细胞通过离心经过微柱，无IgG结合的红细胞穿过凝胶到达底部，而红细胞上若有IgG抗体结合则会被凝胶中的抗IgG拉住，红细胞被阻止在凝胶柱上层或中间。

2 标本与试剂
2.1 如果待测的血清和血浆是冰冻保存的，血样在使用前需离心，确保没有颗粒物质；2.2 挑选抗IgG凝胶卡：检查每1个凝胶卡是否干涸是否完整，做好试验标记，若是抗体筛选可选择2～3个微量管，抗体鉴定则需与多个微量管(根据试剂红细胞谱的细胞品种选择微量管数，并注意留有自身与阳性对照)；
2.3 使用适用于微柱凝胶的试剂红细胞组，或参照试剂的要求制备红细胞悬液。

通常配制0.8%红细胞悬液。

3 方法
3.1 揭开凝胶卡的铝封,在不同的微量管中，根据试剂使用说明书的要求分别加入一定量的(通常50μl)不同的筛选或鉴定试剂红细胞；
3.2 根据试剂使用说明书的要求在这些微量管中加入一定量的(通常25μl)血清或血浆；
3.3 将凝胶卡置37℃凝胶孵育箱15分钟；用凝胶试验离心机，离心观察结果。

4 结果判读与解释
4.1 细胞完全沉积在微量管底部为阴性结果；
4.2 所有细胞仍留在微量管顶部为强阳性结果；
4.3 凝集的强弱判断请参见图。

凝胶检测反应级数图。

三聚氰胺人源scFv抗体筛选与鉴定

ｐａｍｉｎｌｓｓＲｅｕｔＰａｍｉｒｇｎｓａｄｆｏｕｐｓ．ｎｌｓｏＵｓｄｂｏｉｙａｅｎｉｅｃｅｎｎｎｉｏｙｌｓｄａａｙｉ．ｓｌｓｌｓｄｆａｍｅｔｎｉｆｒｐｒｏｅＣｏｃｕｉｎｔｅｉｔｌｔｄａｔｎｓｒｅｉｇａｔｄｎｇｂｉｎｖｔｏｆｔｅｏｉｉａｃｅｎｎｔｏｓｔｒａｅｃｎｉｏｓｆｒｆｒｈｒｓｕｙｎｏａｉｎｏｈｒｎｌｒｅｉｇｍｅｈｄｏｃｅｔｏｄｔｎｏｕｔｅｔｄ．ｇｓｉＫｅｗｏｄ：ｎｉｏｙｐａｅｄｓｌｙｔｃｎｌｇ；ｌｍｉｅｙｒｓａｔｂｄ；ｈｇｉｐａｅｈｏｏｙｍｅａｎ
ｃｏｅ，ｓｎｎｙｑｉｋｄｉｌｎｓｕｉｇｅｚｍｅｎｅｍｍｕｏｏｂｎｓａｔｏ（Ｓ，ｃｏｓｒａｔｅａｄｃｍｐｔｔｅｉｉｉｏｘｅｉｎｓｎｓｒｅｔａｓｙｍｅｈｄＥＩＡ）ｒｓ—ｅｃｉｎｏｅｉｉｈｂｔｎｅｐｒｍｅｔ，Ｉｖｖｎｉ
关键词：体；菌体表面展示技术；抗噬三聚氰胺中图分类号：３２１文献标志码：文章编号：６１７１（０２０ —１ —４Ｒ９．１Ａ１７ —４４２１）３０００
ｄｉ１．９９ｊｉｎ１７— ４４２１．３０３ｏ：０３６／．ｓ．６１７１．０２０．０ｓ

康体生命纳米抗体制备及验证方法

纳米抗体制备及验证方法抗体是由免疫B细胞受到抗原刺激产生的能够特异性的和抗原结合的生物蛋白质分子。

由于其能够高特异性，高亲和的结合抗原，抗体广泛应用在学术研究、疾病诊断以及医学药物各个方面。

传统抗体和纳米抗体的区别:传统抗体分子(IgG)是一种结构相当保守的由两条相同的重链和两条相同的轻链组成的蛋白分子。

抗体的轻链包含1个VL区和1个CL区，而重链则拥有1个VH区和3个CH 区(CH1、CH2和CH3)。

VH区和VL区共同组成传统抗体识别抗原的最小单位，抗体可变区的序列差异决定了抗体能够特异地识别不同的抗原。

而CL区和CH区则相对保守，被称为抗体的恒定区，其中CH区的CH2和CH3两个区域对于抗体招募免疫细胞发挥ADCC和CDC功能有着重要的作用。

重链抗体为驼类和软骨鱼类中天然存在的除传统抗体之外的仅由两条重链组成的特殊抗体，只包含一个重链可变区（VHH, Variable Domain of Heavy Chain Antibody）和两个常规的CH2与CH3区，CH1区缺失。

重链抗体通过重链上的一个可变区（VHH）结合抗原，该可变区可以单独稳定地在体外存在，被称为驼类单域抗体(SdAb)或者纳米抗体（nanobody）。

纳米抗体晶体宽为2.5nm，长4nm，分子量仅为传统完整抗体的1/10（约15kD）但依然具有完整的抗原识别能力，一般通过噬菌体筛选得到VHH序列。

得益于纳米抗体微小的结构、完整的抗原识别能力以及噬菌体筛选技术，可以获得VHH完整序列，纳米抗体可以通过体外重组表达进行大量生产，有效避免传统抗体的批次间差异问题。

纳米抗体相对传统抗体的优势：和传统抗体相比，纳米抗体分子量小，结构简单。

而得益于分子量小的优势，纳米抗体更进一步具有多个特征，使得纳米抗体在新药物发现方面表现出巨大的潜力：（1）和靶点结合特异性更强，可以结合传统抗体结合不到的的位点；（2）更高的组织穿透力；（3）更高的稳定性如耐高温；（4）适合工业化大规模生产；（5）更容易改造和优化；（6）更容易人源化由于纳米抗体的这些特征，越来越多的研究机构和药物生产企业在不同的场景中关注、尝试使用纳米抗体。

EV71病毒特异性单克隆抗体的筛选

分类号：单位代码：10019密级：学号：TS040322硕士学位论文EV71病毒特异性单克隆抗体的筛选与鉴定研究Screening and Characterization of Monoclonal Antibody Specific to EV71 Virus研究生：李静指导教师：王宾教授申请学位门类级别：理学硕士专业名称：生理学研究方向：分子免疫学所在学院：生物学院二零零九年六月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。

研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。

(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要手足口病（Hand foot mouth disease， HFMD）是由多种肠道病毒引起的一种常见急性传染病，多发生于5岁以下的婴幼儿，可引起发热和手足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等致命性并发症。

该病是全球性传染病，传染性强，易引起暴发或流行。

1997年以来，肠道病毒71型（Enterovirus 71， EV71）感染为主的手足口病在马来西亚、台湾、新加坡等地大规模爆发流行，引起世界各国关注和警惕。

EV71病毒为小RNA病毒科、肠道病毒属，分为A、B、C三基因型；VP1作为主要的衣壳蛋白，具有最多的型特异性中和位点，是主要的病毒中和决定因子，直接决定病毒的抗原性。

医院间接抗人球蛋白试验(IAT)标准操作规程

间接抗人球蛋白试验（IAT）标准操作规程
1.目的用于检测红细胞在体外是否被致敏
2.适用范围常用于交叉配血、血型鉴定、抗体筛选和鉴定。

3.所需仪器和材料离心机、水浴箱、抗球蛋白试剂等。

4.执行标准《临床检验操作规程》。

5.原理红细胞在体外与相应的抗体和(或)补体致敏后，将抗人球蛋白血清加入已致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面被结合的抗体球蛋白与抗球蛋白试剂发生特异性反应，使红细胞发生凝集而判断出红细胞表面是否含有被致敏的抗体或补体。

6.操作程序
⑴取小试管2支，分别标明主侧和次侧，主侧管加受血者血清0.1ml 和供血者5%红细胞悬液0.1ml，次侧管加供血者血清0.1ml和受血者5%红细胞悬液0.1ml.
⑵混匀后，置37℃孵育45-60分钟（致敏），取出后，两管用生理盐水洗涤红细胞3-4次，每次离心后倾干上清液。

⑶加最适稀释度抗球蛋白血清1滴，混匀，1000r/min,离心1分钟，观察结果。

⑷阳性对照:2%抗-D抗体致敏的Rh阳性红细胞悬液0.05ml加抗球蛋白血清0.05ml,阴性对照：5% O型红细胞悬液0.05ml加抗球蛋白血清0.05ml,盐水对照（2管）:供血者5%红细胞盐水悬液0.05ml 加等渗0.05ml；受血者5%红细胞盐水悬液0.05ml加等渗盐水
0.05ml.
⑸结果判断：阳性对照管凝集，阴性、盐水对照管不凝集，主侧、次侧配血管都不凝集也无溶血，表示无输血禁忌，可以输血。

主、次测有一测有凝集或溶血，表示有输血禁忌，不能输血。

7.注意事项配血标本必须用EDTA抗凝，避免血液离体后被补体致敏导致假阳性；孵育后受血者和献血者的红细胞应用足量生理盐水洗
涤3-4次，每次倾倒盐水应沥干。

抗体库的构建过程

抗体库的构建过程1. 引言抗体库（antibody library）是一种用于存储和筛选抗体的资源库。

通过构建抗体库，研究人员可以收集并保留大量的抗体样本，以便在需要时进行筛选和鉴定。

本文将详细介绍构建抗体库的过程，包括样本采集、抗体生产、抗体纯化和抗体标记等关键步骤。

2. 样本采集样本采集是构建抗体库的第一步，其目的是收集来源广泛、种类丰富的抗体样本。

常用的样本来源包括动物、人体和细胞培养物等。

2.1 动物样本采集动物样本采集是最常见的样本来源之一。

常用的动物包括小鼠、大鼠、兔子等。

采集动物样本时，需要注意以下几点：1.选择健康的动物，确保其免疫系统正常；2.选择合适的采集方式，如血液采集、脾脏切片等；3.根据实验需要，选择不同时间点的样本，以获得不同抗体的变化情况。

2.2 人体样本采集人体样本采集是研究人员获取人体抗体的重要途径。

常用的人体样本包括血液、血清和组织等。

在采集人体样本时，需要遵守伦理法规，并征得被试者的知情同意。

2.3 细胞培养物样本采集细胞培养物可用于获得特定抗体。

在样本采集过程中，需要注意以下几点：1.选择适当的细胞类型，确保其具有抗体的表达能力；2.采用合适的培养条件，如温度、培养基组成等；3.选择合适的收获时间点，以获得丰富的抗体产量。

3. 抗体生产抗体生产是构建抗体库的关键步骤之一。

抗体可以通过多种方法进行生产，包括动物免疫、细胞培养和重组技术等。

3.1 动物免疫法动物免疫法是最传统的抗体生产方法之一。

它通过将目标抗原注射到动物体内，刺激其免疫系统产生相应的抗体。

具体步骤如下：1.选择适当的动物，如兔子、小鼠等；2.设计合适的免疫方案，包括抗原的剂量、注射次数等；3.在免疫完成后，采集动物血液，获得免疫血清。

3.2 细胞培养法细胞培养法是一种常用的抗体生产方法。

通过将抗原加入细胞培养物中，刺激细胞产生抗体。

具体步骤如下：1.选择适当的细胞类型，如B细胞、淋巴细胞等；2.将抗原加入细胞培养物中，培养一定时间以促进抗体产生；3.收集培养物，分离和纯化抗体。

不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程

不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行,这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。

2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。

3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应,以发现在37℃中有反应活性的抗体。

这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等.当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。

4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清,48小时内使用5。

试剂5。

1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。

每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选,见表1005—1。

5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。

每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005—2。

5。

3。

抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。

5.4。

致敏红细胞（质控细胞）。

5。

0.9％生理盐水。

5.6。

Coombs微柱凝胶卡。

6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。

7。

操作程序7。

1。

盐水介质法7.1。

1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。

7。

1。

2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2％~5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。

7。

1.3。

以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005—1中。

如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。

02抗体筛选和鉴定试验

抗体筛选和鉴定试验1、原理红细胞血型抗体分子的物理特性与血清学的反应性之间有着直接的关系。

可分为IgM和IgG球蛋白抗体IgM为天然抗体，在盐水介质中能直接相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应。

IgG为免疫抗体，常经妊娠或输血等免疫产生。

在盐水介质中不能凝集而只能致敏抗原的红细胞，且必须通过特定的方法使致敏红细胞发生凝集。

如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝胶（或玻璃）等方法。

2、方法待检血清需要使用多种方法进行鉴定。

一般使用盐水法、酶方法、抗球蛋白法、凝聚胺法或凝胶法检测抗体。

在检测到弱抗体时，可以利用适当增加血清的细胞比例、适当增加孵育时间、加入低离子强度溶液增效剂或PEG聚氧乙烯乙二醇等方法增加反应的敏感性。

不同的抗体在不同的方法和条件下可以有不同的表现。

这些特性为判定抗体特异性提供了参考信息。

3、试剂3.1、红细胞：选取三个以上的O型红细胞组成一组筛选细胞（已知抗原）。

3.2、谱细胞：选取八个以上的O型红细胞组成一组谱细胞（已知抗原）。

4、操作4.1、不规则抗体的筛选：用筛选细胞（1、2、3号），同患者血清在三种介质中（盐水、凝聚胺、看球蛋白）反应，需做自身细胞对照。

4.2、不规则抗体的鉴定：对筛选阳性的患者应检查其抗体的特异性。

用一组谱细胞（1-11）同患者血清在三种介质中（盐水、凝聚胺、抗球蛋白），进行抗体的筛选，需做自身细胞对照。

5、结果判断阳性反应：出现红细胞凝集。

表示红细胞上有相应抗体存在。

阴性反应：出现红细胞不凝集。

表示红细胞上没有相应抗体存在。

结合谱细胞反应格局，确定抗体特异性。

6、临床意义6.1、定血型；6.2、测效价6.3、可能几率：正确的抗体鉴定，必须有充分的谱细胞支持。

7、标本要求7.1、按照一般的血液样本采集步骤采集血液标本。

该标本可于4℃或0℃以下冷冻保存三周或数年。

一般不需特殊处理。

7.2、应用EDTA抗凝标本，可反应体内红细胞被补体致敏的真实情况。

抗凝标本也用于直接抗球蛋白试验，并可提供洗脱技术所需的红细胞来源。

单克隆抗体的制作流程

单克隆抗体的制作流程一、引言在生物医学研究和临床治疗中，单克隆抗体被广泛应用。

它可以通过与特定的抗原结合来识别和定位目标分子，为研究人员提供了重要的工具。

在本文中，我们将深入探讨单克隆抗体的制作流程，包括免疫原选择、免疫动物制备、细胞融合和单克隆抗体筛选等环节。

二、免疫原选择免疫原的选择对于制备具有高特异性和亲和力的单克隆抗体至关重要。

首先要确定所需的抗原特征，例如结构域、修饰形式等。

常见的免疫原包括蛋白质、多肽、糖类、小分子化合物等。

在选择免疫原时，需考虑其易得性、免疫原性、纯度、稳定性等因素。

2.1 蛋白质和多肽免疫原蛋白质和多肽通常是制备单克隆抗体最常用的免疫原。

选择合适的蛋白质或多肽，可以根据目标蛋白的功能域、线性表位或立体结构等特征。

对于复杂的蛋白质，可以选择亲和纯化后的特定结构域或表位作为免疫原。

2.2 糖类免疫原糖类通常具有较复杂的结构，选择适当的免疫原十分关键。

在制备糖类免疫原时，可以选择与糖链特异性结合的蛋白质作为载体，通过共价结合将糖类连接到蛋白质上，并保持其天然的空间构象。

2.3 小分子化合物免疫原小分子化合物通常具有较弱的免疫原性，需要通过与载体结合形成分子复合物来增强免疫性。

常用的方法包括与大分子带电载体或蛋白质偶联，或通过共价结合形成分子复合物。

三、免疫动物制备合适的免疫动物选择和制备是单克隆抗体制备的重要环节。

常用的免疫动物包括小鼠、兔子和大鼠等。

3.1 小鼠小鼠是最常用的免疫动物，且易于操作。

在选择小鼠品系时，需考虑其免疫反应能力、抗原耐受性和容易获得的特点。

通常使用BALB/c小鼠或nude小鼠。

3.2 兔子兔子具有较强的免疫反应能力和较大的体积，可以提供大量的抗体。

但兔子对某些抗原可能产生耐受性。

3.3 大鼠大鼠易于操作且免疫反应充分，但体积较小，提供的抗体量相对较少。

四、细胞融合细胞融合是制备单克隆抗体的关键步骤之一。

通过将免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，可以获得具有免疫动物和癌细胞特点的杂交瘤细胞。

几种常用的抗体检测方法

几种常用的抗体检测方法(1)免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。

由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。

A、器材和试剂a. 包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。

Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml 混合，加蒸馏水至1000ml。

b. 洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4&S226;12H2O 2.9g，NaCl8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。

c. 稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。

d. 酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。

e. 底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L 柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。

柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。

f. 底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O2 0.15ml。

TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。

ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。

g. 抗体对照：以骨髓瘤细胞培养上清作为阴性对照，以免疫鼠血清作为阳性血清。

抗-抗体的制备

抗-抗体的制备抗-抗体（Anti-idiotype Antibody）是一种与抗原特异性抗体结构相似的抗体，其特异性是指其抗原结合位点可以与目标抗体结合。

抗-抗体的制备是一项重要的生物学研究技术，可以用于研究免疫应答、抗体结构与功能以及疾病诊断与治疗等领域。

抗-抗体的制备通常需要经历以下几个步骤：1. 抗原选择：首先需要选择目标抗体作为抗原，这个目标抗体可以是任何具有特定结构和功能的抗体。

通常选择已知结构和特异性的抗体作为目标抗体，以便后续制备抗-抗体。

2. 克隆目标抗体：为了获得足够的目标抗体，需要将目标抗体进行克隆扩增。

这可以通过细胞融合技术或单克隆抗体制备技术来实现。

通过这一步骤，可以获得大量纯化的目标抗体。

3. 提取抗体：将克隆的目标抗体从细胞培养物或体液中提取出来。

这可以通过离心、过滤、沉淀等技术来实现。

提取的抗体需要经过纯化步骤，以获得高纯度的目标抗体。

4. 选择抗-抗体：在制备抗-抗体的过程中，需要选择适当的抗-抗体，这可以通过筛选和鉴定的方法来完成。

通常可以使用目标抗体与大量候选抗-抗体进行结合实验，选出与目标抗体结合最紧密的候选抗-抗体。

5. 抗-抗体制备：选定候选抗-抗体后，可以使用多种方法来制备抗-抗体。

其中一种常用的方法是通过免疫化学技术，将候选抗-抗体注射到动物体内，激发动物产生相应的抗-抗体。

这些抗-抗体可以通过血清或其他体液中提取出来，并经过纯化和鉴定，得到纯度较高的抗-抗体。

6. 抗-抗体应用：制备好的抗-抗体可以用于各种实验和应用中。

例如，可以用抗-抗体来研究目标抗体的结构和功能，以及免疫应答的调控机制。

此外，抗-抗体还可以用于疾病的诊断和治疗，例如针对某些肿瘤抗体的抗-抗体可以用于治疗肿瘤。

总结起来，抗-抗体的制备是一项复杂而重要的技术，它可以用于研究和应用的多个领域。

通过选择目标抗体、克隆和提取抗体、筛选和制备抗-抗体，我们可以获得具有特定结构和功能的抗-抗体，为进一步的研究和应用提供了有力的工具。

不规则抗体筛查标准操作规程

不规则抗体筛查标准操作规程(一)检验目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。

(二)检验原理1.盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。

2.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。

无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。

3.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

4.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。

(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。

(四)设备性能参数各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。

(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。

杂交瘤细胞的筛选方法

杂交瘤细胞的筛选方法杂交瘤细胞是一种具有细胞免疫特性的细胞系，它们可以产生单克隆抗体，因此在生物医学研究和药物开发中具有重要的应用价值。

为了获得高质量的杂交瘤细胞，需要进行严格的筛选和鉴定。

本文将介绍杂交瘤细胞的筛选方法，希望能为相关研究工作提供一些参考。

首先，对杂交瘤细胞的筛选需要明确筛选的目的和要求。

一般来说，筛选的目的是获得产生高效抗体的杂交瘤细胞，要求细胞具有良好的生长性能和稳定的抗体产生能力。

因此，筛选方法需要综合考虑这些因素，并根据具体情况确定筛选条件。

其次，常用的杂交瘤细胞筛选方法包括细胞融合、抗体筛选和细胞克隆等步骤。

在细胞融合阶段，可以采用聚乙二醇法或电脉冲法将B细胞和肿瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。

在抗体筛选阶段，可以利用ELISA或细胞免疫荧光等技术对细胞产生的抗体进行筛选和鉴定。

在细胞克隆阶段，可以通过有限稀释法或单细胞分选法获得单克隆杂交瘤细胞系。

此外，对于筛选到的杂交瘤细胞，还需要进行细胞鉴定和验证。

鉴定的主要内容包括细胞形态学观察、染色体分析、抗体产生能力检测等。

只有经过严格的鉴定和验证，才能确保所获得的杂交瘤细胞系具有稳定的抗体产生能力和良好的遗传稳定性。

最后，需要注意的是，在杂交瘤细胞的筛选过程中，应该严格遵守生物安全规范，采取必要的防护措施，确保实验操作的安全性和可靠性。

此外，还需要对实验过程进行记录和数据分析，及时总结经验教训，不断优化和改进筛选方法，提高杂交瘤细胞的筛选效率和质量。

总的来说，杂交瘤细胞的筛选是一个复杂而关键的过程，需要综合考虑多种因素，严格执行操作规程，确保筛选结果的准确性和可靠性。

希望本文介绍的杂交瘤细胞筛选方法能够对相关研究工作提供一些帮助，促进杂交瘤细胞在生物医学研究和药物开发中的应用。

输血意外抗体

凝将Coombs微柱凝胶卡置于微柱凝胶离心机内，1000rpm,10mi
胶法
n。取出微柱凝胶卡，观察结果。
实验步骤 — 抗体鉴定
在12支小试管上标记1、2、3…12。
每支试管中加入受检者血清2滴。
盐
对应滴加1、2、3…11 号试管2%-5%筛选红细胞生理盐水悬
水
液1滴,12号管滴加2%-5%自身洗涤红细胞生理盐水悬液。
水
混合，离心3400RPM,10S。
法
观察结果。
37℃孵育30min。
混合，离心3400RPM,10S。
观察结果。
实验步骤 — 抗体筛选
在三支小试管上标记I、II、III。
每支试管中加入受检者血清2滴。
间接抗
对应滴加I、II、III号2%-5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴。 37℃孵育30min。
实验仪器与试剂
仪器
小试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、加样枪、微柱
凝胶孵育器、微柱凝胶离心机
筛下抗
原:D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、
试剂
Lea、Leb、K、k、FYa、FYb、Kpb、Jsb、L
ub、mur、Dia。
球
37℃孵育30min。
蛋
三次0.9%生理盐水洗涤，扣干试管后再进入多特异性抗球蛋
白
白试剂1滴。
法
混合，离心1000RPM,10S。
观察结果。
实验步骤 — 抗体鉴定
在Coombs微柱凝胶卡上标记1、2、3…12，分别加入1、2、
微柱
3…11号筛选红细胞50ul和待检者血清25ul，12号孔滴加0.8 %自身洗涤红细胞生理盐水悬液。
球

抗体筛选和鉴定与交叉配血-长沙

37℃孵育15-30分钟（具体时间需要对该酶进行测试），用生理盐水洗涤3遍后配制成2-4%的红细胞悬液。 2.在标记好的试管中加入2滴血清和1滴2-4%的酶处理红细胞悬液，37℃孵育15-30分钟，1000g离心15秒，轻摇试管，判读结果。如需要，可进一步做抗人球蛋白试验。
结果判定、注意事项：同一步酶法。
因为某些抗原已丧失。商品化的谱细胞有人种的差异。
谱细胞
谱细胞
抗人球蛋白试剂
抗人球蛋白分类：单特异性的抗-IgG、多特异性的抗 IgG+C3d。
抗-IgG、抗IgG+C3d的抗球蛋白试剂都可用于抗体筛选和抗体鉴定。
抗人球蛋白卡
抗人球蛋白卡
凝聚胺试剂盒
酶
抗体筛选和鉴定的技术
患者血浆＋筛选细胞（谱细胞）患者血浆＋自身细胞（自身对照）
一般试验中常用的是菠萝酶、木瓜酶、无花果酶。方法：
一步酶法（直接法）二步酶法（间接法）
一步酶法（直接法）
在血清和红细胞反应体系中直接加入酶溶液，促进血清中的抗体与相应红细胞抗原的反应，产生特异性凝集。
操作：在标记好的试管中加入2滴血清和1滴2-4%的红细胞悬液，再加入1-2滴酶溶液，37℃孵育15-30分钟，1000g 离心15秒，轻摇试管，判读结果。如需要，可进一步做抗人球蛋白试验。
In-Vitro Hemolysis
4C
0 0 Some Some 0 0 Some Rare 0 0 0 0 Occ.
0
Most Most Most Most Few No Most
22C
Some Few Some Rare Rare Few Few Few Few Rare Rare Most Most Some Few Some Few Some Some Some