细胞工程(一)
高二生物植物细胞工程1(1)
细胞工程习题(答案)(1)
细胞培养技术习题（含答案）第一章动物细胞培养概述一、名词解释细胞培养：是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬浮液，然后放在类似于体内生存环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功能的方法。
组织培养：从生物体内取出活的组织在体外进行培养的方法。
器官培养：将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基取出，在体外培养的方法。
二、填空题1.体外培养（或组织培养）主要包括_细胞培养_，_组织培养_，和_器官培养_ 三种类型。
2._Harrison_的实验开创了动物组织和细胞培养的先河，他建立了_盖玻片悬滴_培养法3.在卡氏瓶原理的启发下，出现了用试管培养，继而又出现了多种类型的_培养瓶、_培养皿和_多孔培养板_的培养。
从20世纪40年代开始，大多数培养工作都过渡到用_瓶子_培养4.在动物细胞培养方法的发展过程中，具有历史意义的培养方法有盖玻片悬滴培养法，_旋转管培养的方法_，_灌注小室培养法_，和目前普遍应用的单层细胞培养法5.早期细胞培养采用_天然_培养基，现在广泛采用添加___血清_____的_人工合成培养基，近二十年来，动物细胞培养朝着无血清_培养基的方向发展。
三问答题1、动物细胞培养技术现已应用到那些领域？请举例说明。
动物细胞培养技术几乎已应用到生物、医学研究的各个领域。
这门技术自创立至今，已在多个学科领域乃至生产实践中均发挥了巨大的作用。
一、在生物学领域的基础研究中的应用离体培养的动物细胞具有培养条件可人为控制且便于观察检测的特点，因而可广泛应用于生物学领域的基础研究中。
1．在细胞生物学上的应用2．在遗传学上的应用除了可用培养的动物细胞进行染色体分析外，还可结合细胞融合技术建立细胞遗传学，进行遗传分析和杂交育种。
3．在胚胎学上的应用通过体外培养卵母细胞，并进行体外受精、技术而应用于家畜的繁殖生产中。
4．在病毒学上的应用胚胎分割和移植己发展成了一种较成熟的在制备减毒活疫苗和诊断用抗原时，离不开细胞这一病毒增殖的场所。
细胞工程原理-第一章 动物细胞的培养
（二）合成培养基
主要是指通过人工设计、配制而成的，使用时需 添加一定量血清的一类培养基，可在体外较好用 于动物细胞培养。目前已经设计出适合不同类型 细胞的培养基，如DMEM、TC199等。 优点：创制出与体内相似的生存环境，又便于控 制，实现标准化。
主要成分：氨基酸、糖、无机盐、维生素及其他 辅助物质。
定 1.鉴定指标 ① 纯度： 何种细胞为主 ② 细胞学特征： 细胞形态、结构、染色体组型、生长曲线、分 裂指数、倍增时间等
③ 稳定性：传代过程中，细胞学特征是否发生变化 ④ 污染情况： 是否有微生物和其他细胞系污染
2.鉴定方法
① 细胞形态学观察： 光镜和电镜观察形态特征 ② 绘制生长曲线，计算分裂指数 ③ 进行染色体组型和带型分析 ④ 检测同工酶酶谱
人心肌成纤维细胞 成纤维细胞
人乳腺
（3）游走细胞型
特点：细胞质常伸出伪足或突起，呈活跃的游 走或变形运动，一般不连接成片。 举例：人单核细胞、巨噬细胞以及某些肿 瘤细胞。
人单核细胞
（4）多行型细胞
特点：呈多角形，是一些形态上不规则的细胞 ，不规则形态是由宽扁的胞质突起所致，细胞 一举般 例分 ：胞 神体 经和 元胞细突胞两、部神分经。胶质细胞。
（一）细胞的冷冻保存
细胞超低温保存的基本原理：细胞在-70℃以下时 ，细胞内的酶活性降低，代谢处于完全停止状态 ，故可长期保存。
细胞低温保存的关键：通过-20-0℃阶段的处理过 程。因为在此温度范围内，易造成细胞的严重损 伤，因此，常常在培养液中加入保护剂来减少对 细胞的伤害。
细胞冷冻过程：将对数期细胞用冻存液（DMSO+血 清或者+培养基+血清）、甘油+血清等）重悬，分
（二）建立细胞系、株
细胞工程___第一章细胞工程绪论
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第二节
细胞工程
一、细胞工程
细胞工程是运用细胞生物学和分子生物学的方 法，通过类似工程学的步骤，在细胞整体水平或细 胞器水平上，按照人们的意愿改变细胞内的遗传物 质以获得新型生物或特种产品的一门综合性科学技 术。(p7)
应用的原理和方法 概念 研究的水平 研究的目的 细胞工程
细胞生物学和 分子生物学
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生物化学工程：生物化学工程是由生物科学与化学工程
相结合的交叉学科，主研究新型生物反应器和新型分离技术以及 设备的开发、生物反应过程的数学模型建立和在线检测及控制手 段完善。
四、生物工程在国民经济中的地位
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1)生物制药 2)绿色食品 3)环境保护 4)培育超级农业品种 5)农业现代化 6)提高人类健康水平 7)全面仿生技术
讨论：生命科学未解的八大奥秘？ 思考题：现代生命科学研究的热点？ 作业： 1. 生物工程的概念及研究内容？ 2.细胞工程的概念，研究范围，在生命科学 中与其它学科的关系。 3. 细胞工程技术的标志性成就有哪些？ 4.细胞工程的作用与应用领域？
参考书目： 1、李志勇，《细胞工程》科学出版社。 2、罗立新《细胞工程》华南理工大学出版社。 3、谢从华，《植物细胞工程》高等教育出版社。 4、朱至清，《植物细胞工程》化学工业出版社。 5、安利国，《细胞工程》科学出版社。 6、《动物组织培养技术及其应用》 陈瑞铭 科学 出版社。 7、鄂征 ，《组织培养技术》人民卫生出版社。 8 、司徒镇强 吴军生《细胞培养》 世界图书出版 公司。
这一领域已达到世界先进水平，以花药单倍体育种途径，培育出的水稻品种 或品系有近百个，小麦有30个左右。其中河南省农科院培育的小麦新品种， 具有抗倒伏、抗锈病、抗白粉病等优良性状。
细胞工程(1)
第一章绪论细胞工程（Cell Engineering)：以细胞生物学与分子生物学为基础理论，采用原生质体融合、亚细胞操作、细胞培养等方法与技术，在细胞水平上改造生物遗传物质，以获得新的性状的细胞系、生物体及生物次生代谢物质。
细胞工程核心技术：细胞的培养与繁殖目的：获得新性状、新个体、新物质。
细胞工程研究内容: 细胞体外培养技术、细胞融合、细胞质工程（核移植）、染色体组工程、染色体工程、基因工程细胞工程：细胞体外培养技术、细胞融合技术、细胞器移植技术细胞工程应用意义：利用组织培养技术——大量生产苗木改善农业生产技术——动植物品种改良保护自然资源——名贵中药细胞生产。
保护自然环境——生物工业代替化学工业生物医药开发与利用生物材料开发与利用第二章实验室设置与基本技术细胞工程实验室三个基本的需要：实验准备（培养基配制，洗涤与灭菌等）；无菌操作；控制培养。
实验室布局的其基本要求：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察实验室组成：基本实验室、辅助实验室基本实验室：准备室、接种室、培养室准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。
要求宽敞明亮、通风条件好。
接种室：功能是进行无菌操作。
要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌；房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定；除了出入口和通气口外，应行密闭。
培养室：功能是对离体材料进行控制培养。
首要要求是要能控制光照和温度；其次为防止微生物感染；培养室应保持干燥和清洁。
辅助实验室：细胞学实验室、摄影室及暗室、生化分析室细胞学实验室：功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。
要求清洁、明亮、干燥；使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。
生化分析室：培养物的有效成分随时进行取样检查。
要求清洁、明亮、干燥；使各种仪器不受潮湿和灰尘污染。
摄影室及暗室：功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。
要求暗；不受潮湿和灰尘污染。
基本设备：天平、酸度计、电炉、培养基分装器、微波炉、冰箱、纯水器灭菌设备：紫外灯、干热消毒柜、喷雾消毒器、蒸汽压力灭菌锅、过滤灭菌装置无菌操作设备：接种箱、净化工作台光温控制设备：时间程序控制器、空调、温度感应器细胞培养设备：培养箱、培养架、摇床、生物反应器细胞学鉴定设备：实体显微镜、倒置显微镜、光学研究显微镜生化分析设备：真空冷冻干燥器、超临界CO2仪、层析冷柜、蛋白质分离纯化仪、培养器皿及实验用具：玻璃器皿、金属材质用具、新型材料器皿洗涤液：碱性洗涤液：洗衣粉；加酶洗衣粉；洗洁精铬洗涤液：铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制要求：玻璃器皿透明发亮、内外壁水膜均匀，不挂水珠。
植物细胞工程实验 (1)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、 H 3BO 3、 MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、 Na 2MoO 4·2H 2O 、CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、Na 2-EDTA·2H 2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B 6)、盐酸硫胺素(维生素B 1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml ，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g 的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。
高中生物思维导图-选修一-细胞工程
植物材料（由具有分生能力的不定形薄壁细胞组成）外植体消毒接种到培养基＋适宜条件（恒温避光）脱分化变异材料诱变处理愈伤组织细胞产物细胞处于不断分生状态，易产生突变。
胚状体再分化接种到分化培养基人工薄膜包装幼苗人工种子体现细胞全能性体细胞花粉新个体单倍体①②③④⑤植物繁殖新途径作物新品种的培育细胞产物的工厂化生产单倍体育种突变体利用微型繁殖作物脱毒人工种子应用植物组织培育技术①②③④⑤④利用分生区（如茎尖）保持优良性状；缩短育种年限；不受季节、气候、地域的限制。
（也可包裹不定芽、腋芽、顶芽。
）胚状体无性生殖有性生殖植物体细胞杂交技术发酵罐培养纤维素酶果胶酶物理：离心、振动、电激化学：聚乙二醇（PEG ）诱导人工诱导原生质体A 原生质体B A 细胞B 细胞去壁正在融合的原生质体再生出细胞壁植物组织培养杂种植株××筛选动物细胞单个分散细胞细胞悬液贴壁生长分瓶培养10代细胞50代细胞不死细胞胰蛋白酶或胶原蛋白酶胃蛋白酶？加培养液蛋白酶处理原代培养传代培养少数少数无菌、无毒环境——加抗生素；定期更换培养液36.5±0.5℃、pH 为7.2-7.4；95%空气+5%CO 2糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素；血清、血浆。
CO 2维持pH 条件使用或冷冻保存10代以内：保持细胞正常的二倍体核型转入培养液＋接触抑制癌化应用生产生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体用于基因工程受体细胞培养用于生理、病理、药理等研究动物细胞培养技术供体体细胞供体细胞卵巢卵母细胞MⅡ中期卵母细胞去核卵母细胞细胞培养（10代以内）去核注入细胞融合重组胚胎胚胎早期培养代孕母体与供体遗传物质基本相同的个体细胞培养使克隆动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物 1.克隆动物绝大部分DNA 来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA ，即线粒体中的DNA 是来自于受体卵母细胞。
2.生物的性状还受环境的影响。
高中生物第章细胞工程.1动物细胞培养学案选择性3
动物细胞培养必备知识·素养奠基一、动物细胞培养概念从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
二、动物细胞培养的条件1。
营养条件:(1)合成培养基：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成。
（2)天然成分：血清等.（3）一般使用液体培养基,即培养液。
2。
无菌、无毒的环境：(1）培养液和培养用具灭菌处理。
(2）无菌环境下操作.（3）培养液定期更换的目的：清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
3。
温度、pH和渗透压:(1)适宜的温度：哺乳动物多以36。
5±0。
5℃为宜。
(2）适宜的pH:多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。
(3)适宜的渗透压。
动物细胞培养能否体现动物体细胞的全能性？说明你的理由。
提示:不能。
动物细胞培养只是细胞的增殖，没有体现细胞的全能性。
4.气体环境：95％空气和5%CO2。
（1)O2作用：细胞代谢所必需的。
(2）CO2的主要作用：维持培养液的pH。
三、动物细胞培养的过程填一填：基于动物细胞培养的过程，完成下面的问题:（1)过程①处理方法有:机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理的方法.(2）过程②为原代培养,培养的动物细胞有两类:①悬浮在培养液中生长增殖;②贴附于某些基质表面生长增殖。
(3）进行过程③时,悬浮培养的细胞直接用离心法收集;贴壁细胞需要使用胰蛋白酶等处理，然后用离心法收集.（4)过程③为传代培养，进行过程③的原因主要有:细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏和接触抑制等。
四、干细胞培养及其应用1。
干细胞分布：早期胚胎、骨髓和脐带等。
2.种类：胚胎干细胞和成体干细胞。
3.判一判：基于干细胞的类型和应用,判断下列说法的正误。
(1)胚胎干细胞和成体干细胞都具有形成机体的所有组织和器官,甚至个体的潜能. (×)提示:成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力。
高二生物植物细胞工程1(1)
www.bbin-com [单选]列各项中，应计入产品成本的是()。A.固定资产报废净损失B.支付的矿产资源补偿费C.预计产品质量保证损失D.基本生产车间设备计提的折旧费 [单选]以下关于程序流程图、N-S盒图和决策表的叙述中，错误的是（）。A.N-S盒图可以避免随意的控制转移B.N-S盒图可以同时表示程序逻辑和数据结构C.程序流程图中的控制流可以任意转向D.决策表适宜表示多重条件组合下的行为 [单选,A1型题]亡阳兼气脱证，首选的药对是（）A.附子、桂枝B.附子、人参C.附子、高良姜D.附子、干姜E.肉桂、吴茱萸 [单选]印刷的要素不包括（）。A.原稿B.承印物C.图文载体D.校样 [单选,A4型题,A3/A4型题]男，50岁，因躯干、双下肢汽油火焰烧伤3小时入院，烧伤面积为60%，其中深Ⅱ度20%，Ⅲ度40%，入院后立即给予补液及应用广谱抗生素预防感染治疗。入院第3天行手术切痂自体微粒皮加大张异体皮移植术。术后因患者发热，给予持续大剂量广谱抗生素以控制感染，术 病人突然高热，寒战，体温高达40℃，出现神志淡漠，嗜睡及休克，白细胞计数24×10/L。对于抗生素的选择，下列哪一个是正确的()A．头孢他啶B．他唑巴坦C．庆大霉素D．两性霉素BE．青霉素 [单选]不受气候影响的地下水是（）。A.气包带水B.潜水C.承压水D.裂隙水 [多选]加盖公章时要()。A.端正、清晰B.印泥适度、落印平稳C.盖在署名中问D.上不压正文，下骑年盖月 [单选]堤防沉降观测基准点的（）应从国家建立的水准测量高程控制网点引测。A.高差B.高度C.位置D.高程 [单选,A1型题]小儿化脓性脑炎的脑脊液变化为（）A.细胞数增高，蛋白正常，糖降低B.细胞数增高，蛋白增高，糖降低C.细胞数正常，蛋白正常，糖降低D.细胞数增高，蛋白升高，糖升高E.细胞数升高，蛋白正常，糖正常 [单选]主动脉超过近端正常主动脉宽度多少可考虑主动脉瘤诊断（）A.20％B.30％C.40％D.50％E.60％ [单选]Battle征是指（）A.颅后窝骨折引起的脑脊液耳漏B.颅中窝底骨折引起的脑脊液鼻漏和耳漏C.颅前窝底骨折引起的眼眶周围的青紫和肿胀D.颅后窝骨折引起的迟发性乳突部皮下淤血斑E.颅中窝底骨折引起的搏动性突眼和颅内血管杂音 [单选,A2型题,A1/A2型题]下列描述为2型糖尿病的特征的是（）A.胰岛素释放试验为低水平B.空腹胰岛素可正常、稍低或稍高，服糖后呈延迟释放C.空腹血糖降低，血浆胰岛素／血糖比值大于0.4D.每天胰岛素分泌总量40～50UE.当血糖升高时胰岛素分泌量增加 [单选,A2型题,A1/A2型题]患者男，35岁，工人。诊断分裂情感性精神障碍，五年内住院三次。每次发作，出现躁狂表现和精神病性症状，甚至有暴力倾向。此次急性发作思维奔逸、夸大妄想、被控制妄想、思维被广播、持续性的听幻觉（幻觉内容与情绪无关）、活动量大、睡眠需要减少。入院后 现易激惹，频频攻击其他患者和工作人员，并且有自伤行为，因此被约束隔离。对于此患者，以下哪项治疗最合适（）A.氯氮平口服B.心理治疗C.利培酮口服D.碳酸锂口服E.电抽搐治疗 [单选]设在变形缝处附近的防火门，应设在楼层数较多的一侧，且门开启后（）变形缝。A．不应跨越B．严禁跨越C．不宜跨越D．可以跨越 [名词解释]工程移交 [问答题,简答题]区间线路发生故障，当确知一端先来车时如何防护？ [单选]能够用于激光光动力疗法的药物是（）A.吲哚青绿B.荧光素钠C.丙酮D.血卟啉衍生物E.甲醇 [配伍题,B型题]结核病的一线抗结核药物是()</br>结核分枝杆菌的细胞壁脂质含量是()</br>迟发型变态反应原理是()A．占其干重的60%B．盐酸酒精C．硫酸D．利福平E．结核菌素试验 [单选,A2型题,A1/A2型题]鉴别周围性和中枢性面神经麻痹，主要依据是（）。A.上半部分面肌有无瘫痪B.鼻唇沟是否变浅C.口角偏斜的方向D.下半部分面肌有无瘫痪E.面肌瘫痪的程度 [单选,A2型题,A1/A2型题]碘造影剂可发生过敏反应，除哪项外属于轻度反应（）A.恶心、呕吐B.气喘、呼吸困难C.面色潮红D.头晕、头痛E.荨麻疹 [单选]以下哪一项不属于政府在残疾人就业工作中的职责（）？A.将促进残疾人就业纳入国民经济和社会发展规划B.督促有关部门做好残疾人就业工作C.制定优惠政策和具体扶持保护措施，为残疾人就业创造条件D.按照法律负责残疾人工作的事实与监督 [单选]患者恶寒重，发热轻，无汗，头痛，肢体疼痛，鼻塞声重，时流清涕，喉痒，舌苔薄白而润，脉浮。其治法是（）A.散寒解肌B.辛温解表C.调和营卫D.散寒止痛E.发汗解肌 [填空题]当温度升高时，溶质在气相中的分子扩散系数（），在液相中的分子扩散系数（）。 [单选]关于仲裁协议，说法正确的是：（）A.仲裁协议可以通过电子邮件的方式订立B.仲裁协议仅约定纠纷适用的仲裁规则的，以制作该仲裁规则的仲裁委员会为确定的仲裁委员会，仲裁协议有效C.仲裁协议未约定仲裁规则的，仲裁协议无效D.以口头方式订立的仲裁协议有效 [单选]企业的项目组织结构，以下哪种结构形式的项目经理权限最大：（）A．职能式组织结构B．项目式组织结构C．平衡矩阵式组织结构D．强矩阵式组织结构 [单选,A1型题]排尿过程中突然尿流中断，疼痛剧烈，改变体位后又可排尿的是（）A.肾结石B.输尿管结石C.膀胱结石D.后尿道结石E.前尿道结石 [单选,A2型题,A1/A2型题]下列哪项不属于泄卫透表法的范围？（）A.疏风散热法B.解表清暑法C.清热泻火法D.宣表化湿法E.疏卫润燥法 [单选]选择性遗忘常见于（）。A.脑外伤B.颅内器质性疾病C.精神分裂症D.癔症E.情感性精神障碍 [单选]铜可溶于（）A、硝酸B、盐酸C、稀硫酸D、浓硫酸 [单选]国际单位制取消了相当数量的繁琐的制外单位，简化了物理定律的表示形式和计算手续，省去了很多不同单位制之间的单位换算。体现的是国际单位制的（）。A.统一性B.简明性C.科学性D.实用性 [多选]下列换热器中，属于板片式换热器有（）等。A.填料函式列管换热器B.螺旋板式换热器C.板式换热器D.板翅式换热器 [单选]电压和电流的瞬时值表达式分别为u＝220sin（ωt－10°）和i＝5sin（ωt－40°），那么（）。A.电流滞后电压40°；B.电流滞后电压30°；C.电压超前电流50°；D.电压超前电流30°； [单选]下列关于Babinski征的描述，不正确的是（）A.检查时沿外侧缘向前再向内划足底B.是最有意义的病理反射C.检查时患者须意识清楚D.阳性表现拇背屈，其余各趾向外扇形展开E.此征阳性提示锥体束受损 [填空题]13世纪是欧洲经济技术的()。城市的兴起，运输技术的进步，市场的扩大，刺激人们去制造商品。 [单选]正确的行针辅助手法是（）。A.提插法、捻转法、震颤法B.提插法、捻转法、弹针法C.刮柄法、弹针法、提插法D.搓柄法、摇柄法、刮柄法E.捻转法、循法、震颤法 [多选]某大型工程项目进行施工招标，招标人编制了完整。详细的招标文件，内容包括：(1)招标公告;(2)投标须知;(3)通用条件;(4)专用条件;(5)合同格式;(6)图纸;(7)工程量清单;(8)中标通知书;(9)评标委员会名单;(10)投标文件格式等。招标人通过资格预审对申请投标人进行审查，确定了资 的内容，提出了对申请投标人资格条件的要求，包括：(1)资质等级的要求;(2)投标人在开户银行的存款达到工程造价的5%;(3)主体工程中的重点部位可分包给经验丰富的承包商完成;(4)必须具有同类工程的施工经验。该项目招标文件内容中不应包括()。A.招标公告B.中标通知书C.评标委员会名单 件格式 [单选,A1型题]拔牙后通常牙槽嵴吸收致上牙槽嵴变小而下牙槽嵴变大，有时需要排成反牙合；当无牙颌上下牙槽嵴顶连线与牙合平面交角小于多少度时建议排反牙合（）A.70B.80C.90D.75E.95 [单选]某患者进食后发生恶心、呕吐、腹泻。关于该菌生化反应，叙述错误的是()A．在3%、7%氯化钠中生长良好B．在10%氯化钠中不生长C．无氯化钠的培养基中生长良好D．神奈川现象阳性E．碱性蛋白胨水可做该菌增菌培养 [填空题]D-301干燥器为（）干燥器，又称为（）干燥器，其干燥介质为（）。 [填空题]若已知两点的坐标为A（100，100）和B（150，50），则直线AB的坐标方位角为（）。
细胞工程课件 第一章 细胞工程
5. 花药与花粉培养
无菌培养植物的花药（带花粉）或花粉， 形成单倍体植株。
有效的育种辅助手段：单倍体植株获得以后， 通过染色体加倍，即得到可以稳定遗传的纯合 二倍体，缩短植物育种年限。
6.细胞培养 (Cell culture)
无菌培养植物单细胞或小细胞团。
细胞培养可用于： 1、植物克隆 2、细胞系的诱变和变异体的筛选 3、生产有用化合物（useful chemicals）
细胞工程 Cell Engineering
Plant Cell
Animal Cell
细胞
大量培养 调控分化
生产有用物质(药 物、蛋白质、酶、 有用化合物)
生产组织和器官， 用于医疗修复
个体再生
优良个体克隆， 用于良种推广
遗传改良
新细胞系、新组 织、新个体
细胞融合、细胞器移植、核 质移植、转基因
细胞工程(cell engineering)：在体外培养生物
参考资料
1. 杨淑慎：细胞工程，科学出版社 2. 李青旺：动物细胞工程与实践 ，化学化工出版
社 3. 曹孜义、刘国民（主编）：实用植物组织培养
技术教程，甘肃科学技术出版社，1999年 4. Pierik RLM: In Vitro Culture of Higher Plants
(4th Edition). Kluwer Academic Publishers, Dordrecht, Netherland, 1999. 5. Plant Cell, Tissue, and Organ Culture (杂志) 6. Plant Cell Reports (杂志) 7. 植物生理学通讯（杂志）
无菌培养植物的成熟胚或未成熟胚， 使其形成正常的植株。
押新高考卷 细胞工程(含解析)-备战2024年高考生物临考题号押题(新高考通用)(1)
备战2024年高考生物临考题号押题（新高考通用）押单项选择题细胞工程考向01 植物细胞工程1.（2024·浙江·高考真题）山药在生长过程中易受病毒侵害导致品质和产量下降。
采用组织培养技术得到脱毒苗，可恢复其原有的优质高产特性，流程如图。
下列操作不可行的是（ ）外植体→愈伤组织→丛生芽→试管苗 A ．选择芽尖作为外植体可减少病毒感染一、植物组织培养技术1.细胞工程的概念2.植物组织培养技术(1)过程(如菊花的组织培养)培养基须保持适当的温度、(2)植物激素在植物组织培养中的作用3.植物细胞的全能性生长素/细胞分裂素植物组织的发育方向高有利于根的分化，抑制芽的形成 低有利于芽的分化，抑制根的形成 适中促进愈伤组织的形成简记为：“高”根，“低”芽，“中”愈伤栽培稻甲产量高、品质好，野生稻乙种植一次可连续收获多年，提醒①光照：在愈伤组织诱导阶段，对有些植物来说，避光培养有利于细胞脱分化形成愈伤组织。
当愈伤组织再分化出芽和叶时，一定要有光照，有利于叶片内叶绿素的合成。
②植物组织培养中所需的碳源一般为蔗糖，原因是蔗糖既可提供充足的碳源，又可维持相对适中的渗透压。
二、植物体细胞杂交技术及植物细胞工程的应用1.植物体细胞杂交技术无性生殖(1)概念与原理(2)过程其中之一是将秸秆碎化后作为食用菌的栽培基质。
(3)意义在打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种等方面展示出独特的优势2.植物细胞工程的应用(1)植物繁殖的新途径①快速繁殖：高效、快速地实现种苗的大量繁殖，保持优良品种的遗传特性。
②作物脱毒：利用植物顶端分生区附近(如茎尖)进行组织培养获得脱毒苗。
(2)作物新品种的培育(3)细胞产物的工厂化生产①次生代谢物次生代谢不是生物生长所必需的，一般在项目单倍体育种突变体的利用原理染色体变异和植物细胞的全能性突变和植物细胞的全能性优点明显缩短育种年限产生突变，大幅度改良某些性状过程杂交→花药离体培养→单倍体植株―――――→人工诱导染色体加倍纯合二倍体植株(以二倍体为例)成胚状体等结构C．提高培养基中生长素和细胞分裂素的比值，有利于诱导生根D．用同一植株体细胞离体培养获得的再生苗不会出现变异11．（2021·福建·高考真题）科研人员利用植物体细胞杂交技术培育矮牵牛新品种，技术流程示意图如下。
《细胞工程》教案
《细胞工程》教案课程名称：细胞工程课程时间：每周一次，共计15周课程目标：1.了解细胞工程的基本概念和原理。
2.掌握细胞工程的常见技术和方法。
3.能够应用细胞工程技术解决生物医学和工程领域的问题。
教学内容：第一周：细胞工程简介介绍细胞工程的定义、发展历程、应用领域和未来发展方向。
第二周：细胞培养技术介绍细胞培养技术的基本原理、操作步骤和常见问题及解决方法。
第四周：细胞重编程技术介绍iPS细胞等细胞重编程技术的原理和应用。
第五周：细胞培养生物反应器介绍细胞培养生物反应器的类型、设计和应用。
第六周：生物材料与细胞工程介绍生物材料在细胞工程中的应用和发展趋势。
第七周：细胞生物传感技术介绍细胞生物传感技术的原理、应用和未来前景。
第八周：细胞治疗技术介绍细胞治疗技术在疾病治疗中的应用和挑战。
第九周：细胞疗法的伦理和法律问题探讨细胞疗法在伦理和法律上面临的挑战和解决方法。
第十周：细胞工程在再生医学中的应用介绍细胞工程在再生医学中的应用和未来发展方向。
第十一周：细胞工程在组织工程中的应用探讨细胞工程在组织工程中的应用和挑战。
第十二周：细胞工程在药物研发中的应用介绍细胞工程在药物研发中的应用和挑战。
第十三周：细胞工程在医学诊断中的应用探讨细胞工程在医学诊断中的应用和前景。
第十四周：细胞工程在环境保护中的应用介绍细胞工程在环境保护中的应用和挑战。
第十五周：细胞工程综合案例分析结合前面所学知识，对一个具体的细胞工程案例进行分析和讨论。
教学方法：1.理论讲授：通过课堂讲解、案例分析等方式，讲解细胞工程的基本概念和原理。
3.讨论研讨：组织学生进行小组讨论、研讨，培养学生的合作能力和创新思维。
评估方式：1.课堂参与度：学生是否积极参与课堂讨论和互动。
2.作业成绩：课后作业是否按时完成，答案是否详尽准确。
3.实验报告：实验操作是否有条理、准确，结果分析是否合理。
4.期末考试：考核学生对细胞工程知识的掌握程度和理解深度。
教学资源：1.《细胞工程导论》2.《细胞与分子生物学》3.《生物医学工程学》4.《细胞工程实验教程》总结反思：细胞工程作为一门新兴的交叉学科，涉及多个学科领域的知识和技术。
细胞工程-第章-绪论(1)
细胞工程-第章-绪论(1)细胞工程-第章-绪论细胞工程是生物领域一种应用工程学原理的一个重要分支，涉及到细胞学、遗传学、生物学等多个学科。
其主要目的在于通过改变生命体内细胞的基本功能来创新性地开发新的生物产品、生产方式和生物技术。
相比于传统的生物工程技术，细胞工程掌握的是更为深入的遗传学知识和先进的分子技术，使之成为现代生物科学的前沿领域。
本文将从以下几个角度介绍细胞工程的概念、意义以及发展前景。
一、细胞工程的概念细胞工程的基本工作流程是利用先进的分子技术和现代遗传学知识对生物细胞进行改造和优化，最终产生出特定的生物产品或改善现有产品的生产方式。
其中分子技术包含了DNA的分离、克隆、测序等技术，以及RNA的转录、翻译等过程。
这些技术都有助于理解细胞的内部机制，使得改造细胞成为可能。
二、细胞工程的意义细胞工程的应用范围极为广泛，可以应用于医药、农业、生态等各个领域。
医药领域，利用细胞工程可以生产出更加高效和安全的生物药品；农业领域，利用细胞工程可以改善农产品的品质和产量，最大程度地保证农产品的健康和安全；在生态领域，细胞工程技术可以应用于环境污染治理、资源回收等方面，从而保护生态环境，维护生态平衡。
可以说，细胞工程在现代生物科学中发挥了重要的作用。
三、细胞工程的发展前景细胞工程在医药领域中的应用前景更为广阔。
目前，细胞工程团队致力于研究更多的生物药品，并从长远角度考虑，打造出更多的针对性治疗方法。
此外，随着时代的不断发展和科技的不断进步，细胞工程也必将不断推陈出新，拓展着其应用范围。
总之，在未来的生命科学领域，相信细胞工程技术将为我们创造更多奇迹，给人类带来更多的贡献。
动物细胞工程(第1课时)高二生物(人教版2019选择性必修3)
解决
一、动物细胞培养
2.动物细胞培养的过程
思考：1、选动物幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料的原 因？
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。
思考：2、用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理组织块，使组织块分散成 单个细胞的目的是什么？
①使细胞与培养液充分接触，一方面保证细胞所需的O2和营养物 质的供应，另一方面保证细胞内代谢废物的及时排出；
一、动物细胞培养
2.动物细胞培养的过程 （1）细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上。
培养皿
培养瓶
（2）培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。
一、动物细胞培养
2.动物细胞培养的过程 （3）接触抑制 解除方法 分瓶培养
贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。
②使得在细胞水平操作的其它技术得以实现。
一、动物细胞培养
2.动物细胞培养的过程
思考：3、用胰蛋白酶分散细胞，由此可说明细胞间的物质主要是 什么成分？
主要是蛋白质(胶原蛋白等)。 思考：4、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？那将动物组织分散成单个 细胞时要注意什么问题呢？ 能，应注意时间的控制。因为胰蛋白酶不仅能分解细胞间的 蛋白质，长时间还会分解膜蛋白，对细胞造成损伤。 思考：5、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白 酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。
分散
单个细胞
适宜 条件
细胞生长和增殖
2.目的： 获得细胞或细胞产物；不能获得完整动物个体。 3.原理： 细胞增殖（有丝分裂） 培育的终点：细胞
那么，动物细胞的培养需要哪些条件呢？
高中生物第2章细胞工程第1节第1课时植物细胞工程的基本技术课件选择性必修3
[解析] (1)分化的植物细胞可以培养成完整的植株，这是因为植 物细胞具有全能性。(2)在本实验中，切取胡萝卜块时要切取含有形成 层的部分，原因是形成层容易诱导形成愈伤组织。(3)决定植物细胞脱 分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，步骤⑤(诱导愈 伤组织形成)和步骤⑥(诱导愈伤组织分化形成试管苗)所需的生长素 和细胞分裂素的比例不同，故从步骤⑤到步骤⑥需更换培养基。愈伤 组织通过细胞的再分化过程形成试管苗。(4)步骤⑥需要照光培养，其 作用是诱导叶绿素的形成，使试管苗能够进行光合作用。(5)组织培养 没有经过两性生殖细胞的结合，因此属于无性繁殖，组织培养得到的 植株保持了原品种的遗传特性。
4．植物体细胞杂交要先去除细胞壁的原因是细胞壁阻碍了原生
质体的融合。
(√ )
5．植物体细胞杂交过程中，细胞融合成功的标志是产生新的细
胞壁。
(√ )
关键能力·突破重难
核心点一 核心点二
1．植物组织培养的过程
植物组织培养
(1)外植体：用于植物组织培养的离体的植物器官、组织或细胞。 (2)脱分化：已经分化的细胞，经过诱导，失去其特有的结构和功 能，转变成未分化细胞的过程。 (3)愈伤组织：细胞排列疏松且无规则、高度液泡化、呈无定形状 态的薄壁细胞团。 (4)再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分 化出根或芽等器官的过程。
[解析] (1)植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以制备原 生质体，需要用纤维素酶和果胶酶将细胞壁分解，诱导原生质体融合 常用的化学诱导剂是 PEG(聚乙二醇)。原生质体融合成功的标志是杂 种细胞再生成细胞壁；图中 X 经过离体培养，可以形成试管苗，所以 X 是愈伤组织。
(2)植物组织培养中常加入细胞分裂素和生长素，当生长素与细胞 分裂素的比值低时，有利于芽的形成，所以起主要作用的是细胞分裂素。
细胞工程(cell engineering)技术
细胞工程（cell engineering）技术广义的细胞工程（cell engineering）指所有应用于生物学和医学的、以细胞为操作对象的技术手段，其中也包括细胞培养。
一般地说，细胞工程主要指应用各种手段对细胞不同结构层次(整体、细胞器、核、基因等)进行改造，如进行细胞融合、核移植、基因转移等，以获得具有特定生物学特性的细胞。
一．细胞融合技术在细胞自然生长情况下，或在其他人为添加因素存在下，使同种细胞之间或不同种类细胞之间相互融合的过程，即为细胞融合（cell fusi on）。
通过细胞融合，可将来源于不同细胞核的染色体结合到同一个核内，结果形成一个合核体的杂种细胞。
细胞在生长过程中，可能发生自发的融合，但几率很低。
在实际工作中常采用各种促融合手段，包括病毒类融合剂如仙台病毒、化学融合剂如聚乙二醇（PEG）及电激融合法等。
在进行细胞融合反应和适当时间的培养后，需要通过一定方法对两种亲本细胞融合产生的具有增殖能力的杂种细胞进行筛选。
筛选方法主要包括药物抗性筛选、营养缺陷筛选和温度敏感性筛选等。
细胞融合最典型的应用是单克隆抗体技术。
细胞融合技术的发展和骨髓瘤细胞株的建成促成了B细胞杂交瘤技术的建立和单克隆抗体技术的成功。
1975年Koehler和Milstein将用绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞和体外培养能长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合，获得了具有两种亲本细胞特性的杂交细胞，即既能在培养条件下长期生长增殖，又能分泌特异的抗绵羊红细胞的抗体的B淋巴细胞杂交瘤。
对这种融合细胞进行克隆化以后，即可获得来自同一细胞克隆的抗体，这种抗体具有高度的均一性，称为单克隆抗体。
二．核移植技术细胞核移植（nuclear transfer）是指将一个双倍体的细胞核（可来自胚胎细胞或体细胞）移植到去核的成熟卵母细胞或受精卵中。
重组的卵细胞可以植入母体，并能发育为与供核细胞基因型相同的后代，因此又称为动物克隆技术。
1997年诞生的克隆羊“多利”就是体细胞核移植技术的产物。
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2）动物细胞培养的环境特性 A 生物特性
具有精细分工、职能专一的 细胞器
能够进行蛋白质翻译后的修 饰。
B 营养要求
开始的培养基主要是全血清培养基，但由于 血清的缺陷，目前开发无血清培养基是细胞培养 的主要方向。
3 动物细胞培养方法
动物细胞的离体培养方法有两种方式： 1）贴壁培养：贴附在比表面积较大的微载
获得原代细胞的步骤： 解剖分离 培养液淋洗和切成碎片 再淋洗 酶法分离成单个细胞 离心分离后再培养
B 连续化培养
❖ 大多数细胞系在有限的代数内以不变的形 式增殖，当超过有限世代后，它们可能有 两种情况，一是衰老死亡，二是发育成永 久细胞系或称连续细胞系。
❖ 适应在体外培养条件下持续传代培养的细 胞称为传代细胞。
教材：P53～56
二、动物细胞工程
（一）、动物细胞研究历史进展和应用 （二）、哺乳动物细胞培养 （三）、动物细胞融合和单细胞克隆等技术
简介
（一）动物细胞研究历史进展和应用
1、动物细胞工程发展历史 1）、细胞融合现象的发现
19世纪30年代到50年代，Muller 等相继在肺结核、天花 等病理组织中和正常组织中（如骨髓和肺等）观察到多核 细胞现象；到1959年，自然界中广泛存在着多核细胞的事 实，才被接受。 2）、动物细胞培养技术的建立
❖ 一般情况下，非致死细胞可直接转化为连 续细胞，可以连续增殖；而其他细胞需要 经过环境适应（如啮齿动物细胞）、杂交 或基因修饰才能转化为连续细胞。
细胞系：经过原代培养，细胞逐渐形成具有 相似生理即代谢特性的稳定细胞系，可供 繁殖和多次传代培养。一旦原代细胞进行 了传代培养即成为细胞系。
细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用 单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单 细胞增殖形成的细胞群，称细胞株 。细胞 株具有特殊的表型性质。
细胞工程(一)
2020年7月12日星期日
举例：干扰素（IFN）是人体细胞分泌的一 种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒、抗肿 瘤和免疫调节活性。早期的干扰素是用病 毒诱导人体白血球或白细胞产生的，其产 量低、价格昂贵。现在可以利用基因工程 生产干扰素。
细胞工程（一）
一、细胞工程概述
（一）细胞工程的定义 （二）细胞工程分类和研究对象 （三）细胞的主要培养技术
3）、细胞融合技术的建立和杂交瘤技术的诞生 1958年, Okada发现紫外灭活仙台病毒可引起艾氏腹水瘤细胞彼此融合。 60年代，Harris(1965)诱导不同动物体细胞融合获得成功并培养存活。 1975年，免疫学家Kohler和Milstein利用仙台病毒诱导绵羊红细胞免疫的
小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，选择到能分泌单一抗体的杂种细 胞。该杂种细胞具有在小鼠体内和体外培养条件下大量繁殖的能力， 并能长期地分泌单克隆抗体，从而建立了小鼠淋巴细胞杂交瘤技术。
1907年，Harrison首先培养了蛙胚神经管区细胞，并观 察到从中长出的轴突细胞（神经纤维），他的工作被认为 是动物细胞培养开始的标志；
1911年，Carrel发现了鸡胚浸出液对于培养细胞的生长 促进作用，并首次把无菌技术引入组织培养技术中。
1914年，Thomson建立了器官培养技术。 1940年，1951年，Earle和Gay分别建立了c3H小鼠结缔 组织细胞系的L系和人体细胞系－人体宫颈癌Hela细胞系。
体上或直接贴附在反应器器壁上， A 对象：大多数原代细胞 Ｂ贴壁基质要求：要求是单层膜和正电荷；
通常是用玻璃或一次性塑料 C 实验室培养：多空板培养皿和培养瓶等小
2、动物细胞工程的应用 ❖ 动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体） ❖ 新品种培育 ❖ 试管动物与婴儿 ❖ 组织工程 ❖ 珍稀动植物资源的保存与保护
（二）、哺乳动物细胞培养
1、培养对象细胞和性质 ❖ 培养对象：哺乳动物细胞和昆虫动物细胞 ❖ 哺乳动物细胞种类与性质 根据细胞的寿命，分为
非致死细胞：在体外培养基中不断增殖，数目以指数式 形式增加，当细胞密度达到一定程度时，细胞停止分 裂，不再生长。但当被放到新鲜培养基中，细胞重新 生长。这样可以连续传代。这种细胞包括癌细胞、表 皮细胞和成纤维细胞。
B、根据研究水平来划分 组织水平 细胞水平 细胞器水平 基因水平
C、根据实验操作对象可分为： 细胞与组织培养 细胞融合 细胞核移植 染色体操作 转基因生物等
（三）细胞的主要培养技术
1、无菌操作技术 2、细胞培养技术：指生物细胞和组织在体外无菌条
件下和适当的温度、气体和营养环境中的保存、生 长和增殖。是细胞工程的最基本技术。 3、细胞融合技术：是指在离体条件下，用人工方法 将不同种生物或同种生物不同类型的单细胞通过无 性方式融合为一个杂合细胞的技术。包括病毒融合 、化学融合、和电融合 4、细胞核移植技术：利用显微操作技术将细胞核与 细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形 成杂种细胞。
（一）细胞工程的定义
➢ 细胞工程是在细胞水平上的工程，它应用 细胞生物学和分子生物学的方法，以细胞 和细胞器为对象进行操作，在体外条件下 进行培养、繁殖，或人为的使细胞某些生 物学特性按人们的意愿发生改变，最终获 得人们所需要的组织、细胞或个体。（ P51）
（二）细胞工程分类和研究对象
A、根据研究对象划分 动物细胞工程 植物细胞工程 微生物细胞工程
4）、动物克隆技术的建立 1962年，英国学者Grudon把非洲爪蟾小肠上皮细胞的核注入同种
或异种非洲爪蟾未受精卵(经紫外线照射杀死卵细胞核)中，约有1％ 的重组卵发育成为成熟蛙。
这一成功开创了由体细胞培育动物个体的新型实验途径，其贡献 在于： ① 证明了动物细胞仍然具有全能性； ② 初步建立了体细胞核移植的实验体系， ③ 卵细胞质对体细胞核的发育功能起着关键性的调节作用
致死细胞：能在体外生存和增殖，但不能连续传代，往 往分裂几代或几十代后就会死亡。大多数细胞属于这 类细胞。
2、培养过程ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1）动物细胞分离和传代培养过程 A 获得原代细胞 原代培养：从特定功能组织器官中分离后，
无法增殖或处于稳定传代培养前动物细胞 ，又叫初代细胞。 获得原代细胞是一系列细胞培养的第一步