中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
犛犖／犜 ２４９７．２８—２０１０
进出口危险化学品安全试验方法 第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用
犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊— 犘犪狉狋２８：犛犺狌狋狋犾犲狏犲犮狋狅狉犳狌狀犮狋犻狅狀犻狀犱犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犿狌狋犪犵犲狀犲狊犻狊
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进出口危险化学品安全试验方法 第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用
１ 范 围
ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险 化 学 品 安 全 试 验 中 穿 梭 质 粒 在 突 变 检 验 中 的 应 用 技 术 的 术 语 和 定 义 、试 验 原 理 、试 验 方 法 和 试 验 结 果 。
将已经转染了质粒的细胞进行培 养，当 细 胞 密 度 达 到 ７０％ ～９０％ 时 加 入 不 同 剂 量 的 受 试 物 溶 液， 避 光 培 养 ２４ｈ～４８ｈ，移 去 受 试 物 溶 液 ，开 始 收 获 质 粒 。 ５．３．４ 细胞内质粒 犇犖犃 的抽提
可以根据实际情况选择抽提 方 法。此 处 介 绍 Ｈｉｒｔ法 进 行 抽 提。将 转 染 后 的 细 胞 用 ５ ｍＬＰＢＳ 洗 两遍，１５ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ，１０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ 各５ｍＬ 洗两遍。加裂解液（０．６％ＳＤＳ，１０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ） １ｍＬ／皿，将脱落的细胞移至ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管，加入５ｍｏｌＮａＣｌ使其终浓度为１ｍｏｌ／Ｌ，缓慢混匀，４ ℃放 置８ｈ以上，４００００×犵 离心３０ ｍｉｎ，取 上 清 液 用 酚 氯 仿 抽 提，乙 醇 沉 淀，４００００×犵 离 心 ３０ ｍｉｎ，ＴＥ （１０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ，１０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ）溶 解 。 ５．３．５ 转 染 细 菌
本部分适用于进出口危险化学品安全试验中的致突变性检测。
２ 规 范 性 引 用 文 件
下列文件中的条款通过 ＳＮ／Ｔ２４９７的本部 分 的 引 用 而 成 为 本 部 分 的 条 款。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部 分，然 而，鼓 励 根 据 本 部 分 达 成 协议的各方研究是否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本 适 用 于 本 部分。
将 抽 提 的 质 粒 转 入 宿 主 细 菌 ，具 体 方 法 参 见 《分 子 克 隆 》。 常 用 氯 化 钙 法 。 ５．４ 显 色 反 应 ５．４．１ 涂 板 及 培 养
将感受态细菌涂布于特定的培养基上，室温放置１０ｍｉｎ。３７ ℃培养１６ｈ～２４ｈ，计数转化子。 ５．４．２ 显 色
本格式上按 ＧＢ／Ｔ１．１做了编辑性修改。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本 部 分 负 责 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 天 津 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共 和 国 湖 南 出 入 境 检 验 检
疫局。 本 部 分 主 要 起 草 人 ：冯 智 劼 、王 利 兵 、王 华 、张 园 、向 雪 洁 、赵 好 力 宝 。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
可以根据预先选好的显色方 法，判 断 是 否 有 突 变。例 如：采 用 含 有 Ｘｇａｌ、ＩＰＴＧ 和 抗 性 药 物 的 ＬＢ 培 养 基 上 野 生 菌 落 为 蓝 色 ，而 突 变 型 为 白 色 。 分 别 计 数 。 ５．４．３ 表 型 鉴 定
为了避免ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ阳性和假阴性，随机挑选野生型和突变型菌落，重复５．３，如果结果一致，则可以进一 步
组别
转 化 子／个
突 变 子／个
突变频率
对照 剂量１ 剂量２ 剂量３
６．２ 结 果 分 析 根据加入受试物后突变子的增减，判断受试 物 对 质 粒 突 变 作 用 的 影 响。 通 过ｔ检 验 和 方 差 分 析 等
统 计 学 方 法 ，比 较 不 同 剂 量 之 间 的 差 异 。
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《分 子 克 隆 》
３ 术 语 和 定 义
下列术语和定义适用于本部分。 ３．１
穿 梭 质 粒 狊犺狌狋狋犾犲狏犲犮狋狅狉 穿梭质粒是既能依靠质粒基因组在原核细胞中繁殖，又能依靠病 毒 基 因 组 在 真 核 细 胞 中 复 制 的 一 类质粒。 ３．２ 靶 基 因 狋犪狉犵犲狋犵犲狀犲 是 诱 变 剂 在 哺 乳 动 物 细 胞 中 作 用 的 靶 子 ，有 时 又 是 赋 予 细 胞 某 种 生 物 特 征 的 选 择 基 因 。 ３．３ 转 化 狋狉犪狀狊犳狅狉犿犪狋犻狅狀 将 ＤＮＡ 导入大肠杆菌或酵母细胞，并稳定地整合于基因组中，从而使受体细胞发生永生化改变 的 现象。 ３．４ 转 染 狋狉犪狀狊犳犲犮狋犻狅狀 病毒 ＤＮＡ 或 ＲＮＡ 导入感受态大肠杆菌的过程。也指将任何 ＤＮＡ（包括质粒 ＤＮＡ）或 ＲＮＡ 导入 受体细胞的过程。
５．２ 受 试 物 溶 液 试验所需各个浓度受试液通过稀释受试物储备液所得。储备液的 配 置 应 采 用 机 械 方 法（如 搅 拌 或
超 声 ）进 行 充 分 溶 解 。 可 采 用 饱 和 度 值 （溶 解 度 值 ）来 得 到 合 适 浓 度 的 储 备 液 。 可 使 用 助 溶 剂 或 分 散 剂 。 相应的溶剂对照组不能引起突变。 ５．３ 试 验 步 骤 ５．３．１ 重 组 质 粒 的 构 建 鉴 定
ＤＮＡ 操作质粒提取、酶切、ＤＮＡ 连接、重组质粒转 化 等 均 按《分 子 克 隆》进 行。转 化 到 细 菌 中 的 重 组质粒经选择基因的筛选，随机挑选其单菌落进行 ＰＣＲ 鉴定和核苷酸序列测定。 ５．３．２ 染 毒 和 转 染
转染前一天接种５×１０５ 个细胞于 ２５ｃｍ 培养瓶中，用不含双抗的 ＤＭＥＭ 培养基常规培养 使 细 胞 密度达７０％～９０％备用；于细胞体外直接将不同剂量的受试物溶液３７ ℃作用质粒一段时间（根据质 粒 的性质选择作用时间）。需设立对照组。将染毒后的质粒转染至目 的 细 胞。具 体 方 法 可 根 据 试 验 目 的 选择，详细方法可按照《分子克隆》进行。然后将 转 染 后 的 细 胞 置 于 含 １０％ 小 牛 血 清 的 ＤＭＥＭ 培 养 基 中 常 规 培 养 ４８ｈ～７２ｈ 后 收 获 质 粒 。 ５．３．３ 细 胞 内 染 毒
４ 试 验 原 理
穿 梭 质 粒 除 了 含 有 在 真 核 和 原 核 细 胞 中 复 制 的 起 点 外 ，穿 梭 质 粒 带 有 对 突 变 敏 感 的 靶 基 因 ，将 诱 变 剂 处 理 的 质 粒 转 染 哺 乳 动 物 细 胞 或 先 转 染 细 胞 后 经 诱 变 剂 处 理 ，在 细 胞 内 修 复 和 复 制 后 ，回 收 质 粒 转 化 宿 主 菌 ，在 一 定 条 件 下 筛 选 突 变 子 ，并 进 一 步 对 突 变 子 靶 基 因 测 序 以 分 析 突 变 的 位 点 、类 型 、序 列 特 异 性 等 信 息 ，从 而 研 究 诱 变 剂 的 诱 变 机 制 。 由 于 诱 变 是 在 哺 乳 动 物 细 胞 内 发 生 的 ，因 而 能 够 较 真 实 地 反 映 高 等 动 物 的 诱 变 机 制 ；且 诱 变 的 发 生 通 过 宿 主 菌 显 色 反 应 来 显 示 ，其 任 一 位 置 发 生 的 单 碱 基 置 换 都 能 从 表
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型改变表现出来；进一步对突变子 靶 基 因 进 行 序 列 分 析，使 表 型 的 改 变 在 ＤＮＡ 分 子 水 平 上 得 到 证 明， 敏感性极高。
５ 试 验 方 法
５．１ 试 剂 耗 材 ——— 细 胞 、质 粒 及 其 宿 主 细 菌 可 根 据 试 验 目 的 进 行 选 择 。 ———选择剂可根据试验目的和质粒上的选择基因进行选择，如 Ａｍｐ、Ｇ４１８等。 ———显色剂，需 要 根 据 试 验 目 的 选 择。 常 用 的 有：Ｘｇａｌ（５溴４氯３吲 哚βＤ半 乳 糖 苷 ）、ＩＰＴＧ （异 丙 基βＤ硫 代 半 乳 糖 苷 ）。 ——— 基 因 工 程 所 需 的 各 种 试 剂 和 酶 。
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验证试验结果。 ５．４．４ 用 于 筛 选 突 变 的 穿 梭 质 粒 的 条 件
——— 可 以 得 到 含 有 质 粒 的 克 隆 细 胞 。 ——— 自 身 突 变 率 小 于 １０４ 。 ——— 具 有 较 多 的 转 化 子 。
６ 试 验 结 果
６．１ 观 察 结 果 观 察 结 果 可 填 入 表 １，受 试 物 诱 发 穿 梭 质 粒 的 突 变 频 率 ，其 中 突 变 频 率 ＝ 突 变 子／转 化 子 表 １ 受试物诱发穿梭质粒的突变频率
２０１００３０２发布
２０１００９１６ 实 施
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局
发布
犛犖／犜 ２４９７．２８—２０１０
前 言
ＳＮ／Ｔ２４９７《进 出 口 危 险 化 学 品 安 全 试 验 方 法 》系 列 标 准 共 分 为 ２９ 部 分 ： ———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外 ＤＮＡ 合成（ＵＤＳ）试验； ——— 第 ２ 部 分 ：空 斑 形 成 细 胞 （ＰＦＣ）试 验 ； ——— 第 ３ 部 分 ：大 型 溞 繁 殖 试 验 ； ——— 第 ４ 部 分 ：酿 酒 酵 母 有 丝 分 裂 重 组 试 验 ； ———第５部分：睾丸细胞 ＵＤＳ试验； ——— 第 ６ 部 分 ：哺 乳 类 动 物 细 胞 姐 妹 染 色 单 体 互 换 体 外 试 验 ； ——— 第 ７ 部 分 ：小 鼠 耳 肿 胀 试 验 ； ——— 第 ８ 部 分 ：腘 窝 淋 巴 结 试 验 ； ——— 第 ９ 部 分 ：血 清 溶 血 素 测 定 试 验 ； ———第１０部分：Ｔ 淋巴细胞增殖功能测定试验； ——— 第 １１ 部 分 ：种 系 突 变 试 验 ； ——— 第 １２ 部 分 ：单 细 胞 凝 胶 电 泳 分 析 试 验 ； ——— 第 １３ 部 分 ：荧 光 原 位 杂 交 试 验 ； ——— 第 １４ 部 分 ：ＳＤＳ聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 试 验 ； ———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ 实验； ——— 第 １６ 部 分 ：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实 验 ； ——— 第 １７ 部 分 ：哺 乳 动 物 行 为 毒 理 学 试 验 ； ———第１８部分：ＤＮＡ 加合物的检测方法； ——— 第 １９ 部 分 ：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实 验 ； ——— 第 ２０ 部 分 ：Ｂｒａｄｆｏｒｄ 法 测 定 蛋 白 质 含 量 ； ——— 第 ２１ 部 分 ：琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 试 验 ； ———第２２部分：ＤＮＡ 的 Ｔｍ 值测定方法； ——— 第 ２３ 部 分 ：细 胞 器 的 分 离 实 验 方 法 ； ——— 第 ２４ 部 分 ：细 胞 免 疫 功 能 体 外 检 测 方 法 ； ——— 第 ２５ 部 分 ：体 液 免 疫 功 能 试 验 ； ——— 第 ２６ 部 分 ：巨 噬 细 胞 功 能 试 验 ； ——— 第 ２７ 部 分 ：流 式 细 胞 术 检 测 凋 亡 ； ——— 第 ２８ 部 分 ：穿 梭 质 粒 在 突 变 检 验 中 的 应 用 ； ——— 第 ２９ 部 分 ：生 化 需 氧 量 （ＢＯＤ）测 定 。 本部分为 ＳＮ／Ｔ２４９７系列标准的第２８部分。 本 部 分 修 改 采 用 《分 子 克 隆 》中 的 相 关 的 检 测 方 法 ，其 有 关 技 术 内 容 与 上 述 方 法 完 全 一 致 ，在 标 准 文
—
中华人民共和国出入境检验检疫
行 业 标 准 进出口危险化学品安全试验方法 第 ２８ 部 分 ：穿 梭 质 粒 在 突 变 检 验 中 的 应 用
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进出口危险化学品安全试验方法 第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用
犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊— 犘犪狉狋２８：犛犺狌狋狋犾犲狏犲犮狋狅狉犳狌狀犮狋犻狅狀犻狀犱犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犿狌狋犪犵犲狀犲狊犻狊
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进出口危险化学品安全试验方法 第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用
１ 范 围
ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险 化 学 品 安 全 试 验 中 穿 梭 质 粒 在 突 变 检 验 中 的 应 用 技 术 的 术 语 和 定 义 、试 验 原 理 、试 验 方 法 和 试 验 结 果 。
将已经转染了质粒的细胞进行培 养，当 细 胞 密 度 达 到 ７０％ ～９０％ 时 加 入 不 同 剂 量 的 受 试 物 溶 液， 避 光 培 养 ２４ｈ～４８ｈ，移 去 受 试 物 溶 液 ，开 始 收 获 质 粒 。 ５．３．４ 细胞内质粒 犇犖犃 的抽提
可以根据实际情况选择抽提 方 法。此 处 介 绍 Ｈｉｒｔ法 进 行 抽 提。将 转 染 后 的 细 胞 用 ５ ｍＬＰＢＳ 洗 两遍，１５ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ，１０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ 各５ｍＬ 洗两遍。加裂解液（０．６％ＳＤＳ，１０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ） １ｍＬ／皿，将脱落的细胞移至ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管，加入５ｍｏｌＮａＣｌ使其终浓度为１ｍｏｌ／Ｌ，缓慢混匀，４ ℃放 置８ｈ以上，４００００×犵 离心３０ ｍｉｎ，取 上 清 液 用 酚 氯 仿 抽 提，乙 醇 沉 淀，４００００×犵 离 心 ３０ ｍｉｎ，ＴＥ （１０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ，１０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ）溶 解 。 ５．３．５ 转 染 细 菌
本部分适用于进出口危险化学品安全试验中的致突变性检测。
２ 规 范 性 引 用 文 件
下列文件中的条款通过 ＳＮ／Ｔ２４９７的本部 分 的 引 用 而 成 为 本 部 分 的 条 款。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部 分，然 而，鼓 励 根 据 本 部 分 达 成 协议的各方研究是否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本 适 用 于 本 部分。
将 抽 提 的 质 粒 转 入 宿 主 细 菌 ，具 体 方 法 参 见 《分 子 克 隆 》。 常 用 氯 化 钙 法 。 ５．４ 显 色 反 应 ５．４．１ 涂 板 及 培 养
将感受态细菌涂布于特定的培养基上，室温放置１０ｍｉｎ。３７ ℃培养１６ｈ～２４ｈ，计数转化子。 ５．４．２ 显 色
本格式上按 ＧＢ／Ｔ１．１做了编辑性修改。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本 部 分 负 责 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 天 津 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共 和 国 湖 南 出 入 境 检 验 检
疫局。 本 部 分 主 要 起 草 人 ：冯 智 劼 、王 利 兵 、王 华 、张 园 、向 雪 洁 、赵 好 力 宝 。 本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
可以根据预先选好的显色方 法，判 断 是 否 有 突 变。例 如：采 用 含 有 Ｘｇａｌ、ＩＰＴＧ 和 抗 性 药 物 的 ＬＢ 培 养 基 上 野 生 菌 落 为 蓝 色 ，而 突 变 型 为 白 色 。 分 别 计 数 。 ５．４．３ 表 型 鉴 定
为了避免ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ阳性和假阴性，随机挑选野生型和突变型菌落，重复５．３，如果结果一致，则可以进一 步
组别
转 化 子／个
突 变 子／个
突变频率
对照 剂量１ 剂量２ 剂量３
６．２ 结 果 分 析 根据加入受试物后突变子的增减，判断受试 物 对 质 粒 突 变 作 用 的 影 响。 通 过ｔ检 验 和 方 差 分 析 等
统 计 学 方 法 ，比 较 不 同 剂 量 之 间 的 差 异 。
犛犖／犜２４９７．２８ ２０１０
《分 子 克 隆 》
３ 术 语 和 定 义
下列术语和定义适用于本部分。 ３．１
穿 梭 质 粒 狊犺狌狋狋犾犲狏犲犮狋狅狉 穿梭质粒是既能依靠质粒基因组在原核细胞中繁殖，又能依靠病 毒 基 因 组 在 真 核 细 胞 中 复 制 的 一 类质粒。 ３．２ 靶 基 因 狋犪狉犵犲狋犵犲狀犲 是 诱 变 剂 在 哺 乳 动 物 细 胞 中 作 用 的 靶 子 ，有 时 又 是 赋 予 细 胞 某 种 生 物 特 征 的 选 择 基 因 。 ３．３ 转 化 狋狉犪狀狊犳狅狉犿犪狋犻狅狀 将 ＤＮＡ 导入大肠杆菌或酵母细胞，并稳定地整合于基因组中，从而使受体细胞发生永生化改变 的 现象。 ３．４ 转 染 狋狉犪狀狊犳犲犮狋犻狅狀 病毒 ＤＮＡ 或 ＲＮＡ 导入感受态大肠杆菌的过程。也指将任何 ＤＮＡ（包括质粒 ＤＮＡ）或 ＲＮＡ 导入 受体细胞的过程。
５．２ 受 试 物 溶 液 试验所需各个浓度受试液通过稀释受试物储备液所得。储备液的 配 置 应 采 用 机 械 方 法（如 搅 拌 或
超 声 ）进 行 充 分 溶 解 。 可 采 用 饱 和 度 值 （溶 解 度 值 ）来 得 到 合 适 浓 度 的 储 备 液 。 可 使 用 助 溶 剂 或 分 散 剂 。 相应的溶剂对照组不能引起突变。 ５．３ 试 验 步 骤 ５．３．１ 重 组 质 粒 的 构 建 鉴 定
ＤＮＡ 操作质粒提取、酶切、ＤＮＡ 连接、重组质粒转 化 等 均 按《分 子 克 隆》进 行。转 化 到 细 菌 中 的 重 组质粒经选择基因的筛选，随机挑选其单菌落进行 ＰＣＲ 鉴定和核苷酸序列测定。 ５．３．２ 染 毒 和 转 染
转染前一天接种５×１０５ 个细胞于 ２５ｃｍ 培养瓶中，用不含双抗的 ＤＭＥＭ 培养基常规培养 使 细 胞 密度达７０％～９０％备用；于细胞体外直接将不同剂量的受试物溶液３７ ℃作用质粒一段时间（根据质 粒 的性质选择作用时间）。需设立对照组。将染毒后的质粒转染至目 的 细 胞。具 体 方 法 可 根 据 试 验 目 的 选择，详细方法可按照《分子克隆》进行。然后将 转 染 后 的 细 胞 置 于 含 １０％ 小 牛 血 清 的 ＤＭＥＭ 培 养 基 中 常 规 培 养 ４８ｈ～７２ｈ 后 收 获 质 粒 。 ５．３．３ 细 胞 内 染 毒
４ 试 验 原 理
穿 梭 质 粒 除 了 含 有 在 真 核 和 原 核 细 胞 中 复 制 的 起 点 外 ，穿 梭 质 粒 带 有 对 突 变 敏 感 的 靶 基 因 ，将 诱 变 剂 处 理 的 质 粒 转 染 哺 乳 动 物 细 胞 或 先 转 染 细 胞 后 经 诱 变 剂 处 理 ，在 细 胞 内 修 复 和 复 制 后 ，回 收 质 粒 转 化 宿 主 菌 ，在 一 定 条 件 下 筛 选 突 变 子 ，并 进 一 步 对 突 变 子 靶 基 因 测 序 以 分 析 突 变 的 位 点 、类 型 、序 列 特 异 性 等 信 息 ，从 而 研 究 诱 变 剂 的 诱 变 机 制 。 由 于 诱 变 是 在 哺 乳 动 物 细 胞 内 发 生 的 ，因 而 能 够 较 真 实 地 反 映 高 等 动 物 的 诱 变 机 制 ；且 诱 变 的 发 生 通 过 宿 主 菌 显 色 反 应 来 显 示 ，其 任 一 位 置 发 生 的 单 碱 基 置 换 都 能 从 表
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型改变表现出来；进一步对突变子 靶 基 因 进 行 序 列 分 析，使 表 型 的 改 变 在 ＤＮＡ 分 子 水 平 上 得 到 证 明， 敏感性极高。
５ 试 验 方 法
５．１ 试 剂 耗 材 ——— 细 胞 、质 粒 及 其 宿 主 细 菌 可 根 据 试 验 目 的 进 行 选 择 。 ———选择剂可根据试验目的和质粒上的选择基因进行选择，如 Ａｍｐ、Ｇ４１８等。 ———显色剂，需 要 根 据 试 验 目 的 选 择。 常 用 的 有：Ｘｇａｌ（５溴４氯３吲 哚βＤ半 乳 糖 苷 ）、ＩＰＴＧ （异 丙 基βＤ硫 代 半 乳 糖 苷 ）。 ——— 基 因 工 程 所 需 的 各 种 试 剂 和 酶 。
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验证试验结果。 ５．４．４ 用 于 筛 选 突 变 的 穿 梭 质 粒 的 条 件
——— 可 以 得 到 含 有 质 粒 的 克 隆 细 胞 。 ——— 自 身 突 变 率 小 于 １０４ 。 ——— 具 有 较 多 的 转 化 子 。
６ 试 验 结 果
６．１ 观 察 结 果 观 察 结 果 可 填 入 表 １，受 试 物 诱 发 穿 梭 质 粒 的 突 变 频 率 ，其 中 突 变 频 率 ＝ 突 变 子／转 化 子 表 １ 受试物诱发穿梭质粒的突变频率
２０１００３０２发布
２０１００９１６ 实 施
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局
发布
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前 言
ＳＮ／Ｔ２４９７《进 出 口 危 险 化 学 品 安 全 试 验 方 法 》系 列 标 准 共 分 为 ２９ 部 分 ： ———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外 ＤＮＡ 合成（ＵＤＳ）试验； ——— 第 ２ 部 分 ：空 斑 形 成 细 胞 （ＰＦＣ）试 验 ； ——— 第 ３ 部 分 ：大 型 溞 繁 殖 试 验 ； ——— 第 ４ 部 分 ：酿 酒 酵 母 有 丝 分 裂 重 组 试 验 ； ———第５部分：睾丸细胞 ＵＤＳ试验； ——— 第 ６ 部 分 ：哺 乳 类 动 物 细 胞 姐 妹 染 色 单 体 互 换 体 外 试 验 ； ——— 第 ７ 部 分 ：小 鼠 耳 肿 胀 试 验 ； ——— 第 ８ 部 分 ：腘 窝 淋 巴 结 试 验 ； ——— 第 ９ 部 分 ：血 清 溶 血 素 测 定 试 验 ； ———第１０部分：Ｔ 淋巴细胞增殖功能测定试验； ——— 第 １１ 部 分 ：种 系 突 变 试 验 ； ——— 第 １２ 部 分 ：单 细 胞 凝 胶 电 泳 分 析 试 验 ； ——— 第 １３ 部 分 ：荧 光 原 位 杂 交 试 验 ； ——— 第 １４ 部 分 ：ＳＤＳ聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 试 验 ； ———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ 实验； ——— 第 １６ 部 分 ：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实 验 ； ——— 第 １７ 部 分 ：哺 乳 动 物 行 为 毒 理 学 试 验 ； ———第１８部分：ＤＮＡ 加合物的检测方法； ——— 第 １９ 部 分 ：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实 验 ； ——— 第 ２０ 部 分 ：Ｂｒａｄｆｏｒｄ 法 测 定 蛋 白 质 含 量 ； ——— 第 ２１ 部 分 ：琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 试 验 ； ———第２２部分：ＤＮＡ 的 Ｔｍ 值测定方法； ——— 第 ２３ 部 分 ：细 胞 器 的 分 离 实 验 方 法 ； ——— 第 ２４ 部 分 ：细 胞 免 疫 功 能 体 外 检 测 方 法 ； ——— 第 ２５ 部 分 ：体 液 免 疫 功 能 试 验 ； ——— 第 ２６ 部 分 ：巨 噬 细 胞 功 能 试 验 ； ——— 第 ２７ 部 分 ：流 式 细 胞 术 检 测 凋 亡 ； ——— 第 ２８ 部 分 ：穿 梭 质 粒 在 突 变 检 验 中 的 应 用 ； ——— 第 ２９ 部 分 ：生 化 需 氧 量 （ＢＯＤ）测 定 。 本部分为 ＳＮ／Ｔ２４９７系列标准的第２８部分。 本 部 分 修 改 采 用 《分 子 克 隆 》中 的 相 关 的 检 测 方 法 ，其 有 关 技 术 内 容 与 上 述 方 法 完 全 一 致 ，在 标 准 文
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中华人民共和国出入境检验检疫
行 业 标 准 进出口危险化学品安全试验方法 第 ２８ 部 分 ：穿 梭 质 粒 在 突 变 检 验 中 的 应 用