激光共聚焦显微镜操作规程
激光共聚焦显微镜操作方法-confocol
(1)用室温下的PBS洗涤细胞三次，弃去PBS；
(2)用4%的多聚甲醛溶液37o C固定细胞15-30min；
(3)用PBS洗三次，每次5min；
(4)用0.2%的TritonX-100透化细胞10min；
(5)PBS洗三次，每次5min；
(6)用含1%的二抗来源血清(消除非特异性影响)的PBS封闭1h；
(7)PBS洗三次，每次5min；
(8)室温孵育一抗1h(用封闭液配制,1:50)；(两个抗体可以一起孵育)
(9)PBS洗三次，每次5min；
(10)室温避光孵育二抗1h(用封闭液配制,1:50)；
(11)用PBS洗三次，每次5min (以下步骤均需避光进行) ；
(可省略)(12)用RNase在37o C下消化细胞30min(使用终浓度为20μg/ml)以除去细胞内的RNA；
(13)PBS洗三次，每次5min；
(14)用Hochest33342对细胞核进行染色(使用浓度为1μg/ml,1:1000),室温避光处理20min；
(15)用PBS洗三次，每次5min；
(16)置于激光共聚焦扫描显微镜下,用100×油镜进行观察,并保存结果。
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录:1 系统得组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统得使用2、1 开机顺序2、2 软件得快速使用说明2、3 显微镜得触摸屏控制2、4 关机顺序3 系统得维护1 系统得组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图:电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明:电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统得使用2、1 开机顺序(1)打开稳压电源(绿色按钮)等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关(2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON”(3)打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关](注:具有5 档光强调节旋钮)(4)Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟,将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态,即可正常使用(5)打开[ 电脑开关],进入操作系统注:键盘上也具有[ 电脑开关]2、2 软件得快速使用说明(1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标(2)进入ZEN 界面,弹出对话框:“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已存图像数据得处理、分析。
(3)软件界面:1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用)2 动作按钮;3 工具组(多维扫描控制);4 工具详细界面;5 状态栏;6 视窗切换按钮;7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块动作按钮:Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Zeiss激光扫描共聚焦显微镜操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用开机顺序软件的快速使用说明显微镜的触摸屏控制关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成;系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用开机顺序1打开稳压电源绿色按钮等待2 分钟电压稳定后,再开其它开关2主开关MAIN SWITCH “ON”电脑系统SYSTEMS/PC “ON”扫描硬件系统COMPONENTS “ON”3打开电动显微镜开关打开荧光灯开关注：具有5 档光强调节旋钮4Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟,将激光器扳钮由“Standby”扳至“Laser run”状态,即可正常使用5打开电脑开关,进入操作系统注：键盘上也具有电脑开关软件的快速使用说明1电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标2进入ZEN 界面,弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、分析等;“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已存图像数据的处理、分析;3软件界面：1 功能界面切换：扫描取图Acquisition、图像处理Processing、维护Maintain注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用2 动作按钮；3 工具组多维扫描控制；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示;Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程1组图片,如XYZ、XYT 等;Stop ——暂停/结束扫描;New ——建立一个新图像扫描窗口/文档;激光连接状况检查眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换ZEN软件界面右上角：Ocular ——通过观察筒用眼睛观察;激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛; Camera ——光路切换至相机;LSM ——共聚焦扫描成像光路;显微镜设置：“Ocular”——>“Light Path”——>点击物镜图标,选择物镜——>样品聚焦;透射光控制Transmitted Light Control反射光光闸控制Reflected Light Shutter荧光激发块选择Reflector共聚焦LSM 扫描设置点击“LSM”ZEN软件界面右上角,系统切换至共聚焦扫描光路：光路设置：Smart Setup ——自动预设光路选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法,应用“Apply”;注：Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫描;Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺序扫描;Best compromise 为兼顾速度与信号的折中式扫描;扫描图像参数设置：每个通道的精细调节：包括：1Pinhole的调节一般设为1AU;该值越大,则信号越强,但共聚焦图像效果会降低;原则上, 在保证图像质量的前提下,该值越接近于1AU 越好；2Master Gain的调节增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小;原则上,在保证图像质量的前提下,Gain值越小越好；3Digital Offset的调节可扣除背景噪音,但标本信号也有一定程度的扣除;原则上,在保证图像质量的前提下,Digital Offset值越接近于0越好；4Digital Gain的调节增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小;原则上,在保证图像质量的前提下,Gain值越接近于~越好；5另外,对于每个通道,需要灵活调节激光的强度激光强度越高,则信号越强,但噪音也相应增强,同时标本更容易被漂白或淬灭;原则上,在保证图像质量的前提下,激光强度越低越好; 选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道的扫描参数;如果预览图像的效果可以,则先“Stop” ,再点击“Single” 或“Start”即可完成图像的扫描;图像的保存：三种方法：1“File”菜单下,“Save”或者“Save AS”;2点击右下角按钮;3点击工具栏按钮;如图所示另外,通过“File”菜单下的“Export”,也可将图像以其它格式输出;显微镜的触摸屏控制显微镜可由TFT 液晶触摸屏进行控制：由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面,触摸屏常用控制界面：TFT触摸屏控制直观、便捷;Objectives物镜控制TL透射光光闸RL反射光光闸Reflector荧光激发块控制荧光观察时,需要选择相应的荧光激发块或者激发波长、发射波长相近的荧光激发块Light path光路设置触摸控制,可将光路切换至“Eyepiece”目镜观察筒,或者将光路切换至左侧共聚焦光路“Sideport L”,或者将光路切换至前侧“Frontport”相机;关机顺序：1关闭软件：主菜单“File”——>“Exit”,退出共聚焦软件ZEN;2关闭主电脑操作系统、显示器电源;3关闭荧光灯电源;4关闭电动显微镜电源;5关闭Ar 激光器：先将扳钮从“Laser run” 扳到“Standby” 状态；再将钥匙逆时针从“—”旋转到“O”状态；等待约8-10分钟、激光器风扇停止转动后切记,将主开关按钮按到“OFF”;6扫描硬件系统COMPONENTS “OFF”电脑系统SYSTEMS/PC “OFF”主开关MAIN SWITCH “OFF”7等灯箱充分冷却后,再放防尘罩;8如果系统长时间超过5个小时不使用,则关闭稳压电源;3 系统的维护主要注意事项如下：1打开稳压电源时,应等待2 分钟电压稳定后,再开其它开关;2严格遵守激光器的开、关流程详见“、开/关机顺序”;3如果使用过油镜,或者物镜表面较脏,则需用擦镜纸擦干净物镜的前表面清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液,混合比例：无水乙醇30%、无水乙醚70%;4不使用荧光时,不打开荧光灯;避免频繁开/关荧光灯;5必须等灯箱充分冷却后,再小心地盖上防尘罩;6显微镜可由TFT触摸屏控制,使用触摸屏时注意：①手指保持清洁、干燥状态,并且为了保证他人使用安全,触摸时严禁配戴有可能接触污染物或危险样品的手套；②触摸屏已足够灵敏,不要大力按压触摸屏；③不要旋转、插拔触摸屏;7刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录,实验前应准备好刻录光盘; 切记：为了防止计算机病毒,严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或者上网8未经授权,严禁自行安装任何软件9实验室温度应保持在22℃±2℃,湿度40%-60%;10避免空调直接对着显微镜吹风;11整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁;。
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构 显微镜操作规程
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程（激光扫描共聚焦荧光显微镜）是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据、先进的分子细胞生物学的分析仪器。
紧要用于察看活细胞结构及特定分子、离子的生物学变化，定量分析，以及实时定量测定等。
成像原理接受点光源照射标本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜收集，并沿原照射光路回送到由双向色镜构成的分光器。
分光器将荧光直接送到探测器。
光源和探测器前方都各有一个针孔，分别称为照明针孔和探测针孔。
两者的几何尺寸一致，约100—200nm；相对于焦平面上的光点，两者是共轭的，即光点通过一系列的透镜，终可同时聚焦于照明针孔和探测针孔。
这样，来自焦平面的光，可以会聚在探测孔范围之内，而来自焦平面上方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。
以激光逐点扫描样品，探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光点的共聚焦图像，转为数字信号传输至计算机，终在屏幕上聚合成清楚的整个焦平面的共聚焦图像。
每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面，这个光学横切面总是有确定厚度的，又称为光学薄片。
由于焦点处的光强宏大于非焦点处的光强，而且非焦平面光被针孔滤去，因此共聚焦系统的景深貌似为零，沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描，形成待察看样品聚焦光斑处二维的光学切片。
把X—Y平面（焦平面）扫描与Z轴（光轴）扫描相结合，通过累加连续层次的二维图像，经过专门的计算机软件处理，可以获得样品的三维图像。
即检测针孔和光源针孔始终聚焦于同一点，使聚焦平面以外被激发的荧光不能进入检测针孔。
激光共聚焦的工作原理简单表达就是它接受激光为光源，在传统荧光显微镜成像的基础上，附加了激光扫描装置和共轭聚焦装置，通过计算机掌控来进行数字化图像采集和处理的系统。
基本结构（激光扫描共聚焦显微镜系统）紧要包括扫描模块、激光光源、荧光显微镜、数字信号处理器、计算机以及图像输出设备等。
激光共聚焦显微镜操作方法-confocol
(1)用室温下的PBS洗涤细胞三次，弃去 PBS;
(2)用4%的多聚甲醛溶液 37o C固定细胞15-30min ;
⑶用PBS洗三次，每次 5min；
(4)用 0.2%的 TritonX-100 透化细胞 10min ;
(5)PBS洗三次，每次 5min ;
(6)用含1%的二抗来源血清(消除非特异性影响 ^^PBS封闭1h;
(7)PBS洗三次，每次 5min ;
(8)室温孵育一抗1h(用封闭液配制，1:50);(两个抗体可以一起孵育)
(9)PBS洗三次，每次 5min ;
(10)室温避光孵育二抗 1h(用封闭液配制，1:50);
(11)用PBS洗三次，每次5min (以下步骤均需避光进行)；
(可省略)(12)用RNase在37o C下消化细胞 30min(使用终浓度为 20 口 g/ml以除去细胞内的
RNA ;
.- --. . -------. . ■.'V-* ■ ■ ,
(13)PBS洗三次，每次 5min ;
(14)用Hochest33342对细胞核进行染色(使用浓度为1科g/m1:1000),室温避光处理20min ;
(15)用PBS洗三次，每次 5min；
(16)置于激光共聚焦才3描显微镜下，用100汹由镜进彳T观察，并保存结果。
激光扫描共聚焦显微镜操作流程详解
激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)激光扫描共聚焦显微镜(laser sea nning con focal microscope)，英文简写LSCM，俗称con focal。
LSCM是一种高科技显微镜，属于最先进的细胞生物学分析仪器。
我们学院使用的是瑞士徕卡公司(Leica)的TCS SP5型号的LSCM。
使用流程1、登陆或5号楼606室公用电脑下载?激光共聚焦预约使用审核表?，打印并填写。
2、联系卢剑清(手机：)审核并签名。
3、持已签名的?激光共聚焦预约使用审核表? 至5号楼610室预约使用时间，及领取钥匙，联系人：窦凯飞(手机：。
4、在熟练使用者的指导下，进行实验。
5、实验结束，及时归还钥匙。
仪器构造和原理LSCM的根本结构主要包括荧光显微镜系统及样品台、激光发射器、扫描器、检测器、图像存储处理和输出设备、计算机控制系统。
激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源，普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。
而LSCM以激光为光源，激光具有单色性强、方向性好、高亮度、相干性好等优点,可以防止普通显微镜的缺点。
一般常用的气体激光器如氩(Ar)、氪(Kr)、氦(He)、氖(Ne)。
illu min ati ng pin hole (照明针孔)：使激光经过照明针孔后形成点光源，点光源具有光源方向性强、发散小、亮度高、高度的空间和时间相干性以及平面偏振激发等独特的优点。
且与detector pinhole(探测器针孔)及焦平面形成共聚焦装置。
分光镜(BeamSplitter)：点光源发出的光经分光镜反射后，通过物镜在样品聚焦。
对标本内焦平面上的每一点进行扫描，Focal plane (焦平面)：激光点光源照射物体在焦平面处聚焦，激发荧光标记的样本发射荧光，形成焦点光斑。
该光斑经过物镜和分光镜等一系列装置的处理，分别在照明针孔及探测针孔两处聚焦。
激光扫描共聚焦显微镜ZEISS780操作规程
激光扫描共聚焦显微镜ZEISS 780操作规程本设备属于精密设备，操作人员必须提前熟悉其适用范围、结构、性能及其具体操作方法，未经操作培训者不能进行上机操作。
通过操作培训的人员必须严格按照仪器管理老师的培训要求及设备使用说明书指定的操作进行工作。
1.开机提前进行镜检，确保样本无误；查看空调温度、抽湿机湿度和不间断电源工作情况。
1.1开三相稳压电源。
注意：先开稳压电源后面的黑色扳手开关①，再按下稳压电源前面的绿色按钮②，如果出现报警声，请马上关闭稳压电源，并报告管理人员。
1.2两分钟以后依次打开电源控制板上的三个开关。
先打开主开关MAIN SWITCH③，再依次打开SYSTEMS/PC④和COMPONENTS⑤开关。
注意：各个开关不要同时按下，开机时仪器会进行自检，每按下一个开关，请等待相应的部件自检完毕后再开下一个开关。
1.3打开电脑开关⑨，点击“LSM User”图标，进入桌面；当看到桌面右下角显示“注意安全”图标时，方可点击桌面中央的ZE N软件图标；然后点击“Start System”按钮开启软件。
注意：当桌面右下角始终不显示“注意安全”图标时，不可启动软件。
这时把电脑主机左边那台仪器的盖子掀开，按一下“Reset”按钮，等待电脑桌面右下角出现“注意安全”图标。
1.4打开氩离子激光器（若不使用458nm或488nm或514nm激光线则不需要打开）。
先打开氩离子激光器正面的开关ON⑥，再顺时针旋转钥匙⑦至“—”的方向，等待绿色指示灯亮起方可开启光路(大约5-10min)。
注意：Ar+激光器在启动后，需要1h左右的预热时间才能进入稳定状态。
若闲置时间1h以上，可将激光器扳钮由“laser run”位置扳至“idle power”处⑧，保护激光器，延长使用寿命。
2.找目标2.1在明场下用Transmitted light找目标，点击①、②、③、④注意：如果实验只使用空气镜，放置样品后，建议先选择低倍物镜找细胞，再换用高倍物镜微调即可。
Leica激光共聚焦显微镜 操作规程
潍坊医学院医学研究实验中心仪器简明操作规程汇编
激光共聚焦显微镜简明操作规程
1. 启动
开启UPS电源，依次开启右侧手柄上的三个开关，从左至右顺序开启，最后开启激光钥匙。
2. 开启软件
电脑进入操作系统界面后，双击电脑桌面启动共聚焦操作软件。
3. 自检
点击对话框的“OK”键进行自检，结束后进入软件界面
4. 开启激光管
点击屏幕上方的“configuration”按钮进入配置界面→点击左边
按钮→打开所需激光（OFF →ON ），Argon激光还需拖动右方滑块以调节输出功率
5. 设置参数
6. 放置样品进行观察。
7. 观察结束保持数据。
8.关机，做好记录。
激光共聚焦扫描显微镜操作规程
激光共聚焦扫描显微镜操作规程一．开机程序1．开启总电源，确认所有仪器电源状态正常工作2．开启电脑，双击桌面上的LSM510图标，开启显微镜。
3．在初始平面上点击Start Expert Mode 键开启专家拍摄模式。
4．在主菜单中点击File New键，建立新的数据库。
二．软件拍摄1．在主菜单上点击Acquire Laser键，开启需要使用的激光2．在主菜单上点击VIS键，开启显微镜观察模式3．把需要观察的玻片放到载物台上选择需要观察的平面4．在主菜单上点击LSM键，开启进入显微镜激光扫描模式5．在主菜单上点击Config键，选择所需要扫描的模式及参数6．在主菜单上点击Scan Find键，进行图像参数自动校正7．在Scan子菜单下点击Fast X键，进行层面选择8．在连续扫描中调节放大器增益、补偿；激光强度等图像参数来优化图像9．点击图像子菜单上的Save键存储优化好的图像三．关机程序1．完成所有操作后，关掉激光开关，冷却5分钟后，点击主菜单上Exit键，退出所有程序2．关闭电脑3．关闭电源ZEISS 510 MET A二维扫描程序1.在Acquire → config →确定扫描所需的波长，（如果已作过相同方法的扫描，可直接调出一张相同条件的图像，用图像窗中的Reuse确定有关的扫描条件）2.在Acquire → micro →在低倍镜(透射光或荧光)下找到要观察的图像3.在Scan control → mode → find →在显示器上找到图像，选定扫描需用的分辨率4.调节物镜到适当的放大倍数5.Scan control → mode →New，打开一新图像窗6.在Scan control → mode → cont →用zoom将图像大小调至最佳，用Pinhole（一般选1）、Detector Gain（650左右，不宜时间超过800，也不宜低于500）、Amplifier offset（不宜过低），以及选择作算术平均值次数、调节激光强度（488nm不超过25%）等调节图像质量至最佳。
激光共聚焦显微镜操作规程
激光共聚焦显微镜操作规程一、准备工作a)打开计算机。
依次打开激光器电源、钥匙开关。
多线氩离子(458 nm, 488 nm, 514 nm) ON、氦氖绿(543 nm) ON、氦氖红(633 nm) ON。
打开汞灯电源开关。
b)登陆Windows XP系统。
双击快捷方式：FV10-ASW 1.1。
User ID: Administrator ; Passeword: Administrator。
注意区分大小写。
二、显微镜镜下观察１.微分干涉差观察a)使用手控面板选择物镜。
插入起偏镜。
插入微分干涉滑块。
b)点击FV10-ASW软件中的图标。
标本聚焦.２.荧光观察：c)使用手控面板选择物镜。
d)打开汞灯的机械快门，拉出DIC滑块，点击FV10-ASW软件中的图标e)使用手控面板选择荧光滤色片。
标本聚焦。
３.获取单张荧光图像a)点击FV10-ASW软件中的按钮。
b)关闭汞灯快门，点击按钮，关闭卤素灯快门。
c)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。
点击Apply按钮。
d)点击XY Repeat按钮开始扫描。
调节图像。
点击Stop按钮停止扫描。
e)选择AutoHV,，并选择扫描速度。
f)点击XY按钮取得一幅图像。
g)点击SeriesDone按钮，“2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。
h)保存该幅图像:右图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像。
(保存为“xml”类型是击FV10-ASW软件专用的图像格式。
)４.获得单张（荧光+微分干涉）图像a)点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。
点击按钮，关闭卤素灯快门。
b)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。
点击Apply按钮。
c)选择TD1。
d)点击XY Repeat按钮开始扫描。
调节绿色(FITC)图像和微分干涉差的图像。
点击Stop按钮停止扫描。
e)选择AutoHV, 并选择扫描速度。
共聚焦操作流程
一、实验环境观察仪器是否有外表明显损坏，如需开启空调，一般控制在25度。
拉上窗帘，避免标本荧光淬灭及杂光干扰。
二、开机查看实验记录，确认是否马上能开机（注意：汞灯必须在关机20分钟以后才能再开启，一般为30分钟）。
确认后可执行以下操作：（务必先开电源，后开钥匙！！！）。
1、打开PSU（主电源）2、打开激光器（只开启需使用的激光器）1）、氩离子多线激光器（458/488/515，应用染料：GFP/FITC/Fluo3/Alexa488/CFP/YFP 等）。
2）MCPSU半导体综合激光器（LD405应用染料：DAPI/Hoechst/BFP等；LD635应用染料：CY5/ Alexa647等）。
3）LD559激光器（注意：电源打开后不要马上开钥匙，等待TEMP指示灯不闪烁后，再开钥匙，红色指示灯不闪烁后，可正常使用）。
3、打开显微镜电源IX2-UCB4、打开荧光汞灯（注意：开启后，“15分钟内勿关”）5、打开电脑主机、显示器，登陆windows xp系统，双击共聚焦软件，打开FV10-ASW应用软件。
三、取图1、DIC（微分干涉差）明场立体图（1）、插入起偏镜、检偏镜（DIC滑块）。
（2）、FV10-ASW软件中点击透射光观察按钮，打开卤素灯快门，使用TD滑块（软件TD lamp项）控制卤素灯的光强，倒置显微镜下观察标本，进行标本聚焦。
1）、使用手控面板选择合适倍率的物镜下观察（注意若用60×油镜时，检偏镜部位要推上弯杆），并检查各物镜对应的DIC元件。
2）、可在检偏镜部位用旋钮进行对比度的调节。
（需要时可使用，一般勿调）（3）、FV10-ASW软件中点击透射光观察按钮，关闭卤素灯快门。
打开DIC通道，执行取图操作。
1）、调节扫描速度至最快（2.0us/pixel），size为512by，点击，进行快速预扫，寻找焦平面。
步骤：适当调节HV、gain及offset参数（一般为能看到图像即可），快速调节寻找焦平面，如需放大光学倍数，可适当调节。
nikon共聚焦显微镜安全操作规程
Nikon 共聚焦显微镜安全操作规程一、操作步骤1、开机：大体按照：电脑→激光台（打开要用的激光按钮）→卤素灯→载物台→显微镜→控制器→软件，荧光灯需要就打开，不需要不用打开2、拍摄流程：打开软件Nikon confocal，ok进入软件操作界面，点eye port，看目镜聚焦，然后点eye port及Interlock解锁切换到激光光路L100，根据自己实验来设置参数和探测方法（DU4），然后点scan，重调Z轴找焦面，对通道进行HV和功率优化，停止scan，点击capture，完成一次拍摄。
3、图像保存：⑴数据保存：File，save as，保存原始数据文件格式.ND2；⑵图片保存：File，Inport/Export，Export ND document，在Export ND document 窗口中Channels，TIF compatibility Options（选择第二个或第三个），保存叠加图像时，在Export ND document 窗口中Channels勾选Insert Overlaps，再点击export4、关机：Z轴降到500以下，物镜转到空挡，最后与开机完全相反顺序进行关机。
二、注意事项：1、放置样品时，确保样品的中心区域在物镜的正上方，且尽量要物镜在两个夹片中心区域，以免转换物镜时，撞坏物镜；2、原则上所有的光源都非常忌讳频繁开关，会大大缩短其使用寿命。
荧光灯、卤素灯：开机后不管是否使用，都最好半小时后再关闭；关机后至少等十五分钟再开机。
激光：开机后不管是否使用，都最好一小时后后关闭；关机后至少等一小时再开机。
3、明场卤素灯的功率值不能超过4，否则会导致温度过高烧坏光纤，影响明场成像；4、60倍和100倍物镜是油镜，滴油时注意只需沾一下，切勿多，滴了油，如果要转物镜，必须先将当前滴了油的物镜用石油醚清洗擦干净才能转换；5、实验结束或者换样品转换镜头时必须按照以下程序进行操作：首先，取下样品，将物镜Z轴值降到500以下，然后，将载物台的载玻片拨至两端，最后再进行物镜的转换。
OlympusFV1200激光共聚焦显微镜操作指南
Olympus FV1200激光共聚焦显微镜操作指南开机程序：1、依次打开计算机、汞灯电源开关、显微镜开关、载物台控制器开关2、打开显微镜触屏面板开关3、打开扫描头开关（先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置）4、打开激光器5、双击电脑桌面上打开FV10-ASW 4.0应用软件。
关机程序：1、关闭FV10-ASW 4.0应用软件2、关闭激光器（注意: 多线氩离子458nm，488nm，514nm需先关钥匙，等风机散热20分钟后再关闭开关键）3、依次关闭扫描头（先将钥匙拧到off位置，再关开关键）、关闭显微镜触屏面板、关闭载物台控制器、关显微镜开关4、关汞灯，先关前面off按钮，倒计时30s，再关后方开关键5、关计算机操作流程：1、用触屏面板选择物镜；点击触屏面板EPI，选择需要的荧光滤片，打开，显微镜目镜下观察样品；2、XY多通道扫描1）点击软件中的按钮，关闭汞灯快门。
2）将Image Acquisition Control面板中Filter Mode里Kalman 打钩选中，设置线平均Line 2次，这样可以降低图像的噪声。
3）对于多通道扫描，选择面序列( Frame)方式,并将下方的激光通道按波长从大到小排序。
4）点击Focus x2按钮开始扫描，在选中的Channel里可先调节探测器的灵敏度（HV），然后调节Laser功率的百分比以调节激发光强度。
点击Stop 按钮停止扫描。
每个通道都调好之后，勾选上全部通道，点击XY按钮获得一幅图像。
3、XYZ多层扫描1）获取多层图像需要将Image Acquisition Control里Depth点上。
2）在预览时调节调焦旋钮，分别在Microscope面板里点Set Start & End 设置多层扫描的范围。
3)点击XYZ按钮获得图像。
扫描结束点击XYZ下方Series Done按钮成图。
点击图像上方图标并选择图标进行3D图像图，选择Save Display可直接保存的最大化叠加，鼠标右击此此图。
Zeiss激光扫描共聚焦显微镜操作手册
Zeiss激光扌：］描共幣茂显微锻操作于•冊目录：1系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2系统的使用2.4开机顺序-22软件的快速使用说明2.3显微镜的触摸屏控制2.4矢机顺序3系统的维护「系统的组成激光扫描共惡焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器・电脑工作站及各相矢附件组成。
系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微視扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微視扫描检测单元CO2培养系统控制器激光器电脑工作站2系统的使用2.1开机顺序(1) 翻开稳压电源(绿色按钮)等待2分钟(电压稳定)后，再开其它开矢(2) 主开矢［MAIN SWITCH〕"ON 电脑系统［SYSTEMS/PC ］9N扫描硬件系统［COMPONENTS “ON(3) 翻开［电动显微鏡开矢］翻开「灾光灯开矢］(注：具有5档光强调节旋钮)(4) Ar离子激光器主开矢“ON顺时针旋转钥匙至“一’预热等待约15分钟，|将激光器［扳钮］由Standby扳至〕“ Laser run状态;即可正常使用(5) 翻开［电脑开矢］，逬入操作系统注：键盘上也具有［电脑开矢〕2.2软件的快速使用说明(4 )电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN图标(2) 逬入ZEN界面，弹出对话框：“ Start System 初始化整个系统，用于激光扫描取图“Image Process ing 不启动共惡焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。
(3) 软件界面：1功能界面切换：扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)・维护(Maintain)(注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用)2动作按钮；3工具组(多维扫描控制)；4工具详细界面；5状态栏；6视窗切换按钮；7图像切换按钮；8图像浏览/预扫描窗口；9文档浏览/处理区域；10视窗中图像达理模块动作按钮：Sin g I e ------------------------- 扫描单张图片♦并在图像预览窗口显示。
OlympusFV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册
Olympus FV1200激光共聚焦显微镜系统操作手册一、开关机步骤1、开机步骤1）打开计算机2）打开汞灯电源开关3）打开显微镜开关4）打开载物台控制器开关5）打开显微镜触屏面板开关6）打开扫描头开关（先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置）7）打开激光器①405nm，633nm：打开开关键即可②559nm：先开开关键，绿色指示灯闪烁（约两分钟），停止闪烁后将钥匙顺时针拧到on位置（红灯闪烁，停止闪烁后即开启完成）③多线氩离子（458nm，488nm，514nm）：先开开关键，然后将钥匙顺时针拧到on位置8）双击电脑桌面上打开 FV10-ASW 4.0应用软件。
2、关机步骤1）关闭FV10-ASW 4.0应用软件2）关闭激光器（注意: 多线氩离子458nm，488nm，514nm需先关钥匙，等风机散热20分钟后再关闭开关键）3）关闭扫描头（先将钥匙拧到off位置，再关开关键）4）关闭显微镜触屏面板5）关闭载物台控制器6）关显微镜开关7）关汞灯，先关前面off按钮，倒计时30s，再关后方开关键8）关计算机二、显微镜观察1、用触屏面板选择物镜；2、点击触屏面板EPI，选择需要的荧光滤片，如下图：紫外激发/蓝色光蓝色激发/绿色荧光绿色激发/红色荧光）打开，显微镜目镜下观察样品，推动载物台控制手柄可水平方向移动样品，转动调焦旋钮可调节焦距；三、获图XY多通道扫描1、镜下调好之后，点击软件中的按钮，关闭汞灯快门。
2、首先进行软件设置：在Acquisition Setting里将扫描速度设置为8us/Pixel，像素数一般设置为1024*1024。
在Image Acquisition Control里点击Dye List按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料（注：再次双击已选项目可取消），然后点击Apply按钮。
3、将Image Acquisition Control面板中Filter Mode里Kalman 打钩选中，设置线平均Line 2次，这样可以降低图像的噪声。
激光共聚焦显微镜FV中文说明书完整版
激光共聚焦显微镜FV中文说明书完整版激光共聚焦显微镜F V中文说明书HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】激光共聚焦显微镜FV1000(倒置显微镜IX81) 简易使用说明书开启系统1.打开计算机.2.打开激光器.(打开钥匙开关.) 2-1.多线氩离子 (458 nm, 488 nm, 514 nm) ON2-2氦氖绿 (543 nm) ON 2-3氦氖红 (633 nm) ON 3.打开汞灯电源开关. 4.登陆Windows XP 系统. User ID: Administrator Password: fluoview5.双击快捷方式：User ID: Administrator Password: Administrator* 系统软件的启动需要等待一定时间.5231显微镜镜下观察微分干涉差观察1.使用手控面板选择物镜.(参照Memo.)2.插入起偏镜.3.插入微分干涉滑块.4.点击FV10-ASW 软件中的图标.Note1:使用TD 滑块控制卤素灯的光强；Note2:检查滤色片转盘的位置是否为“”，如果不是，用手柄按下DICT 图标 5.标本聚焦显微镜镜下观察荧光观察*DIC 元件124手控面板用此旋钮进行微分干涉法对比度的调节 .Memo按照 7-1 的操作转换物镜的倍率之后，对：●物镜●各物镜对应的 D IC 元件 * 进行操作 .1.使用手控面板选择物镜.2.点击FV10-ASW 软件中的图标.3.使用手控面板选择荧光滤色片.(参照Memo.)4.标本聚焦.123Hand switchNote 2Notes 1 & 3Memo关于荧光滤色片NIBA ：蓝色激发 / 绿色荧光（例： FITC 、 EGFP 等） WIG ：绿色激发 / 红色荧光（例： Rhodamine 、 DsRed 等）扫描模式扫描速激光输出的调节明场观察( 显微镜镜下观察 )荧光观察( 显微镜镜下观察 )扫描的按钮选择 XYZ,XYT 或 X YL 每个通道的调节共聚焦的孔径大小卤素灯的光强调节 Kalman 方式染料选择光路图取图条件的保存调出取图条件TwinScanner 设定图像的拇指索引图像显示窗口内存中所显示的文件Lambda 扫描的设定物镜聚焦时间间隔和时间计数( 用于 XYT或 X T 扫描) λ 扫描带宽选择获取单张图像（XY平面）（荧光图像）例：绿色荧光染色（FITC）1.点击FV10-ASW软件中的按钮关闭汞灯快门 .同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply按钮.(关闭染料选择面板可以用Close按钮.)123染料选择后的显示界面Memo扫描控制面板: 连续扫描 : 停止扫描: 快速扫描 ( 隔行扫描 )4564. 点击 X Y Repeat 按钮开始扫描 .5. 调节绿色 FITC ) ( 图像 .( 图像调节的略述如下 .更多的信息 ,参照附录 1.) 6. 点击 S top 按钮停止扫描 .(参照 Memo .[1探测器的灵敏度调节 HV ( )[2共聚焦的孔径大小调节 ( . ) [3激光输出的调节 ( Laser ) [1[2 [3调节方法 ( 例 : HV 调节 ) :点击滑块 , HV 直接提高 ( 或降低 ) 到指定的位置 .点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调 .图像调节略述7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY 按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)78910MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 :创建“ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像” 和“ 一个附属文件 ,不能单独分割 .OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进行其它的操作 .1.点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮. (关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)同步扫描 123染料选择后的显示界面44. 点击 X Y Repeat 按钮开始扫描 .5. 调节绿色 Alexa ( Fluor 488) 图像和红色( Alexa Fluor 546) 图像 .( 图像调节的略述如下 .更多的信息 ,参照附录 1.) 6. 点击 S top 按钮停止扫描 .(参照 Memo .56Memo扫描控制面板: 连续扫描 : 停止扫描: 快速扫描 ( 隔行扫描 )[1探测器的灵敏度调节 ( HV )[2共聚焦的孔径大小调节 ) ( . [3激光输出的调节 ( Laser) [1[2[3调节方法 ( 例 : HV 调节 ) :点击滑块 , HV 直接提高 ( 或降低 ) 到指定的位置 .点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调 .图像调节略述7.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)8.点击XY 按钮取得一幅图像.9.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.10.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)获取单张图像（XY 平面）（荧光图像）78910MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建“ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像” 和“ 一个附属文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进行其它的操作 .例：绿色荧光（ Alexa 488 ）＋红色荧光（ Alexa 546）二重染色序列扫描 (这里介绍线序列扫描.)1.点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮.(关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)123染料选择后的显示界面4 5 6 74.点击序列扫描,并选择线序列方式.5.点击X Y Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色(Alexa Fluor488)图像和红色(Alexa Fluor546)图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击S top按钮停止扫描.(参照Memo.[1探测器的灵敏度调节(HV)[2共聚焦的孔径大小调节)(.[3激光输出的调节Laser)([1[2[3调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述8.选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY 按钮取得一幅图像.10点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.)891011MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 :创建“ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像” 和“ 一个附属文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进行其它的操作 .(XY 平面-单标+微分干涉差)1. 点击FV10-ASW 软件中的按钮关闭汞灯快门 . 同时, 点击按钮关闭卤素灯快门.2.点击染料选择按钮. 在染料列表中, 双击用于观察的荧光染料.*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.3.点击Apply 按钮.(关闭染料选择面板可以用Close 按钮.)4.选择TD1.1234(XY平面-单标+微分干涉差)5 5.点击X Y Repeat按钮开始扫描.6.调节绿色()FITC图像和微分干涉差的图像.(图像调节的略述如下.更多的信息,参照附录1.)7.点击S top按钮停止扫描.(参照Memo.67Memo扫描控制面板:连续扫描:停止扫描:快速扫描(隔行扫描)[1探测器的灵敏度调节(HV)[2共聚焦的孔径大小调节.)([3激光输出的调节(Laser)[1[2[3调节方法(例: HV调节):点击滑块, HV直接提高(或降低)到指定的位置.点击此按钮或者使用鼠标转轮进行微调.图像调节略述(XY 平面-单标+微分干涉差)8. 选择AutoHV, 并选择扫描速度.* 随着扫描速度变慢, 在保持同等亮度的前提下, 背景噪音就会消除.(也可以使用Kalman accumulation 方式. 更多的信息，参照附录2.)9.点击XY 按钮取得一幅图像.10.点击SeriesDone 按钮, “2D View - LiveImage(x)” 2D 界面就出现.11.保存该幅图像:右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.(保存为“xml”类型是 FV10-ASW 软件专用的图像格式.) 891011MemoFV10-ASW 专用的图形格式OIF 格式 : 创建“ 一个含 (16- bit TIFF ) 的图像” 和“ 一个附属文件 ,不能单独分割 . OIB 格式 : 创建单个的 O IF 格式的文件 , 方便进行移动和进行其它的操作 .(XYZ 扫描-双标)1.采用13和14页步骤1到7. 确定Z 轴的上限和下限如下.2.输入StepSize 大小(点击OP 按钮可以使用推荐的值), 并选择 .3.点击XY Repeat 按钮开始扫描.4.点击按钮上移焦点位置.(参照Memo.)5.当图像显示到达上限时, 点击Set 按钮确定. 6.点击按钮下移焦点位置.(参照Memo.)7.当图像显示到达下限时, 点击Set 按钮确定.8.点击Stop 按钮停止扫描.和和1456728Memo和按钮: 点击移动μ m. : 点击移动μ m.。
激光共聚焦显微镜操作手册最终版
徐珏2011.12.3 17:59 于苏州宝石御景园目录标准探测模式（DU4）图像拍摄流程 (1)一、软件开启 (1)二、基本设置 (2)[A1 Setting]界面主要功能区域简介 (2)[Setting]界面功能简介 (4)[Filter and Dye]功能区简介 (6)串色现象解释及Line模式图解 (6)Line模式图解 (7)[scan setting]功能区简介 (7)三、获得图像 (8)[Acquisition]功能区简介 (10)放大方式选择按钮简介 (13)图片扫描参数调用简介 (17)JP2格式图片转化为JPG/TIFF格式图片的操作 (18)各通道荧光图像自由叠加的介绍 (18)数据分析 (21)一、ROI区域分析 (21)二、LUTs调节图像荧光亮度 (23)三、去背景 (25)四、标尺添加 (26)六、长度面积等常规测量 (28)七、细胞计数 (28)[Binary Toolbar]界面简介 (32)光谱扫描模式（SD模式） (34)一、SD模式基本设置 (34)[Detector]标签页功能简介 (35)[Binng/Skip]标签页简介 (36)二、图像获得 (37)三、数据分析 (39)[Spectrum Profile]视窗简介 (40)四、光谱拆分 (40)虚拟滤光扫描模式（VF模式） (47)一、VF模式基本设置 (47)[Detector]设置标签页简介 (48)[Gating Setting]标签页简介 (48)二、获得图像 (48)时间序列拍摄 (49)[Capture Timelapse]视窗简介 (49)[ND]界面简介 (51)[Time Measurement]界面简介 (53)[Capture Z-series]视窗简介 (55)拼大图拍摄 (60)光活化序列拍摄 (61)[Photo Acquition]功能区简介 (62)[Sequential Stimulation]界面简介 (63)常见细胞类型和细胞器形状 (65)常用荧光染料及应用领域 (68)标准探测模式（DU4）图像拍摄流程一、软件开启1、双击桌面NIS-Element图标。
LeicaTCSSP2激光共聚焦显微镜系统操作手册
Leica TCS SP2 激光共聚焦显微镜系统操作手册一、荧光显微镜Leica DMRE的使用A：步距调节B：电动升台按钮C：电动降台按钮D：微调E：上限设置F：下限设置1、观察、扫描转换拉杆2、卤素灯开关3、透射光探测器开光横档4、荧光光路开关5、荧光滤镜转盘1：DAPI；2：TRITC；3：FITC；4：SCAN6、镜头侧DIC棱镜转盘7、与镜头相配DIC滤块8、起偏器9、检偏器10、镜头侧DIC棱镜微调旋钮11、光强调节纽12、减光滤光片13、孔径光阑14、视场光阑选择合适的镜头Leica TCS SP2 镜头配置镜头类型使用介质放大倍率/数值孔径编号HC PL APO CS DRY 10X /0.4 506511HC PL APO CS DRY 20X/ 0.7 506513HC PL APO CS DRY 40 X 0.85/ CORR 506140HC PL APO Ibd.BC OIL 63X /1.4 506192Leica TCS SP2 AOBS 镜头配置镜头类型使用介质放大倍率/数值孔径编号HC PL FLUOTAR DRY 10X/0.3 506505HC PL FLUOTAR DRY 20X/0.5 506503HCX PL APO OIL 40X/1.25-0.75 506176HC PL APO Ibd.BC OIL 63X/1.4 506192 HCX PL APO CS OIL 100X/1.40-0.70 506038 WATER HCX APO L U-V-I WA TER 63X/0.9 506148荧光观察荧光光路开关至“O”位，转轮至“1.0×”位，转换拉杆完全推进，荧光滤块换到相应号位（1：DAPI；2：TRITC；3：FITC；4：SCAN）图像输出扫描荧光光路开关至“I”位，转轮至“UV”位，转换拉杆完全拉出，荧光滤块换到4：SCAN）荧光观察（以油镜观察为例）1、样品正面朝上正确放在显微镜样品台上，点上镜油。
激光共聚焦使用流程
激光共聚焦使用流程Laser confocal microscopy is a powerful imaging technique that allows for high resolution and three-dimensional imaging of biological samples. It is widely used in various fields such as cell biology, neuroscience, and material science.激光共聚焦显微镜是一种强大的成像技术，可以实现生物样本的高分辨率和三维成像。
它被广泛应用在细胞生物学、神经科学和材料科学等领域。
One of the key steps in using laser confocal microscopy is sample preparation. Samples need to be properly fixed, stained, and mounted on glass slides before imaging. This process ensures that the sample is preserved and can be visualized clearly under the microscope.激光共聚焦显微镜使用过程中的关键步骤之一是样本的准备。
在成像之前，必须正确固定、染色和装载样本到玻璃载玻片上。
这个过程可以确保样本被保护，并且可以在显微镜下清晰可见。
When using laser confocal microscopy, it is important to adjust the settings for optimal imaging quality. Parameters such as laser power, gain, and pinhole size need to be optimized to achieve the best results. This may require some trial and error to find the right settings for a particular sample.在使用激光共聚焦显微镜时，调整参数以获得最佳成像质量非常重要。
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激光共聚焦显微镜操作规程
一、准备工作
a)打开计算机。
依次打开激光器电源、钥匙开关。
多线氩离子(458 nm, 488 nm, 514 nm) ON、氦氖绿(543 nm) ON、
氦氖红(633 nm) ON。
打开汞灯电源开关。
b)登陆Windows XP系统。
双击快捷方式：FV10-ASW 1.1。
User ID: Administrator ; Passeword: Administrator。
注
意区分大小写。
二、显微镜镜下观察
１.微分干涉差观察
a)使用手控面板选择物镜。
插入起偏镜。
插入微分干涉滑块。
b)点击FV10-ASW软件中的图标。
标本聚焦.
２.荧光观察：
c)使用手控面板选择物镜。
d)打开汞灯的机械快门，拉出DIC滑块，点击FV10-ASW软件中的图标
e)使用手控面板选择荧光滤色片。
标本聚焦。
３.获取单张荧光图像
a)点击FV10-ASW软件中的按钮。
b)关闭汞灯快门，点击按钮，关闭卤素灯快门。
c)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。
点击Apply按钮。
d)点击XY Repeat按钮开始扫描。
调节图像。
点击Stop按钮停止扫描。
e)选择AutoHV,，并选择扫描速度。
f)点击XY按钮取得一幅图像。
g)点击SeriesDone按钮，“2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。
h)保存该幅图像:右图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像。
(保存为“xml”类型是击FV10-ASW
软件专用的图像格式。
)
４.获得单张（荧光+微分干涉）图像
a)点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。
点击按钮，关闭卤素灯快门。
b)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。
点击Apply按钮。
c)选择TD1。
d)点击XY Repeat按钮开始扫描。
调节绿色(FITC)图像和微分干涉差的图像。
点击Stop按钮停止扫描。
e)选择AutoHV, 并选择扫描速度。
f)点击XY按钮取得一幅图像。
g)点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。
h)保存该幅图像。
５.获取3D图像
例: 绿色荧光(FITC)和红色荧光(Rhodamine)双标（这里介绍线序列扫描取图的过程.）
a)点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。
同时，点击按钮，关闭卤素灯快门。
b)点击染料选择按钮。
在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。
点击Apply按钮。
c)点击序列扫描,并选择线序列方式。
d)点击XY Repeat按钮开始扫描。
调节绿色(AlexaFluor488)图像和红色(AlexaFluor546)图像。
点击Stop按钮停止
扫描。
确定Z轴的上限和下限：从AcquisilionSelling对话框中，勾选StepSize，并输入StepSize大小(点击OP 按钮可以使用推荐的值)。
e)点击XY Repeat按钮开始扫描。
点击和按钮上移焦点位置。
当图像显示到达上限时, 点击Set 按钮确定。
f)点击和按钮下移焦点位置。
当图像显示到达下限时, 点击Set 按钮确定。
点击Stop按钮停止扫描。
g)选择AutoHV, 并选择扫描速度。
选择Depth按钮。
h)点击XYZ按钮取得图像。
i)点击SeriesDone按钮, “2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。
保存该幅图像
三、图像分析
１.3D图像的叠加
a)双击资源管理器中要选择打开的文件，出现2D界面。
b)点击按钮并选择。
c)要保存此图像, 右击此图像, 选择Save Display并命名。
２.3D图像的重建
a)以一定的角度观察3D图像，点击按钮，创建3D图像。
拖动鼠标以一定的角度观察图像。
b)观察3D图像的某个横截面，点击按钮并选定，拖动鼠标观察某个垂直横断面.
c)点击按钮，创建一个2D图像(带文件名)。
保存该幅图像。
３.保存图像
d)右击图像管理器中显示的图像图标, 选择Save as，设置Save as类型为TIFF（或BMP 和JPEG格式）并保存。
如果保存XY或者XYZ通道合并的图像，保存前检查要合并的通道并保存。
e)保存带有比例尺的图像：右击该幅图像，选择Save Display并以新的文件名存为BMP格式文件。
f)保存动态图像：右击该图像，选择Save as A VI并以新的文件名保存该图像。
g)保存到CD-R:插入一张CD-R光盘，点击OK；选择文件并拖放到CD-R的窗口，点击"Write these files to CD."；
点击Next，开始刻录；点击Finish按钮结束。
四、关闭系统
a)选择File/Exit，退出FV10-ASW软件。
b)退出Windows XP。
c)关闭激光器：依次关闭钥匙、电源开关。
多线氩离子(458 nm, 488 nm, 514 nm) OFF、3-2.氦氖绿(543 nm) OFF、
3-3.氦氖红(633 nm) OFF。
d)关闭汞灯电源。