骨碎补中总黄酮的提取、含量测定及抗氧化活性研究的答辩
不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较
不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较目的考察不同提取方法对生、制骨碎补中总黄酮提取效果的影响。
方法分别采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法对骨碎补生品和砂烫品进行提取，通过紫外-可见分光光度（UV-Vis）法检测总黄酮的含量。
结果回流提取法测得的总黄酮含量最高。
结论骨碎补中总黄酮的提取方法以回流提取法为佳。
标签：骨碎补；总黄酮；提取方法骨碎补是较常用中药，具有补肾强骨、养伤止痛之功效，用于肾虚腰痛、耳鸣耳聋、牙齿松动、跌扑闪挫、筋骨伤折等症[1]。
其活性成分是以柚皮苷为主的二氢黄酮类化合物[2]。
笔者采用超声提取法、索氏提取法、回流提取法3种方法提取生、制骨碎补中总黄酮的含量，以比较不同提取方法对总黄酮提出量的影响。
1实验材料1.1仪器752紫外分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。
1.2药品骨碎补药材（购于亳州市药材总公司第二中药批发部）；骨碎补生品和砂烫品均按《中国药典》一部方法制备[1]。
柚皮苷（批号110722-201312，购于中国药品生物制品检定所）；甲醇为AR级。
2方法与结果2.1样品提取方法2.1.1超声提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL，超声提取1 h。
提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL。
2.1.2索氏提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，置于索氏提取器中，加80 mL甲醇，抽提1 h，将提取液转移至100 mL 容量瓶中，甲醇定容至刻度。
2.1.3回流提取法取骨碎补生品及砂烫品粗粉于70℃干燥8 h，各精密称取1.0 g，加甲醇80 mL水浴回流提取1 h，提取液滤过，置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。
2.2总黄酮含量测定2.2.1供试品溶液的制备精密吸取上述三种提取方法提取液各1 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，作为供试品溶液。
槐花的黄铜及抗氧化活性测定(毕业答辩)
色体系芦丁标准曲线
2、黄酮提取率及抗氧化活性测定（单因素实验）
图3 不同溶剂条件下的黄酮提取率及DPPH自由基清除率
2、黄酮提取率及抗氧化活性测定（单因素实验）
图4 不同乙醇浓度条件下的黄酮提取率及DPPH自由基清除率
2、黄酮提取率及抗氧化活性测定（单因素实验）
图5 不同温度条件下的黄酮提取率及DPPH自由基清除率
槐花黄酮的提取及抗氧化活性的研究
答辩内容
一、研究背景 二、材料与方法 三、结果与分析 四、结论 五、致谢
一、研究背景
槐花为豆科植物槐(Sophora japonica. L ) 的干燥花及花蕾， 其中花蕾中黄酮含量较高，约为14% 左右。 黄酮类成分具有保护心血管系统，降血糖、血脂，抗氧 化，抗衰老的作用，增加机体免疫力。 优化槐花黄酮的提取条件，确定槐花黄酮的提取工艺，将
率越高。
不同溶剂
不同乙醇浓度
不同温度
不同次数
五、致谢
大学本科的学习生活即将结束，在此，我要 感谢所有曾经教导过我的老师和关心过我的同学 ，他们在我成长中给予了我很大帮助。本文能顺 利完成，特别要感谢我的指导老师—何大俊老师 ，他在实验的顺利完成、论文开题和写作中，给 了我很大的指导，并且非常仔细的评阅了我的论 文，指正很多错误，使我的论文更加完善。
2、黄酮提取率及抗氧化活性测定（正交实验）
表2 黄酮提取率及数据分析
因素 乙醇 浓度 A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 均值1 均值2 均值3 极差 1 1 1 2 2 2 3 3 3 7.951 9.035 5.621 3.414 时间 B 1 2 3 1 2 3 1 2 3 7.614 7.679 7.314 0.365 温度 C 1 2 3 2 3 1 3 1 2 7.061 7.557 7.988 0.927 7.595 8.325 7.932 8.885 9.672 8.548 6.361 5.041 5.462 1 2 3 4 5 6 7 8 9 均值1 均值2 均值3 极差 黄酮提取 率（mg/g ）
骨碎补提取工艺的实验研究
总 k1 11.942 10.307 11.114 9.076
黄 k2 11.045 11.879 11.575 11.739
酮 k3 11.244 12.046 11.543 13.416
R 0.897 1.739 0.461 4.340
表 3 柚皮苷的方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 平均偏差平方和 F 比 显著性
摘 要：目的：优选骨碎补提取的最佳工艺条件。方法：以骨碎补中柚皮苷及骨碎补总黄酮的含量为指标，采
用 L9(34) 正交设计法对骨碎补的提取条件进行研究。结果：提取次数是骨碎补有效成分提取的关键因素 , 其次是
溶媒用量，提取时间和乙醇浓度为最次要因素。结论：最佳提取工艺条件是 14 倍量 55% 乙醇回流提取 3 次 ,2 h/ 次。
B
5.527
2
2.7635
4.149
C
0.398
2
0.199
0.299
D
28.745
2
14.3725 21.580 P<0.01
E
1.33
9
注：F0.05(2,9)=4.26，F0.01(2,9)=8.02。
柚皮苷的方差结果分析表明，因素 B因素 A、C 则
无显著性影响，影响强度依次为 D ＞ B ＞ C ＞ A，如
以柚皮苷的含量为指标，骨碎补的最佳提取工艺为
A3B3C2D3; 如以总黄酮的含量为指标，骨碎补的最佳 提取工艺为 A1B3C2D3，综合两种分析结果，因素 D 为 最重要影响因素，其次是因素 B, 因素 A 和 C 为最次
要因素。故确定最佳提取工艺条件应为 A3B3C2D3 或 A1B3C2D3。 2.5.2 验证与比较实验 称取 100g 砂烫骨碎补，按
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黄酮清除O2-·自由基能力的实验结果
28
26
24
22
清除率 (%)
20
18
16
14
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
图5 提取浓度与清除率的关系曲线
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
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黄酮清除·OH自由基能力的实验结果
20
18
16
清除率 (%)
14
12
10
8
6
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
图6 提取浓度与清除率的关系曲线
由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
（3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中 总黄酮抗氧化活性 。 并 且 骨碎补中黄酮类化合物 在浓度实的验增浓加度而范加围强内。清除O2-·、·OH效果都随黄酮
骨碎补中总黄酮的提取含量测定及抗氧化活性研究的答辩 PPT课件
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2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程：
骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
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骨碎补总黄酮预防人工关节假体周围骨溶解的实验研究的开题报告
骨碎补总黄酮预防人工关节假体周围骨溶解的实验研究的开题报告标题：骨碎补总黄酮预防人工关节假体周围骨溶解的实验研究研究背景和意义：随着人口老龄化和骨关节疾病发病率的日益增加，全球人工关节置换手术的数量也在逐年增长。
然而，人工关节置换术后出现的假体周围骨溶解问题已经成为了困扰医生和患者的一个难题。
假体周围骨溶解可导致假体松动和关节不稳定，进而影响移动能力和生活质量。
因此，如何有效地预防和治疗假体周围骨溶解已成为了临床研究人员关注的重点。
骨碎补总黄酮是一种天然来源的化合物，已被证明具有一定的骨保护作用，包括可抑制骨吸收和促进骨形成。
然而，其对于假体周围骨溶解的预防作用尚未得到充分研究。
研究内容和方法：本研究旨在探讨骨碎补总黄酮在人工关节假体周围骨溶解中的预防作用。
在实验中，将利用体外实验和动物实验模型，检测不同浓度的骨碎补总黄酮对于假体周围骨溶解的影响。
具体方法如下：1. 体外实验：采用细胞培养技术，将人类骨母细胞（OBs）分为对照组和不同浓度的骨碎补总黄酮处理组，观察骨碎补总黄酮对于OBs细胞增殖、分化和骨基质沉积的影响。
2. 动物实验：选取老年大鼠建立假体置换模型，将大鼠分为对照组和不同剂量的骨碎补总黄酮处理组，观察骨碎补总黄酮对于假体周围骨质疏松、假体松动和假体周围炎症反应的影响。
研究预期成果：本研究期望能够验证骨碎补总黄酮对于假体周围骨溶解的预防作用，并为临床提供新的治疗思路和药物选择。
同时，本实验所采用的体外和动物实验方法也可为同领域研究提供一定的参考价值。
参考文献：1. Gilbert JA, Nodzo SR. The stiff, painful total knee arthroplasty: evaluation and management. J Arthroplasty. 2019 Apr;34(4):658-662.2. Fang Y, Hu X, Liu X, et al. The protective effect of icariin on osteoporosis and bone turnover in ovariectomized rats by regulating the OPG/RANKL/NF-κB pathway in osteoblasts. Life Sci. 2019 Apr 1;222:25-32.3. Li SJ, Liang HW, Zhang Q et al. Effects of total flavonoids of Epimedium on osteoporosis in ovariectomized rats. Chin J Osteoporos. 2019;25(2):159-164.。
内部沸腾法提取骨碎补多糖及其抗氧化活性研究
内部沸腾法提取骨碎补多糖及其抗氧化活性研究作者：梁家灿文慧香梁云贞来源：《安徽农业科学》2022年第14期摘要以骨碎补为试验材料，采用内部沸腾法来提取骨碎补中的多糖，并且测定骨碎补里提取出来的多糖的抗氧化活性，通过设置单因素试验和4因素3水平的正交试验，研究乙醇解吸液体积分数、乙醇解吸时间、水浴提取温度、水浴提取时间对骨碎补多糖提取率的影响。
结果表明，提取骨碎补中多糖的最佳条件为乙醇解吸液体积分数50%、解吸时间15min、水浴提取温度80 ℃、水浴提取时间4 min，在这个条件下的骨碎补多糖提取率为10.90%。
当骨碎补多糖质量浓度为0.5%时，其对DPPH自由基的清除率达74.8%，对羟基自由基的清除率达78.3%。
关键词骨碎补;多糖;内部沸腾法;抗氧化活性中图分类号 R 284;R 285文献标识码 A文章编号 0517-6611（2022）14-0153-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.14.037开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Study on Extraction of Rhizoma Drynariae Polysaccharide and Its Antioxidant Activity by Internal Boiling MethodLIANG Jia-can1，WEN Hui-xiang2，LIANG Yun-zhen3（1.School of Agriculture and Life Sciences，Kunming University，Kunming，Yunnan 650200;2.School of Chemistry and Chemical Engineering，University of South China，Hengyang，Hunan 421000;3.School of Chemistry and Biological Engineering，Guangxi Minzu Normal University，Chongzuo，Guangxi 532500）Abstract Taking Rhizoma Drynariae as the test material，the internal boiling method was used to extract the polysaccharides in Rhizoma Drynariae，and the antioxidant activity of the polysaccharides extracted from Rhizoma Drynariae was determined.The effects of ethanol desorption liquid fraction，ethanol desorption time，water-bath extraction temperature and water-bath extraction time on the extraction rate of Rhizoma Drynariae were studied by setting up single factor experiment and orthogonal experiment with 4 factors and 3 levels.The results showed that the optimal conditions for extracting polysaccharides from Rhizoma Drynariae were 50% ethanol desorption liquid fraction，15min desorption time，80 ℃ water-bath extraction temperature，and 4min water-bath extraction time.Under these conditions，the extraction rate of Rhizoma Drynariae polysaccharide was10.90%.When the mass concentration of drynaria polysaccharide was 0.5%，its scavenging rate for DPPH free radicals reached 74.8%，and the scavenging rate for hydroxyl radicals reached 78.3%.Key words Rhizoma Drynariae;Polysaccharide;Internal boiling method;Antioxidant activity骨碎補（ Davallia mariesii Moore ex Bak.）是一种比较常用的中药，具有补肾、强骨、止痛等功效，用于治疗耳鸣耳聋、牙齿松动、筋骨伤折、肾虚腰痛、跌扑闪挫等症状[1]。
骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖作用的实验研究的开题报告
骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖作用的实验研究的开题报告
一、研究背景和意义
骨碎补总黄酮是从骨碎补中提取得到的一种天然成分，已被证实具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。
近年来，研究表明骨碎补总黄酮也具有相关骨代谢
调节作用，对骨细胞的增殖、分化、矿化等有一定影响。
成骨细胞是骨组织生成和修复的重要细胞类型，对于骨质疏松症、骨折等骨骼疾病的治疗具有重要意义。
因此，本研究旨在探究骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖的影响，为寻找新型骨质疏松症治疗剂提供新思路和方法。
二、研究内容和方法
本研究将使用MTT法、CCK-8法、膜片计数法等实验手段，探究不同浓度的骨
碎补总黄酮对成骨细胞增殖的影响，并考查增殖相关的细胞信号通路。
三、预期结果和意义
预计本研究将获得骨碎补总黄酮对成骨细胞增殖作用的实验数据，并明确其作用机制与信号通路，为寻找新型骨质疏松症治疗剂提供实验基础和理论支持。
四、研究难点和创新点
研究难点：成骨细胞增殖与信号通路复杂多变，需找到关键的细胞因子和前驱物质，探讨其与骨碎补总黄酮之间的交互作用。
创新点：本研究将为骨质疏松症治疗剂的发现提供新思路和方法，对成骨细胞增殖的探究也将为骨科学领域提供新的研究深度和方向。
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定-精选文档
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定骨碎补是较常用的中药，具有补肾强骨，活血续伤之功效。
骨碎补活性成分为柚皮苷等二氢黄酮类化合物［1,2］，为了考察不同炮制方法对骨碎补有效成分的影响，我们用分光光度法测定骨碎不同炮制品（生品骨碎补、砂烫骨碎补、酒骨碎补）中总黄酮的含量，用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。
1 实验材料1．1 药品骨碎补购自湖北，经鉴定均为水龙骨科植物槲蕨Drymaria fortunei (Kunze)J.sm. 的干燥根茎。
1．2 炮制品生品：（1）除祛杂质，洗净，未去毛。
（2）鲜骨碎补洗净，除祛杂质，去毛。
砂烫骨碎补：取沙子置锅内，用武火加热后，加入净骨碎补或片，不断翻动，烫至鼓起时，取出，筛去沙子，撞去毛，放凉。
酒骨碎补：取去毛骨碎补片，加酒拌匀，用文火炒干为度，每骨碎补１００Ｋg，用酒或白酒１０Ｋg。
1．3 仪器7520型分光光度计，1050型液相色谱仪（惠普公司）；LA-204型电子天平（常熟市衡器厂）。
2、实验方法与结果2．1 总黄酮含量测定方法与结果标准曲线制备精密称取柚皮苷对照品4.9mg，置50ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，再分别吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收度，以吸收度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，经回归得标准曲线方程A=0.0292C-0.0577，r=0.9998，线性范围4.9~29.4μg.ml-1.2.2 骨碎补不同炮制品样品溶液制备及测定精密称取骨碎补各炮制品干燥粉末(经80℃干燥4小时,过40目筛)1 g,置索氏提取器中，分别用50毫升甲醇提取12小时，将提取液转移至100毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，精密吸取1毫升于25毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，于283纳米处测定吸收度，按回归方程计算总黄酮含量未去毛的骨碎补甲醇提取液中总黄酮的含量平均值却为4.1，其它四组数据的平均值都在5.0左右，数据相差的很大，可见骨碎补经去毛炮制可使总黄酮在甲醇提取液中的含量增加，从而提示我们经去毛炮制有利于有效成分的溶出。
小驳骨中总黄酮、总酚酸含量测定及其抗氧化活性研究
小驳骨中总黄酮、总酚酸含量测定及其抗氧化活性研究作者：陈燕霞等来源：《江苏农业科学》2014年第04期摘要：采用紫外-可见分光光度法测定小驳骨不同提取溶剂、不同部位总黄酮和总酚酸含量及其抗氧化性。
结果表明，小驳骨茎总黄酮含量高于叶，茎水提取液总黄酮含量最高，为4.26%；小驳骨叶总酚酸含量高于茎，叶醇提取液总酚酸含量最高，为11.90%；在抗氧化性方面，茎水提液>茎醇提液>叶水提液>叶醇提液；小驳骨不同部位总黄酮、总有机酸含量、抗氧化性存在差异；总黄酮含量和抗氧化性具有相关性，表明抗氧化活性可能与黄酮类物质有关。
关键词：小驳骨；总黄酮；总酚酸；抗氧化性中图分类号： R284.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）04-0258-02收稿日期：2013-10-14作者简介：陈燕霞（1988—），女，广东汕头人，硕士研究生，研究方向为中药炮制现代化、中药饮片质量标准化。
E-mail：973414396@。
通信作者：陈康，男，广东阳江人，教授，研究方向为中药炮制现代化、中药饮片质量标准化及中药新药研究。
E-mail：chenkang@。
小驳骨（Gendarussa vulgaris Nees.）别名驳骨丹、接骨草、四季花、小还魂、百节芒、小叶金不换、小接骨草、裹篱樵、长生木、细骨风等，为双子叶植物爵床科小驳骨属植物小驳骨的干燥地上部分，全年均可采收，广泛分布于我国的广东、广西、海南等地。
小驳骨性味辛、温，归肝、肾经；功能为祛瘀止痛，续筋接骨；主用于跌打损伤，筋伤骨折，风湿骨痛，血瘀经闭，产后腹痛[1]。
民间常取小驳骨鲜品捣烂，或用酒调后热敷患处。
据报道，小驳骨含有挥发油、无机元素、生物碱、黄酮苷、有机酸、糖类、氨基酸等[2-4]；卢胜明研究了小驳骨地上部分的95%乙醇提取物的化学成分，从中分离并鉴定了19个化合物[5]；江秀娟等对小驳骨药材进行了性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别，对水分、总灰分、水溶性浸出物含量等进行了测定[6]。
骨碎补总黄酮的实验及临床研究概况
骨碎补总黄酮的实验及临床研究概况李晋玉;赵学千;孙旗;郑晨颖;白春晓;刘楚吟;李亚芳;贾育松【摘要】骨碎补总黄酮作为从中药骨碎补中提取的有效成分,被广泛应用于实验及临床研究.特别是在骨质疏松方面的研究尤为突出,从分子通路,如BMP-Smads信号通路、Wnt/β-catenin通路、MAPK信号通路、CTSK信号通路及OPG/RANKL/RANK信号通路等,到体内雌激素水平、体外细胞、骨组织及临床研究等,从不同的层面论证了骨碎补总黄酮抗骨质疏松的作用.骨碎补总黄酮还可以治疗骨折、骨缺损、膝骨关节炎、类风湿关节炎、股骨头坏死、骨牵张技术等.骨碎补总黄酮在治疗各种不同骨科疾病时,可通过相同的分子蛋白通路发挥作用,从微观角度体现了中医异病同治的治疗特点.虽然骨碎补总黄酮在基础研究及临床治疗方面应用广泛,但是其作用机理仍有待探究,不同分子通路之间的相互作用需要进一步明确.另外,骨碎补总黄酮仍然属于混合成分,其中柚皮苷的作用较为突出,但是并不能完全代替骨碎补总黄酮的作用,需要进一步分离提取,更精准地找到治疗不同骨科疾病不同靶点的有效成分.【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2018(024)010【总页数】8页(P1357-1364)【关键词】骨碎补总黄酮;骨质疏松;信号通路;实验研究;临床研究【作者】李晋玉;赵学千;孙旗;郑晨颖;白春晓;刘楚吟;李亚芳;贾育松【作者单位】北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700;北京中医药大学东直门医院骨1科,北京100700【正文语种】中文【中图分类】R285骨碎补为水龙骨科植物槲蕨的干燥根茎，是一味常用的传统中药。
骨碎补总多酚和总黄酮的体外抗氧化活性研究
骨碎补（Rhizorna drynaria /为水龙科多年生蕨 类植物桝蕨的干燥根茎,其味苦,性温,具有补肾强 骨、续伤止痛等功效,主治肾虚腰痛、牙齿松动、耳 鸣耳聋、筋骨折伤、跌扑闪挫［-2］等,贵州方氏苗药 活血追风丸、治疗腰椎间盘突出和骨折的外用苗 药［2］等多种特色苗药中都用到骨碎补•研究表明, 骨碎补含有以黄酮类化合物为主的活性成分,具有 促进骨折愈合、抗氧化、防治骨质疏松、抗炎、调血 脂、镇痛等活性目前对骨碎补的研究多集中在 其化学成分分析和药理作用及总多酚提取工艺等 方面［4-6］,对骨碎补总多酚和总黄酮的抗氧化活性
液0. 5 mL,混合均匀，静置6 min.加入0. 5 mL
10% (m/v)硝酸铝溶液,
匀，放置6 min后
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
加入4 mL 4% (m/v) NaOH溶液,
匀•放置
15 min,并按照紫外-可 分光光
法
510 nm 处 吸光度•将其 绘制标准曲
线，其回归方程为:A = 11.701 C - 0. 005 7 (R2 =
标准曲线的绘 总黄酮的
照文献⑼
并
改：准 取0. 126 0 g芦丁标准品于
150 mL烧杯中，并用100 mL的70% 溶液溶解
转移至1 000 mL 瓶中，定容，摇匀备用•吸
取该标准溶液1.0,2.0,.0,4.0,.0 mL于5个
25 mL比色管中，再分别加入70%乙醇溶液至
5.0 mL, 匀，再加入5% (m/v (亚硝酸钠溶
摘 要：通过对总抗氧化能力、1,1 -二苯-2 -苦基［自由基（DPPH -）清除率测定，对骨碎补总 多酚和总黄酮的体外抗氧化活性进行了研究•结果显示骨碎补总多酚的总抗氧化活性和DPPH 清除率均高于特丁基对苯二酚（TBHQ）,且骨碎补总多酚DPPH -半数抑制浓度（EC50 =0.011 mg/mL）优于TBHQ（EC50 =0. 199 mg/mL）；骨碎补总黄酮的总抗氧化活性和DPPH •清除能力 均略低于特丁基对苯二酚（TBHQ）,但是骨碎补总黄酮DPPH •清除能力远高于其他常见中草 药.因此认为骨碎补总多酚和总黄酮是天然的抗氧化活性剂和自由基清除剂. 关键词:骨碎补；总多酚；总黄酮；抗氧化活性 论文编码：Doi：10.3969/j. issn. 1673 - 9329.2019.03.09
骨碎补总黄酮的提取、含量测定及抗氧化活性研究
摘要本论文以骨碎补为原料采用乙醇加热回流的方法制备骨碎补黄酮粗提物; 利用紫外分光光度法测定提取物中总黄酮的含量。
通过单因素实验和正交实验确立骨碎补总黄酮提取的最佳工艺条件。
对骨碎补中总黄酮的抗氧化性、羟自由基 (·OH 的清除能力进行了研究。
采用邻苯三酚自氧化测定和邻菲罗啉法测定羟自由基(·OH的清除能力。
结果:骨碎补中黄酮类化合物的最佳提取工艺条件为乙醇浓度60%、料液比 1:30、浸提时间 3h 、浸提温度 60℃。
骨碎补中黄酮类化合物具有抗氧化活性性, 且对 ·OH、 O 2-·的清除在一定条件下随着提取液的浓度增大而增加。
关键词骨碎补黄酮提取含量测定抗氧化活性Tittle:Tittle:ExtractionExtraction Extraction,, content determination and antioxidant activity of total flavonoids in the DrynariaAbstactThis thesis is about preparing Rhizoma Drynariae flavone extracts by ethanol refluxing method, using Rhizoma Drynariae as raw materials. We used UV spectro -photometric method to determin e total flavone content in the extract. Through the single factor experiments and the orthogonal experiments, we established the total flavonoids of Rhizoma Drynariae ethanol extraction. We studied the antioxidant flavonoids and scavenging capacity of hydroxyl free radical(·OH.Pyrogallol autoxidation and 1,10-phenanthroline monohydrate method were used to determine the scavenging capacity of it. Results:the optimum technological conditions for ethanol concentration of the Rhizoma Drynariae extracting flavonoids was 60%,solid-liquid ratio was 1:30,extraction time was 3h extraction temperature was 60℃ . Rhizoma Drynariae in flavonoid compounds had antioxidant activity, and the removal activities of ·OHand O 2-·was increasing with the extract concentration under certain conditions.Keywords Keywords::Drynaria, Flavonoids, Extract, Determination of content, Antioxidant activity目录第 1章绪论1.1骨碎补概况骨碎补 Oats(Avenasativa , 如图 1所示 , 为水龙骨科植物槲蕨 Drynaria fortunei(KunzeJ.Sm. 的干燥根茎。
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定
骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量测定作者：何冬雪刘家含来源：《健康必读·下旬刊》2012年第06期【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)06－0326－01【摘要】:目的:通过考察骨碎补不同炮制品中总黄酮与柚皮苷的含量，来确定其最佳的炮制方法；方法:用分光光度法测定骨碎补不同炮制品中总黄酮的含量.用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。
结果与结论:骨碎补经去毛净制后,可提高总黄酮及柚皮苷的含量。
骨碎补是较常用的中药，具有补肾强骨，活血续伤之功效。
骨碎补活性成分为柚皮苷等二氢黄酮类化合物［1,2］，为了考察不同炮制方法对骨碎补有效成分的影响，我们用分光光度法测定骨碎不同炮制品（生品骨碎补、砂烫骨碎补、酒骨碎补）中总黄酮的含量，用高效液相色谱法测定柚皮苷含量。
1 实验材料1．1 药品骨碎补购自湖北，经鉴定均为水龙骨科植物槲蕨Drymaria fortunei (Kunze)J.sm. 的干燥根茎。
1．2 炮制品生品：（1）除祛杂质，洗净，未去毛。
（2）鲜骨碎补洗净，除祛杂质，去毛。
砂烫骨碎补：取沙子置锅内，用武火加热后，加入净骨碎补或片，不断翻动，烫至鼓起时，取出，筛去沙子，撞去毛，放凉。
酒骨碎补：取去毛骨碎补片，加酒拌匀，用文火炒干为度，每骨碎补１００Ｋg，用酒或白酒１０Ｋg。
1．3 仪器7520型分光光度计，1050型液相色谱仪（惠普公司）；LA-204型电子天平（常熟市衡器厂）。
2、实验方法与结果2．1 总黄酮含量测定方法与结果标准曲线制备精密称取柚皮苷对照品4.9mg，置50ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，作为对照品溶液，再分别吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，以甲醇为空白，在283nm处测吸收度，以吸收度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，经回归得标准曲线方程A=0.0292C-0.0577，r=0.9998，线性范围4.9~29.4μg.ml-1.2.2 骨碎补不同炮制品样品溶液制备及测定精密称取骨碎补各炮制品干燥粉末(经80℃干燥4小时,过40目筛)1 g,置索氏提取器中，分别用50毫升甲醇提取12小时，将提取液转移至100毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，精密吸取1毫升于25毫升容量瓶中，甲醇定容至刻度，于283纳米处测定吸收度，按回归方程计算总黄酮含量未去毛的骨碎补甲醇提取液中总黄酮的含量平均值却为4.1，其它四组数据的平均值都在5.0左右，数据相差的很大，可见骨碎补经去毛炮制可使总黄酮在甲醇提取液中的含量增加，从而提示我们经去毛炮制有利于有效成分的溶出。
中药战骨的化学成分、总黄酮提取工艺与抗氧化活性的研究的开题报告
中药战骨的化学成分、总黄酮提取工艺与抗氧化活性的研究的开题报告题目：中药战骨的化学成分、总黄酮提取工艺与抗氧化活性的研究一、研究背景及意义中药战骨是一种常用的中药材，其具有清热解毒、活血化瘀等功效，主要用于临床上治疗风湿骨痛、筋伤骨折等症状。
战骨所含的化学成分对其药效具有重要影响，因此研究战骨中的化学成分及其功效，对于深入了解战骨药效和开发利用具有重要意义。
总黄酮是战骨中主要的活性成分之一，具有明显的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性。
因此，研究战骨中总黄酮的提取工艺及其抗氧化活性，可以为开发战骨的相关保健食品和药物提供重要的理论和实践基础。
二、研究内容和方法本研究将分别从战骨的化学成分和总黄酮的提取工艺、抗氧化活性等方面进行研究。
具体研究内容如下：1.战骨中化学成分的分析通过对战骨中的主要化学成分进行分离与鉴定，包括所含的生物碱、鞣质、黄酮等成分，明确战骨中各成分的化学特性和药理作用。
2.战骨中总黄酮的提取工艺研究通过选取合适的提取剂、提取温度、提取时间等影响因素，建立总黄酮的优化提取工艺，并对其进行比较和分析。
3.战骨总黄酮的抗氧化活性研究通过多种体外方式，如DPPH自由基清除法、还原比色法、ABTS自由基清除法等，对战骨中总黄酮的抗氧化活性进行检测和评价，并与其他常用的天然抗氧化物做比较。
本研究将采用现代化学和生物学技术手段，如超高效液相色谱-串联质谱、高效液相色谱、分子筛分离等分析技术和DPPH法、还原比色法等生物学检测技术，从战骨的化学成分、总黄酮的提取工艺和抗氧化活性三个方面对其进行系统研究。
三、研究预期结果1.对战骨的主要化学成分进行分析，明确其化学特性和药理作用。
2.建立战骨总黄酮的优化提取工艺，获得高效的总黄酮提取方法。
3.对战骨总黄酮的抗氧化活性进行评价，为开发战骨相关保健食品和药物提供理论和实践基础。
四、研究进度安排1.前期调查和文献查阅：完成。
2.战骨化学成分分析：2021年4月至6月。
不同提取方法对骨碎补中总黄酮含量的影响比较
样 品（ 批号 ： １ ４ ０ ３ １ １ ） 研细， 取约 １ ． ０ ｇ ， 精密称定 ， 精 密加入 阿 魏酸对 照品适量 ， 制成 各 自的供试 品溶液 ， 依法测 定 ， 计算加 样 回收率 。结果见表 １ 。
表１ 加 样 回 收 率试 验 结 果
曾考察 了乙酸乙酯萃 取 １ 次， 萃取 ２次 ， 萃取 ３次 ， 萃取 ４次 ， 萃取 ５次 ， 结果表明 ， 萃取 ４次 ， 与乙酸乙酯萃取 ５次 ， 效 果相 当， 为 了节省资源 ， 简单方便 ， 选择乙酸 乙酯萃 取 ４次 ， 同时对
乙酸乙酯 每 次 萃 取 用 量 做 了 比较 ， 分别每次 １ ０ ｍ Ｌ ， 每 次 １ ５ ｍ Ｌ， 每次 ２ ０ ｍＬ ， 每次 ２ ５ ｍＬ ， 结果表明 ， 每次 １ ５ ｍ Ｌ， 后含量 不再增加 ， 故选择乙酸乙酯萃取 ， 每次 １ ５ ｍ Ｌ 。 参 考文献 ：
２ ０ １ ６ 年第 ３ ７ 卷第１ １ 期
云 南 中 医 中 药 杂 志
７ ５
不 同提 取 方 法对 骨碎 补 中 总黄 酮 含 量 的 影 响 比较
张 琳 ，周 润天 ，李 兴华 （ １ ．中 国药科 大 学 中药学院 ，江 苏 南京 ２ １ １ １ ９ ８ ；２ ．南京 第 １ ３中学 ，江 苏 南京 ２ １ ０ ０ ０ ８ ）
０ １ ４， １ １： ６ ７ ．
［ ４ ］ 宋兴发 ， 刘俊超 ． Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 法测定复方调经糖浆中阿魏酸 的含量 ［ Ｊ ］ ．
注射用骨碎补总黄酮的处方工艺及其含量测定方法研究
注射用骨碎补总黄酮的处方工艺及其含量测定方法研究
张海茹;薛秀峰;丁平田;李宁
【期刊名称】《中国药剂学杂志：网络版》
【年(卷),期】2007(000)004
【摘要】目的制备注射用骨碎补总黄酮并建立其含量测定方法。
方法筛选赋形剂的种类和用量,得出最佳处方和制备工艺;以HPLC法测定其含量。
结果使用100 g·L-1甘露醇作为赋形剂效果最好;含量测定新北美圣草苷和柚皮苷的平均回收率分别为99.6%和99.3%。
结论处方合理,制备工艺可行。
含量测定方法准确、方便、重现性好。
【总页数】5页(P183-187)
【作者】张海茹;薛秀峰;丁平田;李宁
【作者单位】沈阳药科大学药学院;沈阳恒海医药科技有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R283
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王珊;王晓华;宫文武;张成陕
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骨碎补总黄酮防治绝经后骨质疏松症的实验研究
骨碎补总黄酮防治绝经后骨质疏松症的实验研究何伟涛;周金贤;丁晓虹;王海丰;梁冰【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2012(18)5【摘要】目的探讨骨碎补总黄酮防治骨质疏松的机理,为补肾中药有效成分治疗骨质疏松症提供实验依据.方法选取3月龄雌性SD大鼠72只,随机分为6组:给药组切除双侧卵巢给予骨碎补总黄酮灌胃,分为:高剂量组,中剂量组,低剂量组；对照组,切除双侧卵巢给予雌激素灌胃；假手术组,开腹后切除一小块卵巢周围脂肪给予常规喂饲；空白组不做处理常规喂饲.分别在第0、3、6个月处死每次每组4只.取左胫骨近端干骺端标本,运用荧光定量PCR方法测定Cathepsin K mRNA表达量,运用三点弯曲法测胫骨干最大弯曲载荷,采用SPSS软件进行数据统计分析.结果给药组与对照组胫骨干骺端Cathepsin K mRNA表达量相比,有统计学意义(P＜0.05).给药组与假手术,空白组均有显著性差异(P＜0.01)；胫骨干最大弯曲载荷显示:给药组与对照组有统计学意义(P＜0.05),给药组与假手术,空白组均有显著性差异(P＜0.01).结论骨碎补总黄酮可以降低胫骨干骺端Cathepsin K mRNA的表达量,提高胫骨干最大弯曲载荷.此可能为骨碎补总黄酮治疗骨质疏松症的重要机制.%Objective To explore the mechanism of drynaria fortunei J. SM for the prevention of postmenopauaal osteoporosis and to provide experimental evidence of the kidney-supplementing drynaria fortune J. SM for the treatment of osteoporosis. Methods A total of 72 3-month-old female rats were selected and randomly divided into 6 groups. The rats in the drug group were administered with drynaria fortunei J. SM after bilateralovariectomy and divided into high-dose group, middle-dose group, and low-dose group. The rats in the control group were administered with estrogen after bilateral ovariectomy. Rats in the sham surgery group were administered with routine feed after the resection of a little fat near the ovary. Rats in the blank group were not given any treatment. Four rats in every group were killed in 0, 3, and 6 months. The proximal metaphysics of the left tibia of rats were sectioned. The expression of cathepsin K mRNA was measured using fluorescence quantitative PCR. Bending load of the tibia was measured using three point bending test. The statistical analysis was performed with SPSS 13. 0 software. Results The expression of cathepsin K mRNA between drug group and control group was significantly different ( P < 0. 05 ). The expression of cathepsin K mRNA between drug group and sham surgery group, and blank group was also significantly different (P<0. 01). The bending load of the tibia between drug group and control group was significantly different (P < 0.05). The bending load of the tibia between drug group and sham surgery group, and blank group was also significantly different (P <0.01). Conclusion Drynaria fortune J. SM can decrease the expression of cathepsin K mRNA of metaphysics of the tibia and increase the bending load of the tibia. This may be an important mechanism of drynaria fortunei J. SM for the treatment of osteoporosis.【总页数】4页(P444-446,457)【作者】何伟涛;周金贤;丁晓虹;王海丰;梁冰【作者单位】314300,浙江省海盐县中医院;314300,浙江省海盐县中医院;314300,浙江省海盐县中医院;314300,浙江省海盐县中医院;314300,浙江省海盐县中医院【正文语种】中文【中图分类】R275【相关文献】1.补肾健骨汤对绝经后骨质疏松症防治作用的实验研究 [J], 陈玉萍;扎西草;单丽娟2.妪松康防治绝经后骨质疏松症的实验研究 [J], 田李军3.中医药防治绝经后骨质疏松症的实验研究进展 [J], 黄莺飞4.中医药防治绝经后骨质疏松症的实验研究进展 [J], 段水竹5.补肾活血汤防治绝经后骨质疏松症的实验研究 [J], 张鑫;肖鲁伟;童培建因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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黄酮清除·OH能力的测定
采用邻菲罗啉法 在6个25 mL容量瓶中一次加入9 mmol/L FeSO4，9 mmol/L水杨酸各2 mL，不同浓度的黄酮粗提取溶液 1 mL，8.8 mmol/L H2O2启动反应1 h，用蒸馏水定 容，静置，于510 nm处测定吸光度 Ai。以蒸馏水为 空白，测定吸光度A0。 清除率（%）=( A0-Ai)/ A0×100% 其中：A0为空白实验的吸光度； Ai为不同浓度反应液的吸光度。
3.26 3.24
总 黄酮含量 (%)
3.22
3.20
3.18
3.16 1:20 1:30 1:40 1:50 1:60 1:70
料液比 (mL/g)
图3 料液比与总黄酮含量的关系曲线 由图3可知：随着料液比的提高，黄酮得率上升，但超过1:30 后上升趋势不明显，料液比为1:30最好。
提取时间对提取率的影响
黄酮清除O2-· 自由基能力的实验结果
28 26 24 22 20 18 16 14 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
清除率 (%)
图5 提取浓度与清除率的关系曲线
黄酮清除· OH自由基能力的实验结果
2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程： 骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
乙醇浓度对提取率的影响 单 因 素 实 验 提取温度对提取率的影响 料液比对提取率的影响 提取时间对提取率的影响
正交试验设计
为了全面考查影响因素，设计了4因素3水平 的正交试验，试验因素水平见下表：
20 18 16
清除率 (%)
14 12 10 8 6 0.0
0.2
0 提取浓度与清除率的关系曲线 由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
4.结论
（1）采用乙醇热回流提取法，从骨碎补中提取总黄 酮。 （2）在单因素实验基础上，通过正交试验设计，研 究得到骨碎补中总黄酮提取的最佳工艺条件：乙 醇浓度60%、料液比1:30、提取时间 3 h、提取温 度 60 ℃。在此条件下，用紫外分光光度法测得总 黄酮的含量为3.51%。 （3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中 总黄酮抗氧化活性。并且骨碎补中黄酮类化合物 在实验浓度范围内清除O2-·、·OH效果都随黄酮 浓度的增加而加强。
3.实验结果与讨论
乙醇浓度对提取率的影响
3.30 3.25
总 黄酮含量 (%)
3.20
3.15
3.10
3.05 40 50 60 70 80 90
乙醇浓 度 (%)
图1 乙醇浓度与总黄酮含量的关系曲线 由图1得知:随着乙醇浓度的增加，黄酮的得率升高。当浓度 大于60％时，得率的有所降低。故最佳乙醇浓度为60％。
报告内容
CONTENTS
研究背景及意义 实验部分
结果与讨论
结论
1.研究背景及意义
黄酮类化合物是一类分布很广的多酚类天然 产物，几乎存在于所有的绿色植物中，具有多种 明显的药理活性。 目前对骨碎补总黄酮的研究主要在抗炎、抑 制疼痛等方面。同时黄酮也是一种很强的抗氧化 剂，可有效清除体内的超氧阴离子自由基，这种 抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻 止癌症的发生。
骨碎补总黄酮的抗氧化活性研究
黄酮清除O2-· 自由基能力的测定
采用邻苯三酚自氧化法 取 50 mmol/L Tris-HCI 缓冲溶液(pH=8.2)4.5 mL ，与 4.1 mL 蒸馏水混匀后在 25 ℃水浴中保温 20 min ，分别加入 0.1 mL 的不同浓度的黄酮样品液， 取出后立即加入在 25 ℃预热过的 3 mmol/L 邻苯三 酚 0.3 mL ，迅速摇匀后倒人比色杯， 420 nm 下测 定吸光度A i 。以蒸馏水为空白作为对照，测定吸光 度A0 。 清除率的计算： 清除率（%）=( A0-Ai)/A0×100% 式中：A0以蒸馏水为空白实验的吸光度； Ai为加入不同浓度黄酮粗提取液的吸光度。
提取温度对提取率的影响
4.0
3.5
总 黄酮含量 (%)
3.0
2.5
2.0
40
50
60
70
80
90
提取温度 (℃)
图2 提取温度与总黄酮含量的关系曲线
由图2可知：40℃到60℃总黄酮含量有较大的增长, 但60℃到 90℃黄酮含量减小。而60 ℃时总黄酮含量最大。故最佳提取温度 为60℃。
料液比对提取率的影响
比较左表中 4 因素的 R 值的大小，可以看出A因素， 即乙醇浓度为最重要因素。 四因素对黄酮提取量影响 的主次顺序为乙醇浓度>浸 提时间 > 浸提温度 > 料液比， 并且最佳的提取工艺条件 为：乙醇浓度 60% 、料液 比1:30、提取时间3 h、提 取温度 60 ℃，即 A 1 B 2 C 3 D 2 。
3.3 3.2 3.1
总 黄酮含量 (%)
3.0 2.9 2.8 2.7 2.6 2.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
提取时 间 (h)
图4 提取时间与总黄酮含量的关系曲线 由图 4 可知：黄酮含量随着提取时间的增加而增大，当超过 3 h时，总黄酮含量反而降低。故选用3 h为宜。
正交试验结果