初始污染菌检验规程知识讲解
成品初始污染菌检验规程1
成品初始污染菌检测操作规程1、目的：对产品初始污染菌检测的方法做出指导，正确操作以保证实验结果的可靠性和准确性。
检验依据：GB/T 19973.1 EN ISO 11737-12、试用范围：用于检测产品的成品、半成品、部件、原材料、及其内包装袋上的活菌数。
3、职责：实验室操作人员负责操作。
4、试验前准备4.1 按包装说明营养琼脂培养基的配制；4.2与供试液接触的所有器具及制备好的营养琼脂培养基一并放入高压蒸汽灭菌器115℃持续30min,待灭菌器冷却后连同抽取的供试品一并放入无菌室内,启动工作台风机,开紫外线灯30min.5.供试液制备及接种5.1内腔供试液制备：气管插管、喉罩气道导管、鼻氧管、呼吸回路管等管路：在无菌条件下向每套管路的内腔注入浸提介质各20ml,作为供试液,反复荡洗5次,然后将每套管路内腔内的供试液汇集到一无菌具塞试剂瓶内,待混匀后在从瓶内各抽取1ml供试液分别加入10个无菌的空平皿内,最后在将灭了菌凉至45℃的熔化营养琼脂培养基倾注于已加入供试液的平皿中,每平皿中加入培养基量为15-20ml。
作为1：1的供试液。
注气筒：每支注射器抽取灭菌生理盐水至公称容量，振摇5次，汇集到一无菌具塞试剂瓶内,待混匀后在从瓶内各抽取1ml供试液分别加入10个无菌的空平皿内,最后在将灭了菌凉至45℃的熔化营养琼脂培养基倾注于已加入供试液的平皿中,每平皿中加入培养基量为15-20ml。
作为1：1的供试液。
5.2外部供试液制备：按产品外表面积每10cm2用1mL的灭菌生理盐水冲洗，作为1：1的供试液。
用棉拭子在待检产品表面往返涂抹10次后，将棉试子放入10ml灭菌生理盐水的试管中,将试管震打80次混匀作为供试液,然后再分别取1ml供试液放入2个无菌的空平皿内,最后在将灭了菌凉至45℃的熔化营养琼脂培养基倾注于已加入供试液的平皿中,每平皿中加入培养基量为15-20ml.将所取10套供试品分别按上述方法进行供试液制备及接种。
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。
第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3生物负载测定方法A.1概要A.1.1生物负载测定，可使用不同的方法内容。
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书一、引言在日常生活和工业生产中，微生物污染是一个不可忽视的问题。
特别是在食品加工、制药、卫生保健和医疗设施等领域，微生物污染可能对人体健康造成严重影响。
因此，对于这些领域中的设施和设备进行初始污染菌检测至关重要。
本指导书旨在提供一份详细的指南，以帮助进行有效的初始污染菌检测。
二、定义1. 初始污染菌：指在设施和设备投入使用之前，存在于环境中的微生物菌群，可能对人体健康产生影响的细菌、真菌、病毒等。
2. 初始污染菌检测：是通过采集、分离和鉴定设施和设备表面的微生物来评估其是否受到初始污染的检测方法。
三、初始污染菌检测的步骤1. 准备工作在进行初始污染菌检测之前，需要做好以下准备工作：- 确定检测的目标区域：根据需要，确定需要检测的设施和设备区域。
- 收集必要的工具和材料：包括培养基、采样棉签、橡胶手套、消毒剂等。
- 清洁检测区域：确保待检测的区域清洁整齐，以减少外界污染的干扰。
2. 采样- 选择合适的采样方法：根据不同的设施和设备，选择合适的采样方法，常见的包括印迹法、刷子法、划线法等。
- 采样过程中的注意事项：确保采样过程中的卫生条件，佩戴橡胶手套，并在每个采样点上更换新的采样棉签，以避免交叉污染。
- 采样点的选择：根据设施和设备的特点，选择具有代表性的采样点，如接触频繁的表面、接口和难以清洁的区域。
3. 分离与鉴定- 样品处理：将采集到的样品，按照合适的程序进行处理，包括加入适量的培养基，进行可行菌总数的分析。
- 培养与鉴定：将样品在适当的温度和湿度条件下进行培养，待细菌或真菌生长形成菌落后，再通过各种常见鉴定方法（如形态学观察、生化试验、分子生物学技术等）来鉴定菌落的种类。
- 数据记录与分析：将分离鉴定得到的数据记录下来，进行统计和分析，了解初始污染的菌群组成和水平。
四、初始污染菌检测结果的评估与应对1. 结果评估根据初始污染菌检测结果，可以对设施和设备的初始污染情况进行评估。
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书
一、引言
污染菌是指存在于环境中、能够引起食品、水、土壤等特定物质污染的微生物菌种。
这些污染菌对人类健康和环境质量构成潜在威胁。
为了保障公众健康和环境平安，进行初始污染菌检测是必要的。
二、目的
本指导书的目的是提供一个简明的初始污染菌检测流程，以确保检测结果的准确性和可靠性。
通过采用合理的检测方法和技术，有助于及早发现并控制可能存在的污染源，以保护公众的健康和环境的可持续发展。
三、检测方法
1. 样品采集
a. 样品采集前，请确保操作者严格遵守个人卫生要求，包括洗手、穿戴一次性手套等，并准备好干净的采样容器。
b. 根据具体的检测目的和样品类型，选择合适的采集方法。
例如，对于食品样品，可以使用无菌勺子、无菌容器等进行采集。
c. 采集样品时，应避免污染，尽量避免触摸容器内壁，同时避免与外界环境接触。
2. 样品处理和制备
a. 样品采集后，尽快将样品送至实验室进行处理和制备。
b. 根据具体的检测要求，进行样品的预处理，如去除杂质、负离子等。
c. 样品制备过程中，请注意避免交叉污染，使用一次性无菌工具、器皿等进行操作。
3. 检测方法选择
a. 根据检测目标，选择适当的检测方法。
常见的初始污染菌检测方法包括培养法、荧光定量PCR法等。
b. 对于食品等需要进行快速检测的样品，可以选择快速检测方法，如基于抗原-抗体反应原理的快速检测方法等。
《初始污染菌检测》课件
新技术应用
自动化技术
利用机器人和自动化设备进行样 品处理和检测，提高检测效率和
准确性。
生物技术
利用基因组学、蛋白质组学等技术 手段，对初始污染菌进行更精确的 检测和鉴定。
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术提高检测 灵敏度和特异性，实现痕量污染物 的快速检测。
检测标准与规范
制定统一的检测标准
建立全球通用的初始污染菌检测标准，确保检测结果的准确性和 可比性。
新。
分享最佳实践
分享各国在初始污染菌检测方面 的最佳实践和经验，提高全球检
测水平。
感谢您的观看
THANKS
提供食品卫生教育和培训，以提 高员工的食品卫生意识和技能。
医疗和制药行业的管理
制定严格的药品和医疗设备管 理程序，确保其安全性和有效 性。
定期检查药品和医疗设备的存 储和使用情况，以确保其符合 法规和标准。
提供药品和医疗设备管理和使 用的培训和教育，以提高员工 的意识和技能。
05
初始污染菌检测的未来发 展
02
初始污染菌的来源与种类
空气传播
空气中的微生物
空气中的细菌、病毒、霉菌等微生物是初始污染菌的来源 之一。这些微生物可随空气流动而传播，污染食品生产环 境。
空气传播的途径
空气传播是初始污染菌的主要传播途径之一，尤其是在食 品加工环境中，由于人员流动、通风设备的使用等，使得 空气中的微生物容易附着在食品上。
食品和水中的细菌、病毒、霉菌等微 生物也是初始污染菌的来源之一。这 些微生物可能来自于原料本身或是在 加工过程中污染。
控制措施
为了降低食品和水源中的初始污染菌 ，食品加工企业应加强原料检验和质 量控制，定期进行水质检测和处理， 加强食品加工过程的卫生管理。
污染菌
溶液 水中的浓度 应用
缓冲的蛋白胨水溶液 Auffered peptone water
0,43 %氢氧化钠 sodium Bhloride
0,1% 蛋白胨 peptone
通用
0,067 M 磷酸 phosphate
林格氏溶液
Balgon Ringer
1/4 强度
溶解藻酸钙棉拭
Dissolution of BalBium alginate swaAs
议考虑方法中的变量和控制这些变量的途径。例如，对一给定的方法，可以通过延长时间或调整 机械搅动的特性来增加微生物的回收。 A.2.1.6 有些处理方法可能会分解待测产品(例如碎解、袋蠕动和涡旋)。分解的材料会给微生 物计数造成困难，这时则需要进行其他处理，如将分解的材料从洗提液中分离出来。应注意保证 所得到的计数具有代表性。 A.2.1.7 应尽力尽快将试验样品移至试验室。如果必须要推迟转送，试验样品的保存条件应能 避免微生物的丢失或改变。应规定贮存的最长时间。干燥可能是微生物数量减少的重要原因，所 以在选择贮存条件和贮存时间时应加以考虑 A.2.2 获取方法 A.2.2.1 袋蠕动 A.2.2.1.1 将试验样品和一已知体积的洗脱液包封于一无菌胃型袋中开动往复式搅拌，使洗脱液 穿过并环绕试验样品。 A.2.2.1.2 应规定处理的时间长度。 A.2.2.1.3 该方法因为使用了相对大量的洗脱液，所以可能会生成微生物浓度较低的悬浮液。如 可行，洗脱液应予过滤处理。 A.2.2.2 搅动 (机械或手工) A.2.2.2.1 将试验样品浸于装有已知体积洗脱液的适宜器皿中，并用机械搅拌器(往复式、环绕 式或手腕作用式)进行搅动。也可使用手工搅动，但其效力会因操作人员而异。 A.2.2.2.2 应规定搅动的时间和频率。 A.2.2.2.3 可以加人一定大小的玻璃珠来增加表面磨损以提高回收效率玻璃珠的大小以及搅动 频率和时间不应导致过热和/或对微生物造成破坏。 注：加人玻璃珠会增加微生物可附着的表面积。 A.2.2.4 冲洗 A.2.2.4.1 让洗脱液通过试验样品的内腔。可以靠重力或泵来使液体流动。另外还可将洗脱液充 人产品中，夹住并抖动。 A.2.2.4.2 应规定器械与洗提液的接触时间、冲洗速度和液体体积。 A.2.2.4.3 设备结构和内腔大小可能限制从表面彻底取下生物体所需的力的大小。 A.2.2.5 搅切(碎解) A.2.2.5.1 将试验样品浸于装有已知体积洗提液的适宜容器中。在规定的时间内进行搅切。 A.2.2.5.2 搅切时间取决于试验样品和搅切器，但不宜过热，以免会引起洗脱液过热和对微生物 造成破坏。 A.2.2.5.3 该方法能将试验样品分割成足够小，以便能用适当的方法对微生物计数。 A.2.2.6 擦拭 A.2.2.6.1 含有可吸收取样材料的棉拭子通常被固定于杆或把手上。样品材料可以是也可以不 是可溶性的。 A.2.2.7.2 通常的使用方法是用缓冲液或液体培养基湿润棉拭，用棉拭擦拭界定好的取样表面。 在有些情况下，可以先湿润样品表面，然后用干棉拭擦拭，这样可以提高回收效率。随后将棉拭 放至缓冲溶液或液体培养基中，并搅动以从棉拭上取下微生物。另外，有时也可用可溶性棉拭，
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程
背景介绍：
在实验室实验过程中，初始污染菌检验是非常重要的步骤。
初始污染菌指的是
空气、水、试剂或其他材料中存在的微生物。
检验规程的制定能够帮助实验室准确检测和控制初始污染菌的存在，确保实验结果的准确性和可靠性。
检验标准：
初始污染菌检验应符合国家相关标准要求，例如《实验室建设与管理规范》中
对于实验室环境洁净度的规定。
检验过程中应注意保持环境清洁，严格按照检验程序进行操作，确保检测结果的准确性。
检验步骤：
1.准备工作：检验前应检查所需试剂、工具和设备是否齐全，确保实
验室环境干净整洁。
2.取样：根据检验对象的不同，采取相应的取样方法，避免外界污染
的介入。
3.样品处理：对样品进行适当处理，如过滤、稀释等，以便得到合适
的实验样品。
4.培养：将样品接种在适当的培养基上，并在合适的环境条件下培养，
观察细菌的生长情况。
5.检测分析：通过显微镜观察细菌的形态特征，或进行生物学、生化
等相关检测，确定是否存在初始污染菌。
6.记录结果：将检验结果详细记录，包括检测方法、结果数据、存在
问题等，便于回顾和分析。
结论与建议：
初始污染菌检验是确保实验室环境洁净度和实验结果准确性的重要步骤。
在检
验过程中，应严格按照规程操作，保持实验样品的完整性和准确性。
实验室应建立健全的质量管理体系，加强对初始污染菌的监测和控制，不断优化检验方法，提高检测效率和准确性，确保实验室的质量与信誉。
初始污染菌检验规程
A.3.1接触板
A.3.1.1接触板或玻璃片可用于将凝固的培养基放在样品表面上，使存活微生物能附着在培养基表面，然后再培养接触板或玻璃片，至形成可以计数的菌落。
A.3.1.2该系统的优点在于易于使用，结果与凝固的培养基的接触表面直接相关。
A.3.1.3表面上天然集聚的细胞群、菌落在琼脂介面散布、琼脂干燥、可能存在的厌氧菌等都是潜在的不利因素。
A.2.1.6有些处理方法可能会分解待测产品(例如碎解、袋蠕动和涡旋)。分解的材料会给微生物计数造成困难，这时则需要进行其他处理，如将分解的材料从洗提液中分离出来。应注意保证所得到的计数具有代表性。
A.2.1.7应尽力尽快将试验样品移至试验室。如果必须要推迟转送，试验样品的保存条件应能避免微生物的丢失或改变。应规定贮存的最长时间。干燥可能是微生物数量减少的重要原因，所以在选择贮存条件和贮存时间时应加以考虑
A.4.2.2通常需要一真空或正压(有些情况下)源。应注意避免负压过大，这会引起滤膜变形或损坏。
A.4.2.3进行培养时，滤膜可以放在琼脂表面或放在浸泡了营养媒介的吸水纱布垫上。滤膜表面上形成的菌落可以计数，也可从滤器上分离出来进行定性。A.4.2.4膜过滤尤其适用于微生物浓度较低的悬液。
A.4.2.5从洗提液中取出微生物时，当怀疑液体基质中含有杀灭或抑制微生物时，膜过滤特别适用，先将洗提液中的微生物过滤出来，并可在培养前对滤膜上的微生物进行冲洗。但是有些类型的膜滤器可以吸收或释放抑制微生物生长的物质，所以只使用那些适于给微生物计数的滤膜是很重要的。滤膜和洗提液应相容。
0,1%蛋白胨peptone通用
林格氏溶液
Balgon Ringer1/4强度溶解藻酸钙棉拭
Dissolution of BalBium alginate swaAs
初始污染菌检验操作规程
初始污染菌检验操作规程1.目的测定样品细菌总数可用来判明样品细菌污染的程度，以及生产单位工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对样品进行卫生学评价的综合依据，确定灭菌前产品中微生物的数量和性质，为下一步灭菌提供参考依据。
2.适用范围适用于所有需要消毒灭菌前的产品、洁净车间3．作业条件：3.1无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。
3.2超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。
4．作业方法与步骤4．1制作营养琼脂培养基（参见《培养基制作作业指导书》），培养基需按要求培养16-18H 后，检查无菌生长方可使用。
4．2无菌室洁净度验证4．2．1取3只培养皿在超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好置30～35℃培养48h后检查，3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个4．3产品采集与样品处理（制备供试液）4.3.1用无菌手续称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。
作为1：10供试液。
4.3.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。
保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。
作为1：10的供试液。
4.3.3采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。
4.3.4供试液10倍递减稀释4.3.5待上述供试液自然沉降后取上清液1ml，加入9ml生理盐水，制备1：100的供试液。
制备过程中尽量避免碎片等杂物的混入。
4.4接种检验4.4.1取上述供试液上清液作初始污染菌数检测，取4个培养皿，每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注2个平皿。
4.4.2经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。
以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。
初始污染菌检测
随着时间的推移，相关法规与标准可能会发生变化。检测机构应关注法规与标准的更新 动态，及时调整自己的检测方法和操作规程。
提高检测效率的建议
优化实验流程
采用自动化设备
加强团队合作
通过合理安排实验流程，减少不必要 使用自动化设备进行初始污染菌检测，
的环节和操作，提高检测效率。例如， 可以大大提高检测效率和准确性。例
培训方式
02
采用理论教学和实践操作相结合的方式，确保采样人员能够熟
练掌握相关技能。
培训考核
03
对完成培训的采样人员进行考核，确保其具备从事初始污染菌
检测工作的能力。
03
检测操作流程
采样
采样点选择
根据检测目的和要求，选择具有代表性的采样点，如食品生产车 间、食品加工设备、食品接触表面等。
采样量控制
在实施过程中，持续监测污染菌 的情况，评估措施的有效性，并 根据需要进行调整和改进。
05
注意事项与建议
保证检测的准确性
选择合适的检测方法
根据不同的污染菌种类和检测目的，选择合适的检测方法， 确保准确性和可靠性。
严格控制实验条件
确保实验室环境、设备、试剂等符合相关标准和规定，避 免交叉污染和误差。
定期校准和验证
对检测设备、仪器进行定期校准和维护，确保其准确性和 可靠性。同时，对检测方法进行验证，确保其符合预期的 检测要求。
遵守相关法规与标准
熟悉相关法规与标准
在进行初始污染菌检测时，应熟悉并遵守国家或地区的相关法规与标准，确保检测合法 有效。
遵循操作规程
按照规定的操作规程进行检测，确保数据的准确性和可靠性，同时避免违反相关法规与 标准。
合理安排样品的处理、培养、观察等 如，自动化细菌分离、鉴定设备等。
初始污染菌检测讲义
真菌形态特征
• 霉菌个体形态
霉菌亦称丝状真菌，是在分类学上很不相同的许多真菌的一部分，凡是生长在 营养基质上形成绒毛状、蜘蛛网状或絮状菌丝体的真菌，统称为霉菌，霉菌为真核 微生物，其结构比细菌复杂。
•酵母菌个体形态
酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、 腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一 般为1~5微米′5~30微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。酵母菌具有典型 的真核细胞结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等， 有的还具有微体。
2008年5月
21
第21页，幻灯片共78页
无菌技术
• 实验室安全制度
1.安全通则
2.生物安全 •微生物检验质量控制制度
1.技术培训和考核制度
2.仪器和试剂的校对制度
3.实验记录制度
4.结果质疑和核对制度
5.技术方法的规范制度
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无 菌 技术
•菌 种
•菌种保藏原理
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细菌形态特征
金黄色葡萄球菌的单个菌落在Baird-Parker琼脂平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿 润,直径2～ 3mm。灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈 (沉淀),其外常有一清 晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。
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无菌技术
•无菌操作
基本概念：无菌操作一般是指在无菌环境条件下，使用无菌制品或无
菌器材进行检验或实验的过程中， 能防止微生物污染与干 扰的一种常规操作方法。
操作目的：（1）保证检验物品不被环境中的微生物的污染；
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。
第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3 生物负载测定方法A.1 概要A.1.1 生物负载测定，可使用不同的方法内容。
初始污染菌检验操作规程
初始污染菌检验操作规程方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。
每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。
4.6.3结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。
若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。
初始污染菌检验操作规程目的：本规程的目的是为了测定样品细菌总数，以判断样品细菌污染的程度，并评估生产单位的卫生状况，为下一步的灭菌提供参考依据。
适用范围：本规程适用于所有需要消毒灭菌前的产品和洁净车间。
作业条件：1.无菌检测需要在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。
2.超净台及工作台面必须进行洁净度验证。
作业方法与步骤：1.制作营养琼脂培养基，并按要求培养16-18小时后，检查无菌生长方可使用。
2.进行无菌室洁净度验证。
3.进行产品采集与样品处理，制备供试液。
4.进行供试液的10倍递减稀释。
5.进行接种检验。
6.进行培养。
结果与判定：1.计数方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。
每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。
2.结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。
若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。
菌落计数是食品微生物学检验中常用的方法之一。
在进行菌落计数时，需要注意以下基本规则。
首先，不宜采用菌落层片状生长的平板。
其次，计数符合要求的平板上的菌落，按照公式计算结果。
具体而言，菌数除以每件次（或g）的重量，等于件次或重量（g）。
选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
如果只有一个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数进行报告。
(环境管理)初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。
第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3 生物负载测定方法A.1 概要A.1.1 生物负载测定，可使用不同的方法内容。
(019)初始污染菌检验规程
1、目的通过检验产品的初始污染菌，了解产品在生产过程中受微生物的情况，以便更好地提高产品质量。
2、范围本方法适用于本公司生产的一次性使用静脉输液针（简称：输液针）、一次性使用无菌配药注射器带针（简称：配药注射器）、一次性使用无菌注射器带针（简称：注射器）、一次性使用输液器带针（简称：输液器）、一次性使用袋式输液器带针（简称：袋式输液器）及其配件、无菌产品初始包装等的初始污染菌的检验。
3、依据GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典2010版第二部GB 8368 一次性使用输液器GB/T 19973.1-2005 （ISO 11737-1:1995）医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分:产品上微生物总数的估计GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准4、要求灭菌产品管道类内腔污染菌数：应≤10cfu/件次，外部应≤100cfu/件次；非管道类应≤100cfu/件次；敷料类应≤100cfu/g；消毒产品应≤1000cfu/件次或重量（g），具体见表1。
5 检验方法5.1卵磷脂、吐温80－营养琼脂培养基的配制：成份：蛋白胨 20 g牛肉膏药 3 g氯化钠 5 g琼脂 15 g卵磷脂肪 1 g吐温80 7 g蒸馏水 1000 g制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.4加入琼脂，121℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。
5.2 样品采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。
5.3 供试液制备5.3.1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1：10的供试液。
5.3.2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1：10的供试液。
5.3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2，加入灭菌生理盐水100ml。
初始污染菌检查PPT演示文稿
产品初始污染菌数限值：
灭菌产品管道类内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次，非管道类≤100cfu/件次，敷料类≤100cfu/g；消毒产品≤1000cfu/件次或重量（g）
初始污染菌检测
供试液制备
推荐的制备方法
样 品 制 备
供试液制备
梯度稀释
加 样
用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入100ml灭菌生理盐水中，不时振摇。作为1：10供试液。
细菌计数
先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏（可辅助菌落计数器）记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数（每个稀释度的5个平板值，相加后除以5）。 若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。
菌落特征
⑴ 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、 淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落为红色） ⑵ 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。 ⑶ 大小差异很大。
平
皿
号
细
菌
数
平行
行间
1：10
1:100
阴性 对照
37℃48h菌落计数
37℃48h菌落计数
初始污染菌检测
梯度稀释
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
供试液
9mlNacl
9mlNacl
1:10
1:100
1:1000
检验方法
将每样取5份平行样（取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……）
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初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程
1. 目的
检测产品、原料、辅料实际带菌（活的微生物群）的数目。
2. 适用范围
适用于本公司产品、原料、辅料的初始污染菌的检测。
3.职责
由质检部负责执行实施。
4.技术要求
产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g
5.引用标准
GB 15979-2002_一次性使用卫生用品卫生标准
中华人民共和国药典（2015版）
GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法
6.试剂和培养基
6.1洗脱液 0.9%Nacl
称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充分搅拌直至完全溶解，灭菌备用。
6.2胰蛋白胨大豆琼脂培养基
取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为7.3±0.2，
灭菌分装。
6.3玫瑰红钠琼脂培养基
玫瑰红钠琼脂培养基31.5 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调节PH为6.0±0.2，
灭菌分装。
7.仪器设备
锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球
8.操作方法
8.1样品处理
8.1.1无菌称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。
8.1.2对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。
保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10的供试液。
8.2接种
8.2.1需厌氧菌
取制备好的供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。
取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。
8.2.1霉菌
取制备好的供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基的培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。
取一支有培养基的空白平皿做阴性对照。
8.3培养
需厌氧培养基置于37℃培养3d ，霉菌培养置于28℃培养5d
9.观察计数
达到培养时间后，观察阴性对照，若阴性对照有菌，则实验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数，记录每个平皿菌落数
10.结果计算与报告
10.1公式
污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数/克重
10.2菌落计数基本规则
选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范
围。
菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。
大于
100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计
算。
在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。
如果样品菌落总数超过标准的规定，则按10N逐批稀释
10.3填写试验记录，报告结果。