不同冻干保护剂在外泌体储存中的研究
重组猪抑制素蛋白冻干保护剂的筛选
重组猪抑制素蛋白冻干保护剂的筛选李辉+果双双+施振旦摘要：为提高蛋白质的稳定性，便于运输和延长储存时间，冷冻干燥是目前公认最可行的技术之一。
通过对猪重组抑制素蛋白冷冻干燥后的外观、色泽、复水性以及SDS-PAGE电泳检测，对27种常用冻干保护性物质进行筛选。
结果表明，可溶淀粉和β-环糊精的保护效果较好，表现在外形饱满无坍缩、色泽细腻白亮、复溶后无沉淀、电泳检测发现蛋白条带无降解。
将筛选出的2个保护剂制备成冻干样品放置于37 ℃烘箱中，进行加速稳定性试验。
结果表明，在37 ℃放置4个月后，冻干蛋白样品保持形态色泽不变，复溶后无沉淀，蛋白无降解现象。
关键词：重组猪抑制素；冷冻干燥；冻干保护剂；复水性；稳定性Q51文献标志码： A：1002-1302（2016）04-0291-03抑制素是一种主要由雌性动物卵泡颗粒细胞和雄性动物睾丸支持细胞分泌的糖蛋白激素[1]，主要通过负反馈作用抑制垂体FSH、LH的分泌[2]。
通过主动或被动免疫抑制素，可促进垂体FSH、LH分泌，从而促进动物的繁殖活动[3-6]。
因此在实际生产中可以通过注射重组抑制素的方法，利用动物的免疫机能，降低体内抑制素水平，提高动物生产力[7-8]。
笔者所在实验室在前期研究的基础上进行了重组猪抑制素蛋白的大规模发酵制备研究，已经制备了大量纯度较高重组蛋白。
但是作为一种生物制品，应用于生产中尚存在溶液性蛋白稳定性差、远距离运输和储存过程中受温度影响较大等缺陷[9]，因此，常通过冷冻干燥的方法制成冻干品以避免[10]。
冷冻干燥的基本原理是将蛋白溶液在低温下冻结，真空条件下干燥而形成固体制剂。
干燥过程又分为2步：移除结晶水的初步干燥和移除结合水的二次干燥[11]。
然而冷冻干燥操作本身也会影响蛋白质的稳定性，具体在于冷冻过程和干燥过程。
在冷冻过程中，主要是冰晶的形成、离子强度的增加、pH值的改变和相分离等影响因素[12]。
而在干燥过程中，尤其是在二次干燥即移除结合水的过程中，蛋白的水化膜被破坏，导致蛋白质表面的氢键遭到破坏，引起蛋白质天然结构发生改变，从而影响电荷分布，导致蛋白变性凝聚[9]。
《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》范文
《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》篇一一、引言随着生物医学研究的不断深入，对大鼠皮肤等组织的保存与活性的维持技术成为了重要的研究课题。
在许多研究中，由于需要对皮肤组织进行长时间保存和运输，而传统的保存方法如低温保存并不能满足所有的需求。
因此，利用冷冻技术来保存大鼠皮肤成为了一种常见的选择。
然而，冷冻过程中会因为细胞内外的冰晶形成导致细胞损伤，因此选择合适的冷冻保护剂就显得尤为重要。
本文旨在探讨不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响。
二、材料与方法1. 材料实验选用健康的大鼠作为研究对象，实验所使用的冷冻保护剂包括二甲基亚砜（DMSO）、甘油、丙二醇等。
2. 方法将大鼠的皮肤样本进行适当的处理后，分别置于不同的冷冻保护剂中。
将含有皮肤样本的冷冻保护剂液氮罐中储存一段时间后进行复温。
比较复温后大鼠皮肤的活性、细胞结构等指标，分析不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响。
三、实验结果1. 不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响实验结果显示，使用DMSO作为冷冻保护剂的大鼠皮肤活性较好，其存活率相对较高，组织结构完整。
相比之下，使用其他冷冻保护剂的大鼠皮肤活性则较低，且部分出现细胞损伤现象。
2. 复温后的大鼠皮肤指标比较在复温后的大鼠皮肤指标比较中，DMSO组的大鼠皮肤在形态学上表现出了较好的恢复情况，如血管、毛囊等结构清晰可见。
而其他组别的大鼠皮肤则出现了不同程度的细胞损伤和结构破坏现象。
四、讨论实验结果表明，DMSO作为冷冻保护剂在保存大鼠皮肤活性方面具有较好的效果。
这可能是由于DMSO能够有效地降低冰晶的形成速度和数量，从而减少对细胞的损伤。
此外，DMSO还具有较好的渗透性，能够更好地与细胞内的水分结合，从而起到更好的保护作用。
相比之下，其他冷冻保护剂在实验中的效果则较差。
这可能是因为这些物质对于冰晶的形成抑制效果不佳或者与细胞内水分结合能力较差，导致对细胞的保护作用有限。
当然，这并不意味着其他冷冻保护剂没有应用价值，针对不同的组织和实验条件，选择合适的冷冻保护剂仍需进一步研究。
一种组合型外泌体保护剂及冷冻干燥制备方法
一种组合型外泌体保护剂及冷冻干燥制备方法随着生物科技的发展，外泌体研究已成为生命科学领域的一大热点。
外泌体作为一种具有广泛应用前景的纳米级载体，其在药物递送、生物成像和治疗等方面具有重要价值。
本文将介绍一种组合型外泌体保护剂及其冷冻干燥制备方法，以期为相关领域的研究提供参考。
一、组合型外泌体保护剂概述组合型外泌体保护剂是一种新型的外泌体稳定化处理剂，其主要通过多种成分的协同作用，提高外泌体在储存、运输和使用过程中的稳定性。
该保护剂由以下几种成分组成：1.天然聚合物：如透明质酸、壳聚糖等，具有良好的生物相容性和生物可降解性，能够保护外泌体免受机械损伤。
2.合成聚合物：如聚乙二醇（PEG）等，可通过形成保护层，提高外泌体的稳定性。
3.抗氧化剂：如维生素C、维生素E等，能够清除自由基，降低氧化应激对外泌体的影响。
4.其他辅助成分：如稳定剂、缓冲剂等，有助于维持外泌体的结构和功能。
二、冷冻干燥制备方法冷冻干燥是一种常用的外泌体保存和运输方法，通过以下步骤实现：1.预处理：将外泌体与组合型外泌体保护剂混合，使外泌体表面形成保护层。
2.冷冻：将预处理后的外泌体溶液置于低温环境下，使其迅速冷冻成固体。
3.干燥：在真空条件下，通过升华作用将冷冻外泌体中的水分去除。
4.封装：将干燥后的外泌体粉末封装于无菌容器中，以备后续使用。
三、优势与应用前景1.优势：组合型外泌体保护剂及冷冻干燥制备方法具有以下优势：a.提高外泌体的稳定性，降低储存和运输过程中的损失。
b.适用于多种外泌体来源，具有良好的通用性。
c.制备过程简单，易于操作。
d.无需添加有机溶剂，减少对环境的影响。
2.应用前景：该方法可广泛应用于外泌体在药物递送、生物成像和治疗等领域的应用，为外泌体研究提供有力的技术支持。
总结：本文介绍了一种组合型外泌体保护剂及其冷冻干燥制备方法，该保护剂通过多种成分的协同作用，有效提高外泌体的稳定性。
同时，冷冻干燥制备方法具有操作简便、通用性强等特点，为外泌体研究提供了有力支持。
《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》范文
《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》篇一一、引言随着生物医学研究的不断深入，对于如何有效地进行细胞和组织的冷冻保存成为一项关键的技术。
在此过程中，冷冻保护剂的选择对于保存细胞的活性起着至关重要的作用。
本文旨在探讨不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响，以期为未来的研究提供理论依据和实践指导。
二、材料与方法1. 材料本实验选用了不同种类的冷冻保护剂，包括但不限于二甲亚砜（DMSO）、丙二醇（PG）以及新型的多元醇类冷冻保护剂。
同时，我们选取了健康的大鼠皮肤作为实验样本。
2. 方法（1）将大鼠皮肤样本分为若干组，每组使用不同的冷冻保护剂进行处理。
（2）采用不同的冷冻和解冻条件，观察并记录各组大鼠皮肤的活性变化。
（3）使用特定的生物学和化学方法测定皮肤细胞的活性，并进行统计和分析。
三、实验结果经过对比各组大鼠皮肤样本的活性变化，我们发现在不同的冷冻保护剂和条件下，大鼠皮肤的活性存在显著的差异。
具体结果如下：1. DMSO组：在传统的冷冻和解冻条件下，DMSO组的大鼠皮肤活性相对较低。
这可能是由于DMSO的毒性较高，对细胞造成了损伤。
2. 丙二醇（PG）组：使用PG作为冷冻保护剂时，大鼠皮肤的活性得到了一定程度的保持。
但相比新型的多元醇类冷冻保护剂，其效果稍显逊色。
3. 新型多元醇类冷冻保护剂组：该组的大鼠皮肤在冷冻和解冻后活性保持较好，显示出了明显的优势。
这可能是因为新型的多元醇类冷冻保护剂对细胞的损伤较小，同时具有良好的抗冰晶生成和细胞保护作用。
四、讨论通过实验结果的分析，我们可以得出以下结论：不同种类的冷冻保护剂对大鼠皮肤的活性具有明显的影响。
传统的DMSO和丙二醇虽然在一定程度上可以用于细胞和组织的冷冻保存，但其对细胞的损伤较大，影响了细胞的活性。
而新型的多元醇类冷冻保护剂则具有更好的细胞保护作用和抗冰晶生成能力，能够有效保持大鼠皮肤的活性。
此外，我们还发现，在冷冻和解冻过程中，合理的控制条件也对大鼠皮肤的活性产生重要影响。
保加利亚乳杆菌冷冻干燥保护剂的研究
保加利亚乳杆菌冷冻干燥保护剂的研究
赵斌;张建志;李妍;张列兵
【期刊名称】《中国乳品工业》
【年(卷),期】2013(041)002
【摘要】为获得对保加利亚乳杆菌最佳的真空冷冻干燥保护剂的配方,在以10％脱脂乳为基础保护剂的情况下,采用单因素和正交试验设计,以冻干后的存活率为指标,考察了不同冻干保护剂对保加利亚乳杆菌冷冻干燥的保护效果,获得了最优的保护剂配方,即脱脂乳100 g/L,谷氨酸钠25 g/L,抗坏血酸0.5 g/L,甘油60mL/L,酵母浸粉1 g/L.使用此保护剂配方,保加利亚乳杆菌冻干后的存活率可达60.59％.
【总页数】3页(P10-12)
【作者】赵斌;张建志;李妍;张列兵
【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083
【正文语种】中文
【中图分类】Q935
【相关文献】
1.纳豆制备及冷冻干燥保护剂的筛选和优化研究 [J], 弓玉红;田晶
2.保加利亚乳杆菌冻干保护剂的研究 [J], 严佩峰;豆成林;李建芳
3.保加利亚乳杆菌冻干保护剂保护作用的研究 [J], 蒲丽丽;刘宁
4.植物乳杆菌冷冻干燥保护剂配方优化及耐受性研究 [J], 仇梓冰;于长青;张东杰;王长远
5.肉类发酵菌种真空冷冻干燥保护剂研究进展 [J], 毕雨星;张香美;卢涵;赵晶晶;魏兴芳;卢音音
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不同冻干保护剂对利巴韦林冻干粉针的影响研究
不同冻干保护剂对利巴韦林冻干粉针的影响研究摘要：本实验对不同冻干保护剂对利巴韦林冻干粉针的影响进行研究。
试验结果表明无水乳糖、低内毒素甘露醇、低内毒素甘氨酸均可作为的利巴韦林冻干粉针保护剂。
关键词：冻干保护剂；利巴韦林；研究利巴韦林又名三氮唑核苷、尼斯可等，是广谱强效的抗病毒药物，目前广泛应用于病毒性疾病的防治[1-3] 。
利巴韦林常用于拉萨热、副流感病毒感染、流行性出血热、幼儿呼吸道合胞病毒肺炎乙型流感、单纯疱疹、麻疹、腮腺炎、甲型、水痘、带状疱疹等[4-5] 。
利巴韦林常用剂型有注射剂、片剂、口服液、气雾剂等。
冻干保护是除赋形剂外，给于药物有效成分在冷冻干燥过程及冻干后储存阶段保护药物药效的成分。
常用冻干保护有糖类、白蛋白、聚乙二醇等等。
本实验对不同冻干保护剂对利巴韦林冻干粉针的影响进行研究。
1 仪器与试药AS-01 无油隔膜真空泵（北京优晟联合科技有限公司）；LC3200 四元低压梯度高效液相色谱分析系统新品（安徽皖仪科技股份有限公司）；奥豪斯MB23 基础型水份测定仪（奥豪斯仪器（上海）有限公司）；双通道pH/ 离子计（赛默飞世尔科技水质分析仪器）；RE-501 旋转蒸发仪（深圳市朗诚实业有限公司）；WIGGENS 超声波清洗器（北京桑翌实验仪器研究所）；RephiLe PURIST UV座挂两用超纯水机（上海乐枫生物科技有限公司）；Polyscience 高级数字型制冷/加热型循环水浴（北京五洲东方科技发展有限公司）；WiggensC410 防腐蚀隔膜真空泵（北京桑翌实验仪器研究所）.低内毒素蔗糖（武汉大华伟业医药化工有限公司）、无水乳糖（武汉市合中生化制造有限公司）、低内毒素甘露醇（武汉市合中生化制造有限公司）、低内毒素甘氨酸（武汉大华伟业医药化工有限公司）、海藻糖（武汉市合中生化制造有限公司）。
2 实验2.1 保护剂的选择分别选择低内毒素蔗糖、无水乳糖、低内毒素甘露醇、低内毒素甘氨酸、海藻糖作为保护剂，将药液置于样品皿中，以空样品皿为参比，在预冻温度零下五十五度，保持二十小时；升华干燥阶段升温速率为每分钟零点一摄氏度，升至零下十二度，保持十小时；解吸附干燥阶段，采用三十摄氏度，保持八小时。
《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》范文
《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》篇一一、引言在医学和生物学领域，冷冻保存技术被广泛应用于细胞、组织和器官的保存，以便于长期储存和运输。
然而，在冷冻保存过程中，由于细胞内外的冰晶形成和渗透压变化，可能导致细胞损伤和活性降低。
因此，选择合适的冷冻保护剂对于维持组织活性至关重要。
本文旨在探讨不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响。
二、材料与方法1. 材料实验所需材料包括大鼠皮肤组织、不同种类的冷冻保护剂（如甘油、丙二醇、二甲基亚砜等）、实验设备等。
2. 方法（1）实验分组：将大鼠皮肤组织分为若干组，每组使用不同的冷冻保护剂。
（2）处理过程：将各组大鼠皮肤组织进行冷冻保存处理，记录处理过程中的温度、时间等参数。
（3）活性检测：对各组大鼠皮肤组织进行活性检测，包括细胞增殖、细胞凋亡等指标。
（4）数据分析：对实验数据进行统计分析，比较不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响。
三、实验结果1. 不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响实验结果显示，使用不同冷冻保护剂的大鼠皮肤组织在冷冻保存后，其活性存在显著差异。
其中，使用甘油和二甲基亚砜作为冷冻保护剂的大鼠皮肤组织在冷冻保存后的活性较高，而使用丙二醇作为冷冻保护剂的大鼠皮肤组织活性相对较低。
2. 细胞增殖与凋亡情况通过细胞增殖和凋亡检测发现，使用甘油和二甲基亚砜的大鼠皮肤组织在冷冻保存后，细胞增殖能力较强，凋亡程度较低。
而使用丙二醇的大鼠皮肤组织则相反，细胞增殖能力较弱，凋亡程度较高。
四、讨论冷冻保存技术在生物医学领域的应用广泛，但如何选择合适的冷冻保护剂一直是研究的热点问题。
本研究表明，不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响存在显著差异。
其中，甘油和二甲基亚砜作为冷冻保护剂在维持大鼠皮肤活性方面表现出较好的效果。
这可能与它们能够有效地减少冰晶形成、降低渗透压变化、维持细胞内外环境稳定等有关。
而丙二醇作为冷冻保护剂的效果相对较差，可能需要进一步研究其作用机制和改进方法。
《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》范文
《不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响》篇一一、引言在医学和生物学领域，冷冻保存技术被广泛应用于细胞、组织和器官的保存。
然而，在冷冻保存过程中，细胞和组织的活性往往受到不同程度的损害。
为了保护这些细胞和组织免受冷冻过程中的损伤，冷冻保护剂的使用显得尤为重要。
本文旨在研究不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响。
二、材料与方法1. 实验材料实验选用的材料包括大鼠皮肤组织、不同种类的冷冻保护剂等。
2. 实验方法（1）大鼠皮肤组织获取：选取健康成年大鼠，无菌条件下获取其皮肤组织。
（2）分组：将获取的皮肤组织分为若干组，每组使用不同的冷冻保护剂进行预处理。
（3）冷冻保存：将预处理后的皮肤组织进行冷冻保存。
（4）活性检测：对冷冻保存后的皮肤组织进行活性检测，比较不同组间的活性差异。
三、实验结果1. 不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响通过对比不同组别皮肤组织的活性，我们发现使用特定种类的冷冻保护剂能够显著提高大鼠皮肤的活性。
其中，XX冷冻保护剂的效果最为显著，能够显著提高皮肤组织的存活率和活性。
而其他种类的冷冻保护剂，如YY、ZZ等，虽然也能在一定程度上提高皮肤活性，但效果不如XX冷冻保护剂明显。
2. 数据分析与图表展示我们将实验数据整理成表格和图表，直观地展示了不同冷冻保护剂对大鼠皮肤活性的影响。
通过数据分析，我们可以清晰地看到XX冷冻保护剂在提高大鼠皮肤活性方面的优势。
四、讨论本实验研究了不同冷冻保护剂对冷冻保存大鼠皮肤活性的影响。
实验结果表明，使用特定种类的冷冻保护剂能够显著提高大鼠皮肤的活性。
这一结果对于医学和生物学领域具有重要意义，因为冷冻保存技术的广泛应用使得细胞、组织和器官的保存成为可能。
然而，如何在保证保存效果的同时尽量减少对细胞和组织活性的损害，一直是研究者们关注的焦点。
通过本实验，我们发现XX冷冻保护剂在提高大鼠皮肤活性方面具有明显优势，这为今后的研究提供了新的思路和方向。
此外，本实验还存在一定的局限性。
不同保护剂影响植物乳杆菌冻干菌粉发酵活力的研究
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2019.12.004
食品研究与开发
云ood Research And Developme 卷第 12 期
不同保护剂影响植物乳杆菌冻干菌粉 发酵活力的研究
赵延胜1，2，吴超1，王慧2，周洪斌2，董英1，* （1. 江苏大学 食品与生物工程学院，江苏 镇江 212013；2. 镇江出入境检验检疫局 检验检疫综合
Effect on the Fermentation Activity of Freeze-dried Lactobacillus plantarum by Cryoprotectant ZHAO Yan-sheng1，2，WU Chao1，WANG Hui2，ZHOU Hong-bin2，DONG Ying1，*
（1. School of Food and Biological Engineering，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，Jiangsu，China； 2. Inspection and Quarantine Technology Center，Zhenjiang Entry-exit Inspection Quarantine Bureau， Zhenjiang 212000，Jiangsu，China）
粤遭泽贼则葬糟贼：The influences on the viable count of freeze-dried Lactobacillus plantarum CGMCC 6016（L. P. dy1）during storage by different cryoprotectant were studied. And the fermentation activity of freeze-dried L. P. dy1 affected by cryoprotectant was analyzed with the flow cytometry method （FCM）. The results were as follows： 10 % of inulin，22.4 % of inulin，inulin composite protective agent and skim milk composite protective agent were used as cryoprotectant to protect the freeze-dried L. P. dy-1. The viable count of L. P. dy-1 was still higher than 1010 CFU/g after 8 months stored in -20 益，while only the viable count of inulin composite protective agent group kept a level higher than （0.94依0.17）伊1010 CFU/g after 8 months stored in 4 益. The freeze-dried LAB with cryoprotectant could keep high acid production activity storage in -20 益 for 6 months and 4 益 for 4 months respectively. Among the cryoprotectant groups，the cell activity of the inulin composite protective agent group has the slowest decline. The correlation degree R2 between the results of pH value and FCM was 0.77，which indicated that FCM was suitable for the study of cell activity of freeze -dried L. P. dy -1. Compared with the freeze -dried L. P. dy -1 added with skim milk composite protective agent，the bacteria prepared with inulin cryoprotectant could keep a higher fermentation activity and similar cell proliferation activity with the direct activation group.
一种外泌体冻干保护剂和冻干粉复苏液及其应用[发明专利]
![一种外泌体冻干保护剂和冻干粉复苏液及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9e7ca911abea998fcc22bcd126fff705cc175c85.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202011146426.X(22)申请日 2020.10.23(71)申请人 广州佳为生物科技有限公司地址 510420 广东省广州市白云区永平街解放庄路11号8320房(72)发明人 王治元 方燕海 (74)专利代理机构 广州市华学知识产权代理有限公司 44245代理人 郭炜绵(51)Int.Cl.A01N 1/02(2006.01)C12N 5/0775(2010.01)(54)发明名称一种外泌体冻干保护剂和冻干粉复苏液及其应用(57)摘要本发明公开了一种外泌体冻干保护剂和冻干粉复苏液及其应用，冻干保护剂由糖和表面活性剂组成，复苏液包括生理盐水、羟乙基淀粉和脂质体，其中羟乙基淀粉占复苏液0.5‑2.5％，脂质体占复苏液1‑20％。
本发明在复苏液中添加了和囊泡膜具有相似结构的脂质体，用于破损囊泡的修复。
这一过程既遵循了生物膜流动性的特征，又有效的对外泌体囊泡膜结构进行了修复，有利于保持外泌体的活性。
权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 112205389 A 2021.01.12C N 112205389A1.一种外泌体冻干保护剂，其特征在于是由糖和表面活性剂按质量比1.00:(0.05-0.45)组成；所述的糖是蔗糖、海藻糖、甘露醇或山梨醇中的一种以上；所述的表面活性剂为吐温和/或DMSO。
2.根据权利要求1所述的外泌体冻干保护剂，其特征在于：所述的吐温为吐温80。
3.权利要求1或2所述的冻干保护剂在外泌体冻干粉制备中的应用。
4.一种外泌体冻干粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)按0.2-1.2g/10ml外泌体的比例，向外泌体中加入权利要求1或2所述的冻干保护剂，0-4℃孵育1h，再置于37℃下平衡0.5h，制得外泌体冻干液；(2)将外泌体冻干液置于预冻温度-80℃下预冻12h，再置于冷冻温度-50℃、10Pa下冷冻干燥24h，制得外泌体冻干粉。
一种外泌体冻存保护液及其制备方法[发明专利]
![一种外泌体冻存保护液及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/feecbe013868011ca300a6c30c2259010302f340.png)
(19)国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 202011560330.8(22)申请日 2020.12.25(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 112514892 A(43)申请公布日 2021.03.19(73)专利权人 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司地址 510300 广东省广州市开发区广州国际生物岛螺旋四路一号生产区第五层502单元专利权人 广东国科细胞科技有限公司(72)发明人 陈海佳 王小燕 姜交华 刘志敏 陈东煌 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限公司 11227专利代理师 潘颖(51)Int.Cl.A01N 1/02(2006.01)(56)对比文件CN 108635372 A ,2018.10.12CN 107312799 A ,2017.11.03CN 110840915 A ,2020.02.28CN 111226902 A ,2020.06.05US 2019231694 A1,2019.08.01审查员 侯锡爱(54)发明名称一种外泌体冻存保护液及其制备方法(57)摘要本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种外泌体冻存保护液及其制备方法。
该外泌体冻存保护液包括：含NaCl、KCl的Tris ‑HCl缓冲溶液、葡萄糖、CD ‑Lipid浓缩液、人血清白蛋白溶液、聚乙烯醇。
本发明提供的外泌体冻存保护液的配比合理，成分简单，组成明确，加入所述冻存保护液的外泌体能在‑20℃的低温条件下，稳定保存6‑12个月，其生物学活性能维持其最大活性的90％；本发明冻存保护液中所有组分的构成明确，可以工业化生产，原材料价格便宜、易获取，具有低成本优势。
权利要求书1页 说明书5页 附图2页CN 112514892 B 2022.06.14C N 112514892B1.一种外泌体冻存保护液，其特征在于，包括：含NaCl、KCl的Tris ‑HCl缓冲溶液、葡萄糖、CD ‑Lipid浓缩液、人血清白蛋白溶液、聚乙烯醇；以重量份计，外泌体冻存保护液中各组分的用量为：2.根据权利要求1所述的外泌体冻存保护液，其特征在于，以重量份计，外泌体冻存保护液中各组分的用量为：3.根据权利要求1所述的外泌体冻存保护液，其特征在于，所述含NaCl、KCl的Tris ‑HCl 缓冲溶液中，Tris ‑HCl的摩尔浓度为10～50mM，NaCl的摩尔浓度为80～200mM，KCl的摩尔浓度为1～5mM；所述含NaCl、KCl的Tris ‑HCl缓冲溶液的pH值为7.0～8.0。
β-葡萄糖苷酶冻干保护剂的研究
β-葡萄糖苷酶冻干保护剂的研究陈艺;陶治玮;陈文清【摘要】β-葡萄糖苷酶参与生物体的糖代谢,对维持生物体正常生理功能起着重要作用.采用单因素试验和正交试验,对β-葡萄糖苷酶真空冷冻干燥保护剂配方进行筛选和优化.得到冻干保护剂最佳配方为乳糖6％、蔗糖7％、海藻糖7％,甘露醇2％.在此条件下,经过真空冷冻干燥,β-葡萄糖苷酶的残余酶活可达80.25％.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)009【总页数】4页(P109-112)【关键词】β-葡萄糖苷酶;保护剂;正交试验;真空冷冻干燥【作者】陈艺;陶治玮;陈文清【作者单位】四川大学建筑与环境学院,四川成都610065;四川大学建筑与环境学院,四川成都610065;四川大学建筑与环境学院,四川成都610065【正文语种】中文【中图分类】Q814β-葡萄糖苷酶，属于水解酶类，又称β-D-葡萄糖苷水解酶，别名龙胆二糖酶、纤维二糖酶和苦杏仁苷酶，是纤维素分解酶系中重要组成成分之一。
它属于纤维素酶类，能催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖［1-2］。
1837年，Liebig和Wohler首次在苦杏仁中发现。
后来的研究发现，β-D-葡萄糖苷酶存在于自然界许多动植物、微生物及细菌体内，参与生物体的糖代谢，对维持生物体正常生理功能起着重要作用［3］。
因此对β-葡萄糖苷酶的研究具有重要的理论和实用价值。
真空冷冻干燥技术广泛应用于食品、医药、生物等各个领域［4］。
为了使酶或其他一些生物活性材料得以稳定的保存。
冻干是人们常用的一种方法。
酶经过冷冻干燥后不易变质、可长期储存；易复水再生；有利于活性的保持［5］。
但冻干过程牵涉到冷冻和脱水两个过程［6］，不可避免地会带来酶活性的损失及酶的损伤、变性。
多羟基化合物，糖类，聚合物等具有独特的保护生物活性材料的功能，在冷冻干燥时加入适宜的保护剂，可以在很大程度上减轻或避免冷冻干燥对细胞及酶等生物大分子带来的损伤［7］。
不同冷冻保护剂对外周血干细胞保存的研究
不同冷冻保护剂对外周血干细胞保存的研究张俊萍;石远凯;何小慧;韩晓红;刘鹏;杨建良【期刊名称】《癌症（英文版）》【年(卷),期】2001(020)010【摘要】目的:探索冻存外周血干细胞(peripheral blood stem cell，PBSC)的最佳冷冻保护剂组合和最大细胞浓度.方法:将冷冻保护剂二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)羟乙基淀粉(hydroxyethyl starch,HES)、人血清白蛋白(human serum albrin,ALb)及自体血浆(auto plasma)按不同比例组成 3组冷冻保护剂,A组:5% DMSO+ 6% HES+ 4% ALb；B组:5% DMSO+ 6% HES+ auto PLASMA；C组:5% DMSO+ 4% Alb. 冻存 PBSC的细胞浓度分别为1×108/ml、2×108/ml 和4×108/ml 3个梯度.比较 3组不同冷冻保护剂对不同细胞浓度的 PBSC的冻存效果.进行冻存前后粒单系集落形成单位集落形成能力(colony forming unit Granulocyte macrophage)和爆式红系集落形成单位(CFU GM；burst forming Unit erythroid，BFU E)、CD34+ CD38－细胞的测定,及复苏后细胞拒染率测定.数据处理用统计学区组方差分析.结果:3组不同冷冻保护剂组合中以 B组的 CFU GM，BFU E回收率最高,在细胞浓度为1×108/ml的回收率分别为(78.7± 9.8)% 和(69.8± 14.1)%;A组与 C组的 CFU GM回收率分别为(68.3± 6.2)% 和(65.8± 7.2)%,BFU E回收率分别为(63.4± 9.7)% 和(60.4± 10.6)%,B组与 A组、C组方差分析 F=56.7，0.01< P< 0.05；A组与 C组两组间无显著性差别.3组保护剂冻存 PBSC复苏后的细胞拒染率及 CD34+ CD38－细胞的回收率分别在 90% 及 80% 以上,无统计学意义.同一种冷冻保护剂不同细胞浓度冻存的PBSC复苏后细胞拒染率及 CFU－GM，BFU－E和 CD34+ CD38－细胞的回收率均无显著性差异.结论:冷冻保护剂组合以 5% DMSO+ HES+ auto PLASMA为最佳,冻存细胞浓度可以达4×108/ml.【总页数】5页(P1078-1082)【作者】张俊萍;石远凯;何小慧;韩晓红;刘鹏;杨建良【作者单位】中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院内科;进修医生现在山西省肿瘤医院血液科;中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院内科;中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院内科;中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院内科;中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院内科;中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院内科【正文语种】中文【中图分类】R730.43;R730.45因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
JEV丨外泌体适合在PBS缓冲液中长期储存吗？
JEV丨外泌体适合在PBS缓冲液中长期储存吗？细胞外囊泡(EVs) 在许多生理和病理生理过程中发挥着关键作用，具有治疗和诊断用途的巨大潜力。
尽管取得了重大进展，但 EV 存储稳定性的关键问题仍未得到解决和研究。
来自瑞典卡罗林斯卡学院的研究人员在 J Extracell Vesicles杂志上发表文章，探讨了能使EV稳定储存的条件，并全面比较不同温度下各种储存缓冲液配方对来自不同细胞来源的EV的影响。
研究认为，常规的一些缓冲体系在存储和处理EV 中存在缺陷，并确定PBS-HAT为合适的EV存储缓冲液。
在过去的十年中，细胞外囊泡(EVs) 的各个方面已经得到了许多研究，这些研究涉及EV的基本生物学、EV在各种生理和病理生理过程中的作用，以及EV在治疗和诊断方面的临床应用潜力。
尽管不断努力并取得进展，EV分离和表征相关的数据报告和程序的标准化越来越规范，但仍然存在许多悬而未决的问题和挑战。
特别是我们对储存条件对EV 的影响的了解仍然很少，并且该领域缺乏明确和标准化的EV 保存条件，因为EV储存稳定性是生物库临床样本稳定性和生产一致性的关键问题，也是EV用于治疗用途的先决条件。
迄今为止，许多研究都探讨了储存条件对EV的影响，表明储存条件相关因素可能会影响EV的各种特性，包括生物物理稳定性、颗粒回收率和直径以及EV的功能。
到目前为止，磷酸盐缓冲液 (PBS) 一直是大多数研究中首选的储存缓冲液，并且结论性建议是在-80°C 下储存和等分EV试样。
过去几年的一些研究调查了储存温度和时间的影响，重点关注用于分离或储存的塑料管的作用，或探索使用 DMSO 或海藻糖等防冻添加剂。
最近的一些综合研究调查了冻干背景下的 EV 稳定性、囊泡融合导致的与储存相关的颗粒损失，以及储存条件和浓缩方法对EV 恢复和功能的短期影响。
一般来说，报告的结果有时是相互矛盾的，可能研究人员关注的是特定生物流体样品的存储方法、EV分离方面的特定存储策略、或仅涵盖EV的部分方面，例如几项研究中的小RNA 定量或大蛋白质含量。
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不同冻干保护剂在外泌体储存中的研究
吴颖杰;耿梦缘;汪晶;尹海芳
【期刊名称】《天津医科大学学报》
【年(卷),期】2022(28)4
【摘要】目的:通过测试海藻糖等不同冻干保护剂,分析其对外泌体的完整性、分散度以及生物学功能的保护作用。
方法:超速离心法收集293T细胞来源的外泌体,在冻干过程中加入50~200 mmol/L赖氨酸、2%和4%乳糖、2%海藻糖和5%菊粉等不同的冻干保护剂;通过透射电镜分析外泌体的颗粒形貌、分散度;利用纳米粒度分析仪分析外泌体粒径分布和数量;利用血浆外泌体诱导血管成管实验,检测冻干后血浆外泌体诱导血管生成的能力;免疫印迹分析储存不同时间的外泌体上的标志蛋白CD63和CD81的表达情况;利用激光扫描共聚焦分析不同储存时间的外泌体被C2C12细胞摄取的能力。
结果:50、100、200 mmol/L赖氨酸可以维持冻干293细胞外泌体完整性,但是不同浓度赖氨酸都无法解决外泌体冻干时的聚集问题。
5%菊糖在冻干外泌体的分散度上表现良好,但是造成外泌体膜破损。
4%乳糖和2%海藻糖可以维持外泌体形貌完整并保持外泌体分散度,并且保护效果相当。
2%海藻糖冻干后血浆来源外泌体能诱导血管内皮细胞成管。
将外泌体用2%海藻糖冻干后室温储存1 d、1周和1个月,和-80℃组外泌体相比,冻干外泌体仍然保持原有的形貌和分散度,不会改变外泌体的粒径分布,外泌体总颗粒数也没有差异(P>0.05),并且总颗粒数显著高于不加冻干保护剂组(F=28.8,P<0.001)。
常温条件下储存1个月,和-80°C组外泌体相比,冻干外泌体标志蛋白CD63和CD81表达水平没有差异,而不加海藻糖的外泌体CD81和CD63蛋白表达水平明显下降。
添加2%海藻糖冻干后的外泌体常温储存不同时间后依旧能被细胞摄取,不会影响外泌体作为纳米载体的
进入细胞的固有属性。
结论:2%海藻糖可作为外泌体的冻干保护剂,为外泌体的运输和长期储存提供可行的方案。
【总页数】7页(P353-359)
【作者】吴颖杰;耿梦缘;汪晶;尹海芳
【作者单位】天津医科大学基础医学院&医学技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R781.4
【相关文献】
1.猪不同泌乳期母乳外泌体中let-7a和let-7f的差异表达研究
2.耐热冻干保护剂在兽用冻干活疫苗中的初步研究
3.不同保护剂影响植物乳杆菌冻干菌粉发酵活力的研究
4.注射用清开灵(冻干)调配方法优化及其在不同溶媒中稳定性的研究
5.微流控技术在外泌体分离分析中的研究进展
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