临床生化检验与生化试剂

▪ 终点法：
反应到达终点后与起始点（空白）的吸光度差与相同条件下用校正液测 得的结果比较取得结果的方法。试剂与样本反应之前的吸光度在某一定的水 平，开始反后，在主波长下出现一个最大的吸光度，得到一个较明显的吸光 度的落差，所以通过标准品吸光度变化值可以限定其它样本的浓度。终点 法中的反应时间是指开始反应后，试剂与反应物反应到达一定的稳定点，试 剂与反应物不再反应，吸光度不再随时间的变化而发生改变，既到达了反应 平衡。其间所要的时间就是反应时间。在反应时间进程曲线上为与x轴平行 线区段。如血象和Βιβλιοθήκη 瘤细胞学的普查等临床生化检验
临床生物化学，即采用生物化学分析方法，对临床标本进行 定性或定量分析，以辅助临床诊断； 临床生化常用的检测方法： ➢ 化学比色法：待测物经特定的化学反应生成的一定的产物，
在特定波长光照下具有吸收峰，待测物的浓度与吸光度成 正比，从而对物质进行定量检测方法 ➢ 免疫比浊法：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成复合物， 使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的 复合物随抗原量增加而增加，浊度亦增加。然后检测透 （散）射光强度，即透（散）射比浊 ➢ 离子选择性电极电位法：通过检测电极表面电位的改变， 比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算 样本中离子的含量。如，钾、钠、氯的测定 ➢ 电泳法：直流电场中，带电粒子向相反电极移动，血清中 的蛋白质为双性离子，在碱性环境中带负电荷，在电场中 向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷，带 电荷多，分子量小则泳动快，反之则慢，从而将不同蛋白 分离。如:血清蛋白电泳
~ 780nm
2.5 m ~ 50 m
50 m ~300 m
光学光谱区
光吸收基本定律: Lambert-Beer定律
Lambert－Beer定律时讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层 厚度之间关系的基本定律，该定律时分光分析的理论基础。
A=lg(I0/It)=kbc
吸光度
介质（溶液层）厚
度(cm)——光径
K为比例常数，C为溶液浓度
（当液层厚度为cm，浓度单位为mol/L时，吸光系数K称为摩尔吸光系
数ε。ε的意义是：当液层厚度为1cm，物质浓度为1mol/L时在特定波长
下的吸光度值。ε是物质的特征性常数）
Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀 非
散射的液体
吸光度与浓度的关系 A = bc
二 全自动生化分析仪
自动生化分析仪：
集添加试剂、注入样本、比色、计算、出报告等功能于 一体，用于检测生化项目的计算机控制的自动化仪器。
国内使用的主要品牌：
日本：日立（HITACHI） 7020，7060，7080，7170，7180， 7600
奥林帕斯（OLYMPUS），AU400,640, 800,1000，2700,5400 岛津（SHIMADZU），CL7200,8000 东芝（TOSHIBA），TBA40FR,120FR 希森美康（SYSMEX）；180 京都1024魅力系列 美国：雅培（ABBOTT），AerosetC8000，2000 德灵（杜邦）（DADE BEHRING），AR,RXL,XPAND 贝克曼库尔特（BECKMAN COULTER），CX4,5,7,9,LX20 德国：拜尔（BAYER）ADVIA1650,2400；罗氏（ROCHE） 利霸欧宝S-600；康宁560 国内：深圳迈瑞，沈阳东软、南京英诺华,上海科华 其他：荷兰的威图、意大利的BT2000/3000、西班牙的A30等。
自动生化分析仪应用原理：分光光度法
分光光度技术是利用物质的分子对光的选择性吸收作用对物质进行定性或定 量分析的技术。分光光度法是光谱分析技术中最常用的一种，应用最多的是紫 外－可见光分光光度法
远紫外 近紫外 可见 近红外 中红外 远红外
10nm~200 nm
200nm ~380nm 380nm
780 nm ~ 2.5 m
临床生化检验与生化试剂
临床检验在医学中的作用
➢为准确诊断、及时治疗提供依据：
如：肾脏有实质性损伤：尿液中出现蛋白、细胞管型 贫血(症) ：血中红细胞和血红蛋白量减少 白血病： 血象和骨髓象
➢为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据：
在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之 发生相应的变化
➢为预防疾病提供资料
生化分析基本测定方法
▪ 连续监测法（速率法）：
即连续监测反应过程，按产物的生成或底物的消耗的速度(△A/min)进 行定量分析的方法，读数点必须在等速区对低浓度的样本，它的吸光度随时 间变化的慢（速率低），而高浓度样本，它的吸光度随时间的快（速率 高）。在反应时间进程曲线上为反应呈恒速区段(斜率保持不变)，常用于酶 活性线性反应期测定或以酶为工具测底物（代谢物）的浓度。
实时反应曲线
（1）延迟区： delay time,lag time； （2）等速区： 斜率相等的线性段； 连续检测法在此区 读数 （3）过渡区： 两点固定时间法， 在此在此区读数 （4）平衡区： 终点法在此区读数
典型的全自动自动生化分析仪
基本结构
样品(Sample)系统：
校准品、质控品和病人样品盘。由样品装载、输送和分配等装置组成。
试剂(Reagent)系统：
一般由试剂储放（试剂盘）和分配加液装置组成；
条形码(Barcode)识读系统 ：条码试剂 反应系统 ：
反应盘-反应转盘比色杯（Cuvettes）；恒温控制装置 ；蠕动泵(Pump) ；回旋搅拌 混合装置
清洗(Wash)系统：
碱性洗液，酸性洗液，去离子水清洗-防止交叉污染
吸光度
0.00
光源
检测器 吸光度
0.22
b
检测器
吸光度 b
0.42
光源 光源
检测器
一般对一个新的试剂来 说，总是先做标准品定标 （校准），再进行相应的 样本检测。
多点定标和一点定标： 通过多个浓度有一定梯
度的标准液来定标（校 准），规范出标准曲线的 一定的趋势，以此来得到 浓度与吸光度的函数。多 点定标大多用于非线性校 准，得到的标准曲线一般 为二次函数的抛物线类型。 只用一个标准品来定标， 得到的函数为Y（浓度） =AX(吸光度)+B，是一条简 单的直线。