气相色谱实验1

实验六气相色谱系统适用性试验及苯系物的分离实验

一、实验目的

1、了解气相色谱仪的结构组成和操作方法；

2、掌握已知物对照法定性的原理与方法；

3、熟悉进行色谱系统适用性试验的方法。

二、实验原理

1、已知物对照法是根据同一物质在同一色谱柱上和相同的操作条件下保留值相同的原理进行定性。方法是在相同的试验条件下，分别测出已知对照物与样品的色谱图，将待鉴别组分的保留值与对照品的保留值进行比较定性；或将适量已知物加入样品中，对比加入前后的色谱图，若加入后待鉴别组分的色谱峰相对增高，则可初步确定两者为同一物质。该法适用于鉴别范围已知的未知物。

2、中国药典规定，采用色谱法测定药物含量或鉴别药物时，需按该品种项下的要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，使其达到分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和对称因子。若不符合要求，则应通过改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱填充的优劣等）或改变分离条件（如柱温、载气流速、固定液用量、进样量等）等来加以改进，使其达到相关要求。

三、实验仪器与试剂

仪器：气相色谱仪（毛细管柱或102G填充柱）；1μL微量注射器。

试剂：苯、甲苯、二甲苯对照液及含有三组分的混合样品液。

四、实验步骤

1、实验条件

色谱柱：毛细管柱，或2m×4mm15％DNP柱；

温度设置：柱温100℃，检测器(FID) 150℃，气化室150℃；

气体流速：N230mL/min，H240mL/min，Air500mL/min；

进样量：0.5μL。

2、测定

⑴待基线平直后，用1μL微量注射器分别取苯、甲苯、二甲苯对照液及样品液各0.5μL 进样（3次进样取平均值），绘制流出曲线，记录组分峰的保留时间，以各对照组分的保留值确定样品色谱图中各峰的归属。

⑵测量样品液中各组分的峰高h、半峰宽W1/2、峰宽W、0.05倍峰高处的峰宽W0.05h 和A值（峰极值至峰前沿之间的距离），按以下公式计算色谱系统适用性试验的主要系统参数。

①按下式以苯计算色谱柱的最小理论塔板数n

2

2/154.5⎪⎪⎭⎫ ⎝⎛=W t n R 若规定该色谱柱的最小理论塔板数（以苯峰计算）不得小于880，如未达到要求，请根据结果进行有关试验条件的调整。

②按下式计算苯与甲苯及二甲苯的分离度R

苯甲苯，苯，甲苯W W t t R R R +-=)

(2

中国药典规定，为了获得较好的精密度与准确度，应使分离度R ≥1.5，若未达到要求，请根据结果进行有关试验条件的调整。

③按下式计算各组分峰的对称因子fs

A

B A A W f h s 2205.0+== 中国药典规定，若以峰高法定量时，对称因子f s 应在0.95～1.05之间，若未达到要求，请根据结果进行有关试验条件的调整。

注意事项

（1）采用已知物的绝对保留值对照定性时，需保持试验条件的稳定性。另外，由于所用色谱柱不一定适合对照物与待鉴定组分的分离，故有可能产生两种不同组分而峰位相近或相同的现象。所以为了进一步确证，有时需再选用1～2根极性或其他性质与原色谱柱相差较远的色谱柱进行测定，若两峰位仍然相同，则可初步确定二者为同一物质。

（2）若对载体的钝化或硅烷化处理不好，所填充的色谱柱会对极性大的组分造成拖尾，因而使柱效降低，但对非极性组分则柱效较好。对此情况可通过选择不同极性的样品测定后再处理。

五、思考题

1、对一根已经填充好的色谱柱来说，理论塔板数是常数吗？它与哪些因素（或条件）有关？如何使柱效得到提高？

2、若组分间的分离度未达到要求，可通过调整哪些试验条件来加以改善？

3、不对称峰的出现与何因素有关？如何使色谱峰的对称因子符合要求？