生物化学实验——糖酵解中间产物的鉴定

生物化学实验——糖酵解中间产物的鉴定 一、实验目的 了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。
二、实验原理 利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸 苷油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油 醛是不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件 下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油 醛含量成正比。
三、仪器 原料和试剂 （1）仪器：试管（1.5×1.5cm）、吸量管（1ml、、2ml3ml）、恒温水 浴、烧杯（50ml）。 （2）原料：新鲜酵母。 （3）试剂： ①2，4-二硝基苯肼：0.1g2，4-二硝基苯肼溶于水100ml 2mol/L盐酸溶 液中，贮于棕色瓶中备用。 ②0.56mol/L硫酸肼溶液：称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中，这时不会全 部溶解，当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。此液也可用于水合肼溶 液配制，可按其分子浓度稀释至0.56mol/L，此时溶液呈碱性，可用浓 硫酸调pH至7.4即可。 ③5%葡萄糖溶液。 ④10%三氯乙酸溶液。 ⑤0.75mol/LNaOH溶液。 ⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。
理。
0.75mol/L 管号滤液/ml NaOH/ml
2，4-二 硝基苯 肼/ml
0.75mol/L NaOH/ml
观察结 果
1 0.5 0.5 2 0.5 0.5
室温放 置 10min
0.5 0.5
38℃水 浴保温 19min
3.5 3.5
3 0.5 0.5
0.5
3.5
五、思考题 实验中哪一发酵管生成的气泡最多？哪一管最后生成的颜色最深？为什 么？
1.5h，观察发酵管产生气泡的量有何不同。
（3）把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2号和3号杯中按下表
补加各试剂，摇匀放10min后和第一只烧杯中内容物一起分别过滤，取
滤液进行测定。
杯号
10%三氯乙酸/ml 碘乙酸/ml
硫酸肼/ml
2
2
--
--
3
2
1
1
（4）取3个试管，分别加入上述滤液0.5ml，并按下表加入试剂和处
四、操作步骤
（1）取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3g，并按下表分别加入各试
剂，混匀。
杯 号
5%葡萄糖加 入量/ml
10%三氯醋 酸加入 量/ml
碘乙酸加入 硫酸肼加入 发酵时起泡
量/ml
量/ml
多少
1 10
2
1
1百度文库
2 10
--
1
1
3 10
--
--
--
（2）将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵罐内，放入37℃保温