细菌芽孢染色
细菌的芽孢染色
3.在涂片上加2～3滴孔雀石绿染色液，然后在酒精灯上缓 缓加热（注意不能使染色液沸腾），必要时可再滴加少许 染色液。加热时间从冒蒸汽时开始计算2～3分钟。
4.倾掉染色液。等待玻片冷却后，用水冲洗至无染色液为止。
５.用番红复染１～２分钟，水洗至无染色液，用吸水纸除去 残留水分。
６.用油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
微生物学实验
实验四 细菌的芽孢染色
实验目的 1. 了解细菌的芽孢染色原理。 2. 掌握细菌的芽孢染色方法。
实验原理 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理， 用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区分。 芽孢壁厚，透性低、着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱 性染料如孔雀石绿在加热条件下进行染色时，弱碱性染料不仅可以 进入菌体，而且也可以进入芽孢。 进入菌体的染料通过水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。 用复染液（番红）染色，菌体和芽孢因呈现不同的颜色而易于 区别。
实验器材 （一） 显微镜，香柏油，二甲苯，载玻片，镊子，酒精灯，滴管，烧杯， 接种环，5%孔雀石绿染色液，番红染色液，吸水纸。 （二） 苏云金芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌
实验步骤
1. 取干净载玻片，加一滴单蒸水，然后用接种环挑取适量 苏云金芽孢杆菌涂片。
2. 将玻片反复在酒精灯上方通过几次（用手指触摸涂片反面， 以不汤手为宜），对标本进行干燥、固定。
蜡状芽孢杆菌
芽孢染色
注意事项
１.供芽孢染色用的菌种应控制菌龄，使大部分芽孢 仍保留在菌体上为宜。 ２.染色加热过程要及时补充染液，切勿让涂片干涸。
实验思考
１.用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？为什么？ ２.芽孢染色为什么要加热?为什么芽孢和菌体能染成不同的颜色?
细菌芽孢染色实验报告2页
细菌芽孢染色实验报告2页实验名称：细菌芽孢染色实验目的：1.掌握细菌芽孢染色的基本原理和步骤；2.学习观察细菌芽孢染色的结果和注意事项；3.通过实验认识芽孢的特殊结构和功能。
实验原理：细菌芽孢染色是一种利用染料对细菌芽孢进行染色的方法。
由于细菌芽孢具有特殊的结构和功能，能够抵抗不利环境，因此在染色过程中需要使用一些特殊的染料和处理方法。
其中，最常用的染料是孔雀绿和甲基蓝，最常用的处理方法是加热和干燥。
通过细菌芽孢染色，可以观察到芽孢的形态、大小、着色情况等特征，进而推断出芽孢的种类和分布情况。
实验步骤：1.样品采集：采集含有芽孢的样品，并进行预处理，如离心、过滤等；2.芽孢分离：将样品中的芽孢分离出来，可以使用物理、化学等方法；3.加热和干燥：将分离出来的芽孢进行加热和干燥处理，以促进染色效果；4.染色处理：将加热和干燥后的芽孢与染料混合，用玻璃棒搅拌均匀；5.观察和分析：将染色后的样品放在显微镜下观察，记录芽孢的形态、大小、着色情况等特征，并进行分析和判断。
实验结果：通过本次实验，我们观察到了不同种类的芽孢，如枯草芽孢杆菌、肉毒梭菌等。
这些芽孢在染色过程中表现出不同的着色情况和形态特征。
例如，枯草芽孢杆菌的芽孢呈绿色，肉毒梭菌的芽孢呈蓝色。
通过观察和分析，我们发现这些芽孢在样品中的分布情况也不同，有的呈单个存在，有的呈链状存在。
实验结论：通过本次细菌芽孢染色实验，我们掌握了细菌芽孢染色的基本原理和步骤，学习观察了细菌芽孢染色的结果和注意事项。
同时，通过实验认识芽孢的特殊结构和功能。
这些知识和技能对于我们进一步了解和研究细菌及其芽孢具有重要意义。
注意事项和思考题：1.在样品采集和预处理过程中，应该注意避免污染和交叉感染。
对于含有芽孢的样品，应该进行灭菌处理，以避免对实验结果造成影响。
2.在进行芽孢分离时，应该根据不同样品的特点选择合适的分离方法。
对于一些难以分离的芽孢，可以尝试采用其他方法进行分离和纯化。
实验22细菌的芽孢染色
• Schaeffer与Fulton氏染色法 ，改良的Schaeffer和
Fulton氏染色法
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芽孢染色的方法和步骤
1.涂片、干燥、固定：待涂片晾干 后在酒精灯火焰上通过2—3次。 2.染色： ①加染色液：加5%孔雀绿水溶液于 涂片处（染料以铺满涂片为度）， 然后将涂片放在铜板上，用酒精灯 火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算 时间，约维持5-10min。加热过程中 要随时添加染色液，切勿让标本干 涸。（加热时温度不能太高）。 ②水洗：待玻片冷却后 ，用水轻轻 地冲洗，直至流出的水中无染色液 为止。 ③复染：用蕃红液染色1-2min。 3.水洗、晾干或吸干。 4.镜检：
实 验 2-2
细菌的芽孢染色
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细菌的染色和细菌细胞构 造的观察
• 目的要求 • 染色原理 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
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目的要求
• 无菌操作 • 微生物涂片 • 掌握细菌的芽孢染色（枯草杆菌） • 熟炼显微镜使用
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实验材料
• 涂片染色用的细菌培养物
– 芽孢染色（枯草杆菌）24-48h的斜面培养物。
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实 验 2-2
结束
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染色简约流程
• 荚膜染色
– 制片――干燥（空气中晾干或用冷风吹干――复红 染色液染色3-5min――水洗――干燥（晾干）―― 涂苯胺黑（薄层）――风干――镜检――记录
• 芽孢染色
– 涂片－－干燥－－固定――5%孔雀绿水溶液，加 热至染液冒蒸汽，约维持5min（勿干）――冷却 ――水洗――番红液染色1-2min ――水洗－－晾干 或吸干――镜检――记录
实验四细菌的芽孢染色
实验四细菌的芽孢染色细菌的芽孢是指在环境恶劣时，细菌会形成内部有严密壳层保护的休眠结构。
芽孢可以存活在高温、低温、干旱和化学物质等极端环境中，具有极强的耐受性。
因此，了解细菌的芽孢形态和染色技术对于临床医学和微生物学研究具有重要意义。
一、理论知识芽孢染色是一种特殊的细菌染色方法，该方法是通过将细菌在特定的温度和时间条件下培养，诱导细菌形成芽孢。
然后用特殊染剂染色，可以使芽孢呈现出特定的颜色。
这种染色方法可以将细菌分为两类：芽孢形成阳性细菌和芽孢形成阴性细菌。
在芽孢染色实验中，需要用到以下染剂：1. 碘液：可以使细菌和芽孢的细胞质和内浆颜色变成深蓝色。
2. 芽孢绿：能够将芽孢染成绿色。
二、实验步骤1. 准备玻璃片。
取两块无菌的玻璃片，用酒精灼烧消毒，并晾干备用。
2. 细菌培养。
取一株待检测的细菌，接到含有适当营养成分的琼脂平板上。
在适当的温度下，通常是30-37℃，使细菌生长至需要形成芽孢的生长阶段。
3. 热处理。
将培养好的细菌涂在一块玻璃片上，然后将其放置在巴氏杀菌器中，用高温（通常是80℃）处理大约5分钟。
这里的处理过程可以模拟极端环境，诱导细菌形成芽孢。
4. 染色涂片。
将热处理后的细菌涂片放置在滴定瓶中，加入碘液，在室温下静置几分钟。
不要让碘液干燥，否则会影响后续染色效果。
之后，用酒精洗去多余的碘液。
5. 脱色处理。
将染色过的细菌涂片放入酸酒精溶液中，脱色1-2秒钟。
这一步会去除多余的染料，使芽孢显现出绿色。
6. 水洗和固定。
用自来水清洗脱色后的涂片，然后用火焰进行烘干和固定。
三、实验结果与分析芽孢染色的阴性和阳性结构特点如下：芽孢阳性：芽孢位置不定，涂片颜色为绿色。
四、注意事项1. 操作前请认真研究操作步骤并准备好所有必需的实验器材。
2. 涂片需要在室温下进行，但不宜长时间暴露于室外，以免可能的污染干扰实验结果。
3. 涂片需要在染色后及时清洗和固定，否则会有失真或污染的风险。
4. 在过程中要注意无菌操作，以避免其他微生物污染涂片。
细菌芽孢染色法
细菌芽孢染色法一、基本原理芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区分。
芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。
二、器材枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）；孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。
三、操作步骤方法1、（1）将培育24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
（2）滴加35滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。
加热时间从染液冒蒸汽时开头计算约45分钟。
这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。
（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。
（6）待干燥后，置油镜观看，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
方法2、（1）取二支干净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入12接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入12接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成深厚的菌悬液。
（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热35分钟。
（3）用接种环分别取上述混合液23环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。
（4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。
（5）取12接种环黑色素溶液于涂片处，马上绽开涂薄，自然干燥后，油镜观看，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
实验四.细菌芽孢染色
实验四.细菌芽孢染色一. 目的要求：目的：掌握细菌芽孢染色方法内容：１．学习并掌握芽孢染色法２．初步了解芽孢杆菌的形态特征二. 基本原理：芽孢壁厚，透性低，着色脱色较困难。
因此先用着色力较强的孔雀绿，在加热的条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体内的染料经水洗脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂（如沙黄、番红、碱性复红）染色后，芽孢仍保留初染色剂的颜色，此时菌体被染成红色，芽孢呈绿色。
三. 器材1.菌种：培养了16-20小时左右的枯草杆菌（37℃）2.染色剂：5%的孔雀绿水溶液.0.5%番红水溶液石炭酸复红染液0.05%碱性复红蒸馏水3.仪器或其他用品：小试管.滴管.烧杯.试管架.载玻片.木夹子.显微镜等二甲苯.香柏油四. 操作步骤：一）方法1：1.取37℃培养了18-24小时的枯草杆菌作涂片，并干燥固定。
2.于载玻片上滴入3-5滴5%孔雀绿水溶液3.用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计时约5min ,加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料4.倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
5.用0.5%的番红溶液（或0.5%沙黄水溶液或0.05%碱性复红）复染2分钟，水洗.6.制片干燥后用油镜观察。
芽孢呈绿色，菌体呈红色。
二）方法2：1.加1-2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环培养16—20小时的枯草杆菌于试管中，充分混匀打散，制成弄的菌悬液。
2.加5%的孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。
3.将此试管浸于沸水浴中，加热20-30min .4.用接种环从试管底部挑取数环欲洁净的载玻片上，并涂布均匀，将玻片通过微火3次固定。
5.水洗至流出的水中无孔雀绿颜色为止。
6.加复染液染2-3分钟，水洗。
7.干燥后用油镜观察，芽孢绿色，菌体红色。
五.实验报告：1.绘图：枯草杆菌的芽孢形态，芽孢的着色位置。
实验细菌的芽孢、荚膜染色
在接触细菌和染色液时，应佩戴 个人防护用品，如实验服、口罩、
手套等。
实验过程中如发生意外情况，应 立即停止实验，采取相应措施， 并及时向实验室管理人员报告。
废弃物处理要求
实验过程中产生的废弃物应按照 实验室规定进行分类处理。
废弃的染色液和培养基应进行灭 菌处理后才能倒掉，避免对环境
造成污染。
实验结束后，应及时清理实验台 面和地面，保持实验室整洁卫生。
通过显微镜观察染色后的 菌体和芽孢，可以清晰地 分辨出菌体和芽孢的颜色 和形态。
荚膜染色结果观察
通过显微镜观察染色后的 菌体和荚膜，可以观察到 荚膜的存在、形态和分布 情况。
结果分析
根据观察到的染色结果， 可以对细菌的种类、形态 和生理特性进行分析和判 断。
02
实验原理
芽孢染色原理
芽孢染色是一种用于 检测细菌芽孢的染色 技术。
THANK YOU
03
实验材料与试剂
实验材料：细菌芽孢、荚膜样本
芽孢样本
选择具有代表性的芽孢细菌样本，如炭疽芽孢杆菌。
荚膜样本
选择具有明显荚膜的细菌样本，如肺炎球菌。
试剂：染色液、缓冲液等
染色液
用于对细菌芽孢和荚膜进行染色的特定染色液，如结晶紫染 色液、姬姆萨染色液等。
缓冲液
用于维持染色过程中pH值的稳定，常用的有磷酸盐缓冲液。
通过染色，可以将芽 孢与菌体区分开来， 便于观察和计数。
芽孢是某些细菌在不 利环境下形成的抗逆 性休眠体，具有极强 的抵抗力。
荚膜染色原理
荚膜染色是一种用于检测细菌 荚膜的染色技术。
荚膜是某些细菌在生长过程中 分泌形成的细胞外多糖物质， 具有免疫逃逸、抗吞噬等功能。
通过染色，可以将荚膜与菌体 区分开来，便于观察和鉴别。
实验五细菌芽孢染色法
三、实验器材
• 显微镜，酒精灯，火柴，试管夹，载玻片， 接种环，双层瓶，吸水纸，擦镜纸，蒸馏水； • 孔雀绿染液，沙黄（番红）水溶液； • 巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)， 37℃培养20小时；
四、实验步骤
1 ．制备菌悬液 加2滴水于空试管中，用接种环挑取3环菌苔于试管中，搅拌 均匀，制成浓的菌悬液． 2. 染色 加孔雀绿染液2滴于小试管中，将试管置于沸水浴的烧杯中， 加热染色15~20 min 。 3. 涂片固定 用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上，涂成薄膜， 然后将涂片通过火焰3 次温热固定。 4. 脱色 水洗．直至流出的水无绿色为止． 5 ．复染 用沙黄水溶液染色2~3min ，倾去染液稍微用水冲去染液并 用滤纸吸干残液． 6 ．镜检 干澡后用油镜观察． 芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色．
涂片固定用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上涂成薄膜然后将涂片通过火焰3次温热固定
实验五
一、实验目的：
细菌芽孢染色法
1.学习并掌握芽孢染色的方法； 2.观：
芽孢具有厚而致密的壁，透性差，不易着 色，而一旦染上颜色，脱色也比较困难。因此芽 孢染色法的基本原则是：采用着色力强的染料， 在加热条件下，延长染色时间以促进标本着色。 然后采用脱色的方法使标本脱色，菌体颜色褪去， 而芽孢上的颜色仍然保留。再用对照的染料进行 复染，使菌体染上复染液的颜色，和芽孢形成鲜 明的对比，容易辨认。
六、实验记录
菌 名 菌体颜色 芽孢颜色 芽孢形状和位置(图示)
巨大芽孢杆菌
芽孢染色
1 ．制备菌悬液 加2滴水于空试管中，用接种环挑取 3环菌苔于试管中，搅拌均匀，制成 浓的菌悬液． 2. 染色 加孔雀绿染液2滴于小试管中，将试 管置于沸水浴的烧杯中，加热染色 15~20 min 。 3. 涂片固定 用接种环挑取试管底部菌液数环于 洁净载玻片上，涂成薄膜，然后将 涂片通过火焰3 次温热固定。 4. 脱色 水洗．直至流出的水无绿色为止． 5 ．复染 用沙黄水溶液染色2~3min ，倾去染 液稍微用水冲去染液并用滤纸吸干 残液． 6 ．镜检 干澡后用油镜观察． 芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红 色．
实验五 细菌芽孢染色
实验五——细菌芽孢染色山东大学生命科学学院09级四班张行润200900140177 摘要细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。
所有的芽孢染色法都基于一个原则：除了用着色强的染料外，还须要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。
关键词芽孢（gemma of a fungus）芽孢染色法（Spore staining）复染（counterstain）前言细菌的芽孢的某些细菌的特殊结构。
芽孢是某些细菌生长到一定阶段在体内形成的一个圆形或椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。
在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。
芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴定细菌的重要依据。
在一般实验室中通常用芽孢染色法来观察其形态。
此外，由于芽孢具有很强的抗性，因此在生产实践中都以是否有杀死抗性最强的芽孢来评定高温灭菌及某些化学杀菌剂的效果。
一、实验目的1.学习并掌握芽孢染色法2.了解芽孢杆菌的形态特征3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验原理芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，液被称为内生孢子，通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。
与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚、透性低而不易着色，但是芽孢一旦着色就很难被脱色。
利用这一特点，首先用着色能力较强的染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。
芽孢染色法 实验报告
芽孢染色法实验报告芽孢染色法实验报告一、引言芽孢染色法是一种常用的实验方法，用于检测和鉴定细菌中的芽孢形成。
芽孢是一种细菌在不利环境下形成的一种生存形式，具有较强的耐热和抗干扰能力。
本实验旨在通过芽孢染色法，观察和分析细菌中芽孢的形成情况。
二、实验材料和方法1. 实验材料：- 细菌培养物- 芽孢染色试剂盒- 显微镜- 无菌平板- 石蜡刀2. 实验方法：1) 准备细菌培养物：从细菌培养基中取出待检测的细菌菌株，进行液体培养至对数生长期。
2) 制备芽孢悬液：将培养物转移到无菌平板上，用无菌平板划线法制备纯培养物。
将培养物转移到无菌蒸馏水中，轻轻搅拌，制备芽孢悬液。
3) 芽孢染色：取一滴芽孢悬液，滴于玻片上，用芽孢染色试剂盒按照说明书的要求进行染色处理。
4) 观察和分析：将染色后的玻片放在显微镜下观察，记录芽孢的形态和数量。
三、实验结果经过芽孢染色处理后，我们观察到细菌中出现了大量的芽孢。
芽孢呈圆形或椭圆形，外部有一层坚硬的壳，内部包裹着细菌的核酸和蛋白质。
芽孢的颜色因染色剂的不同而有所差异，有些呈红色，有些呈绿色。
芽孢的数量在不同的细菌菌株中也有差异，有些菌株的芽孢数量较多，而有些菌株的芽孢数量较少。
四、讨论与分析芽孢是细菌在不利环境下形成的一种生存形式，具有较强的耐热和抗干扰能力。
在本实验中，我们通过芽孢染色法观察到了细菌中芽孢的形成情况。
芽孢的形成与环境因素密切相关，如温度、湿度、营养物质等。
在适宜的环境条件下，细菌可以形成大量的芽孢，以增加自身的存活率。
芽孢染色法是一种快速且可靠的方法，用于检测和鉴定细菌中的芽孢形成。
通过染色处理，我们可以清晰地观察到芽孢的形态和数量，从而推断细菌的生长状态和环境适应能力。
此外，芽孢染色法还可以用于研究芽孢的形成机制和防治细菌感染的方法。
然而，芽孢染色法也存在一些限制。
首先，不同的细菌菌株对染色剂的反应可能不同，导致染色结果的差异。
其次，染色后的芽孢可能会受到染色剂的影响，使其形态和数量发生变化。
细菌的芽孢染色
若涂片中观察到的只是大量游离芽孢， 若涂片中观察到的只是大量游离芽孢 ， 很少看到芽孢囊及营养细胞， 很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么 原因? 原因
（五）注意事项
• 1、 供芽孢染色用的菌种应控 、 制菌龄， 制菌龄，使大部加热过程要及时补充 、 染液，切勿让涂片干涸。 染液，切勿让涂片干涸。
（六）实验作业
绘出表示芽孢杆菌的形态特征， 绘出表示芽孢杆菌的形态特征，注 芽孢杆菌的形态特征 意芽孢的形状、 意芽孢的形状、着生位置及芽孢囊的形 态特征。 态特征。
中央芽孢偏端芽孢游离芽孢末端芽孢芽孢壁厚透性低着色和脱色均较困难当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内进入菌体的染料经水洗后被脱色当用对比度大的复染色剂蕃红液染色后芽孢仍保留初染剂的颜色是芽孢和菌体更易区分
细菌的芽孢染色
（一）实验目的
1、继续学习微生物标本的制作方法； 继续学习微生物标本的制作方法； 2、掌握芽孢染色的基本原理及方法; 掌握芽孢染色的基本原理及方法;
（三）实验器材
• 1、菌种： 、菌种： • 2、 染色液和试剂 ： 5％ 孔雀绿水溶液 、 、 染色液和试剂： ％ 孔雀绿水溶液、 0.5％蕃红溶液等； ％蕃红溶液等； • 3、 器材 ： 试管夹 、 酒精灯 、 接种针 、 载 、 器材： 试管夹、 酒精灯、 接种针、 玻片、显微镜、擦镜纸等。 玻片、显微镜、擦镜纸等。
又称内生孢子是某些细菌 革兰氏染色阳性杆菌） （ 革兰氏染色阳性杆菌 ） 生长到 一定时间（ 对数期后期） 一定时间 （ 对数期后期 ） ， 在细 胞内形成一个圆形、 胞内形成一个圆形 、 椭圆形或圆 柱形的结构。 柱形的结构。
芽孢有的长在中央或近中央， 芽孢有的长在中央或近中央 ， 圆形或 椭圆形，芽孢的大小，位置， 椭圆形 ， 芽孢的大小 ， 位置 ， 在分类鉴定 上有一定的意义，它仅仅是芽孢细菌生活 上有一定的意义， 史的一个环节， 史的一个环节 ， 它还是检验培养基灭菌彻 底不彻底的依据。 底不彻底的依据。
实验五、细菌的芽孢染色法
环境样品中细菌的检测
芽孢染色法也可用于检测环境样品中的细菌，如水、土壤、 空气等中的细菌。在这些环境中，一些细菌会形成芽孢以适 应不良环境，通过芽孢染色法可以快速检测出这些细菌的存 在和数量。
学习并掌握芽孢染色法的基本步骤
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准备染色剂
选择适合的染色剂，如孔 雀绿染色剂，准备好所需 的浓度。
制备菌悬液
将待染色的细菌培养物进 行离心，去除上清液，得 到菌悬液。
涂片
将菌悬液均匀涂布在载玻 片上，晾干或烘干。
学习并掌握芽孢染色法的基的要求进行染色。
脱色
将染色后的涂片用脱色剂 进行脱色处理，以便更好 地观察芽孢。
复染
将脱色后的涂片用复染剂 进行复染，以便更好地观 察菌体。
学习并掌握芽孢染色法的基本步骤
冲洗
用清水冲洗涂片，去除多余的染 色剂和脱色剂。
观察
在显微镜下观察涂片，观察细菌 的芽孢和菌体的染色情况。
了解芽孢染色法的应用场景
食品和饮料中细菌的检测
态。
复染
用番红再次染色，番红 能够与脱色后的菌膜结
合，使其呈现红色。
镜检观察
观察
在显微镜下观察染色后的菌膜，寻找 芽孢的存在。芽孢在显微镜下呈现圆 形或椭圆形，颜色较深，与周围的细 菌细胞有所不同。
计数
鉴别
根据芽孢的大小、形状、染色深浅等 特征，鉴别芽孢所属的细菌种类。
对镜检观察到的芽孢进行计数，记录 每个视野中芽孢的数量和形态特征。
细菌芽孢染色
细菌芽孢染色某些细菌在其发育的肯定阶段可以形成一个内生孢子,即为芽孢.芽孢形成后并不脱离原细菌菌体,它的外形、大小和在菌体的位置都是肯定的.老熟的芽孢可自菌体中脱落出来.芽孢结构上的特点是壁厚和细胞质深厚,所以不易着色,通常多采纳着色力强的染色剂和用加热等手段促使芽孢着色,并利用复染的方法对比原细菌菌体和芽孢,才易于在显微镜下看到它们.但是,若用简洁染色法使菌体着色而芽孢无色也可以衬托出芽孢的外形、大小和位置. 【试验目的】把握细菌芽孢染色的方法.【试验原理】细菌的芽孢含水量少,脂肪含量高,芽孢壁较厚,对染料的透性差,不易着色,但是一旦着色又难以脱色.通常,芽孢染色采纳弱碱性染料孔雀绿在加热的条件下进行.染色完毕,用蒸馏水冲洗.因孔雀绿是弱碱性染料,与菌体结合力较差,因此易被水冲洗掉,而进入芽孢的孔雀绿却难于溶出.水洗后,再用一种呈红色的碱性染料复染,使菌体和芽孢呈现不同颜色.【试验材料、药品及器具】1、菌种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)2、染液孔雀绿染液藏花红染液3、器皿显微镜、酒精灯、镊子、洗净的载玻片4 片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、玻璃红、洗瓶装蒸馏水、接种环.【试验步骤】1、取培育24h左右的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌分别涂片、干燥、固定.2、在涂片部分用吸水纸条盖住,然后向纸条滴加孔雀绿液至饱和.3、将涂片渐渐加热至微冒蒸汽并不时添加染液以防止吸水纸条干燥.染色2-8 分钟.4、除去吸水纸条,用蒸馏水轻轻冲洗掉多余染液.5、用藏花红染液复染30~60S.6、水洗,风干或烘干后镜检.【试验结果】1、首先用低倍镜,再用油浸镜检查制片,留意芽孢的颜色和菌体的颜色.2、绘制芽孢图.留意芽孢在菌体内的位置、大小和外形并绘制游离芽孢形态图.【思索题】1、为什么经孔雀绿染色后,水洗再复染红色染液只能染上菌体?2、用革兰氏染色能否看到芽孢,为什么?。
实验3细菌芽孢染色
学习并掌握细菌的芽孢染色方法； 初步了解芽孢杆菌的形态特征。
二、基本原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不
易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽孢
不着色，但是一旦染色后又很难脱色。
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的
亲和力不同，用不同的染料进行染色使芽孢
和菌体呈现不同的颜色而便于区别。
二、基本原理
所有的芽孢染色法都基于同一个原则：
除了用着色力强的染料外，还需要加热，
促进芽孢着色。染芽孢时，菌体也会着色,
然后水洗，芽孢的颜色难以渗出，菌体会
脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染,
菌体和芽孢呈现出不同的颜色，便于观察
三、实验器材
菌种 35-37℃培养20-24h的枯草芽孢杆菌 试剂 生理盐水、5%孔雀绿水溶液、蕃红染液 其他器材
干燥 过程中及时补充染液，切勿干涸 直至流出的水无色为止。 镜检
芽孢呈绿色，营养体为红色
作业
1.绘图标识枯草芽孢杆菌及芽孢形态，芽孢的着 生位置。 2.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪
些环节？
3.为什么芽孢染色要加热?为什么芽孢及营养体
能染成不同的颜色?
4.如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题? 如果加热温度过高、 时间太长，又会怎么样呢？
(5)水洗，至流出的水中无孔雀绿颜色 为止。
(6)加番红染液，染2～3min后，倾去染液，不用水洗。
(7)干燥后用油镜观察。芽孢绿色，菌体红色。
2、方法三
(1)取斜面试管一支，另取9mL无菌 水的试管一支加无菌水于斜面试 管中，并用接种环充分均匀搅散 ，制成浓稠的菌液。 (2)加5％孔雀绿水溶液2～3滴于小 试管中．用接种环搅拌使染料与 菌液充分混合。
细菌的芽孢染色
技
，然后再挑取菌液，否则菌体沉于管底，涂片时菌体太少。
术
（2）加热过程中要及时补充染液，切勿沸腾或蒸干，防止加
热过度。染液被蒸干时不能立即补加染液，否则载玻片炸裂
。
— 1—食品微生物检验技术 Nhomakorabea色
在芽孢囊内。巨大芽孢杆菌在37℃条件下以培养12～24小时
技 术
的效果最佳。
（2）涂片不宜过厚； 火焰固定温度要适宜； 控制好脱色程
度。
— 1—
• 芽孢染色关键控制点
芽 孢 染
2.芽孢染色注意事项 （1）用改良法时，欲得到好的涂片，首先要制备浓稠的菌液
色
，其次是从小试管中取染色的菌液时，应用接种环充分搅拌
技
还需要加热，以促进芽孢着色。
术
— 1—
• 芽孢染色的原理、意义
芽 孢
2.芽孢染色的意义
染
（1）芽孢的有无、形态、大小和着生位置等是细菌分类和
色 技 术
鉴定中的重要形态学指标； （2）是否能杀灭一些代表菌的芽孢是衡量和制定各种消毒
灭菌标准的主要依据。
（3）芽孢对不良环境有很强的抵抗力，可以保持生命力达
食品微生物检验技术
目录页
芽孢染色的原理、意义 芽孢染色的基本程序 芽孢染色关键控制点
— 1—
芽孢染色的原理、意义
1.芽孢染色的原理 2.芽孢染色的意义
— 2—
• 芽孢染色的原理、意义
芽 孢
1.芽孢染色的原理
染
芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后
色
又难以脱色这一特点而设计的。用着色力强的染料外，
数十年之久，在自然界使细菌度过恶劣的环境，在实验室
是保存菌种的好材料。
细菌芽孢染色实验报告
细菌芽孢染色实验报告细菌芽孢染色实验报告引言：细菌芽孢染色是一种常用的实验方法，用于鉴定细菌中是否存在芽孢。
芽孢是细菌在不利环境下形成的一种耐受性很强的结构，能够在干燥、高温等条件下存活。
通过芽孢染色实验，我们可以观察和鉴定细菌的芽孢形态和分布情况，进一步了解细菌的生物学特性。
材料与方法：1. 细菌培养物：我们选择了常见的大肠杆菌和枯草杆菌作为实验材料。
2. 芽孢染色试剂：我们使用了石碱法染色试剂，包括马来酸、石碱和碘液。
3. 显微镜：用于观察染色后的细菌样本。
实验步骤：1. 取一小滴细菌培养物放在玻璃片上。
2. 等待培养物干燥后，加入适量的马来酸，使其覆盖整个细菌样本。
3. 在马来酸上滴加适量的石碱，使其与马来酸充分混合。
4. 加入适量的碘液，静置片刻。
5. 用水冲洗玻璃片，直至水清澈无色。
6. 将玻璃片放在显微镜下，用100倍镜观察细菌样本。
结果与讨论：在观察大肠杆菌样本时，我们发现细菌呈现出长而细的形态，没有明显的芽孢结构。
这与大肠杆菌不具备芽孢形成能力的特点相符。
而在观察枯草杆菌样本时，我们发现细菌呈现出短而粗的形态，并且有明显的椭圆形芽孢结构。
这表明枯草杆菌具备芽孢形成能力，能够在不利环境下形成芽孢以保护自身。
细菌芽孢的形成是一种适应环境的生存策略。
在不利条件下，细菌通过形成芽孢来保护自身免受干燥、高温、辐射等不利因素的伤害。
芽孢是一种具有高度耐受性的结构，能够在极端条件下存活多年甚至几十年。
这种生存策略使得细菌能够在不利环境中存活并传播，从而保持种群的持续存在。
细菌芽孢染色实验是一种简单而有效的方法，可以用于鉴定细菌中是否存在芽孢。
通过观察细菌样本的形态和分布情况，我们可以初步判断细菌的生物学特性和环境适应能力。
然而，芽孢染色实验并不能提供细菌的详细分类和鉴定结果，需要结合其他实验方法和技术进行进一步的分析。
总结：细菌芽孢染色实验是一种常用的实验方法，通过观察细菌样本的形态和分布情况，可以初步判断细菌是否具备芽孢形成能力。
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微生物学实验报告
题目：细菌芽孢染色
姓名：学号：组别：年级班级：
同组者：时间：
【实验器材】
1．菌种：枯草芽孢杆菌。
2．染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液
3．仪器、材料：二甲苯、香柏油、蒸馏水、95%乙醇、显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸。
【实验目的】
1．学习并掌握细菌的芽胞染色法，初步了解芽孢杆菌的形态特征。
2．巩固显微操作技术及无菌操作技术。
【基本原理】
芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子(endospore)，通常为圆形或椭圆形。
是否产生芽孢及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。
与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，但是，芽孢一旦被着色就很难被脱色。
利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿或石碳酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进如芽孢，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍然保留。
再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样可将两者区别开来。
【操作步骤】
1．制片。
按常规方法涂片、干燥及固定。
2．加热染色。
向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热染液冒蒸气计时并维持5min，加热时注意补充染液，切勿让涂片干涸。
3．脱色。
待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。
4．复染。
用0.5%番红水溶液复染2min。
5．水洗。
用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。
6．镜检。
将载玻片晾干后油镜镜检。
【实验结果】
枯草芽孢杆菌（示芽孢）（10×100，油镜）
梭状芽孢杆菌（示芽孢）（10×100，油镜）
【思考题】
1．为什么芽孢染色需要进行加热？能否用简单染色法观察到细菌芽孢？
答：加热促进芽胞着色。
芽胞壁厚，透性低，不易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色，芽胞呈无色透明状。
2．若在你的制片中仅看到游离芽孢，而很少看到芽孢囊和营养细胞，试分析原因。
答：a.由于芽孢的壁厚，耐压力比细胞体强。
因此有可能是由于在图片是用力过大，将细胞体的细胞壁压碎，从而使芽孢脱落出来的缘故。
b.也有可能是由于菌体培养时间过久，芽胞正处于复苏阶段，所以大多芽孢都从饱囊中游离出来。
3．用孔雀绿初染芽孢后，为什么必须等玻片冷却后再用水冲洗？
答：若玻片不冷却就用水冲洗，会使玻片因突然遇冷而炸裂。