植物快繁整理大题(重点)

植物组织培养试题

一、名词解释

1、外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子等器官

以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。(重点识记)

2.玻璃化现象: 玻璃化现象指当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈透明水浸状的现象。(重点识记)

3愈伤组织培养:是指将母体植株上的外植体,接种到无菌的培养基上,进行愈伤组织诱导,生长和发育的一门技术. (重点识记)

4 植物细胞全能性：一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整的植株。(重点识记)

5愈伤组织：在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁

细胞。

6胚胎培养——将植物的胚胎与母体分离，培养在已知化学成分的培养基上。

7接种：经过表面消毒的植物材料，按照不同的要求切割或分离出器官、组织、细胞，并将它们转接到无菌的培养基质上的全过程。

8花粉培养：从花药中取出花粉进行无菌培养，以获得单倍性愈伤组织，进而长出单倍体植株的技术。

9体细胞杂交：指将植物不同种、属，甚至科间的原生质体通过人工方法诱导融合，然后进行离体培养，使其再生杂种植株的技术。

10 单倍体育种：利用植物组织培养技术诱导产生单倍体植株，再通过某种手段使染色体组

加倍，从而使植物恢复正常染色体数。

11 超低温冷冻保存：根据生物种子资源，在极低温度下，新陈代谢减缓或降至极低，加入一定的冷冻防护剂，而使之得以长期保存的方法。

12 细胞融合：在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。

13 愈伤组织：在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。

14热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。

15平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。

16消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。

17玻璃化：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。

18脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。

19灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。

20褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。

21纸桥培养：将培养基中放入滤纸，再将材料置于滤纸上进行培养称为纸桥培养。

22微尖嫁接：指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。主要程序：无菌砧木培养—茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽。

23 人工种子：将组织培养产生的体细胞胚或不定牙包裹在能提供养分的胶囊里，再在胶囊的外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜，形成一种类似自然种子的结构。

24 试管苗驯化：植物组织培养中获得的小植株，长期生长在试管或三角瓶内，体表几乎没有保护组织，生长势弱，适应性差，要露地移栽成活，完成由“异养”到“自养”的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程。

25 微体嫁接：指将0.1-0.2mm 的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌实生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的的植株。

26 器官培养：植物的根、茎、叶、花器（包括花药、子房）和幼小果实的无菌培养。

27快速繁殖(微繁殖): 用组织培养的方法,使植物的部分器官,组织迅速扩大培养,并移植

到温室或农田繁殖出大量幼苗的繁殖方法.

28原生质体融合(体细胞杂交):就是使分离下来的不同亲本的原生质体,在离体条件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合,像性细胞受精作用那样互相融合成一体的现象.

29脱分化：将已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。

30驯化：试管苗移植前可将培养瓶移到自然光照下锻炼3～10d，让试管苗接受自然光的照射，感受自然温度的昼夜温差现象，使其壮实，然后再开瓶移植，经过较低温、湿度的处理，以适应自然温、湿度条件。

二问答

1.无病毒苗培育的意义？

答：①从根本上消除只靠种苗传播的病毒病的危害。

②无病毒栽培可改善果树品质，提高丰产性，抗逆性及利用砧木的优良性状

③减少农药的使用，降低生产成本，减少或避免对环境的污染。

2.组培苗基质选配的原则？

答：①需具有良好的物理特性，通气性好。

②需具有良好的化学特性，不含有对植物和人类有毒的成分，不与营养液中的盐类发生化学反应而影响苗正常生长。

③需对盐类要有良好的缓冲能力，维持稳定，适且植物生长的PH值。

④选用基质还需物美价廉，便于就地取材。

3. 褐化现象的产生原因和预防措施各是什么？

答：褐变的主要原因：植物品种；生理状态；培养基成分；培养条件不当。

预防措施：选择合适的外植体；合适的培养条件；使用抗氧化剂；连续转移。

4.在植物组织培养中，造成组培材料污染的因素都有哪些？如何采取相应的措施防止或降低污染？

答：造成污染的原因：培养基灭菌不彻底；外植物体表面消毒灭菌不彻底；操作不当。防止污染的措施是：培养基正确灭菌，外植体冲洗充分，消毒灭菌彻底，严格无菌操作。

5.花药和花粉培养在育种学方面的作用是什么?

答：花药培养和花粉培养使单个花粉粒发育成完整的单倍体植株，经过染色体的加倍处理成为正常结实的二倍体植株，其后代属于真正的纯系。可以大大缩短育种年限。

6固体培养基的制作步骤如下:

⑴母液取出。

⑵适量蒸馏水放入加热容器，接通电源加热。

⑶加入称量好的琼脂至完全溶化，称取相应量的蔗糖至溶解，将母液混合液加入混匀，最后

用蒸馏水定容至所需体积。

⑷测试培养基溶液的PH值(5.8-6.0)，调整。

7 简述选用外植体的原则

答：⑴选择优良的种质

⑵选择健壮的植株

⑶选择最适宜的时期

⑷选取适宜的大小

8 简述优良愈伤组织的特征

答：（1）高度的胚性或再分化能力

（2）容易散碎

（3）旺盛的自我增殖能力

（4）经过长期继代保存而不丧失胚性

9 简述配制培养基母液的注意事项

答：（1）配制母液及培养基要用纯度较高的蒸馏水或去离子水

（2）药品应采用纯度等级较高的分析纯或化学纯

（3）药品称量定容时应特别细心、准确，尤其是生长调节物质和微量元素

（4）每次称量药品时，应特别注意防止药匙污染而引起的药品交叉污染

（5）各种药品先以少量水令其充分溶解，然后依次混合

10 简述人工种子的结构

答：完整的人工种子由体细胞胚、人工胚乳和人工种皮三部分构成

（1）最外面一层是人工种皮人工种皮不是细胞，是人造的高分子化合物，能在适宜条件下维持胚状体正常的生长发育

（2）中间是人工胚乳中间是胚状体维持生命力和保证其状适宜条件下生长发育的所需的营养成分和某些植物激素

（3）最内面是被包埋的胚状体或类似物它不是由受精卵发育而来，相当于天然种子的胚，是有生命的物质结构

11 简述植物脱毒苗的检测方法

答：检测方法有视察观察法、生物鉴定法（敏感植物或指示植物法）、电子显微镜鉴定法、抗血清鉴定法和分光光度法

12植物组织培养的应用有哪些方面？

答题要点：⑴在植物育种上的应用

⑵种苗脱病毒与快速繁殖

⑶细胞培养生产有用次生产物

⑷在细胞生物学和发育生物学研究中的应用

⑸在植物遗传、生理生化以及植物病理等基础研究中的应用

13无菌接种的操作程序是怎样的？

答题要点：⑴准备工作。操作人员、超净工作台、种用工具的准备。

⑵表面灭菌。外植体放入超净工作台内，可先用无菌水冲洗2-3次，置70%酒精中0-60 秒，0.1升汞5-10分钟，然后用无菌水冲洗2-3次。

⑶切割整理。无菌条件下将外植体用器械切割整理成一定大小，然后用无菌水冲洗1-2次。

⑷接种。用器械将外植体移入已制备的培养基内。

14 组培时，植物选取的原则主要有哪些？

答：（1）品种选择；（2）外植体增殖能力；（3）外植体大小；（4）外植体年龄和着生部位；（5）木本材料的特殊性

15 影响植物细胞脱分化和再分化的因子有哪些？

答：（1）温度；（2）光照；（3）湿度；（4）气体（5）培养基渗透压；（6）培养基pH值

16 以一种花卉为例，简述快繁的基本过程

答：植物离体快繁从把外植体接种到培养基上开始，到长成生根的完整植株的过程，分为四个时期；（1）稳定无菌培养期（2）稳定培养增殖、生长和增壯期（3）诱导茎芽生根形成小苗期（4）生根小苗移栽和馴化。

17 简述胚状体的特点。与早期的芽点﹑芽原基如何区别？

答：胚状体发生途径形成的胚状体具有数量多、结构完整、易成苗和繁殖速度快的特点；胚状体发生多来自单个细胞，发育初期就有明显的根端与顶端的分化；由胚状体发育而来的小植株与愈伤组织之间几乎没有结构上的联系，小植株各自独立，易于分离，不需要诱导生根的阶段。而由芽发育的小植株，易初是由分生细胞团形成单极性的生长点，发育为芽，随后再转移到生根培养基上形成根，与母体组织或愈伤组织之间有较紧密的联系，不易分离。三论述题

1.请阐明大花蕙兰通过组织培养技术生产的过程是什么？

培养基的配方的确定：

⑴诱导培养基：

MS+BA4-10mg/L+NAA0.1-1mg/L （花梗）

MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L （种子萌发）

⑵增殖培养基： MS+BA3mg/L+NAA1.0mg/L

⑶生根培养基：1/2MS+IBA1.5mg/L +2%蔗糖

操作步骤：

⑴.选材：选择健壮无病虫害、性状优良、生长120天以上、未开裂的蝴蝶兰蒴果。

⑵.灭菌：蝴蝶兰蒴果→流水冲洗→ 75%酒精浸泡20~30秒→0.1%升汞8~10分钟→无菌水冲洗3～5遍→用无菌滤纸吸干水分。

⑶.接种与初代培养：把灭过菌蝴蝶兰蒴果放在无菌培养皿中，并用解剖刀切开果皮使种子散出，放入种子萌发培养基中培养。60天后，种子萌发成4高、 2~3片真叶的无菌苗。

⑷继代培养：取无菌苗接种到诱导培养基中，30天后长出愈伤组织，继续培养形成原球体。

⑸. 增殖培养：将原球体切割成小块，接种到增殖培养基中，40天后，每个原球体形成13~15个原球茎芽，然后再切割培养，周而复始的进行。

⑹.生根培养：将增殖培养中的健壮芽接种到生根培养基中，20天后芽基小根，40天后根变得健壮生根率95%以上。

⑺.驯化和移栽

①选择基质：苔藓或树皮。

②驯化：置于炼苗室内自然光下培养1周。

③移栽：洗根，用500倍托布津水溶液浸泡苗根数秒后移栽到苔藓或树皮基质中。

④移栽后管理：注意温、光、湿度（89%）、肥、水和防病虫害的管理。

2.简述通过小叶嫁接法鉴定草莓病毒的操作步骤。

①从被鉴定的草莓采集长成不久的新叶，除去两边的小叶，中央的小叶带1～1.5cm的叶柄，把它削成楔形作接穗。

②将指示植物除去中间的小叶，在叶柄的中央用刀切入1～1.5cm，再插入接穗，用线把接合部位包扎好。为了防止干燥，在接合部位涂上少量的凡士林。

③观察。约经2周时间，撤去塑料袋。若带有病毒，嫁接后1～2个月，在新展开的叶、匍匐茎或老叶上会出现病症。

3 论述植物离体快速繁殖的理论和基本程序

答：植物离体快速繁殖是根据植物细胞具有全能性理论；植物离体快繁从把外植体接种到培养基上开始，到长成生根的完整植株的过程，分为四个时期；（1）稳定无菌培养期（2）稳定培养增殖、生长和增壯期（3）诱导茎芽生根形成小苗期（4）生根小苗移栽和馴化期。

4 试述植物组织培养试管苗的驯化目的、原则、方法，怎样才能提高试管苗移栽的成活率？答题要点：

试管苗驯化的目的为：提高试管苗对外界环境条件的适应性，提高光合能力，使试管苗健壮，提高试管苗移栽成活率。

试管苗驯化的原则是：调节温湿光和无菌等环境要素，开始和培养条件相似，后期与预计栽培条件相似。

试管苗的驯化方法是：将长有完整试管苗的培养瓶由培养室转到伴遮荫的自然光下锻炼，并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，一般进行1-2周。

提高试管苗移栽成活率措施：

⑴试管苗的生理状况，壮苗移栽比弱苗移栽成活率高。

⑵植物生长调节物质，生长素（NAA）利于生根。

⑶无机盐浓度，降低无机盐浓度有利于移栽成功。

⑷活性炭，少量活性炭利于嫩茎生根。

⑸环境因子，移栽前10天避免太阳直射，温度在25-30℃为好，开始湿度最好保持在85%以上。

⑥使试管苗逐渐从无菌向有菌过渡，第一次移栽最好选用灭过菌的基质，以提高移栽成活率。

5植物离体快繁过程中常见的问题有褐变和污染，分析产生的原因，并提出解决的方法。

答：污染主要来自于材料表面消毒不彻底和无菌操作过程中有外界环境进入培养容器造成。

解决方法主要有选择植物材料、严格消毒灭菌、合理安排繁殖程序、规范操作，控制环境条件等。

褐变主要是植物细胞内的酚氧化成醌；影响褐変因素有基因型、外植体生理状况、培养基、温度和光照、外植体大小、外植体组织受伤程度、材料转移、用于外植体表面灭菌的化学药品。

解决方法主要有选择适宜的外植体和培养条件、连续转移、加入抗氧化剂等。

6 结合所学知识，探讨组织培养技术在园林植物上的应用前景及存在的问题

答：组织培养技术在园林植物上的应用可以缩短苗木繁殖周期；对引进或新发现的稀有良种、特殊育种材料、濒危植物进行快繁；还可以克服远缘杂交的障碍，有利于种属间杂交的进行；通过植物组织培养技术进行苗木脱除病毒处理可以得到无病毒植物。

存在的问题主要有三大技术难题：污染、褐変、玻璃化；此外，需要设备复杂，投入资金多，电能消耗大；对人员技术水平要求高，对试验场所要求也较高，不能代替田间试验等。四操作题

制作配方为MS+6-BA0.5mg/ L的培养基2L (大量元素母液为10×，微量元素母液、铁盐母液、有机物母液均为100×，激素母液浓度为1mg/ml)

(1)按配方移取各母液：大量元素母液为200ml，微量元素母液、铁盐母液、有机物母液均为20ml，6-BA激素母液为1ml。

(2)定容：用蒸馏水定容至2L。

(3)称量蔗糖和琼脂：蔗糖50－60g，琼脂14－16g。

(4)培养基熬制：加入蔗糖和琼脂后进行培养液熬制，直至琼脂全部融化。

(5) 调PH值：先用PH计或PH试纸测量后再用0.1MNaOH或HCl调PH值为5.8－6.0。

(6)二次定容：当培养基熬制后总体积少于2L时要定容至2L。

(7)分装并扎瓶口：趁热分装，100ml的三角瓶约装入30－40ml, 35瓶/L。

(8)高压灭菌：及时灭菌，121-123℃条件下保持20－30分钟。

(9)冷却：待接种。

高压湿热灭菌程序

⑴培养瓶及培养器械放入高压灭菌锅。

⑵灭菌锅加水至淹没电热丝，封闭高压灭菌锅各出气口，接通电源。

⑶加压至49kPa（0.5MPa），打开排气阀，排冷气至压力为0 kPa。

⑷继续加压至108kPa（1.1mPa-1.2Mpa，即121℃），当压力至108kPa（1.1mPa-1.2Mpa，即121℃）时，稳压在此压力15-20min。

⑸关闭电源，自然冷却至压力为0 kPa，取出培养基和器械冷却，贮存于30℃以下室内。