实验十六 转氨基作用
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论转氨基作用是指氨基酸中的氨基团与另一种物质中的羰基团发生反应，从而产生新的氨基酸或新的化合物。
这个作用在生物体内起着重要的生理和代谢功能，参与蛋白质合成、氨基酸代谢、能量代谢等过程。
为了研究转氨基作用及氨基酸的特性，科学家们开展了许多实验研究，其中纸层析实验是一种常用的方法。
纸层析实验是一种基于物质在纸上移动的原理进行分离和鉴定的技术。
在氨基酸研究中，纸层析实验可以用来分离和检测不同氨基酸的存在和含量。
这种实验方法简便易行，不需要昂贵的设备和大量试剂，因此深受科研工作者的喜爱。
在进行纸层析实验前，首先需要准备一张具有吸附性能的纸层析纸。
将待检测样品溶液滴在纸的一端，然后将纸的另一端浸入移液池中。
待液体在纸上上升至一定高度后，取出纸并晾干。
接下来，可以用各种显色试剂处理纸上的样品，使不同的氨基酸显示出不同的色带。
在进行纸层析实验时，可以通过探讨不同氨基酸的特性来讨论转氨基作用。
每种氨基酸在纸上的运动速度和颜色表现会受到其分子结构、极性和分子量的影响。
例如，极性较大的氨基酸在纸上运动较慢，而极性较小的氨基酸则会相对快速地移动。
这种差异可以通过纸层析实验中的色带位置来观察和比较。
转氨基作用还可以通过纸层析实验中的反应产物来进行研究。
例如，将某种氨基酸与特定的酶反应，可以观察到新的氨基酸或产物的形成。
这种方法可以用来研究酶的催化作用和氨基酸代谢途径。
总结一下，转氨基作用及氨基酸的纸层析实验是研究氨基酸特性和生物代谢的重要手段。
通过纸层析实验，可以分离和鉴定不同氨基酸的存在和含量，并观察氨基酸在纸上的运动速度和颜色表现。
此外，纸层析实验还可以研究转氨基作用产生的新的氨基酸或产物。
这些实验方法为我们深入了解氨基酸的生理功能和代谢机制提供了重要的工具和线索。
转氨基作用
转氨基作用转氨基作用是指酶催化下氨基酸之间的氨基基团转移反应。
在生物体内，转氨基作用是一种重要的代谢途径，参与蛋白质合成、氨基酸代谢以及尿素循环等过程。
转氨基作用的机理是通过酶催化，将一个氨基基团从一个分子转移到另一个分子上。
这个过程中，通常存在一个氨基酸供体和一个接受者，供体的氨基基团会转移到接受者上，形成新的氨基酸。
这个过程中还会形成一个新的代谢产物，通常是一个酮酸或醛酸。
转氨基作用主要发生在细胞的胞质和线粒体中，其中线粒体中的天冬氨酸转氨酶是转氨基作用的重要酶类之一。
天冬氨酸转氨酶催化下，天冬氨酸和α-酮戊二酸发生氨基转移反应，生成谷氨酸和丙酮酸。
这个反应是氨基酸代谢途径中的一个重要步骤，同时也是尿素循环的一部分。
在蛋白质合成过程中，转氨基作用起到了重要的作用。
氨基酸通过tRNA中的氨基酰tRNA合成酶与tRNA结合形成氨基酰tRNA复合物，然后在核糖体的作用下，与mRNA的密码子相互配对，将氨基酸转移到正在合成的蛋白质链上，完成蛋白质的合成。
这个转移过程，就是转氨基作用的一种表现形式。
在氨基酸代谢过程中，转氨基作用也扮演着重要的角色。
例如，天门冬氨酸转氨酶催化下，谷氨酸和丙酮酸发生氨基转移反应，生成天门冬氨酸和α-酮戊二酸。
这个反应是氨基酸代谢中的一个重要步骤，不仅参与了蛋白质合成过程，还可以形成新的代谢产物，供能和合成其他生物活性物质。
除了上述的氨基酸转移反应外，转氨基作用还可以参与其他代谢途径的反应。
例如，丙酮酸转化为乙醛的过程中，也会发生氨基转移反应，生成天冬氨酸和酮戊二酸。
这个反应能够提供能量，并在肌肉的运动过程中发揮重要作用。
总之，转氨基作用是一种重要的代谢途径，参与了蛋白质合成、氨基酸代谢以及其他生物代谢过程。
通过转移氨基基团，形成新的氨基酸或代谢产物，为生物体的生命活动提供了源源不断的氮和能量。
转氨基作用实验结果讨论
转氨酶是指存在于细胞质和线粒体中的一类酶，它们在胺基酸代谢过程中发挥着重要作用。
转氨酶包括谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST），这两种酶在临床检测中常被用于评估肝功能和心肌损伤情况。
在转氨基作用实验中，我们可以通过检测血液中ALT和AST的水平来评估某个组织是否存在损伤。
在实验中，我们将不同给药剂量的化学物质或药物注射到小鼠体内，然后检测其血液中AST和ALT的水平。
实验结果显示，在高剂量注射后的小鼠身上，AST和ALT的水平明显升高，而在低剂量或未注射的小鼠中，AST和ALT的水平保持在正常水平。
这说明高剂量注射可能会导致肝脏和心肌组织的损伤，而低剂量或未注射则没有明显影响。
在实验结果讨论中，我们可以从以下几个方面进行分析：1.对实验结果的解释：通过检测AST和ALT的水平，我们可以初步评估组织损伤情况。
实验结果表明，在高剂量注射后的小鼠中，AST和ALT的水平明显升高，这可能是由于注射的物质导致了肝脏和心肌组织的损伤。
相反，低剂量或未注射的小鼠中，AST和ALT的水平保持在正常水平，说明注射的物质对组织没有造成影响。
2.实验结果的局限性：由于这仍然是一项动物实验，并不完全反映人体内的情况。
因此，在设计实验和解释实验结果时，我们需要谨慎地考虑这些限制性因素。
3.实验结果的意义：在临床医学中，转氨酶的检测是非常重要的，它可以作为肝功能和心肌损伤的指标。
通过这项实验，我们可以更好地理解某些物质对生物体内部分组织的影响，同时也加深了我们对于肝、心血管等系统的认识。
4.进一步研究的展望：转氨酶与生物体内许多疾病和病理过程密切相关。
今后在进一步研究中，我们可以研究更多的物质和药物对转氨酶水平的影响，并探究肝脏和心血管疾病状态下转氨酶的变化规律，以期为临床诊断和治疗提供更精准的指导。
综上所述，转氨基作用实验是非常有意义的一项实验，其结果可以为我们提供对于某些组织受损的初步评估。
在解释实验结果时，我们需要注意实验局限性，同时思考实验结果的意义，为未来的研究展望提供方向。
转氨基运用实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解转氨基作用的基本原理和过程。
2. 掌握转氨基实验的操作步骤。
3. 观察并分析转氨基作用的结果，加深对转氨基作用的理解。
二、实验原理转氨基作用是指氨基在转氨酶的催化下，从一个氨基酸转移到另一个α-酮酸上的过程。
该过程不产生游离的氨，而是通过氨基转移酶将氨基从一个化合物转移到另一个化合物上。
转氨基作用在生物体内具有重要的生理意义，如氨基酸的合成、分解以及代谢等。
实验中，我们以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，在转氨酶的催化下进行转氨基反应，通过纸层析法观察反应结果，从而验证转氨基作用的实现。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 丙氨酸- α-酮戊二酸- 转氨酶- 水合氯醛- 硫酸铵- 氯化钠- 氨水- 纸层析纸- 展开剂2. 实验仪器：- 电子天平- 恒温水浴锅- 离心机- 研钵- 移液管- 试管- 滴管- 显微镜四、实验步骤1. 准备实验试剂：- 将丙氨酸和α-酮戊二酸溶解于水中，配制成一定浓度的溶液。
- 将转氨酶溶解于水中，配制成一定浓度的溶液。
2. 制备反应混合液：- 取一定量的丙氨酸溶液和α-酮戊二酸溶液，混合均匀。
- 加入适量的转氨酶溶液，混匀。
3. 水浴加热：- 将反应混合液放入恒温水浴锅中，加热至一定温度，保持一段时间。
4. 冷却反应混合液：- 将加热后的反应混合液取出，置于室温下冷却。
5. 纸层析：- 将制备好的反应混合液滴在纸层析纸上，待溶剂自然挥发后，用展开剂进行展开。
6. 观察结果：- 观察纸层析纸上各物质的迁移距离，分析反应结果。
五、实验结果与分析1. 结果观察：- 在纸层析纸上，观察到丙氨酸和α-酮戊二酸的反应产物，分别为丙酮酸和谷氨酸。
2. 结果分析：- 实验结果表明，在转氨酶的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸发生了转氨基反应，生成了丙酮酸和谷氨酸。
这验证了转氨基作用的实现。
六、实验总结通过本次实验，我们了解了转氨基作用的基本原理和过程，掌握了转氨基实验的操作步骤，并通过纸层析法观察到了转氨基作用的结果。
转氨基作用
将圆形滤纸置于水平位置，使流动相溶
剂由中心向四周扩散。
纸色谱法
实验原理
转氨基反应是由专一转氨酶 催化的α-氨基与α-酮酸之间基团 互换反应, 广泛存在于机体各组 织器官，是体内氨基酸代谢的重
要途径。
实验原理
本实验以丙氨酸和α-酮戊二
酸为底物，加含有谷丙转氨酶
（ALT）的肝匀浆，保温后用纸层 析法检查谷氨酸的出现，以证明
滤纸上结合水为固定相，有机溶剂作为 流动相。 滤纸纤维与水亲合力强，能吸收20-22% 的水，且其中6-7%的水是以氢键形式与 纤维素的羟基结合，在一般情况下很难 脱去，而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力 甚弱。
纸层析法分类
按操作方式分成两类：垂直型和水平型。 顾名思义垂直型是将滤纸条垂直悬挂， 使流动相向上或者向下扩散。水平型是
【实验步骤】
（3）测定管取出后立即放沸水浴中煮
10min(终止反应)，取出后冷却， 过滤，滤液备用。
3．层析
取直径9cm圆形滤 纸一张，用圆规作 半径1cm同心圆， 通过圆心做两条相 互垂直的线，找到 4个位点。
层析纸准备
在滤纸圆心处打一小孔，取 滤纸一条，下半剪成须状，卷成
灯芯状捻, 上端插入滤纸中心孔
4 、显色
在层析滤纸上滴0.5
%茚三酮溶液,在烤 箱中烘吹干滤纸,可见同心弧状色斑。
用铅笔圈下各色斑。比较各色斑的位置
及颜色深浅，并按下列公式计算各色斑 的Rf值，分析是否发生了转氨基反应。
注意事项
1．点样时手要洗净，操作中手尽可 能少接触滤纸，以免污染。 2. 点样点不宜过大，直径应小于 0.5cm，为什么？ 3. 层析液有腐蚀性，操作时注意安 全，防止溅到皮肤或者眼睛。
转氨基作用实验报告
转氨基作用实验报告
实验目的：
通过转氨基作用实验，观察和验证化合物在有机溶剂中的转氨基能力，从而了解它们是否具有转氨基活性。
实验原理：
转氨基作用是有机化合物中氢原子与还原剂之间的相互作用，产生新的有机化合物。
实验中常用的还原剂是亚硝酸钠，它可以被转化为亚硝基离子，再与氢原子发生反应，形成相应的亚硝胺化合物。
实验步骤：
1. 准备反应溶液：称取适量的待测化合物和亚硝酸钠溶液，放入反应瓶中。
2. 开始反应：将反应瓶密封，加热反应瓶中的溶液，并进行搅拌。
3. 观察反应：观察反应溶液的颜色变化、气体产生等情况，记录反应时间。
4. 结果分析：根据实验结果，分析待测化合物是否具有转氨基能力。
实验结果：
实验中观察到有机溶液发生颜色变化、气体产生等现象，反应时间大约为10分钟。
这表明待测化合物具有转氨基能力。
实验结论：
通过转氨基作用实验，验证了待测化合物具有转氨基活性。
这
种活性可能对其在药物合成、有机合成等领域具有重要的应用价值。
转氨基作用 jxPPT精选文档
【实验讨论】
1．如果对照管在沸水中煮的时间不够充分， 会在层析结果中出现什么现象？ 2.比较谷氨酸和丙氨酸Rf值的大小,并说明 为什么? 3.你的结果中有谷氨酸吗?为什么?
25
若有不当之处，请指正，谢谢！
26
11
【实验原理】
茚三酮显色反应
茚三酮
H2O
茚三酮水合物
氨基酸 蓝紫色化合物
12
【实验仪器和试剂】
1、实验器材
培养皿；滤纸；匀浆器；试管；试管架；恒温水 浴锅；毛细管；移液管；喷雾器；剪刀；铅笔；格 尺
2、实验试剂
（1）0.01M pH7.4磷酸缓冲液
（2）0.1M丙氨酸溶液
（3） 0.01Mａ-酮戊二酸溶液酶：
GPT 谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase） GOT 谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminade）
所有转氨酶的辅酶都是维生素B6的磷酸 酯--- 磷酸吡哆醛。
5
【实验原理】
R1氨基酸 （ 丙氨酸）
丙氨酸
对照
与已知的标准的氨基酸Rf进行对比，指出条带所对应的氨 基酸，并根据结果解释转氨作用。
23
【注意事项】
1.匀浆器的正确使用 . 2.对照管的煮沸时间要充分 . 3.手不要在滤纸上乱摸 . 4.点样量不可过多，点样过程中应注意不要造成滤 纸污染（手和唾液都含有氨基酸）。 点样点直径 <0.5cm, 一般 点3-5 滴,前一滴干后, 才可点第二滴. 5．在滤纸上划线时只需用铅笔，不可用其它笔 6．烘烤时要注意明火。 7．点样时毛细管不能交叉污染。 8. 茚三酮的喷量要适中 .
实验：转氨基作用
——纸 层 析 法
转氨基作用(纸层析法)
转氨基作用原理氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。
转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。
经转氨后，原来的α-—氨基酸变成了相应的α-—酮酸，原来的α-—酮酸则成为新的、相应的α-—氨基酸。
本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称GPT）的催化进行转氨基的过程。
然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。
为便于观察转氨基作用，在反应中须加一碘醋酸（或—溴醋酸），以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。
试剂0.9% NaCl溶液；0.01mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）；1%谷氨酸钾溶液；1%丙酮酸钠溶液；0.25%一碘酸钠溶液；2%HAc。
操作1、肌匀浆的制备（该步由实验室准备室制备）取小白兔一只，猛击头部处死后，立即剪颈放血，取肌肉若干经0.9%NaCl溶液洗去血污后，称取肌肉约100g置电动匀浆器中，再加0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液500ml磨成匀浆。
2混匀后同置37-40℃水浴中保温1小时（时加振摇）。
取出两管各加入2%醋酸2滴，再同置沸水浴中5分钟，使反应停止，稍冷却，将上清液用于纸层析。
纸层析（氨基酸）原理层析法又称色层分离法，原指有色物质在吸附剂上因吸附能力不同而得到分离的方法。
后来此方法也应用于无色物质的分离。
层析法除了吸附层析以外，还有离子交换层析、分配层析和亲和层析等。
纸层析是分配层析中的一种。
分配层析是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离的。
通常用a表示分配系数。
溶质在固定相中的浓度（Cs）a = —————————————溶质在流动相中的浓度（CL）一种物质在某溶剂系统中的分配系数，在一定的温度下是一个常数。
纸层析是以纸作为惰性支持物的分配层析，纸纤维上的羟基具有亲水性，因此以滤纸吸附的水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
有机溶剂沿着滤纸自下而上流动的，称为“上行法”；自上而下流动的，称为“下行法”。
转氨基作用实验结果讨论
转氨基作用实验结果讨论
转氨酶是一类重要的酶，它在生物体内起到了重要的代谢作用。
本次实验旨在研究不同条件下转氨基的作用效果，以深入了解转氨酶的性质。
实验方法：首先，我们收集了一些新鲜动物肝脏、肌肉等组织样本，并制备出10%的组织悬液。
接着，我们将样本和悬液分别分成两组，进行不同条件下的转氨基反应。
其中，实验组的转氨基反应在常温下进行，而对照组则是在高温下进行。
实验时间为30分钟，每15分钟记录一次反应结果。
在实验过程中，我们发现实验组的转氨基反应速度比对照组明显快了很多。
此外，实验组的反应体系中添加了酵素，而对照组的反应体系中没有添加酵素。
这说明了酵素的重要性，它可以促进反应速度，使反应更加高效。
在实验结果分析方面，我们发现实验组的转氨基作用效果明显比对照组更好。
在同样的反应时间内，实验组的转氨基反应产生了更多的产物，并且产物的含量也更高。
这说明了转氨酶在常温下的作用效果要比在高温下更好。
我们还发现样本的种类也会对转氨酶的作用效果产生影响。
比如说，肝脏样本中的转氨酶活性要比肌肉样本中的高很多。
这是因为肝脏
是人体内重要的代谢器官，其中的代谢酶更加活跃。
我们还对实验结果进行了统计分析，发现实验组的转氨酶活性明显高于对照组。
这进一步印证了实验组的优势，说明了转氨酶在常温下的作用效果要比在高温下更佳。
转氨基作用实验结果表明，转氨酶是一类重要的酶，它的作用效果会受到多种因素的影响。
在实际应用中，我们需要根据具体情况进行调整，以达到最好的转氨基反应效果。
实验十六 转氨基作用
实验十六转氨基作用【目的】氨基酸的转氨作用在体内所有器官组织几乎都能进行，但不同的组织器官ALT（GPT）的活性大小不同。
【原理】丙氨基酸与α-酮戊二酸在Ph7.4时，经ALT催化进行转氨基作用生成丙酮酸和谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成棕红色丙酮酸2，4-二硝基苯腙，用颜色深浅表示酶活性大小。
本实验以肝和肌进行比较。
ALT丙氨酸 + α–酮戊二酸谷氨酸 + 丙酮酸37℃丙酮酸 + 2,4 –二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙（棕红色）【试剂】1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.928g,磷酸二氢钾(KH2PO4)2.176g加蒸馏水溶解并稀释至1000ml。
2．ALT基质液称取DT-丙氨酸1.79g, α-酮戊二酸29.2mg于烧瓶中,加0.1 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液80ml,煮沸溶解后待冷,用1mol/L NaOH调节pH至7.4(约加0.5ml),再用0.1mol/L磷酸盐缓冲液稀释到100ml,混匀加氯仿数滴置冰箱可保存数周。
3．2，4-二硝基苯肼溶液2，4-二硝基苯肼19.8mg用10mol/L HCl 10ml溶解后,加蒸馏水100ml,置于棕色瓶内,冰箱保存。
4.0.4 mol/L氢氧化钠溶液将16g氢氧化钠溶解于水中，并加水至1000ml。
【器材】乳钵和细砂、滴管、试管、试管架、恒温水浴箱。
【操作】1．将家兔处死后，立即取出肝和肌，分别以冰生理盐水洗去血液。
取10g新鲜肝和肌组织，分别剪碎，加pH7.4缓冲液10ml加细砂研碎,研成匀浆后再加pH7.4缓冲液20ml混匀,用棉花过滤,此即为肝和肌的浸提液.2.取试管2支按下表操作：表3-18 转氨基作用操作步骤【结果及分析】【思考题】比较两管颜色，说明哪种组织ALT活性高，为什么？。
转氨基作用(精)
0.5 37℃ 10min 1.0 0.5 1.5
0.5 沸水浴 10min 1.0 0.5 1.5
置37℃水浴中40min，保温完毕，立即将测定管放入沸水中 10min以终止反应，取出冷却后。
3、层析：
①
点样：Ala；Glu；测定管；空白管；（滤纸的 处理，点样3-4次）
②
展层：约25min后，溶剂前缘距滤纸边缘约1cm 时即可取出，用吹风机吹干。
转氨基作用与
氨基酸纸层析
咸宁学院医学院生化教研室
• 一、目的要求：
验证氨基酸的氨基移换作用
了解纸层析基本原理。 初步掌握利用纸层析法分离及鉴定氨基酸的技 术（包括：点样、展层、显色等技术）。
• 二、实验原理：
1、转氨基作用： Ala+α-酮戊二酸
ALT
丙酮酸+Glu
2.层析法
层析法又称色谱法（Chromatography），是广 泛应用的一种生物化学技术。层析法是利用混合物各 组分物理化学性质（如溶解度、吸附能力、电荷和分 子量等）的差别，使各组分在支持物上集中分布在不 同区域，借此将各组分分离。 层析系统有两个相，一个相称为固定相；另一
个相称为流动相。由于各组分受固定相的阻力和受流
动相的推力影响不同，各组分移动速度各异，从而使
各组得到分离。
按两相所处的状态分类
流动相 液 体 气 体
方法名称
液相层析法（LC）
气相层析法（GC）
固定相
固
体
液
体
固
体
液
体
分离原理
吸
附
分
配
吸
附
分
配
方法名称
液-固层析法 （LSC）
转氨作用实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除转氨作用实验报告篇一：实验六纸层析法观察转氨基作用实验报告实验六纸层析法观察转氨基作用【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用09救援一班第三大组李岚宇20XX222336室温：28°（一）实验目的：1、学习氨基酸纸层析的基本原理。
2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。
（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。
氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。
各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：α—酮戊二酸+丙氨酸谷氨酸+丙酮酸本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
纸层析属于分配层析。
以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。
有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。
由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：ALT物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。
（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液。
2、0.2mol/Lna2hpo4溶液81ml与0.2mol/Lnah2po4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。
3(:转氨作用实验报告)、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0nnaoh仔细调至ph7.4后,加磷酸盐缓冲液至100ml。
氨基转移作用实验报告
氨基转移作用实验报告氨基转移作用实验报告概述：氨基转移作用是生物化学中一种重要的酶促反应，它在细胞内起着关键的代谢调节作用。
本实验旨在通过观察氨基转移作用的实验现象，了解其机理和应用。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 氨基转移酶：选取乳酸脱氢酶（LDH）作为氨基转移酶。
- 底物：选择乳酸和α-酮戊二酸作为底物。
- 辅助试剂：包括缓冲液、辅酶NADH等。
2. 实验方法：- 步骤一：制备实验体系。
1) 首先制备含有LDH的反应液。
2) 分别制备含有乳酸和α-酮戊二酸的底物溶液。
3) 准备辅助试剂。
- 步骤二：进行氨基转移作用实验。
1) 将LDH反应液、乳酸溶液和α-酮戊二酸溶液混合，加入辅助试剂。
2) 记录反应体系的吸光度变化。
- 步骤三：数据处理与分析。
1) 绘制吸光度-时间曲线。
2) 分析曲线的趋势和特点。
实验结果与讨论：在实验中，我们观察到了氨基转移作用的实验现象。
根据实验结果，我们得出以下结论：1. 氨基转移作用是一个动态过程。
在实验过程中，我们观察到反应体系的吸光度随时间的变化而发生明显的变化。
这表明氨基转移作用是一个动态的过程，随着时间的推移，底物被转化为产物。
2. 氨基转移作用具有特异性。
在本实验中，我们选择了乳酸和α-酮戊二酸作为底物。
根据实验结果，我们发现只有在有LDH存在的情况下，反应体系才会发生明显的吸光度变化。
这说明氨基转移作用具有特异性，只有特定的底物和酶才能发生反应。
3. 氨基转移作用在生物代谢中起重要作用。
氨基转移作用是细胞内一种常见的代谢调节过程。
通过将氨基基团从一个底物转移到另一个底物，细胞可以调节代谢途径中的物质转化和平衡。
本实验结果进一步验证了氨基转移作用在生物代谢中的重要性。
结论：通过本实验，我们深入了解了氨基转移作用的实验现象、机理和应用。
氨基转移作用是生物化学中一个重要的酶促反应，对于生物体的代谢调节起着关键作用。
进一步的研究和应用可以帮助我们更好地理解细胞内的代谢过程，并为药物研发和疾病治疗提供理论基础。
转氨基作用 jxppt课件
AB O
;.
9
【实验原理】 迁移率Rf与分配系数K的关系
K 增加
C固 增加
样品的移动速度 减少
减少
减少
增加
Rf 与 K 呈 反 比 ;.
Rf 减少 增加
10
【实验原理】 谷氨酸
丙氨酸
COOH H C CH2CH2COOH
NH2
KGlu RfGlu
KAla
>
RfKAla <
;.
COOH H C CH3
实验：转氨基作用 ——纸 层 析 法
;.
1
【实验目的】 初步掌握纸层析的原理和方法 验证肝脏内存在具有转氨基作用的酶。
;.
2
【实验原理】 1．转氨基作用 2．层析原理 ３. 茚三酮显色原理
;.
3
【实验原理】 转氨基作用
在转氨酶的作用下，α-氨基酸的-NH2和α-酮酸的-C=O相互转化，生成相 应的α-酮酸和α－氨基酸的过程。
;.
13
【实验操作】 实验操作： 1.肝匀浆制备：提供转氨酶 2.转氨基：丙氨酸 谷氨酸 3.纸层析 4.茚三酮显色
;.
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1.肝匀浆制备：提供转氨酶
新鲜肝脏0.5g
4.5ml 0.01mol/L pH7.4磷酸缓冲液
匀浆
食指抵住底部
充分匀浆至粉红 色溶液
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充分匀浆
中指、食指 夹住十字柄部
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画线→点样→打孔→做灯芯→展层
4.谷氨酸
点样点直径 <0.5cm, 一般 点 3-5 滴,前一滴干后, 才可点第 二滴.
3.对照管
1.测定管 2.丙氨酸
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2cm 3cm
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论误差
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论误差转氨基作用是指一些酶（转氨酶）催化下，氨基酸中的氨基基团与其他有机物中的羰基（如酮体、醛体、羧酸等）发生相互转移的化学反应。
这种转移可以使氨基酸的氨基基团被转移到其他分子上，并将原分子上的基团转移到氨基酸上。
纸层析实验是通过纸层析技术对混合物中的物质进行分离和鉴定的方法。
在氨基酸的纸层析实验中，通常是将待测的混合物和标准氨基酸点于纸上，然后通过溶剂的上升运动，使待测物质和标准物质在纸上产生色斑，并根据它们的迁移速度和颜色对其进行分离和鉴定。
在讨论误差时，需要考虑以下因素：1. 纸张的质量和用量：纸张的质量和用量可以影响实验的结果。
使用较差质量的纸张或者使用过多或过少的纸张都可能导致分离效果不佳。
2. 溶剂的选择和准备：溶剂的选择和准备也会影响纸层析实验的结果。
溶剂的纯度、浓度和pH值等因素都应该被控制在合适的范围内，以避免对实验结果产生干扰。
3. 样品的准备和处理：样品的准备和处理方法可能会引入一些误差。
例如，样品的浓度、含量和纯度等可以影响实验的结果。
4. 运动时间和温度：运动时间和温度的控制也是关键因素。
运动时间过短或太长，以及温度过高或过低，都可能导致实验结果的误差。
为了减小误差，可以采取以下措施：1. 选择优质的纸张，并在合适的量上施加样品和标准氨基酸。
2. 使用高纯度、适当浓度和pH值合适的溶剂。
3. 在样品准备和处理过程中严格控制条件，确保样品的浓度和纯度符合要求。
4. 控制运动时间和温度，使其处于适宜的范围内。
此外，还应注意实验操作的规范性，仔细记录实验过程和观察结果，以便后续分析和讨论误差。
实验十六氨基移换反应的定性鉴定及氨基酸的纸层析（1）
实验十六 氨基移换反应的定性鉴定及氨基酸的纸层析实验类型：验证型目的和要求1．学习一种鉴定氨基移换作用的简便方法及其原理。
2．进一步掌握纸层析的原理和操作技术。
3．了解氨基移换作用在中间代谢中的意义。
原理氨基移换酶也称转氨酶。
它能催化α-氨基酸的氨基与α-酮基的α-酮基互换，这种作用称为氨基移换作用。
它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中，在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互联系、相互转化上，都起着很重要的作用。
转氨酶的种类甚多，任何一种氨基酸进行转氨作用时，都由其专一的转氨酶催化。
它们的最适PH 接近7.4。
在各种转氨酶中，以谷氨酸-草酸乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶、GOT ）及谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶、GPT ）活力最强。
上述两种酶均广泛存在于生物机体中。
在正常人血清中也有少量存在。
机体发生肝炎、心肌梗塞等病变时，血清中转氨酶活力常显著增加，在临床上转氨酶活性的测定有重要意义。
测定转氨酶活性的方法很多，如分光光度法、纸上层析法及光电比色法等。
本实验利用纸上层析法，检查由谷氨酸和丙酮酸在谷丙转氨酶的作用下所生成的丙氨酸，证明组织内氨基移换作用。
为了防止丙酮酸被组织中其它酶所氧化或还原，可加碘乙酸或溴乙酸以抑制酵解作用或氧化作用。
氨基酸的纸上层析属于分配层析。
以滤纸及其结合水作为固定相，把欲分离的混合氨基酸样品加于滤纸上，使流动相（展开剂）经此移动，样品中各组分就在两相溶剂问发生分配现象，在固定相中分配比例较大的氨基酸，随流动相移动的速度就慢；在流动相中分配比例较大的氨基酸，随流动相移动的速度就快。
由于各种氨基酸的分配系数不同，就逐渐集中于滤纸上不同的部位，而彼此分离。
层析完毕后，可用茚三酮乙醇液喷洒滤纸，使氨基酸显色形成斑点。
组分的比移值（Rf ）表示如下：()()R r Rf 沿距离点样原点中心到溶剂前中心距离点样原点中心到层析点=各种氨基酸都有其特征的Rf 值，因此可根据Rf 值来鉴定被分离的氨基酸。
转氨基作用实验思考题答案
转氨基作用实验思考题答案（一）实验目的：1、学习氨基酸纸层析的基本原理。
2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。
（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。
氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。
各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：α—酮戊二酸+ 丙氨酸谷氨酸+ 丙酮酸本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
纸层析属于分配层析。
以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。
有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。
由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：ALT物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。
（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液。
2、0.2mol/L Na2HPO4溶液81ml与0.2mol/L NaH2PO4溶液19ml 混匀,用蒸馏水稀释20倍。
3、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔细调至pH7.4后, 加磷酸盐缓冲液至100ml。
4 、0.1mol/Lα－酮戊二酸称取α－酮戊二酸1.461克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中，以1.0 N NaOH仔细调至pH 7.4 后，加磷酸盐缓冲液至100ml。
转氨基作用(纸层析法,Paper Chromatography)
转氨基作用（纸层析法,Paper Chromatography）一．目的了解动物组织的转氨基作用，学习转氨基反应产物的纸层析鉴定方法。
二．原理氨基酸在体内分解代谢的主要方式是脱氨基作用。
脱氨基作用的主要方式有氧化脱氨基、转氨基、联合脱氨基及非氧化脱氨基。
转氨基是指在转氨酶的催化下，氨基酸的α-氨基与α-酮酸的α酮基的互换反应。
转氨酶广泛分布于动物体的各器官组织中，各种转氨基作用都有专一的转氨酶催化。
本实验将谷氨酸和丙酮酸与肝匀浆一起保温，在肝细胞的丙氨酸转氨酶催化下产生丙氨酸。
利用纸层析法鉴定丙氨酸的存在，证明组织内的转氨基作用。
为了防止底物丙酮酸被组织中其它酶所氧化或还原，可加碘乙酸（或溴乙酸）抑制糖的酵解作用和氧化作用。
结果：丙氨酸和α酮戊二酸没有反应产物用纸层析法鉴定转氨基产物丙氨酸的存在与否。
原理为：谷氨酸和丙氨酸是理化性质不同的两种氨基酸，前者为亲水性氨基酸，后者为疏水性氨基酸，据此二者在固定相（水）与流动相（酚试剂）中的分配程度不同，因而流速不同。
最后用茚三酮显色。
三．材料（一）仪器试管；离心管；离心机；剪刀及镊子；培养皿；表面皿；毛细管；喷雾器；吹风机。
（二）试剂1．0.1%丙氨酸溶液2．1%谷氨酸溶液3．1%丙酮酸钠溶液4．0.25%碘乙酸溶液5．0.01 mol/LpH7.4磷酸缓冲液6．0.1%茚三酮乙醇溶液7．层析溶剂（酚的饱和水溶液）四．方法（一）肝匀浆的制备取新鲜动物肝脏1克，置研钵中剪碎，加细砂少许，5ml预冷的0.01 mol/LpH7.4磷酸缓冲液，研磨成匀浆。
(二)转氨基反应1．取小试管2支，分别标明测定和对照，各加肝匀浆10滴，将对照管立即置沸水浴中10分钟，取出冷却。
2．两管各加1%谷氨酸10滴，1%丙酮酸钠 10滴，0.25%碘乙酸5滴，置4 0℃水浴中保温30分钟后取出。
3．两管各加5%三氯醋酸2滴，置沸水浴中5分钟（2000rpm），将上清液分别移入同样编号的小试管中备用。
转氨基活性实验报告
一、实验名称转氨基活性实验二、实验目的1. 了解转氨基作用在氨基酸代谢中的重要性。
2. 掌握通过纸层析法检测转氨基活性的原理和方法。
3. 学习如何通过实验结果分析转氨基活性的变化。
三、实验原理转氨基作用是指氨基酸分子中的氨基转移至α-酮酸分子上，形成新的氨基酸和新的α-酮酸的过程。
这个过程在生物体内通过转氨酶的催化作用实现。
本实验采用纸层析法，通过观察氨基酸在纸层析上的迁移情况，来检测转氨基活性。
四、实验材料与仪器1. 材料：L-苯丙氨酸、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、纸层析纸、丙酮、层析缸、滤纸、铅笔、剪刀、镊子等。
2. 仪器：分析天平、移液管、滴管、酒精灯、电热恒温水浴锅等。
五、实验步骤1. 配制层析液：将丙酮和蒸馏水按体积比1:1混合，配制成层析液。
2. 准备层析纸：将纸层析纸剪成适当大小，用铅笔在纸的一端标记起始线。
3. 配制样品：将L-苯丙氨酸和L-丙氨酸分别溶解于蒸馏水中，配制成一定浓度的溶液。
4. 制备层析样品：取两根毛细管，分别蘸取L-苯丙氨酸和L-丙氨酸溶液，在层析纸上距离起始线1cm处滴加，重复两次，待溶剂挥发后，再滴加α-酮戊二酸溶液，重复两次。
5. 展开层析：将层析纸放入层析缸中，加入层析液，待层析液上升到距起始线1cm处时，取出层析纸，晾干。
6. 观察结果：用铅笔在层析纸上标记出各样品的迁移位置，比较L-苯丙氨酸和L-丙氨酸的迁移距离，分析转氨基活性。
六、实验结果与分析1. 实验结果：L-苯丙氨酸和L-丙氨酸在层析纸上的迁移距离不同，说明两种氨基酸的转氨基活性存在差异。
2. 分析：L-苯丙氨酸的迁移距离较L-丙氨酸远，说明L-苯丙氨酸的转氨基活性较低。
这可能是因为L-苯丙氨酸的氨基转移速率较慢，或者其α-酮酸与层析液之间的相互作用较强。
七、实验结论通过本实验，我们掌握了纸层析法检测转氨基活性的原理和方法。
实验结果表明，L-苯丙氨酸的转氨基活性低于L-丙氨酸。
这为进一步研究氨基酸代谢提供了实验依据。
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实验十六转氨基作用
【目的】
氨基酸的转氨作用在体内所有器官组织几乎都能进行，但不同的组织器官ALT（GPT）的活性大小不同。
【原理】
丙氨基酸与α-酮戊二酸在Ph7.4时，经ALT催化进行转氨基作用生成丙酮酸和谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成棕红色丙酮酸2，4-二硝基苯腙，用颜色深浅表示酶活性大小。
本实验以肝和肌进行比较。
ALT
丙氨酸 + α–酮戊二酸谷氨酸 + 丙酮酸
37℃
丙酮酸 + 2,4 –二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙（棕红色）
【试剂】
1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）
称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.928g,磷酸二氢钾(KH2PO4)2.176g加蒸馏水溶解并稀释至1000ml。
2．ALT基质液
称取DT-丙氨酸1.79g, α-酮戊二酸29.2mg于烧瓶中,加0.1 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液80ml,煮沸溶解后待冷,用1mol/L NaOH调节pH至7.4(约加0.5ml),再用0.1mol/L磷酸盐缓冲液稀释到100ml,混匀加氯仿数滴置冰箱可保存数周。
3．2，4-二硝基苯肼溶液
2，4-二硝基苯肼19.8mg用10mol/L HCl 10ml溶解后,加蒸馏水100ml,置于棕色瓶内,冰箱保存。
4.0.4 mol/L氢氧化钠溶液
将16g氢氧化钠溶解于水中，并加水至1000ml。
【器材】
乳钵和细砂、滴管、试管、试管架、恒温水浴箱。
【操作】
1．将家兔处死后，立即取出肝和肌，分别以冰生理盐水洗去血液。
取10g新鲜肝和肌组织，分别剪碎，加pH7.4缓冲液10ml加细砂研碎,研成匀浆后再加pH7.4缓冲液20ml混匀,用棉花过滤,此即为肝和肌的浸提液.
2.取试管2支按下表操作：
表3-18 转氨基作用操作步骤
【结果及分析】
【思考题】
比较两管颜色，说明哪种组织ALT活性高，为什么？。