实验十六 转氨基作用

实验十六转氨基作用

【目的】

氨基酸的转氨作用在体内所有器官组织几乎都能进行，但不同的组织器官ALT（GPT）的活性大小不同。

【原理】

丙氨基酸与α-酮戊二酸在Ph7.4时，经ALT催化进行转氨基作用生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成棕红色丙酮酸2，4-二硝基苯腙，用颜色深浅表示酶活性大小。本实验以肝和肌进行比较。

ALT

丙氨酸 + α–酮戊二酸谷氨酸 + 丙酮酸

37℃

丙酮酸 + 2,4 –二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙（棕红色）

【试剂】

1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）

称取磷酸氢二钠（Na2HPO4）11.928g,磷酸二氢钾(KH2PO4)2.176g加蒸馏水溶解并稀释至1000ml。

2．ALT基质液

称取DT-丙氨酸1.79g, α-酮戊二酸29.2mg于烧瓶中,加0.1 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液80ml,煮沸溶解后待冷,用1mol/L NaOH调节pH至7.4(约加0.5ml),再用0.1mol/L磷酸盐缓冲液稀释到100ml,混匀加氯仿数滴置冰箱可保存数周。

3．2，4-二硝基苯肼溶液

2，4-二硝基苯肼19.8mg用10mol/L HCl 10ml溶解后,加蒸馏水100ml,置于棕色瓶内,冰箱保存。

4.0.4 mol/L氢氧化钠溶液

将16g氢氧化钠溶解于水中，并加水至1000ml。

【器材】

乳钵和细砂、滴管、试管、试管架、恒温水浴箱。

【操作】

1．将家兔处死后，立即取出肝和肌，分别以冰生理盐水洗去血液。取10g新鲜肝和肌组织，分别剪碎，加pH7.4缓冲液10ml加细砂研碎,研成匀浆后再加pH7.4缓冲液20ml混匀,用棉花过滤,此即为肝和肌的浸提液.

2.取试管2支按下表操作：

表3-18 转氨基作用操作步骤

【结果及分析】

【思考题】

比较两管颜色，说明哪种组织ALT活性高，为什么？