网织红细胞计数
《临床检验基础》课件——第九讲：网织红细胞计数实验
不允许以血红 蛋白浓度来折 算红细胞数
充池要均匀， 不能有气泡混 入、溢出或不
满
请认真书写实 验报告
谢谢 大家
数板等
试剂
红细胞稀释液
改良牛鲍氏计数板
操作步骤
01
02
03
04
取中号试管1支 ，加红细胞稀 释液20ml。用清洁干燥微量吸管 取末梢血10μl ，擦去 管外余血后加至红细 胞稀释液底部，再轻 吸上层清洗吸管2-3次
立即混匀。
混匀后，用干净 微量吸管将红细 胞悬液充人计数 池，不得有空泡 或外溢，充池后 静置2-3 min后计
参考区间
男：
（4.09～5.74）×1012/L
女：
（3.68～5.13）×1012/L
新生儿：（5.2～6.4）×1012/L
注意事项
1
2
3
4
5
采血时不能 挤压过甚， 因此针刺深 度必须适
当。。
稀释液要过滤， 试管、计数板 均须清洁，以 免杂质、微粒 等被误认为红
细胞
参考范围数 值内，两次 红细胞计数 相差不得超
临床检验基础
第九讲 网织红细胞计数
目录
CONTENTS
实验原理 实验器材 实验试剂 操作步骤
计算 参考值 注意事项 思考题
实验原理
用等渗稀释液将血液按一定倍 数稀释，充人计数池后显微镜下 计数一定体积内红细胞数，换算 求出每升血液中红细胞的数量
试验器材、试剂
试验器材
显微镜、改良 Neubauer血细胞计
数。
高倍镜下依次计 数中央大方格内 四角和正中共5 个中方格内的红 细胞。对压线细 胞按"数上不数下 、数左不数右"的
《临床检验基础》课件——第九讲：网织红细胞计数理论
3．放疗和化疗的监测
•指导临床适时调整治疗方案，避免造成严重的 骨髓抑制。
•机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期 HFR和MFR降低，而后网织红细胞数值降低； 停止放、化疗，骨髓功能恢复后，这些指标依次 上升。
临床检验基础
第九讲 网织红细胞计数
网织红细胞(reticulocyte，Ret)是晚幼红细胞脱核后到 完全成熟红细胞间的过渡细胞
胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸(RNA)，经煌焦油蓝等活 体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，连缀成线， 线连接成网。
属于尚未完全成熟的红细胞(当嗜碱性物质消耗殆尽后才 被视为成熟红细胞)，一般为8～9.5μm。
2．评价疗效
(1)观察贫血疗效：贫血随访
缺铁贫或巨幼贫有效治疗后，2～3d后Ret开始上升， 7～10d达到最高峰(约10％)，2周后渐降至正常。
(2)骨髓移植后监测骨髓造血恢复：
骨髓移植后第21天，如Ret大于15X109／L，常表示 无移植并发症；
若骨髓开始恢复造血功能，首先HFR和MFR上升， 其次为网织红细胞计数值上升。
外周血中网织红细胞主要为Ⅳ型，凡含有2个以上 网织颗粒的红细胞均应计为网织红细胞。
3．网织红细胞计数方法
(1)Miller窥盘： (2)显微成像系统：计算机和细胞形态分析软件，
①HFR：粗颗粒堆积成网状。 ②MFR：粗颗粒在10个以上，或细小颗粒超过15个。 ③LFR：细胞内含15个以下细小颗粒
参考范围
参考值
成人和儿童:0.005～0.025
网织红细胞百分数 新生儿: 0.02～0.06 网织红细胞绝对数 成人和儿童: (24～84)X109／L
4
临床意义
1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型。
10-网织红细胞计数
10-网织红细胞计数B D I S R e t i c-C O U N T（T h i a z o l e O r a n g e）Catalog No. 349204简介早期红细胞细胞核丢失后，胞浆内仍残留有细胞器（如核糖体、线粒体），这样的早期红细胞就是网织红细胞，它有别于不含细胞器的成熟红细胞。
这些细胞器富含核酸物质（RNA和DNA），而在成熟红细胞中不含有此种物质。
正常人（非贫血者）中，网织红细胞在骨髓中三天成熟，第四天出现在外周循环血中。
网织红细胞计数可以评估红细胞造血系统活性，但是如果网织红细胞的骨髓成熟时间缩短而循环血成熟时间延长，这种评估方法就会有误差。
这时，外周血相中一至三天的网织红细胞（“漂移”网织红细胞）也会被当做第四天网织红细胞而计算在内。
如遇此种情况，应当对“漂移”网织红细胞做修正（修正公式见流式细胞仪分析一节）。
BD公司生产的Retic-COUNT试剂主要成分为噻唑橙（TO），与丫啶橙（AO）的作用类似。
TO 与DNA碱基对以1:2的比例结合，分解常数、正电荷数和膜通透性与AO相近。
Retic-COUNT试剂既可与DNA结合，也可与RAN结合，形成的荧光-核酸复合物，吸收光谱为475nm，荧光发射光谱为530nm，因此，适合在安装了488nm激光的流式细胞仪上使用，如FACSCalibur，FACSort，FACScan等。
网织红细胞计数的传统方法是使用新亚甲基蓝染料，染色涂片后，光镜下计数。
但此方法费时，且由于只计数1000个细胞，因而存在固有的取样误差。
使用Retic-COUNT流式细胞术方法进行网织红细胞计数，与传统的新亚甲基蓝方法相比，存在很多优势。
使用流式细胞术，可以检测上万个细胞，具有很好的取样精确性。
由于使用的是细胞悬液，可以消除涂片时的分布误差。
同时，它还具有省时、操作简便等优点。
另外，由于可以使用配套的Retic-COUNT自动软件，不需要做阴性对照，还可以减少操作的变异性。
网织红细胞计数
网织红细胞计数网织红细胞是未完全成熟的红细胞。
红细胞由骨髓进入外周血，需24-48h合成最后20％的血红蛋白，残余的嗜碱性物质才能完全消失，成为成熟的红细胞。
将其分为五型：花冠型、丝球型、网型、破网型、点粒型。
●仪器型号：Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置●检测原理：一份血液样品经过吸液和定量、稀释至指定的稀释比，并进行染色。
然后将该样品送入流动的池中。
一个半导体激光束通过流动池照射到细胞上。
前向散射光由光二极管接收，侧面的散射光和侧面的荧光则由光点信增管（PMT）接收。
光信号被转化为电脉冲，从而可以得到有关血液细胞的信息。
⑴前向散射光和侧向散射光：当光通路中存在诸如粒子之类的障碍物时，该光束就在每个障碍物的不同方向上产生出散射光。
通过检测散射光，可以得到有关细胞体积大小和材质的信息。
与此同时，当一束激光照射到血细胞颗粒上时，就产生光散射。
散射光的强度，取决于颗粒直径和观察角度这样的因素。
对前向散射光进行检测，提供有关血液细胞体积大小的信息；同时对侧向散射光进行检测，提供有关细胞内部的信息。
⑵侧向荧光：当光照射到经过荧光染色的血液细胞上时，就产生比入射光波长更长的光。
随着染色集团浓度的增加，荧光强度也增加。
通过测●试剂：⑴CELLPACK（EPK）⑵RET SEARCHⅡ（RED）●标本吸入量：⑴手工模式130lμ⑵自动进样器模式200lμ●静脉血采血方法：抽取病人静脉血2ml，于EDTA二钾抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K2／ML）24小时室温保存。
●操作步骤：⑴当机器经过电源接通和一系列自检无误后，在机器左上放状态栏显示“READY”及确认“READY LED”（准备状态灯）呈绿色时，机器进入准备测量状态。
⑵要在允许空白值内：WBC RBC HGB PLT0.3⨯109/L 0.02⨯1012/L 1g/L 10⨯109/L⑶检测质控数值合格。
⑷标本的测量：手工模式：在准备测量状态下，按下屏幕最上一行数字键输入标本的编号，按吸液管放进待测标本试管中并按下开始键。
一、网织红细胞(Ret)计数
【临床意义】
（1） 评价骨髓造血功能： ① RET↑是红系造血功能活跃的反映。表示骨髓造血功能旺
盛，见于增生性贫血，以溶贫最为显著（6～8%，急性溶血 可达20%，严重者可达40～50%）；急性失血可明显↑ ；缺 铁和巨贫RET正常或轻度↑ 。
② RET↓表示骨髓造血功能减低，多见于再障，尤以急性再
血红蛋白测定
血红蛋白组成 珠蛋白肽链（4条）,每条折叠的珠蛋白肽链结合1个 亚铁血红素，分子量64458（不带O2）。 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 珠蛋白肽链 亚铁血红素 亚铁血红素 亚铁血红素 亚铁血红素
原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+ 原卟啉 Fe 2+
血 红 蛋 白
3 1
A
控制Ret计数CV=10% (ICSH推荐)需镜检的RBC数
Ret（%） １～２ ３～５ ６～10 11～25 窥盘小方格内镜检RBC数 1000 500 200 100 相当镜检RBC总数 9000 4500 1800 900
【正常参考值】
方 法 年龄组 相对值（%）
显微镜 计数
成人、儿童 新生儿
染色后，使含有RNA的RBC被计数，自动计算出RET的%及绝对数。优点：
测量细胞多，避免主观因素、方法易于标准化。国外已广泛使用，国 内逐步推广使用。但成本高。
近年来，新型多参数血细胞分析仪具有Ret计数功能。
【质量控制】
1.抗凝血最好在4h内处理，保存在4º C，可延长至8h. 2.染色温度控制在37º C为宜，无论何种染液，室温（25º C） 以下染色时，RET检出率明显减低，故要求37º C恒温染 色。 3. 玻片法容易使血液中的水分蒸发，造成涂片困难，受染料沉 淀的干扰，故已少用。 4. 试管法为手工RET计数的首选方法，染液与血液的比例以 1:1为宜，严重贫血时可适当增加血液比例。 5. 推制血膜不宜太薄或太厚，否则会造成RET分布不均。 6. ICSH推荐使用Miller窥盘作Ret计数，其CV=10%±
网织红计数的方法与原理
2 检测原理及方法
2.1检测原理
网织红细胞的核糖核酸以弥散胶体状态存在。常 规细胞染色法在涂片及染色过程中对细胞进行了 固定，使网织红细胞的核酸物质即使着色也难于 在普通显微镜下识别。Ret须经活体染色或荧光染 色后才可用显微镜识别或经仪器计算分离。 因此就有两大类计数方法：显微镜计数法和仪器 计数法。
网织红细胞计数
马强虎
网织红细胞计数
1 概念、分型及形态特征 2 检测原理及方法 3 方法学评价 4 质量控制 5 参考值 6 临床意义
1 概念、分型及形态特征
1.1概念：
网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间 的过渡阶段细胞，略大于成熟红细胞，直径 8.0~9.5um，其胞质中残存的嗜碱性物质核糖核酸 （RNA）源自有核红细胞，嗜碱性物质RNA经碱 性染料（煌焦油蓝或新亚甲蓝等）活体染色，形 成蓝色或紫色的点粒状或丝网状结构沉淀物，故 称作网织红细胞。
3.方法学评价
检测方法
评价
普通显微镜法 玻片法 试管法
简便、成本低，可直观细胞形 态；影响因素多，重复性差
水份易蒸发，染色时间短，结Hale Waihona Puke 果偏低易掌握，重复性好，易复查
Miller窥盘计数法 仪器法
规范计算区域，减少了实验误 差，ICSH推荐方法
检测细胞多，精密度高，与手 工法相关性好，易标准化，仪 器贵；出现Howell-jolly小体， 有核红细胞，巨大血小板可是 结果假性增高。
细胞数÷1000 ×100%
网织红细胞
2.3 Miller窥盘计数法（ICSH推荐使用的Ret显微镜 计数法）
1．标本采集：真空采血管或普通空针采静脉血， 用EDTA-K2抗凝（1.5~2.2mg/ml）
网织红细胞计数
8
3．作为病情观察的指标
溶血性贫血及失血性贫血，治疗过程中 连续观察网织红细胞计数，可作为判断 病情变化的参考指标。 如治疗后网织红细胞逐渐降低，表示溶 血或出血已得到控制。 如网织红细胞持续不减低，甚至更增高， 表示病情未得以控制，甚至加重。
9
四、红细胞沉降率测定
红细胞沉降率（ESR），简称血沉率 指红细胞在一定条件下沉降的速率。 正常情况下，红细胞在血浆中具有相对 的悬浮稳定性，沉降极其缓慢。 在病理情况下，血沉率可明显增快。
28
临床意义
2．血细胞比容减低 见于各种贫血。 不同类型的贫血，红细胞体积大小不同， 故血细胞比容的减少与红细胞数量减少 并不—定成正比。 因此必须将红细胞数、血红蛋白量和血 细胞比容三者结合起来，计算红细胞各 项平均值才有参考意义。
29
(二)红细胞平均值的计算
1．平均红细胞容积(MCV) 指每个红细胞的平均体积，以飞升（ fl ）为单 位。
14
参考值
魏氏(Westergoen)法： 成年男性0~15mm/1小时末
成年女性0~20mm/1小时末
15
临床意义
(一)生理性变化 12岁以下的儿童血沉略快。 妇女月经期血沉略增快，可能与子宫内膜破损 及出血有关。 妊娠3个月以后至分娩后3周血沉快，与生理性 贫血及纤维蛋白原含量增加等有关。 老年人血浆纤维蛋白原含量增加血沉加快。 高原地区居民红细胞增多，血沉低于平原地区。
实验三网织红细胞计数血沉测定专家讲座
实验三网织红细胞计数血沉测定
第2页
▪ 器材 显微镜、试管、吸管、玻片、推片、 香柏油、擦镜纸、擦镜液
▪ 试剂 新亚甲蓝 ▪ 标本 新鲜全血
实验三网织红细胞计数血沉测定
第3页
操作步骤
▪ 1.加染液 将Ret染液2滴加至小试管中，做好标识。
▪ 2.加血 在已加入染液小试管内注入新鲜全血2滴， 马上混匀。
实验三网织红细胞计数血沉测定
第6页
注意事项
▪ 1.试剂准备 推荐使用新亚甲蓝染液, 试剂应定 时配制, 用前过滤。
▪ 2.染色 染液与血液比以1:1为宜,染色时间不能 过短。试剂用后及时盖好盖子, 以免挥发。
▪ 3.标本 应及时染色, 及时测定。 ▪ 4.计数 选择红细胞分布均匀, 网织红细胞着色
实验三网织红细胞计数血沉测定
第9页
二、血液沉降率测定（魏氏法）
参考值 ＜50岁: 男性 < 15mm/h 女性 <20mm/h
＞50岁: 男性 < 20mm/h 女性 <30mm/h
实验三网织红细胞计数血沉测定
第10页
注意事项
1.严格控制采血量，使抗凝剂与血液百分比为 1: 4。
2.血沉管应垂直放置，不得倾斜。
实验三网织红细胞计数血沉测定
第12页
白细胞计数
一、目标
掌握显微镜白细胞计数方法。
二、原理
用白细胞稀释液将血液稀释
一定倍数, 同时破坏溶解红细胞。 将稀释血液冲入计数池后, 在显微 镜下计数一定体积内白细胞数, 经 换算求出每升血液中白细胞数。
实验三网织红细胞计数血沉测定
第13页
三、器材
显微镜、改良计数板、血盖片、试管、微量 吸管、加样枪、乳胶吸头、纱布
10-网织红细胞计数
10-网织红细胞计数B D I S R et i c-C O U N T（Thi azol e O r ange）Catalog No. 349204简介早期红细胞细胞核丢失后，胞浆内仍残留有细胞器（如核糖体、线粒体），这样的早期红细胞就是网织红细胞，它有别于不含细胞器的成熟红细胞。
这些细胞器富含核酸物质（RNA和DNA），而在成熟红细胞中不含有此种物质。
正常人（非贫血者）中，网织红细胞在骨髓中三天成熟，第四天出现在外周循环血中。
网织红细胞计数可以评估红细胞造血系统活性，但是如果网织红细胞的骨髓成熟时间缩短而循环血成熟时间延长，这种评估方法就会有误差。
这时，外周血相中一至三天的网织红细胞（“漂移”网织红细胞）也会被当做第四天网织红细胞而计算在内。
如遇此种情况，应当对“漂移”网织红细胞做修正（修正公式见流式细胞仪分析一节）。
BD公司生产的Retic-COUNT试剂主要成分为噻唑橙（TO），与丫啶橙（AO）的作用类似。
TO 与DNA碱基对以1:2的比例结合，分解常数、正电荷数和膜通透性与AO相近。
Retic-COUNT试剂既可与DNA结合，也可与RAN结合，形成的荧光-核酸复合物，吸收光谱为475nm，荧光发射光谱为530nm，因此，适合在安装了488nm激光的流式细胞仪上使用，如FACSCalibur，FACSort，FACScan等。
网织红细胞计数的传统方法是使用新亚甲基蓝染料，染色涂片后，光镜下计数。
但此方法费时，且由于只计数1000个细胞，因而存在固有的取样误差。
使用Retic-COUNT流式细胞术方法进行网织红细胞计数，与传统的新亚甲基蓝方法相比，存在很多优势。
使用流式细胞术，可以检测上万个细胞，具有很好的取样精确性。
由于使用的是细胞悬液，可以消除涂片时的分布误差。
同时，它还具有省时、操作简便等优点。
另外，由于可以使用配套的Retic-COUNT自动软件，不需要做阴性对照，还可以减少操作的变异性。
(三)网织红细胞计数
（2）评价疗效
网织红细胞反应： 网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别 或巨幼细胞贫血分别 给予铁剂、维生素B 或叶酸治疗2~3d后，网织 给予铁剂、维生素 12或叶酸治疗 后 红细胞计数值开始上升， 达到最高(10% 红细胞计数值开始上升，7~10d达到最高 达到最高 左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 左右 ；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、 血红蛋白开始升高。 血红蛋白开始升高。 骨髓移植、 治疗后： 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造 治疗后 血功能， 升高， 血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。 升高 网织红细胞计数值上升。
六、参考值
成人： 成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） （ ） 新生儿： 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） （ ） 儿童： 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） （ ） 成人绝对值（ 成人绝对值（24-84） ×109/L ）
七、临床意义
（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 ）评价骨髓增生能力， 再障时 明显降低。绝对值低于 × 再障时，明显降低。绝对值低于5×109/L可 可 做为急性再障的辅助诊断指标。 做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 失血、多数溶血性贫血患者网织红细胞可明 溶血性贫血 显高于正常。 显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持 正常、轻度升高或降低。 正常、轻度升高或降低。
（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制， 早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织 降低， 早期 和 降低 红细胞的降低。而停止放、化疗， 红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功 能恢复后，又见上述指标依次上升。 能恢复后，又见上述指标依次上升。可指 导临床医师适时调整治疗方案， 导临床医师适时调整治疗方案，避免造成 严重的骨髓抑制。 严重的骨髓抑制。
网织红细胞计数
网织红细胞计数1．项目名称网织红细胞计数2．检验目的2．1观察贫血疗效2．2骨髓移植后监测骨髓造血恢复2．3其他疾病协诊等临床实验室3．检验原理：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，甲蓝活体染色后，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
4．性能参数4．1重复性4．2分析和计算参数：百分比（%）4．3样本量：染液量=1：14．4精密度5．原始样品系统：全血6．容器和添加剂类型容器采用真空负压专用抗凝管，添加剂类型为0.109M乙二胺四乙酸钾7．试及显微镜7．1 10G/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：新亚甲蓝 1.0G枸橼酸钠0.4G氯化钠0.85G溶于双蒸馏水100ML中，混匀，过滤后备用。
7．2 显微镜7．2．1 商标8．校准程序:显微镜的验证，光路系统校正灯泡大约半年更换一次9．程序步骤：9．1标本采集与要求9．1．1标本采集：抽取静脉血1.8ml，加入到含有乙二胺四乙酸钾溶液的抗凝真空试管中，并轻轻颠倒10次使之充分混匀，不得有凝块、不得形成泡沫，总量不得超过2.0±0.2ml，并在试管上做好标识。
采血应避免溶血，采血后2小时内送到检验科，需要运输时应在低温条件下运输。
采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤。
9．1．2不合格标本的处理对凝固、有凝块、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理9．1．3标本保存检测应在标本采集后2小时内完成,2～8℃保存不超过4小时,分析后的标本保存三天。
9．2检验前准备9．2．1把接收到的标本按顺序编写序号。
9．2．2准备清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片、盖玻片、毛细管，玻璃笔。
9．3病人标本的检验9．3．1取小试管1支加10G/L新亚甲蓝盐水溶液2滴。
9．3．2加入末梢血（或EDTA钾抗凝静脉血）2滴于上述试管中，混匀。
网织红细胞计数
22
手工法
魏氏法、温氏法、ζ血沉率及潘氏法, 检测原理相似。 差别在于抗凝剂、用血量、血沉管规 格、观察时间的不同，故各种方法的参 考值不同。 ICSH推荐魏氏法为血沉测定参考方法
23
魏氏法
将枸橼酸钠抗凝血吸入
10mm
特制血沉管内，垂直立 ESR：10mm/h 于室温中，1h末读取红
细胞层下沉的距离，用
Ⅳ点粒型
4
对网织红细胞的描述
是晚幼红细胞脱核后的未完全成熟的红细胞 体积比成熟红细胞体积稍大 胞浆内残存有正常核糖核酸(RNA) 具有合成血红蛋白的能力 核糖核酸越多，网织红细胞越幼稚 外周血中主要是Ⅳ型网织红细胞 网织红细胞经瑞氏染色为嗜多色性红细胞 存在于骨髓与外周血中
5
网织红细胞计数（Ret）
42
43
毫米（mm）数值报告。
24
魏氏血沉测定
25
自动血沉仪法
抗凝血液静置后，红细胞下降，红细胞 与血浆分离，其界面随时间而下移。血 沉仪用光电比浊法、红外线扫描法或摄 影法定时扫描红细胞与血浆界面位置， 得到血沉值并显示红细胞沉降高度H与 对应时间t相关的H-t曲线。
26
方法学评价
方法 优点
缺点
魏氏法 国内规范方法， 测定血沉某时刻最
贫血→RBC总面积减少，ESR↑ RBC增多，ESR ↓ RBC直径愈大，ESR ↑ 球形RBC增多，ESR↓
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其他因素
血沉管位置 血沉管倾斜，血沉增快
温度 温度＞25℃，血沉增快，结 果应校正
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质量保证（魏氏法）
抗凝剂用量准确：枸橼酸钠（109mmol/L） 与血液之比（1：4）。
网织红细胞数 100%
1000
医学检验科新项目临床应用课件(网织红细胞计数(RET)等项目)
FT3
与TT3基本相同，但比TT3更为灵敏，且测定值不受TBG的影响；在亚临床甲亢患者，病人甲亢症状不明显， TT3可在正常范围，但FT3多已升高
FT4
与TT3基本相同，但比TT3更为灵敏，且测定值不受TBG的影响
TG-Ab
升高：慢性淋巴细胞性甲状腺炎、Graves病、甲减
anti-TPOAb 一种自身抗体，IgG型抗TPO抗体常见于桥本甲状腺炎，其水平与疾病活动期相关
6.孕产妇贫血的 诊断
当溶血性贫血溶血时大量网织红细胞进入血循环，Ret可达6%～8%，急性溶 血，可达约20%，甚至50%以上，绝对值超过100×10^9／L。急性失血后 ，5～10d网织红细胞达高峰，2周后恢复正常。
RET和IRF（ 未 成 熟 网 织 红 细 胞 ） ：血容量增加以满足胎儿生长的需要，势 必刺激骨髓造血功能的增强，因此网织红细胞明显增高，尤其是未成熟网织 红细胞增高。
医嘱：甲状旁腺激素 采样管:黄管
治疗骨质疏松
骨质疏松患者血清PTH水平异常升高，血清骨钙 素、25-羟基维生素D3水平异常降低，临床上， 可以将PTH作为骨质疏松诊断的主要参考指标。
甲状旁腺功能减退症
甲状旁腺功能减退症(HP)简称甲旁 减，是指PTH分泌过少或效应不足 引起的一组临床综合征。
甲状旁腺功能亢进
CT降低： 1. 甲状腺发育不全或甲状腺全切除者，血清降钙素水平降低。 2. 重度甲状腺功能亢进时，血清降钙素水平降低。 3. 妇女停经以后、低血钙、老年性骨质疏松等。
降钙素（CT）
降钙素 （CT）
与
降钙素原 （PCT）
一字之差，降钙素（CT）和降钙素原（PCT）意义大不同！
降钙素（CT）
CT
降钙素（CT）是人体内分 泌系统分泌的一种调节钙 磷代谢的激素，可以降低
一、网织红细胞(Ret)计数
优点：操作简单、快速，同时可获得多项血细胞参数。 缺点： ①不同的仪器使用的溶血素不同，形成不同的Hb 衍生物，某些溶血剂形成的衍生物稳定性差，故应严 格控制溶血剂的加入量及溶血时间。 ②有些溶血剂虽加入KCN,但衍生物并不是HiCN,而 是氰化血红蛋白仪器需经过校正后才能进行Hb测定。 ③ 低色素性贫血、某些肝病等，由于RBC具有抵 抗溶血剂的作用，导致RBC溶血不完全而影响Hb测定。
本试剂中含有少量KCN，废液必须无害化处理。
废液处理：用水按1:1稀释,再按每升液体加35ml次氯 酸钠，充分混匀，敞开容器口，过夜，使CN-氧化成N2 和CO2 ↑，或水解成CO32-和NH4+，然后倒入下水道。
【方法学评价】
1.氰化高铁血红蛋白（ HiCN ）法：
特点： ①WHO和ICSH推荐的标准方法，
5.Hb功能 运输O2和CO2,结合可逆。1分子Hb结合1分子O2 ，在标准 状况下，每克Hb能结合1.39 ml O2 。
。
血红蛋白测定
• 测定血液中各种血红蛋白的总浓度。 • 方法有多种
血红蛋白计法 氰化高铁血红蛋白法（HiCN） 十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法（SLS-Hb） 其他方法
血红蛋白计法
【正常参考值】
成人男： 120～160 g/L 成人女: 110～150 g/L 新生儿: 170～200 g/L
【临床意义】
贫血诊断优于RBC. Hb<120 g/L, （女，110 ）轻度， Hb<90 g/L, 中度 Hb<60 g/L, 重度 Hb<30 g/L, 极重度
【质量控制】
1.技术误差：稀释倍数尽量准确，分光光度计波、比色杯 光径要经常校正，以减少技术误差。 2.HiCN转化液：应置棕色瓶中，不得使用塑料容器，以防 CN-丢失。 3. HiCN参考液：是制备标准曲线、计算K值、校正仪器及 其他测定方法的关键物质，ICSH公布严格的 规格和制备方法。国产标准品已有供应
SOP008网织红细胞百分数计数
网织红细胞计数一、检验目的：了解骨髓红细胞增殖增加或减低等情况二、原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或亚甲蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色的网状结构一、标本要求取末梢外周血或抗凝静脉血二、试剂10g/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：新亚甲蓝1g枸橼酸钠0.4g氯化钠0.85g溶于双蒸馏水100ml中，混匀，过滤后备用。
三、仪器设备普通光学显微镜和Miller窥盘四、操作步骤1.于小试管中滴加2滴网织红细胞染液。
2.加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。
3.静置15--20分钟后，取用1滴制成薄片。
4.油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。
七、质量控制：1、95%的可信限法：（1）Sp=√R（1—R）/NSp为标准差，R为网织红细胞百分数，N为所数红细胞数。
网织红细胞计数95%可信限范围为0.028—0.0522、两差比值法：r=IR1-R2I/√R1（1--R1）+R2（1—R2）/N。
R1、R2分别为两次计数结果N为所数红细胞数，r＜2时结果可靠。
八、计算方法：九、生物参考区间0.5%~1.5%十、操作性能十一、超出可报告范围的处理：十二、危急值：十三、干扰因素：1、工作人员的责任心。
2、推血片的质量。
3、染色时间。
十四、临床意义：1、网织红细胞增多：表示骨髓红细胞系统的增生旺盛。
多见于各种增生性贫血，如溶血性贫血，特别是急性溶血性贫血，急性大出血引起的失血性贫血。
当缺铁性贫血和巨幼细胞性贫血治疗有效时，可出现短时间的网织红细胞大量增加，以后即降至正常或稍高于正常。
2、网织红细胞减少：多见于骨髓增生低下，如再生障碍性贫血和某些溶血性贫血有再障危象时。
阵发性睡眠性血红蛋白尿症网织红细胞有所减少，但有些慢性再生障碍性贫血患者的网织红细胞并不明显减低。
3、可以作为贫血治疗疗效的判断监察指标，用于观察治疗效果和判断病情变化。
十五|参考文献：1、《全国临床检验操作规程》2、罗春丽主编《临床检验基础》3、刘成玉主编《临床检验基础实验指导》。
网织红细胞计数法的流程
网织红细胞计数法的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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网织红细胞计数
1．项目名称
网织红细胞计数
2．检验目的
2．1观察贫血疗效
2．2骨髓移植后监测骨髓造血恢复
2．3其他疾病协诊等临床实验室
3．检验原理：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，甲蓝活体染色后，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
4．性能参数
4．1重复性
4．2分析和计算参数：百分比（%）
4．3样本量：染液量=1：1
4．4精密度
5．原始样品系统：
全血
6．容器和添加剂类型
容器采用真空负压专用抗凝管，添加剂类型为0.109M乙二胺四乙酸钾
7．试及显微镜
7．1 10G/L新亚甲蓝（或煌焦油蓝）生理盐水溶液：
新亚甲蓝 1.0G
枸橼酸钠0.4G
氯化钠0.85G
溶于双蒸馏水100ML中，混匀，过滤后备用。
7．2 显微镜
7．2．1 商标
8．校准程序:显微镜的验证，光路系统校正
灯泡大约半年更换一次
9．程序步骤：
9．1标本采集与要求
9．1．1标本采集：
抽取静脉血1.8ml，加入到含有乙二胺四乙酸钾溶液的抗凝真空试管中，并轻轻颠倒10次使之充分混匀，不得有凝块、不得形成泡沫，总量不得超过2.0±0.2ml，并在试管上做好标识。
采血应避免溶血，采血后2小时内送到检验科，需要运输时应在低温条件下运输。
采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤。
9．1．2不合格标本的处理
对凝固、有凝块、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理
9．1．3标本保存
检测应在标本采集后2小时内完成,2～8℃保存不超过4小时,分析后的标本保存三天。
9．2检验前准备
9．2．1把接收到的标本按顺序编写序号。
9．2．2准备清洁、干燥、无尘、无油脂的载玻片、盖玻片、毛细管，玻璃笔。
9．3病人标本的检验
9．3．1取小试管1支加10G/L新亚甲蓝盐水溶液2滴。
9．3．2加入末梢血（或EDTA钾抗凝静脉血）2滴于上述试管中，混匀。
9．3．3室温下放置10~15MIN后，取1滴制成薄片。
9．3．4油镜下至少计数1000个红细胞中网织红细胞数。
9．3．5计算网织红细胞百分数=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/1000 网织红细胞绝对数（个/L）=网织红细胞百分比数*红细胞数/L 【注意】
1．活体染色时间不能过短。
室温低时，放37摄氏度恒温箱。
2．最好制两张片，每张计数1000个红细胞，避免分布不均引起的误差。
涂片要薄而均匀，不使红细胞重叠。
3．为计数方便，可于目镜中放一中间有孔硬纸，缩小视野便于计数。
4．试剂应定期重配，以免变质沉淀。
5．染液与血液比例约为1：1，严重贫血时可适量增加血液的比例。
10．质量控制
10．1显微镜法网织红细胞目视激计数误差较大，影响因素主要有：操作人对网织红细胞认识不同；血涂片的好坏；计数红细胞数量的多少和计数方法等。
10．2仪器法岁可计数红细胞10000~50000个，但如存在Howell-Jolly小体、有核红细胞、巨血小板，则可见假阳性。
11．干扰
12．参考区间
网织红细胞百分数
成人：0.005~0.015
新生儿：0.03~0.06
儿童：0.005~0.015
网织红细胞绝对数：
成人：（24~84）*10*9/L
13．实验室解释：
13．1判断骨髓红细胞造血情况
13．1．1网织红细胞增多：表示骨髓红细胞生成旺盛。
常见于：1.溶血性贫血，溶血时由于大量网织红细胞进入血液循环，RET可增至6%~8%或以上，急性溶血时，可达到20%左右，严重者可在50%以上，绝对值常超过100*10*9/L。
急性失血后5~10D网织红细胞达到高峰，2周后恢复正常。
2.放射治疗和化学治疗后，造血恢复时，可见RET短暂和迅速增高，是表明检测幼稚RET的变化骨髓恢复较敏感的指标。
3.红系无效造血时，骨髓检查表明红系增生活跃，而外周网织红细胞计数正常或仅轻度高。
13．1．2网织红细胞减少：见于再生障碍性贫血、溶血性贫血再障危象时。
典型的再生障碍性贫血网织红细胞计数低于0.005，网织红细胞绝对值低于15*10*9/L,为诊断其标准之一。
13．2观察贫血疗效缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血治疗过程中，如RET增高，表明治疗有效，说明骨髓增生功能良好；如RET不增高，则表明治疗无效，
并提示有骨髓造血功能障碍，需进一步检验。
RET是贫血患者随访检查的项目之一。
13.3骨髓移植后监测骨髓造血恢复骨髓移植后第21天，如RET大于15*10*9/L，常表明无移植并发症；RET小于15*10*9/L，伴中性粒细胞和血小板增高，可能为骨髓移植失败。
14.安全性防护措施
14．1在操作显微镜时应按照仪器作业指导书进行操作,防止受伤、触电等14．2请带上橡胶手套进行染色、冲片,在工作完成后,用消毒液清洗双手,以免发生感染
14．3在涂片时应小心谨慎,应始终戴上橡胶手套,以避免发生细菌感染,若样本溅入眼睛或者伤口,须用大量清水冲洗,并立即就诊
14．4在配制染液时:如果试剂不慎落入眼睛,立即用大量清水冲洗,并接受治疗;如果不慎吞入试剂,立即向医生求助,喝入大量清水,并尽量呕出吞入试剂;如果试剂沾上皮肤或者手,用大量清水冲洗;在丢弃废液和消耗品时,请按照处理医疗、传染性、工业性废水的步骤进行处理,如果其中含有血样,可能导致细菌感染. 15．变异的潜在来源
15．1标本放置时间过长
15．2制片时用力不均匀使。
细胞分布不均、细胞破碎。
15．3染色时间过长或过短。
16．参考文献
16．1 叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版，东南大学出版社16．2熊立凡主编《临床检验基础》第三版,人民卫生出版社
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