色谱柱清洗及保存方法

色谱柱清洗及保存方法
1、尺寸排阻色谱柱：
（1）树脂基质分子尺寸排阻色谱柱
①离子性吸附：对于阳离子性吸附物质，通过提高盐浓度进行过柱清洗
（1mol/L的醋酸缓冲液）
②疏水性吸附：对于疏水性吸附物质，可通过提高有机溶剂的浓度
（PW·PW XL：50%、α及SuperAW：100%可）进行过柱清洗。

③复合吸附：对于阳离子性·疏水性物质的去除，可提高盐浓度进行过柱，
水洗后，提高有机溶剂浓度进行过柱。

（2）硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱
①碱性物质的去除（离子性吸附）：通过提高淋洗液的盐浓度（通常
0.5mol/L）进行过柱清洗。

②疏水性吸附的去除（疏水性吸附）：在淋洗液中添加甲醇、乙腈（10-20%）
等水溶性有机溶剂进行过柱清洗。

本法请注意缓冲液中盐的析出。

③在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂：在淋洗液中添加6-8mol/L的
尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性剂（Triton、Tween、Brij等）后进
行过柱清洗。

但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。

一般来说，清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。

2、离子交换色谱柱、
（1）如果预柱滤片或保护柱在分离之前曾经使用过，需要首先将预柱滤片或保护柱反接用清洗溶液冲洗15-30min。

如果经过冲洗效果没有得到明显
改善，则需要更换预柱滤片或保护柱。

对于Proteomix阴离子交换色谱柱，清洗溶液为含150mM硝酸钾的75%乙腈溶液（用HCl调节pH至2）。

对于Proteomix阳离子交换色谱柱，清洗溶液为含1.0M NaCl的50mM磷
酸盐缓冲液（pH10）。

（2）在使用过程中，样品经常会被吸附在柱入口端的筛板或者填料上。

当样品吸附累积到一定程度时，柱压将会升高，色谱峰形也会出现展宽。

这时就需要清洗色谱柱了。

下面是色谱柱清洗的基本步骤：
①将色谱柱与检测器断开；
②将色谱柱反接后进行冲洗；
③将流速设置到所推荐的最大流速的50%进行冲洗。

注意柱压的变化。

如
果柱压超出正常水平许多，则需要降低流速，或选用低粘度的清洗溶液；
④通常10-15倍柱体积的清洗溶液就足够了。

下面将介绍可供选择的清洗
溶液。

低pH的盐溶液有助于去除碱性蛋白。

高pH的盐溶液有助于去
除酸性蛋白。

有机溶剂可去除疏水蛋白。

这里推荐两种常用的清洗溶液：
对于Proteomix阴离子交换色谱柱，清洗溶液为含150mM硝酸钾的75%
乙腈溶液（用HCl调节pH至2）；对于Proteomix阳离子交换色谱柱，
清洗溶液为含1.0M NaCl的50mM磷酸盐缓冲液（pH10）。

3、亲和色谱柱
①0.1-0.2mol/L NaOH水溶液：测定状态下，用0.1-0.2mol/L的NaOH
水溶液通过样品进样阀清洗数次（3-5回）。

②20-40%醋酸水溶液与上述NaOH水溶液的清洗方法相同。

③在淋洗液中添加水溶性有机溶剂（疏水性吸附物质的去除）在淋洗液中
添加甲醇、乙腈等水溶性有机溶剂（浓度<20%）进行过柱清洗。

（注意
盐的析出）
④在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂（难溶性蛋白的去除）在淋洗中
添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面活性剂（Triton、Tween、
Brij等）后进行过柱清洗。

但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。

通常情况下，使用方法1和2便可将吸附物质去除。

如果方法1 和2不能恢复柱效，则可使用方法3和4。

4、疏水相互作用色谱柱。