结核培养与药敏试验
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测的金标准是基于培养和鉴定结核分枝杆菌。
以下是具体步骤：
1.痰液样本收集：患者需要提供早晨醒来时的深咳痰液样本，
以获得有效的细菌数量。
2.痰液预处理：痰液样本经过预处理，包括离心和去除杂质。
这一步通常包括液体化和浓缩痰液。
3.痰液培养：将预处理后的痰液接种到培养基上，通常是液体
培养基。
培养基中的结核分枝杆菌将逐渐增殖形成菌落。
4.鉴定：通过常规培养、染色和生化试验等方法，鉴定已培养
的菌落是否为结核分枝杆菌。
5.药敏试验：对已鉴定的结核分枝杆菌进行药敏试验，以确定
哪些药物对其具有抗菌作用，从而为治疗方案的选择提供依据。
此方法被认为是金标准，因为它能够准确检测到结核分枝杆菌，并且可以确定其对药物的敏感性，为结核病的诊断和治疗提供可靠的结果。
但是，该方法需要相对较长的时间（通常需要几周）来进行培养和鉴定，因此在临床实践中可能需要其他更快速的检测方法来尽早确诊结核病。
肺结核的诊断与治疗原则
肺结核的诊断与治疗原则肺结核是一种由结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的慢性传染病，主要累及呼吸系统。
早期诊断和及时治疗对于防止疾病传播和减少并发症的发生至关重要。
本文将介绍肺结核的诊断和治疗原则。
一、诊断肺结核的方法诊断肺结核的关键是通过临床表现、辅助检查和痰涂片确诊。
以下是一些常用的诊断方法：1. 临床症状和体征：肺结核患者常出现慢性咳嗽、血痰、低热、消瘦等非特异性症状。
体征方面，可触及颈淋巴结肿大、肺部啰音等。
2. 胸部X线检查：肺结核病灶常表现为肺上叶或下叶的阴影。
结核球可能呈圆形阴影，周围伴有纤维包膜。
3. 痰涂片检查：通过染色和显微镜观察痰中是否存在结核分支杆菌。
痰涂片检查是诊断肺结核最常用的方法之一。
4. 结核菌素皮肤试验：注射结核菌素后观察皮肤反应情况，阴性结果不能完全排除结核感染，但阳性结果提示可能存在结核感染。
5. 痰培养和药敏试验：将痰液中的结核分支杆菌培养出来，然后进行药物敏感性测试，以指导后续的治疗方案。
二、肺结核的治疗原则肺结核的治疗原则包括早期发现和治疗、系统抗结核治疗、个体化治疗方案和合理用药。
以下是一些常用的治疗方法和原则：1. 早期发现和治疗：及早发现结核病患者，尤其是具有结核感染风险的人群，如与结核患者密切接触的人员、免疫功能低下的人群等。
早期治疗可以阻断疾病传播，并减少并发症的发生。
2. 系统抗结核治疗：肺结核的治疗主要依靠抗结核药物，如异烟肼、利福平、吡嗪酰胺等。
根据治疗期限的不同，可将抗结核药物分为两个阶段：初始治疗阶段和维持治疗阶段。
3. 个体化治疗方案：根据患者的病情、年龄、肝肾功能等因素，制定个体化的治疗方案。
对于某些特殊群体，如孕妇、儿童、老年人以及合并HIV感染的患者，需要特别关注并给予相应的治疗策略。
4. 合理用药：合理选药、规范用药是肺结核治疗的基本原则。
要根据病原学结果和药物敏感性进行药物选择，并注意药物的剂量和联合用药的相互作用。
2024肺结核诊断标准2024
引言：肺结核是一种严重的传染病，是全球范围内的公共卫生问题。
为了提高肺结核的诊断准确性和早期发现率，2024年制定的肺结核诊断标准（二）对于医疗机构的临床诊断和治疗提供了重要的指导。
概述：本文将详细介绍2024年的肺结核诊断标准（二）。
我们将讨论肺结核的流行病学特征和临床表现，并解释肺结核的传染机制。
然后，我们将介绍肺结核的诊断标准的五个大点，包括临床评分和病史信息的收集、图像学检查、痰液检查、血液检查和活检。
每个大点将进一步划分为59个小点，以详细阐述诊断标准的细节。
我们将对肺结核诊断标准（二）进行总结。
正文：一、肺结核的流行病学特征和临床表现1.流行病学特征：介绍肺结核的发病率、感染途径、高危人群等。
2.临床表现：详细描述肺结核的临床表现，包括典型症状如咳嗽、咳痰、胸痛等，以及不典型症状的体征，如发热、乏力等。
二、临床评分和病史信息的收集1.临床评分工具：介绍肺结核临床评分的常用工具和评分标准，如TBSCORE评分、TBSCORE+和ATS/IDSA诊断标准等。
2.病史信息的收集：指导医生如何获取患者的详细病史信息，包括家族史、既往病史、接触史等，并详细解释这些信息对于肺结核的诊断意义。
三、图像学检查1.X线检查：解释X线检查在肺结核诊断中的意义和局限性，包括典型影像特征如干酪样坏死、肺门淋巴结增大等。
2.CT扫描：介绍CT扫描在肺结核诊断中的应用，包括高分辨率CT的优势、CT表现和非结核分枝杆菌感染的鉴别等。
四、痰液检查1.痰涂片检查：解释痰涂片检查的原理和操作步骤，以及结果的解读和判断。
2.痰液培养和药敏试验：介绍痰液培养和药敏试验在肺结核诊断中的作用，以及相关的操作指南和解读结果的方法。
五、血液检查和活检1.血液检查：讨论肺结核患者血液生化指标的变化，如C反应蛋白、红细胞沉降率等，以及IGRA和TSPOT.TB的应用。
2.活检：介绍肺结核活检的方法、操作技巧和结果的解读，包括经皮穿刺活检、纤维支气管镜活检等。
结核分枝杆菌痰培养及耐利福平药敏试验分析
结核分枝杆菌痰培养及耐利福平药敏试验分析发表时间：2018-07-13T13:57:23.327Z 来源：《心理医生》2018年16期作者：张婷[导读] 在进行结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的过程当中。
（甘肃省临夏州疾病预防控制中心甘肃临夏 731100）【摘要】目的：研究结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的结果。
方法：选择2016年1月—2017年10月临夏地区结核病定点医院接诊的痰涂片阳性病患200例，对所有病患都施以痰培养和耐利福平试验，并对其痰培养和药敏试验的结果进行综合分析。
结果：本组200例病患当中，有195例痰培养提示阳性，占总比例的97.5%；有1例为涂阳培阴，占总比例的0.5%；有4例污染，占总比例的2.0%。
患者耐利福平药敏试验的结果提示，新患者的耐利福平率为10.63%，复治者的耐利福平率为22.86%，初治失败者的耐利福平率为40.0%。
结论：严格按照相关的标准和流程进行结核分枝杆菌培养与药敏试验，复治者与初治失败者明显比新患者多。
【关键词】耐利福平；结核分枝杆菌；药敏试验；痰培养【中图分类号】R52 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）16-0106-02在进行结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的过程当中，比较容易受多种因素的影响而出现涂阳培阴亦或者是污染的情况[1]，所以，在实际操作期间要严格按照相关的步骤和标准进行，全面落实标本的收集、接种与保存等环节。
此研究，笔者将以200例痰涂片阳性病患（接诊于2016年1月—2017年10月）为对象，重点分析结核分枝杆菌痰培养与耐利福平药敏试验的结果，现作出如下报道。
1.资料与方法1.1 一般资料2016年1月—2017年10月临夏地区结核病定点医院接诊的痰涂片阳性病患200例，包含男性患者104例，女性患者96例；年龄在18～76岁的范围之内，平均（46.28±11.34）岁；复发者，35例；新患者，160例；初治失败者，5例；职业为农民者，92例；无业者，11例；工人；60例；离退休人员，37例。
结核菌适用的操作方法
结核菌适用的操作方法结核菌是一种革兰氏阳性的细菌，可以引起结核病。
结核菌的培养和鉴定是临床诊断结核病的基础，所以对结核菌的操作方法非常重要。
下面我将详细介绍结核菌的培养和鉴定的操作步骤。
首先，结核菌培养的基本要求是使用结核分枝杆菌专用的培养基。
常用的培养基有Lowenstein-Jensen培养基、Middlebrook 7H9培养基、Middlebrook7H10培养基等。
这些培养基中添加有特定的抑菌物质，可以抑制其他细菌的生长，有利于结核菌的分离与培养。
其次，结核菌分离的步骤是将获得的样本(如痰液、组织切片等)通过稀释法先行稀释至适宜的浓度，然后涂布于结核菌专用培养基上。
培养基装入培养皿中，放置于37的恒温培养箱内培养。
结核菌的分离需要一定的时间，通常需要培养3-6周以上才能看到菌落的形成。
第三，结核菌鉴定的常用方法主要有荧光染色法、抗酸染色法与PCR技术。
荧光染色法是通过与结核菌特有的荧光抗体结合，形成荧光颗粒来鉴定结核杆菌。
抗酸染色法利用结核菌的特殊性抗酸抽象，通过耐酸染料的染色，使结核杆菌能在显微镜下显示为红色或紫色的颗粒。
PCR技术能够通过结核菌特有的目标基因特异性扩增，从而快速检测分离到的菌株是否为结核菌。
此外，结核菌的药敏试验也是非常重要的操作方法。
药敏试验能够快速检测菌株对常用抗结核药物的敏感性，并为临床治疗提供参考依据。
药敏试验的操作方法是将分离到的结核菌接种在含有不同浓度抗结核药物的培养基上，培养一段时间后观察菌体生长情况，从而判断菌株对该药物的敏感性。
最后，结核菌的培养和鉴定需要特殊操作和仪器。
在操作过程中需要注意严格遵守无菌操作的要求，以避免细菌的交叉污染。
在用药敏试验时，需要准确控制药物的浓度，避免药物浓度过高或过低对结果的影响。
总结起来，结核菌的培养和鉴定是临床诊断结核病的重要步骤。
只有通过正确的操作方法和仪器设备，才能准确鉴定结核菌的存在和对抗结核药物的敏感性，为结核病的早期诊断和治疗提供准确的依据。
生物安全实验室结核病诊断实验室的建设要求
生物安全实验室结核病诊断实验室的建设要求结核病诊断实验室是用于结核病痰涂检测和结核杆菌培养、药敏试验等实验诊断的专用场所。
因结核杆菌主要通过呼吸道传播感染，所以，规范结核病诊断实验室建设和实行严格的个人防护及推行科学的实验室规范化管理显得十分重要。
结核病诊断实验室的建设应根据不同的实验内容和实验性质来考虑。
在实验室建设、设备配置和个人安全防护方面遵循相关的管理规定，确保实验人员和实验环境的安全。
从生物安全防护基本要求考虑，结核病诊断实验室应尽量和其他区域分开，宜形成一个相对独立的实验区域。
结核病诊断实验室主要分为涂片实验室和培养与药敏实验室。
其实验室建设的基本要求分述如下：结核病诊断实验室中的涂片实验室应符合BSL-2实验室要求，但开展结核菌培养与药敏实验时实验室应符合BSL-3实验室的基本要求。
（一）涂片实验室基本要求1.涂片实验室应进行合理分区布局，并应在实验室出口处设专用洗手池。
2.实验室的墙面、地板和天花板应平整、防滑，便于清洁，不渗水，并耐化学品和消毒剂的腐蚀。
3.实验台面应耐高温、耐酸碱、防水。
4.实验台柜应牢固、平稳，台柜间应留有一定距离，便于清洁。
5.实验室如采用开窗自然通风时，应设置防蚊虫纱窗。
6.实验室应有符合要求的照明，但要防止强光和避免反光。
7.实验室应配备必要消毒设备，如高压灭菌器和消毒喷雾装置。
8.实验室人口处宜设置更衣处。
（二）培养与药敏实验室基本要求本实验室除满足涂片实验室的要求外，还应达到以下要求：1.实验室应设带锁并能自动关闭装置及可视窗。
2.实验室应设实验操作区和准备区，应具有足够的空间用于实验操作和实验用品的放置。
3.实验区域内应配备高压灭菌器及其他消毒装置。
4.实验操作区应配置Ⅱ级生物安全柜。
5.实验室宜设应急洗眼和喷淋冲洗装置。
6.实验室应有可靠的电力供应保障和应急照明系统。
重要设备如生物安全柜、培养箱、冰箱等应有备用电源或UPS等辅助电源。
7.实验室入口处应有明显的生物危害标识，实验室内应设有在黑暗中能辨别方向的标识。
结核分枝杆菌培养药敏实验及质量控制
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基本步骤：
制备培养基 标本前处理（去污染） 接种 孵育 报告结果
2007-10-11
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一、培 养 基
酸性罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基
天门冬素
3.6g
或谷氨酸钠（纯度99%以上）7.2g
KH2PO4 MgSO4.7H2O 枸橼酸镁
14.0g 0.24g
结核分枝杆菌（MTb）结核病的病原体 • 1882年郭霍（Robert Koch）发现 • 繁殖时有分支生长的趋势，故称分支杆
菌 • 具有抗酸性,又称抗酸杆菌,用抗酸染色
的方法检查分枝杆菌 • 分枝杆菌有致病性和非致病性两大类 • 主要引起肺結核的致病性分枝杆菌有人
型、牛型、非洲、田鼠分枝杆菌
二、痰涂片镜检标准化操作
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污染率过高？
可能原因
解决方法
标本保存不当 涂片留取后24小时内培养，不能及时 (时间、温度） 培养的4oC冰箱保存。
前处理不充分 4％，1－2倍，充分混旋，20分钟。
材料灭菌不佳 接种用吸管需高压灭菌。
操作不当
培训，严格按操作规程操作。
培养基因素
统一供应，4oC直立保存，1个月内使 用
2007-10-11
耐药性测定常用方法
• 绝对浓度法:是我国30 多年来一直沿用的药敏 试验方法，为目前我国大多数结核病专科医院 常规使用的用于临床检测的方法。
• 比例法:是WHO 全球耐药监测项目中推荐的标 准药敏试验方法，目前为我国流行病学监测和 耐多药结核病规划管理项目所采用的方法。
• 二者在临界药物浓度接种菌量、结果判读方法 等方面都有一定差别。
INH （异烟肼）
0.2
SM （链霉素）
结核药敏试验标准
结核药敏试验（Tuberculosis Drug Sensitivity Testing）是用来确定结核分枝杆菌对各种抗结核药物的敏感性的一种实验室检测方法。
这种测试对于指导临床医生选择有效的治疗方法至关重要，因为如果结核分枝杆菌对某些药物产生耐药性，将需要调整治疗方案。
世界卫生组织（WHO）和各国卫生部门都制定了结核药敏试验的标准和指南，以确保测试的准确性和一致性。
以下是一些基本的标准和要求：
1. 测试方法：WHO推荐使用的药敏试验方法包括液体培养基中的比例法（Proportional Method）和绝对浓度法（Absolute Concentration Method）。
2. 药物覆盖：药敏试验应涵盖以下抗结核药物：异烟肼（Isoniazid）、利福平（Rifampicin）、乙胺丁醇（Ethambutol）、氧氟沙星（Ofloxacin）、克拉霉素（Clarithromycin）、阿米卡星（Amikacin）、链霉素（Streptomycin）和卡那霉素（Kanamycin）。
3. 质量控制：为了确保测试结果的准确性，应定期进行质量控制，包括使用已知药敏谱的参考菌株进行比对测试。
4. 结果报告：药敏试验的结果应该清晰、准确地报告，通常包括敏感（S）、中介（I）、耐药（R）以及其他可能的分类，如部分敏感（PS）或剂量依赖性敏感（DDS）。
5. 结果解释：药敏试验的结果需要结合患者的临床情况和治疗历史来解释，有时可能需要专家会诊。
6. 实验室认证：进行药敏试验的实验室应遵守相应的国际和国家级标准，并获得认证。
结核培养具体操作流程
结核培养具体操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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肺结核的结核病的治疗监测与疗效评估
肺结核的结核病的治疗监测与疗效评估肺结核是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，其症状包括咳嗽、咳痰、胸痛等。
为了确保患者的有效治疗，监测和评估疗效变得尤为重要。
本文将介绍肺结核治疗监测的方法以及如何评估疗效。
一、治疗监测方法治疗监测方法是确保肺结核患者得到恰当治疗和达到理想疗效的关键。
以下是一些常用的监测方法：1. 痰液培养痰液培养是一种重要的治疗监测方法。
通过检测痰液中的结核菌数量和繁殖情况，可以判断患者是否得到有效治疗。
痰液培养和药敏试验可以帮助医生确定患者对抗结核药物的耐药性情况，从而调整治疗方案。
2. 影像学检查胸部 X 光和 CT 扫描是另一种常用的监测方法。
这些影像学检查可以评估肺部病变的程度、病变范围以及其与治疗的关系。
影像学检查对于及时发现治疗效果不佳的患者、调整治疗方案至关重要。
3. 化验指标血常规、生化指标等化验指标也是治疗监测的重要手段。
例如，监测患者的白细胞计数和 C 反应蛋白水平可以判断结核活动性的程度。
其他指标如肝功能、肾功能等也是用来评估患者在治疗过程中的状况。
二、疗效评估在治疗监测后，医生需要对患者的疗效进行评估，以确定疗效是否符合预期，进一步决定是否需要调整治疗措施。
以下是一些常用的疗效评估方法：1. 症状改善观察患者的症状改善情况是最直观的疗效评估方法。
症状如咳嗽、咳痰、胸痛等是否减轻，以及体温是否恢复正常可以作为评估的依据。
2. 影像学复查通过对比首次影像学检查和治疗一段时间后的影像学结果，可以评估病变的变化情况。
病变的缩小、消失等是治疗有效性的指标。
3. 实验室指标监测患者的血常规、生化指标等化验指标是否恢复正常，也是疗效评估的重要手段。
比如，白细胞计数和 C 反应蛋白水平是否降低，炎症指标是否恢复正常等可以用来判断治疗效果。
4. 痰液培养痰液培养和药敏试验是评估治疗疗效的重要方法。
如果痰液培养结果为阴性，表明患者的结核菌已经逐渐消失，治疗效果较好。
总结：肺结核的治疗监测与疗效评估在确保患者得到恰当治疗和疗效评估方面起着重要作用。
MDR-TB诊断与治疗
MDR-TB诊断与治疗引言多药耐药结核病（MDR-TB）是一种严重的传染病，其对公共卫生和全球健康构成了巨大的挑战。
MDR-TB是指对两种最常用的结核菌首选药物——异烟肼和利福平耐药的结核菌感染。
本文将介绍MDR-TB的诊断方法和治疗策略，旨在提供给医疗工作者和研究者们更多的了解和指导。
诊断方法临床症状评估MDR-TB的临床表现与非多药耐药结核病相似，如咳嗽、疲劳、发热等。
然而，MDR-TB患者通常对常规的结核菌病治疗方案不起反应，需要进一步的检测和评估。
结核菌培养和药敏试验结核菌培养是MDR-TB诊断的金标准。
通过将患者样本（如痰、尿液等）进行培养，可检测到结核菌的存在。
药敏试验则可以确定结核菌对不同药物的敏感性，从而指导治疗。
分子诊断方法分子诊断方法是一种快速和灵敏的诊断手段，可以通过检测结核菌DNA或RNA来确定细菌的存在。
多重聚合酶链反应（PCR）和核酸扩增试验（NAT）是常用的分子诊断方法。
治疗策略药物治疗MDR-TB的治疗通常采用联合药物治疗，以避免细菌对单一药物产生耐药性。
根据药敏试验结果，选择对MDR-TB菌株敏感的药物进行治疗。
常用的药物包括链霉素、乙胺丁醇、噻嗪酰胺等。
治疗方案通常为2年以上。
外科手术对于MDR-TB患者中存在严重病灶的患者，外科手术可能是一种有效的治疗方式。
外科手术可以切除病灶，并减少细菌对药物的耐药性。
心理支持和社会支持MDR-TB患者常常面临长期治疗和社会歧视的压力，因此心理支持和社会支持对于患者的康复非常重要。
提供心理咨询和社会工作服务，可以帮助患者提高治疗依从性，并改善生活质量。
结论MDR-TB是一种严重的传染病，需要早期诊断和治疗以避免病情的进展和传播。
临床症状评估、结核菌培养和药敏试验以及分子诊断方法是MDR-TB的诊断手段。
药物治疗、外科手术以及心理支持和社会支持是MDR-TB的治疗策略。
通过综合应用这些方法，我们可以更好地管理和控制MDR-TB的传播，保障公共卫生和全球健康。
结核病实验室基本要求和痰涂片检查-结核病防治网
痰涂片镜检室布局范例
可以开关的窗户 记录用 的桌子 显微镜
染色池
采 光 用 窗 户 （固定）
工作台 (通风柜)
收集标本 用的桌子
试 剂 柜
实验室门
二、培养和药敏实验室基本要求
1.满足涂片实验室的基本要求，并符合 生物安全防护的要求。 2.实验室门应带锁可自动关闭，并有可 视窗。 3.实验室应设实验操作间和准备间，具 有足够的空间进行实验和放置物品。 4.进入实验室应使用专用工作服，操作 时应戴口罩、帽子和乳胶手套 。
二、结核病细菌学实验室中存在的危险物
结核病细菌学实验室的工作人员， 在分枝杆菌检验过程中可能接触到各 类危险物，特别是许多操作易产生分 枝杆菌气溶胶。操作人员必须认真了 解各类危险物的性质，便于注意个人 安全防护。
(一)生物危险物
种类 可能存在的地点 危险性 致病性
结核分支杆菌 各种临床标本、菌株、操 非结核分支杆菌 作台、仪器、设备、试剂
其它
具有易燃、刺激性的化学试剂 易燃、腐蚀、 刺激感观
(三)物理危险物
分类和名称 紫外线 可能存在的地方 实验室及走廊 危险性 伤害眼睛、皮肤 伤害眼睛 烫伤 烧伤
紫外线透视仪 暗室 高压蒸汽 火焰 尖利物品 消毒、洗刷 酒精灯、酒精喷灯
各种刀、剪、镊子、注 造成外伤后感染 射器、玻璃碎片等
三、实验室安全防护基本原则 1.进入实验室，尽量避免携带非必需物 品。必要的文具、书籍带入后必须远 离毒菌操作区。 2.实验室工作人员应注意着装整齐，操 作时穿戴好实验服、口罩、帽子和相 应隔离服装、手套，蓄发者须将头发 装束在帽子内。
三、实验室安全防护基本原则
3.实验室内应保持肃静，试验过程中禁止一 切与试验无关的活动，以利于集中精力完 成实验操作。 4.实验台上不可放置任何与实验无关的物件 或私人用品。 5.实验过程中绝对禁止吸烟、饮食及用嘴湿 润铅笔或标签等，也不要以手抚摩头面部 等。
结核分枝杆菌的微生物学检查程序 -回复
结核分枝杆菌的微生物学检查程序-回复结核分枝杆菌是一种引起结核病的病原菌，它具有潜伏感染和活动性感染两种状态。
为了准确诊断结核病，需要进行微生物学检查。
以下将详细介绍结核分枝杆菌的微生物学检查程序。
第一步：标本采集结核分枝杆菌的标本可以采集自患者的呼吸道、淋巴结、组织等部位。
常见的标本包括痰、胸腔积液、脑脊液等。
标本采集应严格遵循无菌操作原则，避免污染和细菌的死亡。
第二步：标本处理采集到的标本需要进行适当的处理，以提高分枝杆菌的检出率。
对于痰标本，应先进行离心，将上清液（上清液中含有较高浓度的分枝杆菌）分装入多个收集器中。
对于其他标本，如胸腔积液、脑脊液等，可以进行直接涂片或离心浓缩处理。
第三步：分枝杆菌培养分枝杆菌培养是诊断结核病的关键步骤。
常用的培养基有Lowenstein-Jensen（LJ）固体培养基、麦康奈尔（Middlebrook）液体培养基等。
将经过标本处理的标本接种到培养基上，并在适宜的温度（通常为35-37摄氏度）下培养2-8周。
培养期间需要定期观察菌落的形态，并进行常规的结核分枝杆菌鉴定。
第四步：分枝杆菌鉴定通过观察分枝杆菌的形态特征，如形状、颜色等，可以初步鉴定分枝杆菌。
进一步的鉴定需要进行生化试验，如尼氏染色、热酸洗脱法、硝酸盐还原试验等。
这些试验可以确定菌株是否为结核分枝杆菌。
第五步：药敏试验药敏试验用于检测结核分枝杆菌对抗结核药物的敏感性。
常用的药敏试验包括比值法（MIC测定）、比例法、临界浓度法等。
通过药敏试验可以确定分枝杆菌对抗结核药物的敏感性，以指导临床治疗。
第六步：核酸检测核酸检测是近年来发展起来的一种快速、准确的检测方法。
常用的核酸检测技术有PCR（聚合酶链反应）、LAMP（环介导等温扩增法）等。
通过检测结核分枝杆菌特定的基因序列，可以快速准确地诊断结核病。
综上所述，结核分枝杆菌的微生物学检查程序包括标本采集、标本处理、分枝杆菌培养、分枝杆菌鉴定、药敏试验和核酸检测。
结核分枝杆菌的分离鉴定程序
结核分枝杆菌的分离鉴定程序介绍结核病是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，其传播速度快、危害大，给人们的健康带来了很大的威胁。
因此，对结核分枝杆菌的分离鉴定程序非常重要。
本文将详细介绍结核分枝杆菌的分离鉴定程序，包括样本采集、试管培养、生化鉴定、药敏试验等环节。
样本采集结核分枝杆菌主要通过呼吸道传播，因此，样本采集通常采用痰液、支气管灌洗液等。
采样前需要对患者进行相关的禁忌症评估。
在采样时，应确保样本的纯净度和有效性。
试管培养试管培养是结核分枝杆菌分离鉴定的最基本步骤。
通常使用低松散沙状固体培养基如LJ和7H11等进行培养。
试管培养过程中，需要进行严格的无菌操作，避免外界细菌或真菌的污染。
培养基的制备、接种、培养条件和培养时长等都需要严格控制。
试管培养基的制备1.准备所需材料：含有生长因子的结核分枝杆菌缓冲液、各种试剂和培养基。
2.按照制剂说明书将试管培养基制备好。
3.使用无菌仪器将制备好的培养基分装到试管中，每支倒数0.5毫升。
4.将试管培养基密封并进行无菌处理，以确保培养基的无菌。
接种培养1.取出一支含有菌株的试管培养基。
2.打开培养基容器盖子，用铸菌环将菌株转移到培养基上。
3.将铸菌环放回到试管中，盖好试管盖。
培养条件1.放置到恒温培养箱中，设置适宜的温度（通常在37摄氏度）。
2.培养箱中的湿度应控制在80%以上，以保持培养基的湿润。
3.培养时间通常为3至6周，根据菌株的生长情况进行观察。
生化鉴定生化鉴定是结核分枝杆菌分离鉴定的一种常用方法。
通过对菌株的代谢产物进行观察和检测，可以确定其是否为结核分枝杆菌。
常用生化鉴定试验1.尼舍氏染色法：染色后，结核分枝杆菌呈红色，而其他细菌不变色或呈蓝色。
2.热力酸快速试验（TCH）：结核分枝杆菌可产生热力酸，使培养基产生颜色变化。
3.尼氏-约翰逊快速鉴定法：通过对结核菌产生的色素进行观察来进行鉴定。
4.结晶胶凝酶试验：通过观察菌株是否产生结晶胶凝酶来进行鉴定。
结核菌罗氏培养基药敏试验结果判读时间及准确率影响分析
结核菌罗氏培养基药敏试验结果判读时间及准确率影响分析摘要：目的：分析结核菌罗氏培养基药敏试验结果判读时间及准确率影响。
方法：选取市疾控中心保存的250株结核菌株，选择2018年1月~2019年6月期间我中心收治的82例肺结核患者为研究对象，在患者的痰标本中分理出结核菌，进行罗氏培养基药敏试验，培养4周、6周之后将检测结果与标准结果进行对比分析，分析准确率。
结果：所有菌组药敏实验的结果判读时间及准确率对比为：SM（链霉素）准确率第4周（92.67%）低于第6周（97.92%）、INH（异烟肼）准确率第4周（99.17%）高于第6周（96.67%）、EMB（乙胺丁醇）准确率第4周（92.67%）低于第6周（98.33%）、RFP（利福平）准确率第4周（90.83%）低于第6周（98.75%）（P<0.05）。
结论：建议于第4周进行异烟脐药敏结果判读，于第6周进行链霉素、乙胺丁醇、利福平的药敏结果判读，结果较为准确。
关键词：结核菌；罗氏培养基；药敏试验；判读时间；准确率Analysis on the time and accuracy of drug sensitivity test results in Roche culture medium for tuberculosis bacteriaAbstract: Objective: To analyze the effect of time and accuracy of drug sensitivity test for tuberculosis bacteria in Roche culture medium.Method: choose 250 strains of TB strains preserved, the centers for disease control and prevention, choose from January 2018 to June 2019 I center admitted during the period of 82 pulmonary tuberculosis patients as the research object, in the sputum specimens of patients with isolating n/med tuberculosis bacterium, drug sensitive test for roche medium, 4 weeks, 6 weeks after the compare test results with the standard analysis, analysis of accuracy.Results: all groups of bacteria medicine sensitive experiment results for interpretation oftime and accuracy: SM (streptomycin) accuracy 4 weeks (92.67%) less than 6 weeks (97.92%), INH (INH) accuracy (99.17%) than 4 weeks (96.67%), 6 weeks EMB (ethambutol) accuracy 4 weeks (92.67%) less than 6 weeks (98.33%), RFP (rifampicin) accuracy 4 weeks (90.83%) less than 6 weeks (98.75%) (P<0.05).Conclusion: It is suggested that the sensitivity of isomeric umbilicus should be interpreted at the 4th week, and that of streptomycin, ethambutanol and rifampicin at the 6th week.Key words: tuberculosis;Roche culture medium;Drug sensitivity test;Interpretation time;accuracy引言罗氏培养基是结核菌药敏试验最常用的基础培养基，世界卫生组织将罗氏培养法作为结核菌药敏试验的标准方法，但是在实际临床检验中，结核菌罗氏培养基药敏试验结果影响因素较多，尤其是结果判读时间尚存在一定争议，需进一步深入探索。
结核球细菌学药敏试验结果分析与临床应用
92生垦塞旦匡型垫!垒生!垒旦筮翌鲞筮垫拐Q避』塑婴!堡塑墼坐型丛鲤!堂坐!：垫!Q；∑垡：!!：堕!：垫查条件也恰当，患者无明显临床症状，可以较放心随访观察。
彩色多普勒血流成像法，使用不当可引起误差，检查时需注意仪器调节，增益不能过大或过少，因肌瘤内都是低速血流，脉冲重复频率不能过大，本研究使用0．6K H z，彩色检查角度不能太大，否则可引起图像失真，同时注意检查结果受所使用仪器灵敏度的影响。
总之，对于子宫肌瘤内的占位，首先需进行二维仔细检查，观察占位病变是否呈火球状，边界规则，再用彩色多普勒成像法对肌瘤进行仔细检查，注意仪器的适当调节，如果肌瘤内血流信号丰富或较丰富，则肌瘤内细胞较活跃，无论肌瘤的大小，无论患者的年龄，都需密切注意观察其生长，必要时给与干预治疗。
参考文献[1]陈蕙祯．蔡红兵。
毛尔发．现代妇科肿瘤学[M]．武汉：湖北科学技术出版社，2006：659．[2]田顺杨．妇科肿瘤临床病理学[M]．北京：人民卫生出版社，2001：146．【3】石～复，子宫肌瘤现代诊疗[M]．北京：人民军医出版社，2007：32．33．(收稿日期：2010—07—15)(本文编辑：方华玲)结核球细菌学药敏试验结果分析与临床应用田红宇【摘要】目的通过对结核球中结核茵细菌培养和药敏试验结果分析，为临床用药提供指导。
方法对手术切除的结核球组织，取材做结核茵培养和药敏试验。
结果结核球中结核茵对吡嗪酰胺(PZ A)、高浓度异烟肼(I N H)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(E M B)、利福平(R FP)敏感的敏感性均在80．O％以上，I N H敏感性53．3％。
R gE (S)药物组合后的敏感性在76．7％以上。
结论结核球患者应用耐药和耐多药方案治疗的依据有待进一步研究。
外科手术后抗结核治疗宜选择患者能够耐受的I N H方案。
【关键词】结核球；药敏试验，结核球是由于干酪性病灶局限化外有纤维包膜，结核性肉芽组织发生干酪样坏死，阻塞性空洞充满干酪样物质形成…。
肺结核的结核病菌分离与药敏试验
肺结核的结核病菌分离与药敏试验肺结核是一种严重影响人类健康的传染病，由结核分枝杆菌引起。
针对肺结核的治疗，结核病菌分离与药敏试验是至关重要的步骤。
本文将详细介绍结核病菌的分离和药敏试验的流程和意义。
一、结核病菌的分离结核病菌的分离是指从患者的临床样本（如痰液、组织、体液等）中分离出结核分枝杆菌。
这一步骤对于确诊肺结核、确认感染者以及评估耐药性至关重要。
1. 采样采集病人的临床样本是进行分离的第一步。
最常用的样本是患者的痰液。
在采样过程中，应注意避免污染和交叉感染，采用无菌容器进行采样。
2. 处理样本采集的样本需要经过一系列处理步骤，以分离出结核分枝杆菌。
一般的处理包括离心、抗酸染色和培养。
3. 离心离心是将采集到的样本离心，分离出细菌。
这一步骤通过高速离心使样本分层，得到细胞沉淀。
4. 抗酸染色经过离心后的细胞沉淀需要进行抗酸染色。
抗酸染色可以使结核分枝杆菌显现红色，从而与其他细菌进行区分。
5. 培养抗酸染色后的样本需要进行培养，使结核分枝杆菌得到足够的生长。
培养的常用介质有各种琼脂糖培养基和液体培养基。
培养时间一般为6-8周。
二、药敏试验药敏试验是对分离出的结核分枝杆菌进行药物敏感性测试，以确定使用何种抗结核药物进行治疗。
1. 抗生素的选择常用的抗结核药物有异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇等。
在药敏试验前，需要根据结核菌的感染情况和临床表现选择一组合适的抗生素。
2. 药敏试验方法药敏试验有多种方法，常见的包括比例法、纸片扩散法和测MIC法。
这些方法都是通过培养结核菌在含有不同浓度抗生素的培养基上，观察生长情况来判断结核菌对抗生素的敏感性。
3. 结果解读根据药敏试验的结果，可以将结核菌分为多种药物敏感性类型。
常见的有多重耐药（MDR）、广谱耐药（XDR）和全耐药（TDR）等。
根据不同类型的耐药性，可以选用相应的联合疗法进行治疗。
三、结核菌分离与药敏试验的意义结核菌分离和药敏试验具有以下几个重要意义：1. 确诊与治疗结核菌分离为肺结核的确诊提供了可靠的依据，使医生可以根据药敏试验的结果选择合适的抗生素进行治疗。
二种不同方法对结核菌培养和药敏的优势互补
而改 善呼 吸和微 循环 ， 增加 心输 出量 使血 压升高 。 文 本 观察 到 二组 病 情 、 龄基 本 相似 ． 合 治 疗措 施 也 一 年 综 样 。 治疗 组加 用纳 洛酮使 病情 发生 较快 较好变 化 。 唯 表 现在 呼 吸 困难 和神 志好 转 开 始时 间在 用药 后 ３ ０分 钟
呵显 效 ， 显 优 于 对 照 组 。 同 时 Ｓ Ｐ 明 显 升 高 。Ｐ Ｏ 明 Ｂ ａ
３ ０次／ 并 节律 快 慢 不 整 减 到 ２ 分 ０次 左 右 ． 分 呼吸 均 匀规 整 。 神志 好 转 表 现 为 由恍 惚 和 谵 妄 ， 颤 和 抽 或 震 或 搐及 视神经 乳 头水 肿转 为神 志清 楚 ． 头痛 ， 有 但震 颤抽 搐及 视神经 乳 头水 肿消 失 ３ 讨 论
维普资讯
临床 肺科 杂志
２０ ０ ２年 ５月
第 ７卷 第 ２期
－
１ ３
拄： ＋吾 组 治 ｌ后 ２ ｈ 与治 ｌ 前 比鞍 Ｐ ｏ Ｉ △ 治 疗 组与 对 照 纽 比较 Ｐ ０ ｏ 厅 ４ 厅 ＜ ＜ ｌ
疗明显升高 ．＜００ ． Ｐ ． １ ＨＲ． 减 少 ． ＜ ０ ０ Ｒ Ｐ ． １差 异 显 著 。 （） ３ 治疗 组 呼吸 困难 和神 志 好转 开始 时 间 多在 ３） （ 分钟 ～３小时 内 而完 全缓解 多 在 ｌ ３ ～ 天 对照组 神 志好 转开始 时 间 多在 ３ 时 ～２ 小 ４小 时 。完 全 缓解在 ｌ
ｔｎ ９１１ ： １ ｉ ８． ２１ ７ ｏ ０ ３．
二 种 不 同方 法对 结核 菌培 养 和 药敏 的 优 势 互 补
沈 丽 王易伟 王 字
结核病药敏实验
O
2
OOC22COOO2 2O2OO22肉改2 良汤Middlebrook
O2 O2
7H9肉汤
O2 CO2
FFFOOFO2F2FF2OOFFF22OO传22 感器
FFFOFF2FOFF2FF
对氧气高度敏感的钌复合物
无或微弱荧光
强荧光
液体培养对象
• 初诊的肺结核可疑症状者 • 随访的肺结核患者
痰标本采集、保存和运输
• 痰标本采集：即时痰、夜间痰、晨痰 • 痰标本保存：4 ℃保存 • 运输（UN3373类包装）：3天内必须运送到
实验室，7天内必须进行培养
培养标本的选择
诊断病例 － 3涂2培
• 3份痰标本均为阳性：选取阳性级别高的2份痰标本进行培 养；
• 3份痰标本2份阳性：选取2份阳性痰标本进行培养； • 3份痰标本1份阳性：选取阳性标本和1份质量好的阴性标
绝对浓度法
结果解释
• 敏感： 培养基斜面上无菌落
• 低浓度耐药： 培养基斜面上菌落数 （1+）~（4+）不等
• 高浓度耐药：培养基斜面上菌落数 （1+）~（4+）不等
• 实报菌落数： 含药培养基上菌落数< 20个
比例法和绝对浓度法的一致性
• 综合以往国内有关比例法和绝对浓度法的试 验报道，对2种方法研究结果显示,比例法和绝 对浓度法检测结果的一致率4 药均高达96 %以 上,对于结核分支杆菌,二种方法测试H、S、R 和E 的耐药率均无显著性差异。
1ml
混合、摇匀
分装 凝固
含药培养基
接种0.01ml
磨菌
1mg/ml菌悬液
100倍稀释
10-2 mg/ml
ml
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结核分枝杆菌固体培养操作流程
1
痰标本中加入 1-2倍体积 4%NaOH
2
涡旋振荡 1分钟
3
室温静置 15分钟
第3天、7天、此后每周 观察一次直至第九周, 记录菌落生长和污染
6
分别接种0.1ml
置37C温
前处理液至2
箱培养 只酸性罗氏培养基斜面
5
4
结核分枝杆菌固体培养操作流程 操作
痰标本
1－2倍 4% NaOH
No. of sputa tested n=41
n=41 n=36
培 100 养 80 阳 性 60 比 40 例
20
0
90
81
100
100
100
90
81 90
73
100
90
100
94
81
63
77
29
4C
10
25C
25
15
25-30C
0
0
3
7
14
21
28
标本保存时间（0,3,7,14,21,28天） Kim SJ, et al, 1986
特点：全自动、全封闭、快速、样本量 大 原理：分枝杆菌对NaOH的耐受性；分 枝杆菌在液体培养基生长更快，添加了 丰富的营养物质；分枝杆菌生长耗氧， 荧光增强，仪器自动探测荧光的变化。 试剂组成：MGIT培养管、MGIT生长 添加剂、PANTA杂菌抑制剂、SIRE药 敏试剂。 标本适用范围：除血液标本以外的所有 标本
结核分枝杆菌药敏试验-比例法
• 抗结核药物效价的计算：
效价 =纯度×活性成分×（1－水份含量） 实例：KM纯度99%，水分3.3%，活性成分69.6%
KM效价=99%×69.6%×（1－3.3%） =0.6663
保存 异烟肼和可以在室温保存（干燥器）；二氢链霉素/乙 胺丁醇必须在4℃保存；利福平必须在－20℃保存
9
6
瘰疬分枝杆菌
5
7
蟾蜍分枝杆菌
5
8
缓黄分枝杆菌
4
9
新金分枝杆菌
3
10
外来分枝杆菌
3
11
三重分枝杆菌
3
12
马赛分枝杆菌
2
13
亚洲分枝杆菌
2
14
堪萨斯分枝杆菌
2
25.23 24.62 18.62 18.62 2.70
1.5 1.5 1.2 0.9 0.9 0.9 0.6 0.6 0.6
结核分枝杆菌药敏试验-基于固体罗氏培养 基础上的方法
• 分枝杆菌培养阳性（菌落数）：菌落生长不足斜面面积1/4者
• 分枝杆菌培养阳性（1+）： 菌落生长占斜面面积的1/4
• 分枝杆菌培养阳性（2+）： 菌落生长占斜面面积的1/2
• 分枝杆菌培养阳性（3+）： 菌落生长占斜面面积的3/4
• 分枝杆菌培养阳性（4+）： 菌落生长布满整个斜面
分枝杆菌快检测系统（BACTEC960 系统）
盐水，用无菌吸管尖端或接种环刮取2-3周的新 鲜菌落，置于磨菌瓶中。注意尽可能刮取多处 的菌落。旋紧瓶盖，在涡旋振荡器上混旋1分钟。 加入少许灭菌的PBS或生理盐水。 • 将悬浊液转移至比浊管中，加生理盐水或 PBS，其浊度与标准麦氏比浊管（MacFarland No.1）一致，即得到1mg/ml的菌悬液。
'0 '1
5% oxalic acid 5% oxalic acid
'5 '10 '15 '20 '30 '40 '60
Ex posure time(min)
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 '0
M. scrofulaceum M. kansasii
1% NaOH 2% NaOH 5% oxalic acid
钾、硫等）、生长因子 • 耐酸耐碱：对一定浓度的强酸强碱具有耐受性
结核分枝杆菌的生长特性
• 生长缓慢：在一般培养基上生长繁殖一代 需要10多小时，一般10-30天肉眼可见菌 落生长。
• 菌落形态（罗氏培养基）：粗糙、凸起、 致密，有表面皱折，呈颗粒、结节或菜花 样，浅黄色或米色，不透明。
• 液体培养基（不含吐温-80）：絮状或颗 粒状沉淀。
结核分枝杆菌药敏试验-MGIT960法
特点：全自动、全封闭； 快速、样本量 大； 联合 （SIRE）药敏，可进行 PZA药敏试验；结果仪器 自动判读。
结核分枝杆菌药敏试验-MGIT960法
结核分枝杆菌快检测系统 （BACTEC960系统）
结核分枝杆菌药敏试验-试验器材试剂
• 生物安全柜 • 电子灭菌器 • 涡旋振荡器 • 恒温培养箱 • 无菌吸管 • 无菌生理盐水 • 0.5%吐温-80生理盐水（无菌） • 磨菌瓶（无菌） • 试管架 • 对照、鉴别、含药培养基
绝大部分非结核分枝杆菌能将对硝基-苯甲酸（PNB ）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸（PABA），而 绝大部分（98%以上）MTBC缺乏对硝基-苯甲酸（PNB ）还原酶活性，为对氨基-苯甲酸（PABA）将对硝基苯甲酸（PNB）还原为细菌能够利用的对氨基-苯甲酸 （PABA） • 局限：鉴定周期长15天-30天，特异性不高
结核分枝杆菌药敏试验-比例法
• 纯培养、生长活跃的结核菌作为测试 (2 – 4 周). 如果生 长不充分 (少于20 菌落, 1+), 不能很好的解释DST结果
• 少量菌代表病人体内所有菌生长情况 • 以H37Rv 作为对照，新鲜传代
结核分枝杆菌药敏试验-比例法
操作流程：
• 含药培养基的制备 • 菌液制备和稀释 • 接种 • 培养 • 报告结果
'5 '10 '15 '20 '30 '40 '60
Ex posure time(min)
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
利用固体罗氏鉴别培养基的鉴别：
中性罗氏 培养基
+
噻吩-2-羧酸 肼TCH
+
对硝基苯 甲酸PNB
+
菌型鉴定 NTM
+
+
-
人型Mtb
+
-
-
牛型Mtb
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
• 原理：硝基苯甲酸还原酶机制
Paramasivan CN, et al, 1983
不同浓度的酸碱对分支杆菌的影响
Percentage survival Percentage survival
100
M. tuberculosis
90
M. fortuitum
80
70
60
50
1% NaOH
40
30
2% NaOH
20
10
01% NaOH
4856
4415 90.9% 441 9.1%
L-J法
2447
2360 96.4 87 3.5%
结核分枝杆菌药敏试验-菌种鉴定
临床数据-2. 2016年湖南省胸科医院333株NTM的菌种鉴定结果
鉴定结果
例数
构成比（%）
1
胞内分枝杆菌
84
2
龟分枝杆菌
82
3
戈登分枝杆菌
62
4
鸟分枝杆菌
56
5
偶发分枝杆菌
2.比例法（WHO推荐方法） Canetti , 1963
临界药物浓度（单个药物浓度度μg/ml ） ）：SM 4；INH0.2； RFP40；EMB2；PAS1；OFX2；KM30；AMK30；CPM40； TH1321 40 临界菌群比＝耐药菌群数/全菌群数（ 1% ）
菌液浓度10-2mg/ml， 10-4mg/ml，接种量0.01ml
结核分枝杆菌药敏试验-菌型鉴定
基于结核分枝杆菌特异分泌蛋白MPB64抗原的快 速检测鉴定技术
原理：1）MPB64是结核分枝杆菌中特有的分泌蛋白
由RD2区RV1908基因编码，保护228个氨基酸，相对 分子量24000 ；2）通过该蛋白制备的单克隆抗体
3）免疫层析法检测MPB64，鉴定结核分枝杆菌 适用样本：MGIT960等液体及改良罗氏培养基等固体培养
质量控制
2、污染率
污染的培养管数量 = ———————————×100%
培养管总数
污染率应控制在2-5%，
质量控制-污染率过高？
可能原因
解决方法
标本保存不当 标本留取后尽快培养，暂时无法培 (时间、温度） 养应于40C冰箱保存不超过3天。
前处理不充分 材料灭菌不佳 操作不当 培养基因素
4％，1－2倍，充分混旋，20分钟。 接种用吸管需高压灭菌。 培训，严格按操作规程操作。 无菌试验，40C直立保存，1个月 内使用
质量控制
人员培训 • 仪器设备监控 • 培养基无菌试验、生长试验 • 每月对培养情况培养阳性率、涂阳培阴
率和污染率的统计分析
质量控制
• 1、涂阳培阴率：
培养阴性的病例总数 = ———————————×100%
涂片检查阳性的病例总数
涂阳培阴率应小于10%
注意：涂片、培养为同一份标本 数据统计为初治病人
核酸检测
• 焦磷酸测序法： 仪器昂贵 要求样本菌株纯度高-纯菌种
• PCR-反向点杂交法（基因芯片）: 仪器相对便宜 可对同一样本混合菌株同时鉴定 目前可鉴定的菌种17-24种
结核分枝杆菌药敏试验-菌种鉴定
临床数据
1. 2016年湖南省胸科医院分枝杆菌分离情况
方法
菌株数
MTBC
NTM
MGIT 960法
分枝杆菌的分类