实验八 高效液相色谱法测定水中毒死蜱的残留量

实验八高效液相色谱法测定水中毒死蜱的残留量（5学时）

一、实验目的

学习水中农药的提取净化方法；学习高效液相色谱法（HPLC）测定水中农药的残留量

二、实验原理

实验以乙酸乙酯为提取剂，采用溶剂萃取法提取废水中的毒死蜱，经旋转蒸发仪浓缩后，经HPLC检测。

HPLC原理：以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

三、实验材料和仪器

乙酸乙酯、甲醇（色谱纯）、0.22µm有机系过滤头、无水硫酸钠、分液漏斗、50mL 烧杯、铁架台、10mL移液管、5mL移液管、10mL容量瓶、50mL量筒、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪

四、实验步骤

1、标准曲线

准确称其95%毒死蜱原药0.0263g置于50mL容量瓶中，取少许二氯甲烷溶解并用甲醇定容至50mL（500mg/L），再用甲醇配置浓度为2.5、5、25、50、125mg/L 的标准溶液，用HPLC检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算相关系数及回归方程。

2、样品前处理

1）所有玻璃器皿先用乙酸乙酯润洗；

2）用量筒准确量取50mL供试水体，置于分液漏斗中，用移液管移取10mL乙酸乙酯于分液漏斗中，盖上塞子激烈摇动2min，置于铁架台上静置15min，将下层水层放到50mL的烧杯中，另取一烧杯接收上层萃取液；

3）对第一次萃取后的水层再加入5mL乙酸乙酯摇动2min，静置5min，再进行分层处理，同样操作重复一次；

4）合并三次提取液，注意不要使水层流入烧杯中，如有水可加一定量的无水硫酸钠干燥；

5）将合并的提取液转移至旋转瓶中，60℃下浓缩至2mL左右；

6）取一定量的色谱级甲醇润洗内壁并将浓缩液定容到10mL；

7）浓缩液超声5min；过0.22µm滤头去除杂质，供液相检测。

3、添加回收率试验

为验证本次农药残留检测方法的准确度，开展样品添加回收率试验。要求制备3个不同浓度，每个浓度各检测3次。

取毒死蜱农药制剂，配制浓度为2.4、4.8、9.6mg/L三种溶液，按照同样的

样品前处理方法对已知浓度的溶液进行处理，每个浓度重复测量三次，计算回收率。

4、液相检测条件

色谱柱：Amethyst（紫晶）C18-H（4.6mm×150mm，5µm）；

检测器：紫外检测器；

流动相：甲醇-水（体积比90:10）；

检测波长：289nm；

柱温：25℃；

流速：1.0mL/min；

进样量：20µL。

5、液相检测的步骤

①流动相的处理：过滤，超声

②开机，预热30min

③先用甲醇灌泵，直到泵压稳定

④设置检测波长，流动相比例，再用流动相灌泵，直到泵压稳定

⑤将处理好的样品进针，观察出峰情况

⑥记录峰面积和出峰时间

⑦全班进样结束后，用纯甲醇灌泵，直到泵压稳定后，停泵，待压力降至零后，关掉程序。

五、实验结果与分析

1、标准曲线

浓度(mg/L)峰面积

2.5

5

25

50

125

2）以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制散点图并添加趋势直线，

3）计算毒死蜱标准曲线方程及相关系数

2、样品检测或添加回收率试验（以每组的试验内容填写并分析）

序号配制浓度（mg/L）峰面积平均值检测浓度（mg/L）回收率（%）

注：检测浓度的计算方法是，将峰面积作为Y值带入标准曲线中，求出的X值为样品浓缩定容（10mL）后的浓度，提取前的体积为50mL，测定体积是提取前体积的1/5，故原浓度应为为X/5。

六、思考题

蔬菜上的农药残留如何检测？

制作人：林美珍实验师

2013-11-6