实验设计 探讨血氨升高对肝性脑病的发病作用

实验设计

研究题目：探讨血氨升高在肝性脑病中的发病作用

研究背景：肝性脑病是指在排除其他已知脑疾患的前提下，继发于肝功能紊乱的一系列严重的神经精神综合征。肝性脑病的发病机制目前尚不完全清楚，肝性脑病的神经病理学变化多被认为是继发性变化，肝性脑病的发生主要是由于脑组织的功能和代谢障碍引起。目前，有氨中毒学说，GABA学说、假性神经递质学说及血浆氨基酸失衡学说等几种用于解释肝性脑病的发病机制。其中氨中毒学说为解释肝性脑病的发病机制的中心环节

目的：1复制急性肝功能不全的模型，探讨血氨升高在肝性脑病中的发病作用;

2.认识肝脏对血氨清除的重要功能；

3.学习血氨的测定方法；

4.观察血氨升高后对中枢神经系统的毒性作用，肝性脑病的主要表现；

5.肝性脑病的解救

原理：通过对大部分肝脏结扎，使肝解毒功能严重损害从而复制出急性肝功能不全的动物模型，再经十二指肠推注NH4Cl，致使实验动物出现类似肝性脑病的典型症状。由于手术需要采用全麻的方式故一般观测指标用不上，本实验通过看家兔苏醒与死亡时间和血氨的变

化，来辅助判断肝性脑病的发生与否。。

药品和器材：3%戊巴比妥1%普鲁卡因，1%肝素，2.5%复方NH4Cl溶液（NH4Cl 25g，NaHCO3 15g，以5%葡萄糖溶液定容至1L），2.5%复方谷氨酸钠溶液（谷氨酸钠溶液25g，NaHCO3 15g，以5%葡萄糖溶液定容至1L），2.5%复方N a Cl溶液（N a Cl 25g，NaHCO3 15g，以5%葡萄糖溶液定容至1L），酚试剂次氯酸钠试剂蒸馏水

兔手术器械一套，兔手术台，兔头夹，动脉夹，头皮针，721型分光计，离心机，婴儿秤，刻度吸管，巴氏吸管，粗棉线，注射器水浴箱

步骤：1 取性别相同，体重接近的家兔四只，分三组进行实验。其中A组分A1 A2

2 将ABC兔称重后3%戊巴比妥1ml/kg麻醉仰卧固定于兔台，剪去颈前部和上腹部正中线附近的被毛，1%普鲁卡因局部浸润麻醉下进行手术。

3 颈总动脉插管：从耳缘静脉按1ml/kg量注射1%肝素。在甲状软骨下纵行切开颈正中皮肤，分离颈总动脉并插管。取血2ml 于洁净试管内做血氨测定。

4 A、B兔肝叶的游离和结扎：从胸骨剑突下沿上腹正中线做长约6—8cm的切口，打开腹腔，暴露肝脏，术者左手食指和中指在镰状韧带两侧将肝脏往下按，右手持剪刀剪断肝和横膈之间的镰

状韧带。辨明肝脏各叶，用蘸过生理盐水的粗线沿肝左外叶，左中叶，右中叶和方形叶之根部围绕一周并结扎，使上述肝叶迅速变成暗褐色。C兔肝叶不结扎，其余同A 、B兔

5 A2兔先按20ml/kg量从耳缘静脉缓慢推注复方谷氨酸钠溶液

6 A、、C兔沿胃幽门找到十二指肠，以5号针头或小儿头皮针头穿刺入肠内快速推注复方氯化铵溶液3ml/kg，B兔注入同量的复方氯化钠溶液，以皮钳对合夹住腹壁，关闭腹腔，等候15分钟。取血2ml测血氨。

7 在此过程中观察记录家兔的呼吸，记录各兔苏醒的时间及死亡时间并同时用显色法测血氨。

注：c兔为做肝叶假手术时间空格里填写实验时间附：测血氨的方法

充分混匀，置试管于37摄氏度水浴箱水浴15——30分钟，取出后冷却，观察比较呈色情况，用635nm波长比色。