流感嗜血杆菌ppt课件
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、肖氏沙门菌、希氏沙门菌 ▪ 食物中毒——鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌
、肠炎沙门菌 ▪ 败血症——猪霍乱沙门菌最常见
生物学性状
培养基液面为黄色： － ❖ 应用：用于肠道杆菌的鉴定
靛基质试验原理
色氨酸
色氨酸酶
靛基质 （吲哚）
对二甲基氨基苯甲醛
玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）
靛基质试验
尿素酶试验
❖ 原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生 成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。
❖ 培养基：尿素培养基
❖ 试剂：酚红指示剂
❖ 结果：培养基变红：+
❖ 培养基：枸盐酸盐培养基
❖ 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上 呈蓝色）
❖ 结果：培养基变蓝：+ 培养基不变色：－
❖ 应用：肠杆菌科属间鉴别
枸橼酸盐利用试验原理
培养基
枸橼酸盐
铵盐
碳酸盐
氨
培养基pH下降 溴麝香草酚蓝 呈碱性变色
培养基变蓝
埃希菌属
埃希菌属（Escherichia）有6个种，只有大肠埃希 菌（E.coli）是临床最常见、最重要的一个菌种。
❖
培养基不变色：-
❖ 应用：肠杆菌科属间鉴定
尿素酶试验原理
尿素 尿素酶
氨+CO2
培养基pH升高
酚红呈碱性变色
枸橼酸盐利用试验
❖ 原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯 一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源，细菌 生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成 的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。
❖ 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验， 主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
葡萄糖
甲基红试验
丙酮酸
大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
甲基红试验
V-P试验
❖ 原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。
①大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群； ②在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即 可成为机会致病菌，引起肠道外感染； ③一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人 类胃肠炎； ④在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的 卫生学检测指标。
22
生物学性状
❖ 中等大小的G-杆菌、无芽胞、有周鞭毛、菌毛 ❖ 营养要求不高。肠道鉴别培养基形成有色菌落
流感嗜血杆菌
肠道杆菌共同特点
❖ 形态结构
➢ G—中小杆菌，无芽孢，多数有周鞭毛（除志 贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC ），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。 及菌毛
❖ 培养特性
➢ 需氧或兼性厌氧
➢ 营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似， 形成灰白色中等大小S型菌落。
❖ 生化反应
发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；
，SS平板上呈红色大菌落 ❖ 发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气
，分解蔗糖因菌株而异，尿素酶试验阴性。 吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC试 验）为+ + - -。 克氏双糖铁琼脂（KIA）：斜面和底层均产酸产 气，H2S（-）。 动力-吲哚-尿素（MIU）培养基为+ + -。
23
根据生化反应的结果初步定属、种，再根据 血清凝集反应才能作出最后判断。
甲基红试验
❖ 原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步 生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4 以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色 反应。此为甲基红试验阳性。
❖ 培养基：葡萄糖蛋白胨水
❖ 试剂：甲基红试剂
❖ 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： －
❖ 培养基：葡萄糖蛋白胨水
❖ 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： －
❖ 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
葡萄糖
V－P试验
丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
大量混合酸
pH降至4.4以下 甲基红试剂
培养基变红
葡萄糖 丙酮酸
脱酸 乙酰甲基甲醇
伊红美兰不能结合
无色的乳糖不发酵菌落
EMB平板上的E.coli
SS培养基（沙门志贺培养基） 乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂
大肠埃希菌
乳糖 发酵
产酸
中性红 呈红色
桃红色乳糖发酵菌落选择抑制源自 用（强选）伤寒沙门菌 不乳发糖酵无色乳糖不发酵菌落
胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌，提高肠道致病菌检出率
V-P试剂 二乙酰
培养基变红
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径
靛基质试验
❖ 原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的 色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂 对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。
❖ 培养基：蛋白胨水 ❖ 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） ❖ 结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+
志贺菌（Shigella)
人类细菌性痢疾的病原菌，俗称痢疾杆菌 一、生物学性状 ❖ 形态与染色：G–、短小杆菌、无芽胞，无
鞭毛，无荚膜，有菌毛。 ❖ 培养特性：营养要求低，SS平板上呈无色半
透明菌落 ❖ 生化反应：葡萄糖+，乳糖-
H2S - ，动力可与沙门24菌、大肠埃希菌区别。
培养——SS平板
有色菌落
无色菌落
25
❖ 抗原构造及分类： O抗原（分类依据）：包括群和型特异性抗 原 A群:痢疾志贺氏菌 B群:福氏志贺氏菌 C群:鲍氏志贺氏菌 D群:宋内氏志贺氏菌 K抗原无分类意义
❖ 抵抗力：比其它肠道杆菌弱，粪便标本立即 送检；易形成抗药性。
26
沙门菌属
是肠杆菌科中最复杂的菌属，有2000种以 上血清型 对人类有致病性 ▪ 肠热症——伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌
微生物检验 1.分离培养
2.鉴定
（1）初步鉴定： ①确定肠杆菌科的细菌，应采用葡萄糖氧化-
发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以 鉴别；②肠杆菌科细菌的分群，多采用苯丙氨酸 脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科的细菌分 为三个类群；③选择生化反应进行属种鉴别。 KIA和MIU将细菌初步定属。 （2）最后鉴定：
乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形 杆菌）。触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为 亚硝酸盐。
EMB（伊红——美兰培养基），乳糖、伊红、美兰
大肠埃希菌 （非致病菌）
选择作用 （弱选）
乳糖 发酵
产酸
伊红 结合 美兰
形成紫黑色金属光 泽化合物
有色的乳糖发酵菌落
伤寒沙门菌等 （致病菌）
乳糖 不发酵
、肠炎沙门菌 ▪ 败血症——猪霍乱沙门菌最常见
生物学性状
培养基液面为黄色： － ❖ 应用：用于肠道杆菌的鉴定
靛基质试验原理
色氨酸
色氨酸酶
靛基质 （吲哚）
对二甲基氨基苯甲醛
玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）
靛基质试验
尿素酶试验
❖ 原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生 成氨和CO2，氨使培养基呈碱性变色。
❖ 培养基：尿素培养基
❖ 试剂：酚红指示剂
❖ 结果：培养基变红：+
❖ 培养基：枸盐酸盐培养基
❖ 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上 呈蓝色）
❖ 结果：培养基变蓝：+ 培养基不变色：－
❖ 应用：肠杆菌科属间鉴别
枸橼酸盐利用试验原理
培养基
枸橼酸盐
铵盐
碳酸盐
氨
培养基pH下降 溴麝香草酚蓝 呈碱性变色
培养基变蓝
埃希菌属
埃希菌属（Escherichia）有6个种，只有大肠埃希 菌（E.coli）是临床最常见、最重要的一个菌种。
❖
培养基不变色：-
❖ 应用：肠杆菌科属间鉴定
尿素酶试验原理
尿素 尿素酶
氨+CO2
培养基pH升高
酚红呈碱性变色
枸橼酸盐利用试验
❖ 原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯 一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源，细菌 生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成 的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。
❖ 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验， 主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
葡萄糖
甲基红试验
丙酮酸
大量混合酸
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
甲基红试验
V-P试验
❖ 原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮 酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙 酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化 合物。
①大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群； ②在宿主免疫力下降或细菌侵入肠外组织器官后即 可成为机会致病菌，引起肠道外感染； ③一些血清型的大肠埃希菌具有致病性，能导致人 类胃肠炎； ④在环境卫生和食品卫生学中常被用作粪便污染的 卫生学检测指标。
22
生物学性状
❖ 中等大小的G-杆菌、无芽胞、有周鞭毛、菌毛 ❖ 营养要求不高。肠道鉴别培养基形成有色菌落
流感嗜血杆菌
肠道杆菌共同特点
❖ 形态结构
➢ G—中小杆菌，无芽孢，多数有周鞭毛（除志 贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC ），无芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。 及菌毛
❖ 培养特性
➢ 需氧或兼性厌氧
➢ 营养要求不高，普通培养基可生长，菌落相似， 形成灰白色中等大小S型菌落。
❖ 生化反应
发酵葡萄糖产酸、或产酸产气；
，SS平板上呈红色大菌落 ❖ 发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇产酸产气
，分解蔗糖因菌株而异，尿素酶试验阴性。 吲哚、甲基红、V-P、枸橼酸盐试验（IMViC试 验）为+ + - -。 克氏双糖铁琼脂（KIA）：斜面和底层均产酸产 气，H2S（-）。 动力-吲哚-尿素（MIU）培养基为+ + -。
23
根据生化反应的结果初步定属、种，再根据 血清凝集反应才能作出最后判断。
甲基红试验
❖ 原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步 生成大量混合酸，使培养基pH维持在4.4 以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色 反应。此为甲基红试验阳性。
❖ 培养基：葡萄糖蛋白胨水
❖ 试剂：甲基红试剂
❖ 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： －
❖ 培养基：葡萄糖蛋白胨水
❖ 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： －
❖ 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
葡萄糖
V－P试验
丙酮酸
脱酸
乙酰甲基甲醇
V-P试剂
二乙酰
培养基变红
大量混合酸
pH降至4.4以下 甲基红试剂
培养基变红
葡萄糖 丙酮酸
脱酸 乙酰甲基甲醇
伊红美兰不能结合
无色的乳糖不发酵菌落
EMB平板上的E.coli
SS培养基（沙门志贺培养基） 乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂
大肠埃希菌
乳糖 发酵
产酸
中性红 呈红色
桃红色乳糖发酵菌落选择抑制源自 用（强选）伤寒沙门菌 不乳发糖酵无色乳糖不发酵菌落
胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌，提高肠道致病菌检出率
V-P试剂 二乙酰
培养基变红
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径
靛基质试验
❖ 原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的 色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂 对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。
❖ 培养基：蛋白胨水 ❖ 试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛） ❖ 结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：+
志贺菌（Shigella)
人类细菌性痢疾的病原菌，俗称痢疾杆菌 一、生物学性状 ❖ 形态与染色：G–、短小杆菌、无芽胞，无
鞭毛，无荚膜，有菌毛。 ❖ 培养特性：营养要求低，SS平板上呈无色半
透明菌落 ❖ 生化反应：葡萄糖+，乳糖-
H2S - ，动力可与沙门24菌、大肠埃希菌区别。
培养——SS平板
有色菌落
无色菌落
25
❖ 抗原构造及分类： O抗原（分类依据）：包括群和型特异性抗 原 A群:痢疾志贺氏菌 B群:福氏志贺氏菌 C群:鲍氏志贺氏菌 D群:宋内氏志贺氏菌 K抗原无分类意义
❖ 抵抗力：比其它肠道杆菌弱，粪便标本立即 送检；易形成抗药性。
26
沙门菌属
是肠杆菌科中最复杂的菌属，有2000种以 上血清型 对人类有致病性 ▪ 肠热症——伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌
微生物检验 1.分离培养
2.鉴定
（1）初步鉴定： ①确定肠杆菌科的细菌，应采用葡萄糖氧化-
发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌加以 鉴别；②肠杆菌科细菌的分群，多采用苯丙氨酸 脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，将肠杆菌科的细菌分 为三个类群；③选择生化反应进行属种鉴别。 KIA和MIU将细菌初步定属。 （2）最后鉴定：
乳糖发酵试验：非致病菌 +，致病菌 -（除外变形 杆菌）。触酶阳性；氧化酶阴性；硝酸盐还原为 亚硝酸盐。
EMB（伊红——美兰培养基），乳糖、伊红、美兰
大肠埃希菌 （非致病菌）
选择作用 （弱选）
乳糖 发酵
产酸
伊红 结合 美兰
形成紫黑色金属光 泽化合物
有色的乳糖发酵菌落
伤寒沙门菌等 （致病菌）
乳糖 不发酵