枯草芽孢杆菌的分离及筛选
枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案
氯化钠 ５克
蒸馏水 １００毫０升
氯化钠 ５克
琼脂 １８克
4—5ml，0.06MPa（8lbf/in2）30min 灭菌
试剂： 40%NAOH(或 KOH)，肌酸。 3、 步骤：
1. 接种与培养 将芽孢杆菌测试菌接种于上述培养液中，一般于 30 摄氏度培养 4 天。
2. 结果观察 在培养 4 天后，取培养液（约 2ml）和等量的 40%NAOH 相混合，如少量肌酸 （约 0.5—1mg），充分振荡， 2—5min 后如培养液呈红色，即为 V.P试. 验阳性， 有时须放置更长时间才出现红色反应。
ｐＨ ６．５ 121℃灭菌 20min
2、培养基：半固体培养基 3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于
30 培养 3—7 天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺 线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌
三、乙酰甲基甲醇实验 1、 原理：
本实验是测定芽孢杆菌 （或其他细菌） 发酵葡萄糖的变化。 有些芽孢杆菌发酵葡萄糖 产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或 2,3-丁二醇。乙酰 甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰， 后者与蛋白胨中精氨酸所含 的胍基起作用，生成红色化合物，即表示 V.P.试验阳性。若在培养基中加入少量肌酸
蒸馏0 克
pH
7.0-7.2
121℃灭菌 20min
淀粉培养基
牛肉膏 ５克
以补充胍基，可加速反应。反应式如下： 2 丙酮酸—— >乙酰甲基甲醇 + 2 二氧化碳；
-2H 乙酰甲基甲醇———— >二乙酰；
+KOH
缩合 二乙酰 + NH=C(NH 2)2———— >红色化合物 2、 培养基和试剂 培养基：蛋白胨 5g，葡萄糖 5g，NaCl 5g，蒸馏水 1000ml。调节 PH 6.5，每管分装
分离枯草芽孢杆菌的流程
分离枯草芽孢杆菌的流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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枯草芽孢杆菌的培养、筛选分离和鉴别
03
枯草芽孢杆菌的筛选分离
枯草芽孢杆菌的分离纯化
制样品稀释液
取得土壤样g，放入盛 1 有99ml的无菌水锥形
瓶中，充分振荡。
培养
用移液枪将各个浓度梯度的一 3 定量稀释液接种到开始时制作 好的培养基上，用无菌刮铲涂 匀。37℃下倒置培养24小时。
加热筛选能形成芽孢的 细菌
在超净工作台中，将装有锥形瓶 2 的菌悬液加塞、包扎、摇匀后放
3
高压灭菌：将分装包扎的培养基放入 高压蒸汽灭菌锅中进行高压蒸汽霉菌， 用0.075MPa灭菌30分钟。（使用高 压蒸汽灭菌锅要注意放完冷气。灭菌 结束后等到气压降到“0”时才能打 开放气阀。）
培养基 制备
2
精确称取蔗糖30g、磷酸二氢钾4.5g、 硫酸铵2.5g、蛋白胨10g、碳酸钙 2g、酵母膏5g和琼脂20g，然后在 1000ml水中充分溶解。
道中的游离氧，造成肠道
2
低氧，促进有益厌氧菌生
长，间接抑制其它致病菌
生长。
4.
枯草芽孢杆菌菌体自身合成α -
4
淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤
维素酶等酶类，在消化道中与
动物体(人体)内的消化酶类一
同发挥作用。
3.
3
刺激动物(人体)免疫器官
的生长发育，激活T、B
淋巴细胞，提高免疫球
蛋白和抗体水平，增强
细胞免疫和体液免疫功
能，提高群体免疫力。
生物科学 进入人体，能100%到达大小肠，抑
制致病菌，促进有益厌氧菌生长，并产生 乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑 制其它致病菌生长。提高免疫球蛋白和抗 体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能， 提高群体免疫力。合成α -淀粉酶、蛋白酶、 脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与 动物体(人体)内的消化酶类一同发挥作用。
枯草芽孢杆菌实验报告
微生物技术综合实验年级：13级生物工程（专升本）班级：学号：姓名：徐红贞指导老师：刘凤霞教授日期：二零一三十月五号目录1实验目的及原理 (1)1.1实验目的 (1)1.2实验原理 (1)2实验材料 (1)2.1实验仪器 (1)2.2实验试剂 (1)2.3培养基 (2)2.3.1 生长培养基 (2)2.3.2鉴定培养基 (2)2.3.3摇瓶培养基 (2)3试验方法 (2)3.1仪器的准备 (2)3.2培养基的配置 (2)3.3初步筛选及鉴定 (2)3.3.1采集土样 (3)3.3.2富集培养 (3)3.3.3稀释分离、纯化 (3)3.3.4初筛 (3)3.4复筛及鉴定 (4)3.4.1革兰染色 (4)3.5酶活力的测定 (4)3.5.1摇瓶培养 (4)3.5.2酶液稀释 (4)3.5.3酶液测定 (4)4结果分析 (5)4.1平板涂布分离 (5)4.2平板划线分离 (5)4.3初筛 (5)4.4复筛 (5)4.5摇瓶培养 (6)4.6酶活力测定 (6)5参考资料 (7)6附录 (8)微生物上游技术综合实验枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定1.实验目的及原理1.1实验目的（1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。
（2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。
（3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。
（4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。
（5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。
1.2实验原理选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。
将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。
枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案
附表：培养基的配方
肉汤琼脂培养基
牛肉膏 ５克
蛋白胨 １０克
ｐＨ ６．５ 121℃灭菌 20min
四、淀粉水解 1、原理：
许多芽孢杆菌产生淀粉酶， 能将培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进 一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 2、 培养基及试剂： 培 养 基 ： 在 肉 汤 琼 脂 中 添 加 0.2% 的 可 溶 性 淀 粉 ， 分 装 于 三 角 瓶 。
0.1MPa(15lbf/in2)20min 灭菌备用。
2、培养基：半固体培养基 3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于
30 培养 3—7 天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺 线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌
三、乙酰甲基甲醇实验 1、 原理：
本实验是测定芽孢杆菌 （或其他细菌） 发酵葡萄糖的变化。 有些芽孢杆菌发酵葡萄糖 产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或 2,3-丁二醇。乙酰 甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰， 后者与蛋白胨中精氨酸所含 的胍基起作用，生成红色化合物，即表示 V.P.试验阳性。若在培养基中加入少量肌酸
可溶性淀粉 ２克
琼脂 １５－克２０
蒸馏水 １００毫０升
ＨＨＪＳ－ＺＬ
枯草芽孢杆菌的鉴定实验
1. 形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等） ⑴单个菌体的形态 ⑵群体形态的观察
2. 革兰氏染色 3. 芽孢染色 4. 菌体大小测量 5．枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：
一 过氧化氢酶测定 1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧 2、试剂： 3—10%过氧化氢 培养基：肉汤琼脂培养基 3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上， 30 培养 1—2 天。取一干净载玻片，在
臭豆腐中的枯草芽孢杆菌的分离、筛选、鉴定与验证
微生物实验方案设计——臭豆腐中的枯草芽孢杆菌的分离、筛选、鉴定与验证姓名：吴安琦专业：化学生物学学号：20131583摘要：本实验目的在于通过对市场上卖的臭豆腐发酵卤水中的菌种进行多样性分析,分离纯化其中的各种菌株,后对其进行生化鉴定和食用安全性验证试验，从中筛选出高效的制作食用臭豆腐发酵的枯草芽孢杆菌菌株。
关键词：臭豆腐；枯草芽孢杆菌；分离纯化；菌种鉴定。
引言臭豆腐，其名虽俗气、却外陋内秀、平中见奇、源远流长，是一种极具特色的汉族传统小吃。
臭豆腐臭豆腐以优质黄豆为原料。
制作工艺较为复杂，黄豆经过筛选、脱壳、浸泡、磨浆、过滤、煮浆、点浆、成型、划块、发酵等十道工序。
呈贡臭豆腐质地软滑，散发异香。
先人赞誉云：“味之有余美，玉食勿与传”。
它不仅有很高的营养价值，而且有较好的药用价值。
古医书记载，臭豆腐可以寒中益气，和脾胃，消胀痛，清热散血，下大肠浊气。
常食者，能增强体质，健美肌肤。
“闻着臭”是因为豆腐在发酵腌制和后发酵的过程中，其中所含蛋白质在蛋白酶的作用下分解，所含的硫氨基酸也充分水解，产生一种叫硫化氢（H2S）的化合物，这种化合物具有刺鼻的臭味。
在蛋白质分解后，即产生氨基酸，而氨基酸又具有鲜美的滋味，故“吃着香”。
枯草芽胞杆菌，是芽胞杆菌属的一种。
单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
并且耐氧化；耐挤压；耐高温，能长期耐60°C高温，在120°C温度下能存活20分钟；耐酸碱，但是不耐低温,在-4和-80度冰箱中会很快死亡。
土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法
土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法一、实验目的1.学习掌握芽孢染色法并了解芽孢的形态特征2.学习并掌握荚膜染色法并了解荚膜的形态特征3.学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征4.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验原理1.细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
2.芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色又难以脱色这一特点而设计的。
3.所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而更能明显地衬托出芽孢，便于观察。
4.染色方法：改良后的Schaeffer-Fulton氏染色法三、实验仪器及材料1.菌种：枯草芽孢杆菌2.染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液3.仪器或其他用具：Eppendorf管架、载玻片、显微镜、电磁炉、搪瓷杯等。
四、实验步骤1.制备菌悬液：在EP管中滴两滴生理盐水，挑取2-3环菌苔加入到含生理盐水的EP管中，混合均匀。
2.染色：在EP管中滴加2-3滴孔雀绿染液，盖紧EP管，将EP管插入浮筏中，放进沸水中加热15-20分钟，加热过程需要有人看护，随时控温，防止沸水进入EP管。
3.涂片固定：取半滴经孔雀绿染色的菌悬液在载玻片的中央，用接种环将菌液涂抹均匀，将载玻片用法电风机冷风吹干，经过酒精灯火焰固定三次。
4.脱色：待玻片冷却后，水洗脱色。
5.复染：滴加数滴0.5%番红水溶液在菌膜上，染色2min，再水洗。
6.镜检：将晾干后放在显微镜下观察。
五、实验结果结果描述：大部分菌体被染成红色，少部分被染成绿色，说明有芽孢产生，但是芽孢的数量没有菌体多，芽孢被染成绿色，菌体被染成红色，由绿色芽孢的外面还包裹着一层淡红色带可知，该芽孢是内生芽孢，芽孢呈椭圆形，位于菌体的中央，是中央生的芽孢，同时可以观察到枯草芽孢杆菌的大小比平常的小得多。
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然界中的益生菌，它具有很强的抗菌能力，在农业、食品、环保等领域中有着重要的应用价值。
近年来，随着生态环境的恶化和水质污染的加剧，水产业生态环境问题日益突出，针对水体的净化和养殖水环境的改善成为亟需解决的问题。
本文将探讨枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化的相关内容，为水产业的可持续发展提供一定的参考。
一、枯草芽孢杆菌的筛选枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤和水体中的益生菌，它具有很强的适应性和抗逆性，能够在各种环境中生存和繁殖。
在水体净化中，枯草芽孢杆菌可以分解有机污染物，降解废弃物中的氮、磷等养分物质，减轻水质负荷，提高水体的透明度和透氧性，有效改善养殖水环境。
筛选出优良的枯草芽孢杆菌菌株对养殖水体的净化具有重要的意义。
1. 筛选标准的确定在筛选枯草芽孢杆菌菌株时，需要确定一定的筛选标准，可以从菌株的抗逆能力、生长速度、对废弃物的降解能力等方面进行评价。
抗逆能力是菌株在恶劣环境中生存的保障，生长速度则影响菌株的应用效果，对废弃物的降解能力是衡量菌株是否适合用于水体净化的重要指标。
2. 筛选方法常用的筛选方法包括菌落计数法、抗生素敏感性试验、生长速率检测等。
通过对大量菌株的筛选和鉴定，可以得到具有优良特性的枯草芽孢杆菌菌株，为养殖水体的净化提供优质的微生物资源。
二、枯草芽孢杆菌与光合细菌的复配光合细菌是一类能够进行光合作用的细菌，它们能够利用光能和无机物质合成有机物，具有很强的生物合成能力。
在养殖水体净化中，光合细菌可以参与氮、磷等营养物质的循环，促进水体中废弃物的降解，提高水质的透明度和透氧性，改善水体的生态环境。
1. 复配原理2. 复配效果。
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化1. 引言1.1 研究背景随着水产养殖业的快速发展，养殖水体中的污染问题也日益突出。
养殖废水中含有大量的氨氮、硫化氢、无机磷等有机物质，这些物质对水体生态环境和养殖水生物的健康造成了严重影响。
传统的水质处理方法存在效率低、成本高、操作复杂等问题，因此迫切需要寻找一种新的高效、低成本的水质净化方法。
枯草芽孢杆菌和光合细菌作为生物净化剂，在水质净化领域备受关注。
枯草芽孢杆菌具有良好的抗逆性和生长速度快的特点，能够有效降解水体中的有机废弃物和氨氮，对养殖水体的净化效果显著；光合细菌则是利用光合作用将有机物质转化为生物质和氧气，可有效减少水中废弃物质和有害物质的浓度。
本研究旨在筛选出具有优良净化能力的枯草芽孢杆菌和光合细菌，探讨二者复配在养殖水体中的净化机制和效果，为养殖水体的环境治理提供新的思路和方法。
通过这项研究，有望为水产养殖业的可持续发展提供技术支持和科学依据。
1.2 研究目的研究目的是探究枯草芽孢杆菌和光合细菌复配对养殖水体的净化效果及其机制，为改善养殖水体环境质量提供科学依据。
具体目的包括：1. 筛选出适合在养殖水体中应用的枯草芽孢杆菌和光合细菌菌株，以提高净化效果和适应性；2. 探究枯草芽孢杆菌与光合细菌复配净化水体的原理，深入了解两者之间的协同作用机制；3. 评估枯草芽孢杆菌与光合细菌复配在养殖水体净化中的应用效果，探讨其在不同环境条件下的适用性和稳定性；4. 分析影响复配效果的因素，包括水体温度、酸碱度、溶氧量等，为进一步优化复配方案提供参考；5. 总结枯草芽孢杆菌与光合细菌复配对养殖水体的净化效果，展望未来该领域的研究方向，为推动相关技术的发展和应用提供指导。
2. 正文2.1 枯草芽孢杆菌的筛选方法枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于自然环境中的细菌，具有很强的适应性和生存能力。
在养殖水体净化中，通过选择具有良好营养特性和高效生长能力的枯草芽孢杆菌菌株进行筛选是非常重要的步骤。
枯草芽孢杆菌的分离纯化和初步鉴定方案
枯草芽孢杆菌的分离纯化和初步鉴定方案3班第3组周三15:30-17:00周四08:30-09:50组长：刘晨阳组员：吕宛容，韩晴，董春燕，邢爽，高倩倩，薛琳琳，邵宇婷，吴子侥枯草芽孢杆菌的分离纯化和初步鉴定一、目的要求1、掌握分离、纯化枯草芽胞杆菌的方法。
2、掌握如何鉴别所得菌是否为枯草芽胞杆菌的方法。
二、实验原理芽孢杆菌是属于芽孢杆菌属的一类细菌。
单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽胞0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽胞形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。
其分布十分广泛，主要存在于土壤或腐烂的稻草之中。
由于其能够形成芽孢，因此能够抵抗高温，低温等不良环境，所以是实验室及工业生产中主要污染菌之一，危害极大。
但是许多芽孢杆菌能分泌蛋白酶、淀粉酶、抗菌素等物质，是工业酶制剂生产的重要菌种。
例如，我国使用的BF7658枯草芽孢杆菌生产а-淀粉酶，用于淀粉水解，纺织品退浆等。
又如AS1398枯草杆菌是生产蛋白酶的重要菌株。
芽孢杆菌的细胞大小0.7×2～3 μm，营养细胞为杆状，杆端钝圆、单生或者短链，单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，有芽孢0.6×1～1.5 μm，芽孢中生或近中生，壁薄，不膨大，孢子呈椭圆或长筒形，常为两端染色。
其菌落变化很大，芽孢杆菌在麦芽汁琼脂培养基斜面上，菌落呈细皱状，干燥或颗粒状。
在土豆培养基上菌落呈细皱状，干燥，有时呈现天鹅绒状的菌苔，在液体培养基表面形成银白色的菌膜。
菌落粗糙，扁平、扩展，不透明，不闪光，表面干燥，污白色或微带黄色。
芽孢杆菌能产生芽孢，芽孢具有较强的抗高温能力在沸水中加热不会失去生理活性，但是不能产生芽孢的细菌会失去活性，因而得到芽孢菌属，经过进一步的分离纯化及生理生化鉴定得到芽孢杆菌。
枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定
枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定一、目的：掌握芽孢杆菌属常见种的分离，鉴定方法和技术。
将土壤样品中分离的芽孢杆菌属未知种鉴定到属。
二、原理：芽孢杆菌能产生芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性，但是不能产生芽孢的细菌会失去活性。
，因而得到芽孢菌属，经过进一步分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。
三、材料和器皿：显微镜、培养皿（12个）、试管（12个）、三角瓶（5个）、烧杯、移液管（）、涂布棒（6个）、载玻片、接种环、接种针、试管架、灭菌锅、培养箱培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、淀粉培养基、v.p.实验培养基、肉汤琼脂培养基孔雀绿溶液、番红复染液、NaOH溶液、草酸铵溶液、碘液、乙醇四、操作步骤菌种的分离和纯化（1）土壤的采集：取土壤表层5~10厘米下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋中带回实验室分离。
（2）平板的制备：融化三角瓶中的牛肉膏蛋白胨培养基，以每皿20ml左右倒入6个平板上。
（3）稀释分离法：秤取土壤5g放入含有45ml水的三角瓶中，摇动片刻，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15分钟，而后静止5分钟。
吸取上层液0.5ml加入到含有4.5ml的无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后分别吸取10-2和10-3土壤悬浊液个0.1ml滴加到上述牛肉膏蛋白胨培养基平板上，每种稀释2皿，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37℃恒温培养1~2天。
（4）挑菌及纯化：从上述分离的平板上分别挑取2个单菌落中部分菌落，然后在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，经菌落特征的观察和镜检，确定是否是芽孢杆菌纯种后，从中选择一株转接于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，置37℃培养1~2天备用。
菌种的鉴定1、形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等）（1）单个菌种的形态（2）菌种形态的观察2.革兰氏染色3.芽孢染色4.菌体大小测验5.枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定一、淀粉水解一、原理许多芽孢杆菌产生淀粉酶，能将淀粉培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
枯草芽孢杆菌及其分离培养方法
枯草芽孢杆菌及其分离培养方法
枯草芽孢杆菌是一种常见的细菌，它属于芽孢杆菌科，是一种革兰氏阳性菌。
枯草芽孢杆菌具有很强的耐热性和抗干旱能力，可以在极端环境下生存，因此在工业生产和科学研究中有着广泛的应用。
枯草芽孢杆菌的分离培养方法如下：
1. 样品采集：从土壤、水体、植物等自然环境中采集样品，将样品放入无菌容器中。
2. 处理样品：将样品加入适量的无菌水中，进行搅拌均匀，然后离心沉淀。
3. 制备培养基：制备适合枯草芽孢杆菌生长的培养基，如普通营养琼脂培养基、葡萄糖琼脂培养基等。
4. 接种培养基：将样品沉淀液均匀地接种在培养基上，然后在适宜的温度下进行培养。
5. 观察菌落：经过一段时间的培养，可以观察到枯草芽孢杆菌在培养基上生长形成的菌落。
6. 纯化菌株：将菌落进行分离，筛选出纯净的枯草芽孢杆菌菌株。
总之，枯草芽孢杆菌的分离培养方法需要注意无菌操作，制备适合其生长的培养基，以及在适宜的温度下进行培养。
通过这些步骤，可以成功地分离出枯草芽孢杆菌，并获得纯净的菌株，为后续的研究和应用提供了基础。
一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件优化
一株枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其发酵条件优化一、引言枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的芽孢形成细菌，广泛存在于土壤、水体、植物表面等环境中。
枯草芽孢杆菌具有良好的免疫调节、抗菌、促生长等生物学特性，被广泛应用于农业、食品、医药等领域。
针对不同用途的需求，分离鉴定枯草芽孢杆菌并优化其发酵条件，能够提高其生物活性和产量，为其在实际应用中发挥更好的效果。
二、枯草芽孢杆菌的分离鉴定1.样品采集与处理首先，从自然环境、农田土壤或其他植物表面等样品中采集含有枯草芽孢杆菌的样品。
将样品带回实验室后，进行分离和处理，避免混杂其他细菌或真菌。
2.菌株分离将处理后的样品进行稀释，接种于富含培养基中，利用传统分离方法（如平板分离法、稀释平板法等）进行分离。
通过观察不同菌落形态和颜色，筛选出枯草芽孢杆菌单菌株。
3.生理生化鉴定对分离到的枯草芽孢杆菌进行生理生化鉴定，包括形态学观察、生长特性、氧化还原反应、产酶活性等。
利用生化试剂盒进行相关检测，确定菌株的生物学特性。
4.分子鉴定通过16SrRNA序列分析或蛋白质质谱鉴定等分子生物学方法，确认所分离到的枯草芽孢杆菌的属种分类，并与数据库中的已知菌株进行比对验证。
5.枯草芽孢杆菌存取将鉴定完成的枯草芽孢杆菌单菌株保存在甘油保存流质中，存放在-80°C低温冰箱中备用。
1.发酵基质的选择选择适宜的发酵基质对枯草芽孢杆菌的生长和代谢具有重要影响。
常用的基质包括葡萄糖、大豆粉、玉米粉等，可以根据具体需求进行配比调整。
2.发酵菌种培养条件通过扩种培养，将枯草芽孢杆菌预培养至指数生长期，然后接种至发酵罐中，保持较高的菌液浓度，有利于产酶和生长。
3.发酵条件的控制在发酵过程中，通过控制温度、pH值、通气速率、发酵时间等因素，调节菌体生长、产酶效率和产物生成速率。
通常，较适宜的发酵条件为温度37°C-42°C，pH值6.0-8.0，通气速率1.0-2.0L/min。
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化我们来介绍一下枯草芽孢杆菌和光合细菌。
枯草芽孢杆菌是一种厌氧菌，能够利用有机物质进行呼吸作用和产生能量，同时它还具有分解有机物的能力，能够促进水体中有机物的降解。
光合细菌则是一类能够利用光能进行光合作用的细菌，它们可以吸收水体中的有机物和无机物，利用光合作用产生氧气和有机物，有助于水体氧化还原平衡的维持和有机物的降解。
针对枯草芽孢杆菌和光合细菌在水体净化中的应用，研究人员进行了数量众多的筛选试验和净化技术研究。
在枯草芽孢杆菌的筛选过程中，研究人员通过对不同环境样品的采集，分离枯草芽孢杆菌并进行纯化培养，通过对其分解有机物和对不同水体污染指标的降解能力进行评价，最终确定了适合水体净化的优良菌株。
而对光合细菌的筛选也是同样如此，通过采集不同水域的样品，分离出光合细菌并进行纯化培养，通过对其光合作用效率和对水体中有机物的吸收能力进行评价，最终确定了适合水体浑浊物质降解和有机物吸收的优良菌株。
枯草芽孢杆菌和光合细菌在复配过程中还可以相互促进，共同发挥净化作用。
枯草芽孢杆菌通过分解有机物质产生的代谢产物可以为光合细菌提供养分，促进光合作用的进行，有利于光合细菌的活性和生长。
而光合细菌产生的氧气和有机物质也可以为枯草芽孢杆菌提供生长环境和养分，从而促进其降解和分解作用。
枯草芽孢杆菌与光合细菌复配对养殖水体的净化效果明显优于单一菌种的应用。
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化技术是一种非常有效的生物净化技术。
通过找寻优良的枯草芽孢杆菌和光合细菌菌株，并进行复配应用，能够显著提高养殖水体的水质，减少有机物质和浑浊物质的积累，有助于维持水体的生态平衡和增强养殖水体的可持续发展能力。
未来，我们对于该技术的研究还需要进一步深入，例如优化菌株的筛选和复配比例的确定等。
相信在不久的将来，该技术将在养殖业中得到更加广泛的应用，为养殖水体的净化和环境保护贡献更多的力量。
枯草芽孢杆菌的分离筛选
４ ． Ｗｕ ｑ ｉ Ｃ ｏ ｕ ｎ ｔ ｙ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ Ｂ ｕ ｒ ｅ ａ ｕ； ５ ． Ｚ ｈ ａ ｏ ｃ ｈ ｕ ａ ｎ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｎ ａ ｎ Ｃ ｏ ｕ ｎ ｔ ｙ
析， 最终 鉴定 ｂ 一１菌株 为枯 草 芽孢杆 菌 （ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ ） ， 其 同源性≥ ９ ９ 。
关 键词 ： 枯草 芽孢杆 菌 ； 筛选 ； 鉴定；
［ 中图分 类号 ］ ￥ ８ １ ６ ． ６ ［ 文献 标识 码］ Ａ ［ 文章编 号］ １ ０ ０ ４ — ６ ７ ０ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ ０ ２ ４ — ０ ４ Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎｄ Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎｇ ｏ ｆ Ｂａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ Ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ
ＢＡＩ Ｙａ ｎ — ｑ ｉ ｎ ， ＸＩ Ｎ Ｘｉ ａ ｏ — ｌ ｉ ｎ ｇ 。， ＬＡＩ ＹＯ Ｕ — ｚ ｈｉ 。， ＺＨ ＡＮＧ Ｘｉ ａ ｏ — ｃ ｈ ｕａ ｎ ，
Ｚ ＨＡＮＧ Ｇａ ｎ ｇ － ｊ ｕ ａ ｎ 。 Ｌ Ｉ Ｕ Ｊ ｉ ａ ｎ — ｆ ｅ ｎ ｇ 。 ， ＸＩ Ｎ Ｙａ — ｐ ｉ ｎ ｇ
（ １ ． Ｓ ｈ ｉ ｊ ｉ ａ ｐ ａ ｎ Ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｚ ｉ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｂ ｕ ｒ ｅ ａ ｕ， Ｚｉ ｃ ｈ ａ ｎ ｇＳ ｈ ａ ａ ｎ ｘ ｉ ７ １ ７ ３ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；
枯草芽孢杆菌的分离及筛选
枯草芽孢杆菌的分离及筛选枯草芽孢杆菌是一种常见的土壤细菌，广泛存在于自然环境中，可发酵多种有机物，在生物降解、环境清洁等方面有广泛应用。
本文将介绍枯草芽孢杆菌的分离及筛选方法。
一、土样采集与处理选择土壤样品时应注意，最好是新鲜土壤，不含过多杂质和残留农药、化学物质等。
首先，将土壤样品放入干净无菌试管中，并加入生理盐水，与搅拌器进行搅拌，使土壤悬浮于生理盐水中。
然后将其过滤，再将过滤液离心，离心后上清液即处理好的样品。
取样品1ml加入小培养皿中，加入适量的20%固体土壤样品，混匀后将其平均涂布于营养琼脂平板上，再进行孵育。
通常，孵育温度为30-37℃，培养基的选择可根据实验需要进行不同的调配。
通过枯草芽孢杆菌的鉴定，可判断其种类和特性。
可采用革兰染色法、形态学观察法、生理生化测定法等多种方法进行鉴定。
1. 革兰染色法：将菌落划入微滴水中，然后将其固定，加入革兰染色液，约定时间后用水冲净，用镜片沥干，用显微镜观察。
2. 形态学观察法：通过对菌落的形态、色素、形状、运动方式等特征进行观察，再与已知菌株进行对照，确定其种类和特性。
3. 生理生化测定法：可通过测定该菌株的生理生化特性，如酸碱反应、氧需求等，进一步确定其种类和特性。
1. 抗生素筛选：将分离得到的枯草芽孢杆菌接种于含有不同抗生素的墨汁琼脂平板上进行筛选，观察不同菌落的生长情况并记录，最终确定其抗性水平。
2. 发酵产物筛选：通过枯草芽孢杆菌的发酵产物、酶活性等特性，进行筛选。
将菌株接种于适当的发酵培养基中，培养一定时间后采集发酵产物进行分析。
3. 生化代谢产物筛选：通过分离并鉴定菌株代谢产物，确定其产物种类和达到的水平，寻找有价值的代谢产物。
综上所述，枯草芽孢杆菌的分离和筛选具有重要的应用价值，为生物降解、环境治理等领域开拓了新的途径。
希望本文对有关人员能够提供一些参考和帮助。
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种常见的土壤细菌，被广泛应用于农业、环境保护和生物技术领域。
它具有良好的耐受性和生长能力，能够利用有机废弃物和污染物质为生，且在环境中具有较高的存活率，对生物多样性和环境平衡具有积极的影响。
光合细菌则是一类能够利用光合作用产生能量的细菌，具有较强的光合活性和辐射抵抗能力，在水体中能够进行光合作用，产生氧气，并分解有机废物，具有很强的净化水体的能力。
本文将基于枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化进行探讨。
枯草芽孢杆菌的筛选及其特点分析枯草芽孢杆菌的筛选十分重要。
针对养殖水体的净化需求，需从自然界中筛选出具有较高净化水体能力的枯草芽孢杆菌菌株。
枯草芽孢杆菌在自然环境中广泛分布，对水体中的氨氮、亚硝酸盐等有害物质具有较强的降解能力，同时也具有对抗有害微生物的能力，可有效控制水体中的病原微生物的繁殖。
通过采集自然水体样品，利用选择培养基和筛选方法，可以得到一些具有较高净化水体潜力的枯草芽孢杆菌菌株。
通过对这些菌株的生理生化特性和代谢特点进行分析和鉴定，选择出最具有应用潜力的菌株进行进一步研究和应用。
在实际应用中，枯草芽孢杆菌与光合细菌的复配应用效果更好。
光合细菌能够利用太阳能进行光合作用，产生氧气，同时还可以利用有机物进行呼吸作用，分解有机废物，改善水体生物环境。
而枯草芽孢杆菌可以利用水中的氨氮、亚硝酸盐等有害物质为生长和代谢，因此枯草芽孢杆菌与光合细菌复配能够互补净化水体，发挥出更好的净化效果。
枯草芽孢杆菌能够在水体中降解有害物质，包括氨氮等。
氨氮是养殖水体中普遍存在的有害物质，过多的氨氮会直接影响养殖水体中的生物环境，导致养殖水体富营养化，生物死亡等严重问题。
而枯草芽孢杆菌可以通过降解氨氮等有害物质，转化为对水体生物无害的物质，改善水体环境。
枯草芽孢杆菌还具有对抗有害微生物的作用。
枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案
以补充胍基，可加速反应。反应式如下： 2 丙酮酸—— >乙酰甲基甲醇 + 2 二氧化碳；
-2H 乙酰甲基甲醇———— >二乙酰；
+KOH
缩合 二乙酰 + NH=C(NH 2)2———— >红色化合物 2、 培养基和试剂 培养基：蛋白胨 5g，葡萄糖 5g，NaCl 5g，蒸馏水 1000ml。调节 PH 6.5，每管分装
氯化钠 ５克
琼脂 １８克
2. 革兰氏染色 3. 芽孢染色 4. 菌体大小测量 5．枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：
一 过氧化氢酶测定 1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧 2、试剂： 3—10%过氧化氢 培养基：肉汤琼脂培养基 3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上， 30 培养 1—2 天。取一干净载玻片，在
四、淀粉水解 1、原理：
许多芽孢杆菌产生淀粉酶， 能将培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进 一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 2、 培养基及试剂： 培 养 基 ： 在 肉 汤 琼 脂 中 添 加 0.2% 的 可 溶 性 淀 粉 ， 分 装 于 三 角 瓶 。
0.1MPa(15lbf/in2)20min 灭菌备用。
试剂： 卢哥尔氏碘液 3、步骤：
将培养基融化后，冷却至 50 摄氏度左右，倒成平板，凝固后取菌种点钟于平板上 （每皿点钟 2 点），一般于 30 摄氏度培养 2—4 天，形成菌落后， 在平板上滴加卢哥 尔氏碘液，以铺满菌落为度，平板呈蓝色，而菌落周围如有五色透明圈出现，说明 淀粉被水解，透明圈的大小，可表明水解能力的大小。
上面加一滴 3—10%的过氧化氢，挑取一环培养 1—2 天的菌苔，在过氧化氢 溶液中涂抹， 若有气泡（氧气）出现，记作过氧化氢酶阳性， 无气泡者为阴性。 也可将液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
实验题目枯草芽孢杆菌的分离
实验题目枯草芽孢杆菌的分离、纯化和鉴定一、实验目的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）广泛存在于土壤、植物根际体表等，其好氧、嗜温，极易分离与培养。
由于枯草芽孢杆菌生长快，具有广谱抗菌活性和很强的抗逆能力，并且对人畜无毒，不污染环境，因此已作为一种理想的生防菌广泛应用于多种植物病害的防治且备受关注。
本实验通过温度筛选法和选择性培养基筛选法分离枯草芽孢杆菌，并针对其生理生化特征进行纯化和鉴定及16S rDNA基因序列进行分析。
二、实验原理枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。
单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆倒柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖。
枯草芽孢杆菌的分离方法：（1）温度筛选法：枯草芽孢杆菌能产生芽孢，在孢子状态下稳定性好，能耐氧化；耐挤压；耐高温，能长期耐60°C高温，在120°C温度下能存活20分钟，利用枯草芽孢杆菌的这一特性，可利用高温水浴使不能产生芽孢的细菌失去活性，得到芽孢菌属，经过进一步的分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。
（2）选择性培养基筛选法：枯草芽孢杆菌培养基的组分是由葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙等5种原料构成,将5种原料作为枯草芽孢杆菌培养有影响的因素,通过试验数理统计的直观和理论分析,对其配方进行优化，当培养基的配方为无水葡萄糖3.50g/L、蛋白胨0.83g/L、酵母膏0.50g/L、磷酸二氢钾0.35g/L和碳酸钙0.25g/L,温度(34±2)℃时,培养16h即可达到生长峰值。
枯草芽孢杆菌的分离及筛选
微生物设计性实验枯草芽孢杆菌的分离及筛选1 实验目的掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生物分离筛选技术和微生物形态观察技术。
了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生长等特点，以及它所具有的产淀粉酶的功能。
根据这些特点进行分离和筛选，从而得到纯菌株。
2 实验原理枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
有的菌株是α -淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
选择含淀粉丰富的土壤为最佳，80度的水浴处理样品1小时，目的是杀死微生物营养体，残留芽胞。
利用稀释涂步法，在淀粉的培养基培养，培养1-3天后，观察。
然后，进行初筛与纯化，鉴定参照《伯杰氏细菌手册》鉴定或者利用显微镜进行革兰氏染色，确认是否为枯草芽孢杆菌。
再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定菌株。
3 实验材料3.1 选择培养基本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。
配方：牛肉膏5.0g蛋白胨10.0g氯化钠5.0g可溶性淀粉10.0g琼脂20g蒸馏水1000ml调整pH 至7.2配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。
3.2 溶液或试剂牛肉膏1.25g蛋白胨2.5g氯化钠1.25g可溶性淀粉2.5g琼脂5g碘11克，碘原液2毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2克，磷酸氢二钠45.23克，柠檬酸8.068克，氯化钴25克，重铬酸钾3.34克，100毫升0.01NHCL。
3.4 仪器或其他用品平板培养皿10个、试管15支、三角瓶2个、烧杯3个、称量纸、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、500ml量筒、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。
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微生物设计性实验枯草芽孢杆菌的分离及筛选1 实验目的掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生物分离筛选技术和微生物形态观察技术。
了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生长等特点，以及它所具有的产淀粉酶的功能。
根据这些特点进行分离和筛选，从而得到纯菌株。
2 实验原理枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
有的菌株是α -淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
选择含淀粉丰富的土壤为最佳，80度的水浴处理样品1小时，目的是杀死微生物营养体，残留芽胞。
利用稀释涂步法，在淀粉的培养基培养，培养1-3天后，观察。
然后，进行初筛与纯化，鉴定参照《伯杰氏细菌手册》鉴定或者利用显微镜进行革兰氏染色，确认是否为枯草芽孢杆菌。
再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定菌株。
3 实验材料3.1 选择培养基本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。
配方：牛肉膏5.0g蛋白胨10.0g氯化钠5.0g可溶性淀粉10.0g琼脂20g蒸馏水1000ml调整pH 至7.2配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。
3.2 溶液或试剂牛肉膏1.25g蛋白胨2.5g氯化钠1.25g可溶性淀粉2.5g琼脂5g碘11克，碘原液2毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2克，磷酸氢二钠45.23克，柠檬酸8.068克，氯化钴25克，重铬酸钾3.34克，100毫升0.01NHCL。
3.4 仪器或其他用品平板培养皿10个、试管15支、三角瓶2个、烧杯3个、称量纸、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、500ml量筒、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。
4 实验流程倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→初筛→复筛→纯化→保存5 实验步骤实验前准备制备淀粉培养基，无菌水，在121摄氏度下灭菌20min。
倒平板。
把接种工具，培养基，和其他用品全部在超净工作台上摆好，进行紫外线灭菌30min。
5.1 制备土壤稀释液取土样时最好选取如花坛等地方的土样，选好采样地点，铲产去表层5cm，取5～15cm 处。
用无菌器具规范采样几十克，装入无菌的塑料袋或纸袋中扎好，记录采样时间、地点、采样环境等以备考证。
采样后应尽快分离。
振摇约二十分钟，使土样与水充分混合，将细胞分散。
放入盛有99ml无菌水三角瓶中，常压80度的水浴处理样品1小时后，取出。
用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推，制成10-2、10-3、10-4、10-5不同稀释度的土壤溶液。
5.2 涂布将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-3、10-4、10-5三种稀释度，然后用无菌吸管分别由10-3、10-4、10-5三管土壤稀释液中各吸取0.2ml，小心地滴在对应平板培养基表面中央位置。
用无菌涂布器涂布。
右手拿无菌涂布器平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。
室温下静置5～10min，使菌液浸入培养基。
5.3 培养将淀粉培养基平板倒置于30°C培养箱中培养1～3d。
5.4 初筛观察菌落表面粗糙不透明，呈污白色或微黄色，将这样的菌种单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基上，置于30°C的培养箱中培养，若发现有杂菌，需要再一次进行分离纯化。
（如不能用肉眼更好的观察，可对其进行革兰氏染色，在显微镜下观察，与标准菌种比较。
）5.8 复筛测定其淀粉酶活。
5.8.1 试剂和器材1、试剂：（1）碘原液：称取碘11克，碘化钾22克，加水溶解，稀释至500毫升。
（2）稀碘液：取碘原液2毫升，加碘化钾20克，稀释至500毫升，此试剂随配随用。
（3）2%淀粉液：称取干燥过的可溶性淀粉2克，加5毫升蒸馏水，搅拌混和，再徐徐倾入70毫升煮沸的蒸馏水中。
继续煮沸2分钟，冷却至室温，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（pH为6）（4）柠檬酸缓冲液：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）45.23克，柠檬酸（C6H8O7·H2O）8.068克，加水溶解，稀释至1000毫升。
（5）标准比色液：称取氯化钴（CoCL2·6H2O）25克和重铬酸钾3.34克溶于100毫升0.01N HCL，其五倍稀释作标准。
（6）样品：细菌-α淀粉酶2、器材（1）电热恒温水浴（2）试管（3）量筒（4）吸量管（1ml）5.8.2 操作方法：1、取试管1支，加20毫升2%淀粉，混匀，在30℃水浴中，使管内温度达到30℃。
2、将淀粉酶0.5ml加到30℃的淀粉液中，混匀，在30℃水浴中保温，自加入记时，经5分钟后取反应液1毫升，加入盛有5毫升稀碘液的试管中。
混匀，目测比色，每隔一定时间重复测定，直至呈色与标准比色颜色相同为止，记录反应进行的时间。
3、计算。
在上述条件下，每一小时催化1毫升2%可溶性淀粉水解的酶量，定为一个酶活力单位。
5.9 纯化并保存菌种保存时一般都需要不受杂菌污染，菌种变异很少，并能尽量保持细菌的形态和生理性状不发生变化。
同时，做好以下工作：（1）做好菌种保存记录，注明菌种名称，分离年月日、分离者姓名、分离地点等。
（2）防止杂菌污染及意外事故，把菌种保存在2—3只试管中备用。
（3）原始菌种妥善保存。
6 结果与分析6.1 分离到枯草芽孢杆菌菌的株数6.2 枯草芽孢杆菌产酶活性大小及形态观察鉴定结果【注明参考文献，格式参考学术论文样式】枯草芽孢杆菌的鉴定实验1、形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等）（1）单个菌体的形态（2）群体形态的观察2、革兰氏染色3、芽孢染色4、菌体大小测量5、枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：一、过氧化氢酶测定1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧2、试剂：3～10%过氧化氢培养基：肉汤琼脂培养基3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30 培养1～2 天。
取一干净载玻片，在上面加一滴3～10%的过氧化氢，挑取一环培养1～2 天的菌苔，在过氧化氢溶液中涂抹，若有气泡（氧气）出现，记作过氧化氢酶阳性，无气泡者为阴性。
也可将液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
二、需氧性试验1、原理：不同种类的芽孢杆菌对氧气的需求性常有差异，因此本实验可作为鉴定芽孢杆菌的一个较重要指标。
2、培养基：半固体培养基3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于30 培养3— 7 天观察结果。
若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌三、乙酰甲基甲醇实验1、原理：本实验是测定芽孢杆菌（或其他细菌）发酵葡萄糖的变化。
有些芽孢杆菌发酵葡萄糖产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或的胍基起作用，生成红色化合物，即表示2,3-丁二醇。
乙酰甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中精氨酸所含V.P. 试验阳性。
若在培养基中加入少量肌酸以补充胍基，可加速反应。
反应式如下： 2 丙酮酸—— >乙酰甲基甲醇+ 2 二氧化碳；-2H 乙酰甲基甲醇———— >二乙酰；+KOH 缩合二乙酰+ NH=C(NH 2)2———— >红色化合物2、培养基和试剂培养基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl 5g ，蒸馏水1000ml。
调节PH 6.5，每管分装4— 5ml ，0.06MPa（8lbf/in2 ）30min 灭菌试剂：3、步骤：1.接种与培养将芽孢杆菌测试菌接种于上述培养液中，一般于30 摄氏度培养4 天。
2.结果观察在培养4 天后，取培养液（约2ml）和等量的40%NAOH 相混合，如少量肌酸（约0.5— 1mg），充分振荡，2— 5min 后如培养液呈红色，即为V.P. 试验阳性，有时须放置更长时间才出现红色反应。
四、淀粉水解1、原理：许多芽孢杆菌产生淀粉酶，能将培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
2、培养基及试剂：培养基：在肉汤琼脂中添加0.2% 的可溶性淀粉，分装于三角瓶。
0.1MPa(15lbf/in2)20min 灭菌备用。
试剂：3、步骤：将培养基融化后，冷却至50 摄氏度左右，倒成平板，凝固后取菌种点钟于平板上（每皿点钟2 点），一般于30 摄氏度培养2— 4 天，形成菌落后，在平板上滴加卢哥尔氏碘液，以铺满菌落为度，平板呈蓝色，而菌落周围如有五色透明圈出现，说明淀粉被水解，透明圈的大小，可表明水解能力的大小。
卢哥尔氏碘液40%NAOH( 或KOH) ，肌酸。
附表：培养基的配方肉汤琼脂培养基牛肉膏5克蛋白胨10克氯化钠５克琼脂１８克蒸馏水１０００毫升葡萄糖10 克pH 121℃灭菌20min 7.0-7.2 淀粉培养基牛肉膏５克蛋白胨１０克氯化钠５克可溶性淀粉２克琼脂１５－２０克蒸馏水１０００毫升121℃灭菌20min Ｖ—Ｐ．实验培养基（半固体培养基）葡萄糖５克蛋白胨５克氯化钠５克蒸馏水１０００毫升ｐＨ６．５121℃灭菌20min。