梅毒ppt课件
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需注意TRUST检测结果阳性需谨慎对待，低滴度(≤1∶4)除 可能为生物学造成的假阳性外，还有可能是发病初期或使 用抗生素延长了阳性血清出现的潜伏期。
TRUST滴度与病情活动呈正相关，并且可作为判定复发或 再感染指征,对于高滴度者(≥1∶8)应考虑为现症梅毒病人， 并结合临床症状给予适当治疗。
21
2.实验器材 滴管、反应纸卡
5
操作步骤
一、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）
1.试剂及待检血清室温下平衡10min 2.在样本圈内加入待检血清及阴性、阳性血清，每圈50μl，
尽量将血清铺匀涂满但不要超出卡圈 3.垂直向血清中心加入抗原1滴 4.旋转摇动卡片8分钟后立即观察结果
6
加血清
加抗原
旋转摇动
14
2）最终判定基准：未致敏粒子的反应图像应为阴性。致敏 粒子（最终稀释度1:80及以上）反应图像为阳性，最终应 判定为阳性。反应图像为阳性的最终稀释倍数作为抗体 效价。
未致敏颗粒 阴性
待检血清 阳性对照
致敏颗粒 阳性
最终判断： 阳性
1:40 1:80
15
注意事项
1.试剂及检测样品应充分混匀，及时更换加 样吸头避免交叉污染。
ELISA和TPPA两种方法检测的梅毒抗体均为特异性抗体， 该抗体即使经治疗后也可终生阳性，因此不能作为评价治 疗效果，复发或再感染的指标。
20
实验讨论
综合应用特异性抗体和非特异性抗体两种方法检 测及滴度分析不仅能够提高梅毒感染检测的敏感 性和特异性，同时能够进行疗效观察，对于早期 发现，早期诊断，早期治疗梅毒患者以及有效控 制梅毒流行具有重要意义。
17
实验讨论
梅毒血清学的联合应用对梅毒诊断有何意义？
18
实验讨论
TRUST法检测非特异性抗体，是现症梅毒患者实验室诊断 的重要指标，但初期或晚期梅毒病人抗体浓度较低可出现 假阴性，抗体浓度过高时出现前带现象也可出现假阴性， 而某些疾病如自身免疫性疾病则可出现假阳性。
TRUST检测的非特异性抗体在感染1-2周即可出现，如滴 度≥1∶4，又具有典型的临床表现，则现症梅毒的可能性 较大。
观察结果
7
结果分析
甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 阴性：呈现粉红色均匀分散的沉淀物 阳性：出现粉红色凝集块，根据凝集块大小可以分为4个阳
性级别（1+～4+）
阴性
阳性
弱阳性
8
实验注意事项
稀释血清应准确及避免交叉污染 及时观察实验结果 抗体浓度过高可能发生前带现象而 致假阴性,若TPPA或ELISA检测结 果为阳性或弱阳性，需生理盐水稀 释样本后重复实验。
9
临床意义
1.TRUST实验为梅毒螺旋体感染的血清学过筛试验， 阴性不可排除感染，阳性需用特异性抗体的检测 方法进行确认。
2.TRUST实验对现症梅毒的诊断具有较高价值，通 过连续监测抗体滴度能够动态反映病程，此法在 一 期 、 二 期 梅 毒 的 阳 性 率 较 高 ， 与 ELISA 或 TPPA检测结果综合分析能够更准确的诊断疾病。
2.实验中不能随意移动反应板，否则容易造 成假阳性。
3.保证足够的反应时间、及时观察结果。 4.阳性结果用另一种方法如ELISA法复查。
16
临床意义
梅毒螺旋体感染后2周左右患者血清中即可出现特异性IgM 抗体，4周左右即可检测出特异性IgG抗体，TPPA法为检 测 特异性IgG抗体的较好方法之一，其阳性可以提示曾经 或现 在感染梅毒，与TRUST法的检测结果综合分析对梅 毒的诊断、分期及治疗效果评价具有重要价值。
实验五
梅毒螺旋体抗体检测
1
实验目的
1.掌握临床 常用检测梅毒 感染的方法及
操作程序
2.熟悉两种 方法的特点
2
3.了解多 种方法联合 检测梅毒
感染的 临床意义
梅毒螺旋体感染的常用检测方法
3
梅毒感染检测
TRUST （检测非 特异抗体）
TPPA(检测特 异性抗体）
ELISA (检测 特异性抗体）
现症梅毒的主要指标 同时是判断治疗效果、
25
4
5
Βιβλιοθήκη Baidu
6
7
25
25 25 25
待 检 血 清 (μ l) 25 25 未致敏颗粒 - (μ l) 致 敏 颗 粒 (μ l) - -
最终稀释倍数 - -
1
倍比稀释血清
25 25
1:40
2
25
25 25 25
-
-
-
-
25
25 25 25
1:80 1:160 1:320 1:640
34
5
致敏颗粒
未致敏颗粒
复发的指标
特异性强，准确性 高，但无法判断是
否为现症梅毒
敏感性高，有一 定的假阳性率
不同方法具有各自的特点
（一） TRUST实验
实验原理 凝集法-检测非特异性抗体
反
应
卡 滴
+
加
血
清
抗心类脂抗原
产生凝集现象
抗原中加入了甲苯胺红染料，因甲苯4 胺红颗粒均匀，结果易于观察
实验试剂及器材
1.实验试剂 甲苯胺红溶液重悬的类脂抗原、阳性对照血清、 阴性对照血清，
13
结果分析
TPPA间接凝集实验： 1）反应图像的判定
阴性（-）： 粒子集中于孔底呈纽扣状，呈现外周边缘 均匀平滑的圆圈 弱阳性（+）：粒子形成小环状，呈现外周边缘均匀平 滑的圆圈 阳性（+）：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂 乱地凝集在周围。 强阳性（++）：产生均匀的凝集，凝集粒子在底部整 体上呈膜状延展。
10
（二） TPPA法-检测特异性抗体
明胶颗粒间接凝集实验（TPPA法)
11
实验试剂及器材
1.实验试剂 血清稀释液、致敏粒子、未致敏粒子 以及其相应的溶解液，阳性对照血清
2.实验器材 专用滴管、反应板、微量加样器、微 量加样器吸头、移液管
12
TPPA法操作步骤
管号
12
3
稀释液(μ l) 100 25
19
实验讨论
ELISA检测梅毒抗体具有较高的敏感性，并可用全自动酶 标仪进行批量初筛，但特异性稍差，有一定的假阳性率， 采用ELISA两步法可在一定程度上提高检测结果的敏感性 和可靠性。
TPPA法特异性及敏感性均较高，可作为ELISA法及TRUST 法筛查的确证实验。但该方法操作复杂费时。
TRUST滴度与病情活动呈正相关，并且可作为判定复发或 再感染指征,对于高滴度者(≥1∶8)应考虑为现症梅毒病人， 并结合临床症状给予适当治疗。
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2.实验器材 滴管、反应纸卡
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操作步骤
一、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）
1.试剂及待检血清室温下平衡10min 2.在样本圈内加入待检血清及阴性、阳性血清，每圈50μl，
尽量将血清铺匀涂满但不要超出卡圈 3.垂直向血清中心加入抗原1滴 4.旋转摇动卡片8分钟后立即观察结果
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加血清
加抗原
旋转摇动
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2）最终判定基准：未致敏粒子的反应图像应为阴性。致敏 粒子（最终稀释度1:80及以上）反应图像为阳性，最终应 判定为阳性。反应图像为阳性的最终稀释倍数作为抗体 效价。
未致敏颗粒 阴性
待检血清 阳性对照
致敏颗粒 阳性
最终判断： 阳性
1:40 1:80
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注意事项
1.试剂及检测样品应充分混匀，及时更换加 样吸头避免交叉污染。
ELISA和TPPA两种方法检测的梅毒抗体均为特异性抗体， 该抗体即使经治疗后也可终生阳性，因此不能作为评价治 疗效果，复发或再感染的指标。
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实验讨论
综合应用特异性抗体和非特异性抗体两种方法检 测及滴度分析不仅能够提高梅毒感染检测的敏感 性和特异性，同时能够进行疗效观察，对于早期 发现，早期诊断，早期治疗梅毒患者以及有效控 制梅毒流行具有重要意义。
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实验讨论
梅毒血清学的联合应用对梅毒诊断有何意义？
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实验讨论
TRUST法检测非特异性抗体，是现症梅毒患者实验室诊断 的重要指标，但初期或晚期梅毒病人抗体浓度较低可出现 假阴性，抗体浓度过高时出现前带现象也可出现假阴性， 而某些疾病如自身免疫性疾病则可出现假阳性。
TRUST检测的非特异性抗体在感染1-2周即可出现，如滴 度≥1∶4，又具有典型的临床表现，则现症梅毒的可能性 较大。
观察结果
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结果分析
甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 阴性：呈现粉红色均匀分散的沉淀物 阳性：出现粉红色凝集块，根据凝集块大小可以分为4个阳
性级别（1+～4+）
阴性
阳性
弱阳性
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实验注意事项
稀释血清应准确及避免交叉污染 及时观察实验结果 抗体浓度过高可能发生前带现象而 致假阴性,若TPPA或ELISA检测结 果为阳性或弱阳性，需生理盐水稀 释样本后重复实验。
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临床意义
1.TRUST实验为梅毒螺旋体感染的血清学过筛试验， 阴性不可排除感染，阳性需用特异性抗体的检测 方法进行确认。
2.TRUST实验对现症梅毒的诊断具有较高价值，通 过连续监测抗体滴度能够动态反映病程，此法在 一 期 、 二 期 梅 毒 的 阳 性 率 较 高 ， 与 ELISA 或 TPPA检测结果综合分析能够更准确的诊断疾病。
2.实验中不能随意移动反应板，否则容易造 成假阳性。
3.保证足够的反应时间、及时观察结果。 4.阳性结果用另一种方法如ELISA法复查。
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临床意义
梅毒螺旋体感染后2周左右患者血清中即可出现特异性IgM 抗体，4周左右即可检测出特异性IgG抗体，TPPA法为检 测 特异性IgG抗体的较好方法之一，其阳性可以提示曾经 或现 在感染梅毒，与TRUST法的检测结果综合分析对梅 毒的诊断、分期及治疗效果评价具有重要价值。
实验五
梅毒螺旋体抗体检测
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实验目的
1.掌握临床 常用检测梅毒 感染的方法及
操作程序
2.熟悉两种 方法的特点
2
3.了解多 种方法联合 检测梅毒
感染的 临床意义
梅毒螺旋体感染的常用检测方法
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梅毒感染检测
TRUST （检测非 特异抗体）
TPPA(检测特 异性抗体）
ELISA (检测 特异性抗体）
现症梅毒的主要指标 同时是判断治疗效果、
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Βιβλιοθήκη Baidu
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待 检 血 清 (μ l) 25 25 未致敏颗粒 - (μ l) 致 敏 颗 粒 (μ l) - -
最终稀释倍数 - -
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倍比稀释血清
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致敏颗粒
未致敏颗粒
复发的指标
特异性强，准确性 高，但无法判断是
否为现症梅毒
敏感性高，有一 定的假阳性率
不同方法具有各自的特点
（一） TRUST实验
实验原理 凝集法-检测非特异性抗体
反
应
卡 滴
+
加
血
清
抗心类脂抗原
产生凝集现象
抗原中加入了甲苯胺红染料，因甲苯4 胺红颗粒均匀，结果易于观察
实验试剂及器材
1.实验试剂 甲苯胺红溶液重悬的类脂抗原、阳性对照血清、 阴性对照血清，
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结果分析
TPPA间接凝集实验： 1）反应图像的判定
阴性（-）： 粒子集中于孔底呈纽扣状，呈现外周边缘 均匀平滑的圆圈 弱阳性（+）：粒子形成小环状，呈现外周边缘均匀平 滑的圆圈 阳性（+）：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂 乱地凝集在周围。 强阳性（++）：产生均匀的凝集，凝集粒子在底部整 体上呈膜状延展。
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（二） TPPA法-检测特异性抗体
明胶颗粒间接凝集实验（TPPA法)
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实验试剂及器材
1.实验试剂 血清稀释液、致敏粒子、未致敏粒子 以及其相应的溶解液，阳性对照血清
2.实验器材 专用滴管、反应板、微量加样器、微 量加样器吸头、移液管
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TPPA法操作步骤
管号
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3
稀释液(μ l) 100 25
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实验讨论
ELISA检测梅毒抗体具有较高的敏感性，并可用全自动酶 标仪进行批量初筛，但特异性稍差，有一定的假阳性率， 采用ELISA两步法可在一定程度上提高检测结果的敏感性 和可靠性。
TPPA法特异性及敏感性均较高，可作为ELISA法及TRUST 法筛查的确证实验。但该方法操作复杂费时。