第一篇 微生物检验基本技术

第一章细菌检验基本技术

一、形态学检查

意义：1.为后续的进一步检验提供参考依据

2.迅速了解标本中有无细菌及菌量的大致情况

3.对少数具有典型形态特征的细菌可以做出初步诊断，为临床选用抗菌

药物治疗起重要的提示作用。

分为：染色标本和不染色标本的检查

1、不染色标本的检查：用于观察细菌的动力及运动情况。常用方法有压滴法和悬滴法。

2、染色标本检查：检查的内容：对标本合格与否进行评价；了解标本有无细菌及大致菌量；根据细菌形态、染色性质等对病原菌初步识别分类，决定进一步的生化反应鉴定血清学鉴定、并为临床选择用药提供帮助。

常用染色方法有：革兰染色（常用）、抗酸染色（结核病、麻风病）、荧光染色（结核、麻风、白喉、痢疾）、负染色（墨汁负染色法用于新型隐球菌检查）、特殊染色（鞭毛染色、荚膜染色、异染颗粒（白喉））。

二、培养与分离技术（关键）

目的：鉴定细菌的种类和保存菌种，为进一步确定细菌的致病性、药物敏感性提供依据。

牛肉膏无糖，可作为肠道细菌鉴别培养基的基础成分。

流感嗜血杆菌需要X因子和V因子。

理想的凝固物质具有的特性：本身不被细菌利用；在微生物生长温度范围内保持固体状态，凝固点的温度对微生物无害；不因消毒灭菌而破坏，透明度好，黏着力强。（琼脂最合适）

半固体培养基琼脂含量 0.3%~0.5%；固体培养基1.5%~2.0%。

培养基质量检验：1、无菌试验：将灭菌后的培养基置35℃温箱培养过夜，判定是否灭菌合格。2、效果检验：按不同的培养要求，接种相应菌种（符合要求的标准菌种），观察细菌的生长、菌落形态、色素、溶血及生化反应等特征，判断培养基是否符合要求。

制备好的培养基存放于冷暗处或4℃冰箱，一般不超过七天，如果用塑料袋密封。保存期可延长，但至多两周。

专性需氧：结核分枝杆菌、霍乱弧菌

微需氧菌（5%氧气、10%二氧化碳、85%氮气）：空肠弯曲菌，幽门螺杆菌兼性厌氧菌：大多数病原菌

专性厌氧菌：破伤风梭菌、脆弱拟杆菌

二氧化碳培养（5%~10%二氧化碳）：淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、布鲁菌

菌落是单个细菌在培养基上分裂繁殖而成的肉眼可见的细菌集落。

菌苔是由众多菌落连接而成的细菌群落。

三、生物化学鉴定技术

1、碳水化合物代谢试验

2、蛋白质和氨基酸代谢试验

3、碳源利用试验

4、呼吸酶类试验

5、其他

重点：触酶试验：区分葡萄球菌（+）和链球菌（-）

氧化酶试验：区分弧菌科、非发酵菌（+）和肠杆菌科（-）

四、非培养检验技术（对于培养时间长或难以培养的细菌以及细菌毒素、耐药基因等）

1、免疫学检验技术：抗原检测和抗体检测

2、分子生物学检验技术：核酸杂交技术、聚合酶链反应、生物芯片技术

3、细菌毒素检验技术：内毒素（革兰阴性菌）、外毒素（革兰阳性菌）

4、降钙素原检验技术

5、动物实验

五、细菌检验自动化

1、微生物标本前处理系统及自动染色系统

2、自动血液培养系统、

3、自动化细菌鉴定药敏系统

4、微生物医院内感染分析系统

5、微生物实验室信息化、

6、微生物自动化检验系统进展