ELISA实验报告(酶联免疫吸附测定)结果
酶联免疫吸附测定实验报告
酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样本中特定分子的存在。
本实验旨在通过ELISA技术，对特定抗原在样本中的含量进行测定，并了解其原理及应用。
一、实验原理ELISA技术是一种基于免疫反应的实验方法，其原理主要包括固相吸附、特异性结合、酶标记和显色反应。
首先，在微孔板中固定特异性抗体，形成固相吸附。
然后，加入待测样本，样本中的目标抗原与固相抗体结合。
接着，加入酶标记的二抗与目标抗原结合，形成特异性结合。
最后，通过添加显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化，从而定量分析目标抗原的含量。
二、实验步骤1. 准备样本和试剂：收集待测样本，如血清、尿液或细胞培养上清液，并准备好ELISA试剂盒中的各种试剂。
2. 板洗涤：将微孔板放入洗板机中，加入洗板缓冲液，进行洗涤步骤，以去除未结合的物质。
3. 固相吸附：将特异性抗体加入微孔板孔中，孵育一段时间，使其与固相吸附。
4. 样本孵育：将待测样本加入各孔中，与固相抗体结合，在恒温条件下孵育。
5. 二抗结合：加入酶标记的二抗，与目标抗原结合形成特异性结合。
6. 洗涤：再次进行洗板步骤，去除未结合的物质。
7. 底物反应：加入显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化。
8. 反应终止：加入终止液，停止酶催化反应。
9. 测定吸光度：使用酶标仪测定各孔的吸光度值。
10. 数据分析：根据吸光度值，绘制标准曲线，通过比较待测样本的吸光度值，计算出目标抗原的浓度。
三、实验结果通过ELISA实验，我们成功测定了待测样本中目标抗原的含量。
根据标准曲线，我们计算出了各样本中目标抗原的浓度。
这些结果将有助于我们了解样本中特定分子的水平，从而进一步研究其生物学功能和相关疾病的发生机制。
四、实验应用ELISA技术具有广泛的应用领域，包括生物医学研究、临床诊断、药物开发等。
ELISA实验报告（酶联免疫吸附测定）结果
ELISA实验报告（酶联免疫吸附测定）结果ELISA实验报告-森贝伽⽣物实验技术中⼼前⾔酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表⾯，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，⼜保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表⾯的抗原或抗体起反应。
⽤洗涤的⽅法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成⼀定的⽐例。
加⼊酶反应的底物后，底物被酶催化变为有⾊产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜⾊反应的深浅刊物定性或定量分析。
ELISA可⽤于测定抗原，也可⽤于测定抗体。
该法适于测定细胞培养上清、⾎清、⾎浆及组织液中的样本，⼲扰⼩可以测到每毫升纳克⽔平的细胞因⼦（或受体）的⽔平。
材料与⽅法1材料1.1主要试剂ELISA检测试剂盒(From：森贝伽⽣物/SenBeiJia)1.2主要仪器及耗材酶标仪：芬兰（Labsystems Multiskan MS）公司产品洗板机：芬兰（Thermo Labsystems）公司产品离⼼机：微量⾼速离⼼机（国产）移液器：吉尔森P型移液器(Pipetman)产品培养箱：隔⽔式恒温培养箱（国产）产品其他所需耗材均为国产。
2⽅法2.1实验过程（1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为50µL；（2）加样：分别设空⽩孔、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µL，然后再加待测样品10µL。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；（3）温育：⽤封板膜封板后置37℃温育30min；（4）配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液⽤蒸馏⽔30（48T的20倍）倍稀释后备⽤；⼩⼼揭掉封板膜，弃去液体，甩⼲，每孔加满洗涤液，静置30sec 后弃去，如此重复5次，拍⼲；（5）加酶：每孔加⼊酶标试剂50µL，空⽩孔除外；（6）温育：⽤封板膜封板后置37℃温育30min；（7）洗涤：⼩⼼揭掉封板膜，弃去液体，甩⼲，每孔加满洗涤液，静置30sec 后弃去，如此重复5次，拍⼲；（8）显⾊：每孔先加⼊显⾊剂A50µL，再加⼊显⾊剂B50µL，轻轻震荡混匀，37℃避光显⾊15min；（9）终⽌：每孔加终⽌液50µL，终⽌反应；（10）测定：以空⽩空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
elisa实验报告结果分析
Elisa实验报告结果分析1. 引言Elisa（酶联免疫吸附实验）是一种常用于检测和定量分析生物样本中特定分子的方法。
本文旨在对实验结果进行分析，并根据分析结果得出结论。
2. 实验设计在本次实验中，我们选择了特定的生物分子作为目标，通过Elisa方法来检测样本中的该分子含量。
实验过程中，我们遵循了以下步骤： 1. 准备样本和试剂：收集样本并处理，准备所需的试剂。
2. 涂覆酶标板：将待测样本加入酶标板孔中，使样本中的目标分子与酶标板表面发生特异性结合。
3. 洗涤：去除未结合的物质。
4. 加入检测抗体：加入特异性抗体，与已结合的目标分子发生反应。
5. 加入标记物：加入标记物，用于检测目标分子的存在。
6. 洗涤：去除未结合的物质。
7. 反应底物：加入底物，观察颜色变化。
8. 停止反应：加入停止液停止反应。
9. 测量：使用酶标仪或光谱仪测量吸光度。
3. 结果分析根据实验结果，我们得到了一系列吸光度值。
下面我们将对吸光度值进行分析，并根据实验设计和已有知识得出结论。
3.1. 标准曲线分析实验中通常会使用一系列已知浓度的标准样品来构建标准曲线。
通过测量标准样品的吸光度值，我们可以绘制出标准曲线。
在实验中，我们可以使用标准曲线来确定未知样本中目标分子的浓度。
3.2. 样本浓度分析根据实验设计，我们在酶标板中加入了待测样本，并测量了其吸光度值。
通过标准曲线，我们可以将吸光度值转化为目标分子的浓度。
根据样本中目标分子的浓度，我们可以进行进一步的分析。
3.3. 结果验证为了验证实验结果的准确性和可靠性，我们可以进行重复实验或与其他方法进行比较。
此外，还可以进行质控实验来评估实验的可重复性和准确性。
4. 结论通过对Elisa实验结果的分析，我们得出以下结论： 1. 根据标准曲线分析，我们可以确定未知样本中目标分子的浓度。
2. 样本浓度分析结果显示，样本中目标分子的含量为X单位。
3. 实验结果经过验证，具有较高的准确性和可靠性。
酶联免疫吸附实验报告
酶联免疫吸附实验报告酶联免疫吸附实验报告酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种常用的生物化学技术，用于检测和定量分析特定抗原或抗体的存在。
该实验结合了免疫学和酶学的原理，通过酶的催化作用来实现对目标物的检测。
本报告将介绍酶联免疫吸附实验的基本原理、操作步骤以及结果分析。
一、实验原理酶联免疫吸附实验的原理基于免疫学的特异性识别和酶学的催化作用。
实验中，首先将待测物（抗原或抗体）与特异性的抗体或抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
然后，将该复合物与与酶标记的抗体或抗原结合，形成二抗或二抗原复合物。
最后，通过添加底物，利用酶的催化作用产生可测量的信号，从而确定待测物的存在或浓度。
二、实验步骤1. 准备样品和试剂：收集待测物样品，并准备所需的试剂，如抗体、底物等。
2. 预处理样品：根据待测物的性质，进行必要的样品预处理，如稀释、去除干扰物等。
3. 涂布固相支持物：将特异性抗体或抗原溶液均匀涂布在固相支持物（如酶标板）上，使其吸附。
4. 孵育：将待测物样品加入酶标板中，与固相支持物上的抗体或抗原结合，形成复合物。
然后加入酶标记的抗体或抗原，形成二抗或二抗原复合物。
孵育一段时间，以便复合物的形成。
5. 洗涤：将酶标板反复洗涤，去除未结合的物质。
6. 底物反应：加入适当的底物，使底物与酶发生反应，产生可测量的信号。
底物的选择与酶的选择有关，常用的底物有TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）等。
7. 反应停止：通过添加反应停止剂，停止底物的反应，并使产生的信号停止发展。
8. 读取结果：使用酶标仪或其他适当的仪器，测量底物反应产生的信号的强度。
根据标准曲线或对照样品，确定待测物的浓度或存在与否。
三、结果分析根据实验结果，可以定量测定待测物的浓度或判断其存在与否。
一般来说，酶标仪测得的信号强度与待测物的浓度成正比，可以通过标准曲线来确定待测物的浓度。
elisa检测实验报告
elisa检测实验报告ELISA 检测实验报告一、实验目的本次 ELISA 检测实验的目的是定量检测样本中特定抗原或抗体的浓度，以评估实验对象的生理或病理状态。
二、实验原理ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种基于抗原抗体特异性结合反应的免疫测定技术。
其基本原理是将已知的抗原或抗体固定在固相载体（如聚苯乙烯微孔板）表面，然后加入待检样本，样本中的待测抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
接着，加入酶标记的第二抗体（或抗原），形成抗原抗体酶标记抗体复合物。
最后，加入底物，酶催化底物反应生成有色产物，通过测定有色产物的吸光度值，即可定量分析样本中待测抗原或抗体的浓度。
三、实验材料与设备1、试剂包被缓冲液（碳酸盐缓冲液，pH 96）封闭液（含 1% 5% 牛血清白蛋白的 PBS 缓冲液）洗涤液（含 005% Tween-20 的 PBS 缓冲液）样本稀释液（PBS 缓冲液）标准品（已知浓度的抗原或抗体）酶标记的二抗（辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记）底物溶液（如 TMB 或 pNPP）终止液（如 2M 硫酸或 1M 氢氧化钠）2、仪器与设备酶标仪（能够读取 450nm 或 492nm 波长的吸光度值）恒温培养箱移液器（量程分别为20μL、200μL、1000μL）聚苯乙烯微孔板离心机四、实验步骤1、包被将已知浓度的抗原或抗体用包被缓冲液稀释至适当浓度。
向聚苯乙烯微孔板的每孔中加入100μL 稀释后的包被液，4℃过夜或 37℃孵育 2 3 小时。
2、封闭倒掉包被液，用洗涤液洗涤微孔板 3 次，每次浸泡 3 分钟，然后拍干。
每孔加入200μL 封闭液，37℃孵育 1 2 小时。
3、加样倒掉封闭液，用洗涤液洗涤微孔板 3 次，然后拍干。
将待检样本和标准品用样本稀释液进行梯度稀释。
向微孔板的每孔中分别加入100μL 稀释后的样本和标准品，空白对照孔加入100μL 样本稀释液。
37℃孵育 1 2 小时。
酶联免疫吸附试验结果
酶联免疫吸附试验结果酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA），是一种广泛应用于生命科学中的试验技术，主要用于检测生物体内特定蛋白质和抗体的存在和数量。
本文将根据不同类别，介绍ELISA试验结果的分析。
一、直接ELISA试验结果分析直接ELISA试验是指将已知抗原沉淀于微孔板上，再加入待检测物，之后加入特定抗体进行检测的试验方法。
当待检测物含有对应的抗原，则抗原和特定抗体结合，形成固定的复合物。
此时，待检测物在微孔板中残留，被进一步检测。
如果待检测物中含有特定抗体，则会与预先添加的抗原结合。
根据特定抗体标记的物质进行检测。
直接ELISA试验结果为同轴柱，并且呈现梯度性图谱。
二、间接ELISA试验结果分析间接ELISA试验是指使用抗原沉淀于微孔板上，加入待检测物，并再次加入特定抗体进行检测的试验方法。
在该试验中，患者血清或其他样品中含有抗体，抗体与固定的抗原结合，形成复合物。
之后添加特定抗体，间接ELISA试验的结果为同轴柱，并且呈现梯度性的图谱。
三、竞争ELISA试验结果分析竞争ELISA试验是对样品中的特定物质进行检测的试验方法。
在试管中，抗体与已知抗原结合后，特定抗体标记的物质被加入竞争ELISA反应体系中。
如果合适的特定抗体分子与抗原分子竞争结合，则可抑制特定抗体分子与标记物结合，标记物的含量随之减少。
竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。
四、间接竞争ELISA试验结果分析间接竞争ELISA试验是对患者中特定物质的抗体进行检测的试验方法。
在该试验中，已知抗原沉淀于微孔板上，加入患者样品，之后加入特定抗体。
如果患者样品中含有特定抗体，将与特定抗体竞争结合，导致标记物与它竞争结合量的减少。
间接竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。
总之，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于特异性分子识别原理的分析方法，具有操作简单、稳定可靠、敏感度高等特点。
ELISA酶联免疫吸附试验报告
大学实验报告酶联免疫吸附试验学院：专业：姓名：学号：一．实验原理酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种用酶标记抗原或抗体的方法，此法是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的技术，可敏感地检测体液中微量的特异性抗原或抗体。
基本原理如下：①先使用抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或酶标抗体，这种酶标抗原或酶标抗体即保留了其免疫活性，又保留了酶活性；③试验时，把受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原或酶标抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤法去除固相载体上的游离物质，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的多少有关。
当加入酶反应的底物后，底物被酶催化而产生有色物质。
颜色反应深浅与受检抗原或抗体的量成正比。
因此，可借助颜色反应的深浅来定性、定量抗体或抗原。
本技术的特点是敏感性高，特异性强，操作简易，结果容易观察。
图1 ELISA实验原理示意图二．实验材料BSA抗原、兔抗BSA抗体（一抗，分别用PBS稀释成1:2, 1:4, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256七个浓度）、酶标羊抗兔IgG（二抗）、0.05M PH9.6碳酸盐包被缓冲液、洗涤液（PBS）、底物溶液、2mol/L H2SO4。
三．实验方法1.包被板的处理：加BSA（包被缓冲液稀释为10μg/ml）至酶标板中，每孔100μl，置湿盒中4℃过夜。
第二天取出，用PBS洗涤3-4次。
2.取包被好的酶标板，在第一孔中加入100μl PBS作阴性对照，在第2-8孔加入上述稀释的一抗各100μl，置37℃保温1h。
3.倾去液体，用PBS洗涤3-4次后加入二抗各100μl，置37℃保温30min。
4.倾去液体，用PBS洗涤3-4次后加入底物溶液各100μl，在暗处37℃避光显色20min，最后加入50μl、2M H2SO4终止反应。
5.在波长490nm处，测定各孔的光密度吸收值。
酶联免疫吸附试验实验报告
酶联免疫吸附试验实验报告酶联免疫吸附试验实验报告酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在与浓度。
本实验旨在通过ELISA技术，检测和定量分析一种特定抗原在不同样本中的浓度变化。
实验材料和方法：1. 样本制备：收集不同来源的样本，如血清、尿液等，并进行离心分离获得上清液。
2. 酶标板涂覆：将待测抗原溶液加入酶标板孔中，保持一定的温度和时间，使抗原均匀地附着在酶标板表面。
3. 阻断：加入阻断液，封闭未被抗原占据的酶标板孔，避免非特异性结合。
4. 抗体结合：加入特异性抗体，与抗原结合形成抗原-抗体复合物。
5. 酶标记抗体结合：加入酶标记抗体，与抗原-抗体复合物结合，形成二抗夹心复合物。
6. 显色反应：加入底物，使酶标记抗体催化底物发生颜色变化。
7. 反应停止：加入停止液，终止显色反应。
8. 测定吸光度：使用酶标仪测定酶标板孔中的吸光度。
实验结果：根据测定吸光度值，我们可以得到不同样本中抗原的浓度变化。
通过比较不同样本的吸光度值，可以了解抗原在不同条件下的表达情况以及不同样本中抗原的相对浓度。
实验讨论：ELISA技术在生物医学领域具有广泛的应用，尤其在疾病诊断和药物研发方面起到了重要的作用。
通过ELISA技术，可以检测和定量分析目标抗原的存在与浓度，从而判断疾病的发生与发展，为临床诊断提供依据。
在本次实验中，我们选择了特定抗原作为目标，通过ELISA技术对其进行检测和定量分析。
实验结果显示，不同样本中抗原的浓度存在差异，这可能与样本来源、处理方法等因素有关。
通过进一步的研究和分析，可以进一步探究这些差异的原因，并为临床诊断和治疗提供更准确的依据。
此外，ELISA技术还可以用于药物研发过程中的药物筛选和药效评价。
通过检测药物对特定抗原的影响，可以评估药物的疗效和安全性，为新药的研发提供重要的参考依据。
Elisa实验报告
KH2PO40.2g,
Na2HPO4·12H2O2.9g,
Tween-20，0.5ml，
蒸馏水加至1000ml。
6．洗涤液：同稀释液。
7．封闭液：0.5%（质量分数）BSA（用PBS配制）。
8．邻苯二胺溶液(底物)：
配制：
0.1mol/L柠檬酸(2.1g/100ml),取6.1ml，
0.2mol/LNa2HPO4·12H2O(7.163g/100ml), 取6.4ml,
实验材料与试剂：
1．聚苯乙烯微量细胞培养板(平板, 96孔)。
2．酶联免疫检测仪。
3．辣根过氧化物酶羊抗兔IgG。
4．包被液：0.05mol/L碳酸缓冲液（pH9.6）：
Na2CO30.15g,
NaHCO30.293g，
蒸馏水稀释至100ml。
5．稀释液（PBS-Tween）：
NaCl8g,
KCl 0.2g，
B
228
1.114
0.810
0.698
0.519
0.374
0.094
C
1.098
1.357
0.943
0.996
1.019
0.895
0.682
0.415
0.201
0.067
D
1.494
1.354
1.240
1.334
1.118
0.859
0.667
0.472
0.281
0.083
组平均
1.333
1.317
1.131
1.186
1.084
(仅供参考)ELISA(酶联免疫吸附测定)实验报告
ELISALin Chengyu Bio 04 2010030007Experiment Date: 2012-03-12 Submitting Date: 2012-03-211Introduction1.1Background informationELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) is a solid-phase assay for antibodiesemploying ligands labeled with enzymes which is widely used for immunological assays.This technique can be applied to detect antigens or antibodies for qualitative orquantitative purpose. Since enzyme reactions are very well known amplificationprocesses, the signal is generated by enzymes which are linked to the detection reagentsin fixed proportions to allow accurate quantification.11.2Major principlesFigure 1 Schematic diagram of ELISA2Figure 2 Procedure of indirect ELISA3As shown in Figure 1 & 2, the general procedure of indirect ELSIA is to: incubate theplate well with antigen, wash off unbounded antigen, incubate with 1st antibody, washoff unbounded 1st antibody, incubate with labeled 2nd antibody, wash off unbounded 2ndantibody, incubate with enzyme substrate solution, and detect optical density or otherindex showing enzyme activity.2Experiment Operation2.1Antigen coating(1)Prepare an antigen solution in coating buffer (human IgG at 0.025mg/ml);(2)Pipette 200 μl antigen solution to each well (Row: B~G; Column: 2~10; Column 11is negative control without antigen) of the microtiter plate;(3)Incubate the plate at 37 ℃for 30 min;(4)Remove the antigen solution;(5)Wash each well with 200 μl with PBS-T for 3 times;(6)Block each well (Row: B~G; Column: 2~11) with 200 μl 0.5% BSA-PBS, andincubate the plate at 37 ℃for 30 min;(7)Remove the blocking solution;(8)Wash each well with 200 μl with PBS-T for 3 times.2.2Primary antibody reaction(1)Dilute the primary antibody (rabbit-anti-human IgG antiserum) in PBS-T fordifferent dilution (from 1:400 to 1:51,200 in 2-folds dilution);(2)Add 200 μl diluted antibody solution to each well following Table 1;Table 1 Scheme to add primary antibody(3)Incubate the plate at 37 ℃for 1 hour;(4)Remove the primary antibody solution;(5)Wash each well with 200 μl PBS-T for 3 times.2.3Application of secondary antibody(1)Dilute the peroxidase conjugated secondary antibody (Goat-anti-rabbit IgG-HRP) inPBS-T at the dilution of 1:20,000 and 1:40,000;(2)Add 200 μl secondary antibody solution to each well following Table 2;(3)Incubate the plate at 37 ℃for 1 hour;(4)Remove the secondary antibody solution;(5)Wash each well with 200 μl PBS-T for 3 times.2.4Substrate development(1)Add 200 μl substrate solution to each well (Row: B~G ,Column: 2~11);(2)Incubate for approximately 3 min;(3)Add 50 μl 2 M H2SO4 to each well to terminate the reaction;(4)Measure optical density at 490 nm.3Raw data and its processing3.1Raw data3.2Data processingSet Row B, C, and D as Group I, and Row E, F, and G as Group II. The processed datais shown in Table 4Table 4 Processed data: optical density of each groupSet different dilutions of primary antibody as x axis, optical density as y axis, drawFigure 3 to illustrate their relation.Figure 3 Relationship between optical density and dilutions of primary antibodyFor the reason that the curve cannot illustrate the relationship enough, change the x axis to nature logarithm of different dilutions of primary antibody. See Figure 4:Figure 4 Relationship between optical density and natural logarithm of dilutions of primary antibodyUsing linear fit for each group, we can figure out that two lines are approximately parallel.In the black curve in Figure 3, there is an oblivious point of inflection which corresponds with the dilution of 1:800. The curve after this point becomes flat, which indicates that the binding between antigens and primary antibodies is saturated in the dilution of 1:800 and higher. This data can suggest that in other immunoenzymatic experiment, the proper dilution of primary antibody will be around, and no higher than 1:800.What’s more, from the red line in Figure 4 we can figure out that the optical density hasa linear relation with natural logarithm of dilutions of the primary antibody.As for comparison between Group I and Group II, from Figure 3 we can figure out thatthe point of infection of blue curve, which corresponds with the dilution of 1:40,000, ison the left, about 1:1600.In Figure 4, the green line (1:40,000) is positioned lower than the red line (1:20,000),which is easy to understand. Lower concentration of secondary antibody means lessbinding with primary antibody during application of secondary antibody.4Results and discussion4.1Results(1)The optical density has an approximately linear relation with the natural logarithmof the dilutions of the primary antibody;(2)For secondary antibody in the dilution of 1:20,000, the proper dilution of primaryantibody is 1:800; for secondary antibody in the dilution of 1:40,000, primaryantibody is recommended to be 1:1600;(3)With the same dilution of antigen and primary antibody, higher concentration ofsecondary antibody will get a higher optical density;4.2Discussion(1)What is the significance of the negative control groups?I.The no primary antibody groups proved that there is no specific bindingbetween antigen and secondary antibody, and provided a background ofnon-specific binding between secondary antibody and antigen;II.The no antigen groups can provide a background of non-specific binding between primary antibody and BSA.(2)Why washing step is essential?Washing each well with PBS-T, which contains tween-20 as detergent, can wash offunbounded antigens and antibodies, including those non-specifically binding. Ifwashing step is omitted, the background index will be higher, and might causeinterference to the result.(3)Why blocking step is essential?After the antigen coating step, the surface of the well is not covered by antigenentirely, i.e. there is still some site leaving blank, which allows other proteins bindto them. Blocking step is to block those blank sites with non-specific bindingmaterial that will not cause interference to the experiment. Thus, the primaryantibody will only bind to the antigen coated in the first step, rather than coat on thesurface as well.(4)What’s the advantage of indirect ELISA comparing with direct ELISA?I.Indirect ELISA can amplify the optical density which we measure.Compared to direct ELISA, the number of secondary antibody binding tothe primary antibody is way larger than the number of primary antibodybinding to the antigen. Thus, optical density will be higher and easier tomeasure, which means a lower error;II.The secondary antibody contains HRP, which is essential for substrate development. Compared to direct ELISA, indirect ELISA need only onekind of antibody contains HRP to perform many kinds of experiment, ratherthan one antibody linked to enzyme for one experiment, which isinconvenient.5Reference【1】/wiki/ELISA【2】/post/9314400054【3】/indirect_elisa。
酶联免疫吸附实验报告
酶联免疫吸附试验【小组成员】潘晓娟（21000101）陈怡静（21000100）李永乐（21000588）袁理（21000221） 【实验原理】酶联免疫吸附试验为酶免疫技术的一种，是在固相载体上进行的免疫酶技术。
其理论依据为：抗原或抗体可吸附固相载体（聚苯乙烯微量细胞培养板）表面而不改变其特性；抗原或抗体与酶交联后，仍保持其结合活性，同时酶的催化活性不改变；特异性抗原抗体结合后，标记的酶可高效催化底物水解、氧化或还原，产生有色物质，其颜色深浅与相应的抗体或抗原量相关。
【实验设计】酶联免疫吸附试验有多种设计方案，本组采取抑制ELISA 设计：正常兔血清→兔抗鼠IgG*+HPR-羊抗兔Ig →显色按照实验原理，若未加入未知抗原时，正常兔血清与酶标抗体结合后吸附在固相载体表面，能使后来加入的底物发生氧化还原反应而显色。
若先将未知抗原与酶标羊抗兔IgG 反应，如未知抗原中含有能与酶标羊抗兔IgG 反应的抗原，则正常兔血清能与酶标羊抗兔IgG 结合量减少，底物显色变浅，甚至不变色。
鉴于此次为首次进行酶联免疫吸附试验，包被物正常兔血清与未知抗原兔抗鼠IgG 二者的最佳反应稀释度均未知，故实验采取4个不同稀释度的正常兔血清与4个不同稀释度的兔抗鼠IgG 进行交叉，并设置了只含稀释液和酶标羊抗兔IgG 的空白对照组。
【实验材料】1:200正常兔血清、1:200兔抗鼠IgG 、1:200HPR-羊抗兔Ig 、包被液、封闭液、洗涤液、底物缓冲液（TMB ）、终止液 、聚苯乙烯微量细胞培养板、微量加液器、10μL 加样器头、100μL 加样器头、洗瓶、吸水纸、水浴箱。
【实验方法】1、稀释：按照加孔数计算稀释时所需正常兔血清与稀释液的量，倍比稀释1:200正常兔血清至1:1000、1:2000、1:4000、1:8000四个稀释度；2、包被：按下图所示，用100μL 加样器头往聚苯乙烯微量细胞培养板中加入不同稀释度血清100μL/孔，置于4°C 冰箱保存过夜；正常兔血清稀释度3、干燥：取出已包被过夜的培养板，倒掉多余的包被液，甩干后用吸水纸吸掉多余水分；4、封闭：加入150μL/孔的封闭液，放入37°C 恒温箱30min ；5、稀释：按照加孔数计算稀释时所需1:200兔抗鼠IgG 与稀释液的量，倍比稀释1:200兔抗鼠IgG 至1:1000、1:2000、1:4000、1:8000四个稀释度；6、干燥：取出培养板，以洗涤剂冲洗3次，每次3min ，用吸水纸吸掉多余水分；7、加液：按下图所示，加入已倍比稀释的兔抗鼠IgG 50μL/孔和1:200HPR-羊抗兔Ig 50μL/孔（无需稀释后加入），对照组只加入1:200HPR-羊抗兔Ig 50μL/孔，放入37°C 恒温箱30min ；1:1000 1:20001:10001:20001:10001:20001:10001:2000稀释液稀释液1:40001:8000 1:4000 1:8000 1:4000 1:8000 1:4000 1:8000 稀释液 稀释液1:1000/HPR-羊抗兔 1:1000/HPR-羊抗兔 1:2000/HPR-羊抗兔 1:2000/HPR-羊抗兔 1:4000/HPR-羊抗兔 1:4000/HPR-羊抗兔 1:8000/HPR-羊抗兔 1:8000/HPR-羊抗兔 HPR-羊抗兔 ***HPR-羊抗兔 HPR-羊抗兔 ***1:1000/HPR-羊抗兔1:1000/HPR-羊抗兔1:2000/HPR-羊抗兔1:2000/HPR-羊抗兔1:4000/HPR-羊抗兔1:4000/HPR-羊抗兔1:8000/HPR-羊抗兔1:8000/HPR-羊抗兔HPR-羊抗兔 ***HPR-羊抗兔HPR-羊抗兔 ***8、干燥：取出培养板，以洗涤剂冲洗3次，每次3min，用吸水纸吸掉多余水分；9、显色：加入底物缓冲液（TMB）100μL/孔，避光显色5min；10、终止：滴入H2SO4终止反应，利用酶标读数仪测量OD值。
elisa酶联免疫吸附实验报告
elisa酶联免疫吸附实验报告eｌisａ酶联免疫吸附实验报告得目验实.一??酶联免疫吸附测定(enzyme—linｋedimmunｏsorbeｎtassay 简称EＬISA)就是在免疫酶技术(iｍmunoenzymatiｃｔechniｑuｅs)得基础上发展起来得一种新型得免疫测定技术，ＥLＩＳA过程包括抗原(抗体)吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原)，再加相应酶标记抗体(抗原）,生成抗原（抗体)-－待测抗体(抗原）-－酶标记抗体得复合物,再与该酶得底物反应生成有色产物。
借助分光光度计得光吸收计算抗体（抗原）得量。
待测抗体(抗原)得定量与有色产生成正比。
理原验实.二?用于免疫酶技术得酶有很多，如过氧化物酶,碱性磷酸酯酶,β－D－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶,6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ＥＬIＳA法得酶有辣根过氧化物酶,碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化得就是氧化还原反应,在呈色后须立刻测定,否则空气中得氧化作用使颜色加深,无法准确地定量.辣根过氧化物酶（HＲP）就是一种糖蛋白,每个分子含有一个氯化血红素（protoｎｈeｍiｎ）区作辅基。
酶得浓度与纯度常以辅基得含量表示。
氯化血红素辅基得最大吸收峰就是40３ｎm，HRP酶蛋白得最大吸收峰就是27５nm，所以酶得浓度与纯度计算式就是（已知H ＲP得A（１cm4０3nm1%)＝２5，式中1%指ＨRP百分浓度为100mｌ含酶蛋白1g，即10mg/ｍｌ,所以,酶浓度以mg/m ｌ计算就是ＨRP得A(１cm403ｎmmｇ／ｍl=2、5)ＨRP纯度（ＲＺ)=A403nm／A275nm纯度RZ（ReiｎheｉtＺahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HR Ｐ得RＺ值在３、0左右,最高可达3、4.用于ＥLISA检测得HRP得RZ值要求在３、０以上.):条三有理原本基得ASILＥ??1（就能可，面表体载相固于附吸地性理物以能体抗或原抗?是蛋白与聚苯乙烯表面间得疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学与酶学活性;)3(酶?结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物得颜色反应来判定就是否有免疫反应得存在,而且颜色反应得深浅就是与标本中相应抗原或抗体得量成正比例得,因此,可以按底物显色得程度显示试验结果。
ELISA实验报告
ELISA实验报告一、实验目的ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的免疫学技术。
本次实验的目的是通过 ELISA 方法检测样本中特定抗原或抗体的含量，熟悉 ELISA 的实验原理、操作步骤，并对实验结果进行分析和解读。
二、实验原理ELISA 的基本原理是将已知的抗原或抗体固定在固相载体（如聚苯乙烯微量反应板）表面，然后加入待检样本，使其中的抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
洗去未结合的物质后，再加入酶标记的第二抗体或抗原，形成抗原抗体酶标抗体复合物。
最后加入底物，通过酶催化底物显色，根据颜色的深浅来定量测定样本中抗原或抗体的含量。
三、实验材料1、试剂包被缓冲液（pH 96 的碳酸盐缓冲液）洗涤缓冲液（含 005% Tween-20 的 PBS 缓冲液）封闭液（含 1% BSA 的 PBS 缓冲液）样本稀释液（PBS 缓冲液）酶标抗体工作液底物溶液（TMB 溶液）终止液（2 M 硫酸溶液）2、仪器酶标仪移液器恒温箱微量反应板3、样本待检血清样本四、实验步骤1、包被用包被缓冲液将抗原稀释至适当浓度，每孔加入100 μL，4℃过夜包被。
2、洗涤次日，弃去孔内液体，用洗涤缓冲液洗涤 3 次，每次 3 分钟，拍干。
3、封闭每孔加入200 μL 封闭液，37℃孵育 1 小时，洗涤 3 次。
4、加样将待检血清样本用样本稀释液进行梯度稀释，每孔加入100 μL，同时设置阴性对照和阳性对照，37℃孵育 1 小时，洗涤 3 次。
5、加酶标抗体每孔加入100 μL 酶标抗体工作液，37℃孵育 1 小时，洗涤 5 次。
6、显色每孔加入100 μL 底物溶液，37℃避光显色 15 分钟。
7、终止每孔加入50 μL 终止液，终止反应。
8、测定使用酶标仪在 450 nm 波长处测定各孔的吸光度值（OD 值）。
五、实验结果1、原始数据记录各孔的 OD 值，如下表所示：｜样本|OD 值|｜｜｜｜阴性对照|0085|｜阳性对照|1258|｜待检样本 1|0325|｜待检样本 2|0158|｜待检样本 3|0685|2、结果判断计算阴性对照和阳性对照的平均 OD 值，分别记为 OD 阴平和 OD阳平。
ELISA实验报告(两篇)
引言概述:ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用于测定抗体或抗原的定量和定性的快速、敏感和特异性的实验技术。
本文将继续讨论ELISA实验的一些重要内容，包括实验操作步骤、控制样品的使用、结果分析和解释。
通过深入了解这些实验细节，我们可以更好地理解ELISA的原理和应用。
正文内容:一. 实验操作步骤1. 准备样品和标准曲线- 收集所需的样品，可以是血清、尿液或细胞上清等。
- 确定需要测定的抗体或抗原，并准备相应的标准曲线。
2. 处理样品- 样品处理包括离心、稀释或加热等步骤，以去除可能干扰测定的物质。
3. 准备实验板- 将酶标板预先涂覆上抗体或抗原，然后用非特异性蛋白质阻断剂进行阻断。
4. 加入样品和标准曲线- 将处理后的样品和标准曲线加入预先涂覆抗体或抗原的孔中。
5. 孔洗涤和加入检测抗体- 通过洗涤孔来去除非特异性结合物质。
- 加入检测抗体，它可以是与标准曲线中的抗体相同的抗体或与待测物质结合的抗体。
6. 孔洗涤和加入底物- 通过洗涤孔来去除未结合的检测抗体。
- 加入底物，它会与酶结合并产生可测定的信号。
7. 信号检测和结果记录- 使用酶标仪测量底物的反应产物生成的光信号。
- 将光信号与标准曲线进行比较，得出待测样品中目标物质的含量。
二. 控制样品的使用1. 阳性对照样品- 阳性对照样品是已知含有目标抗体或抗原的样品，用于验证实验的准确性和可靠性。
2. 阴性对照样品- 阴性对照样品是未含目标抗体或抗原的样品，用于确定实验的特异性。
3. 反应性对照样品- 反应性对照样品是含有不同浓度目标抗体或抗原的样品，用于绘制标准曲线并进行定量测定。
4. 标准曲线的制备- 使用已知浓度的标准样品制备标准曲线，该曲线用于将光信号转换为目标物质的定量结果。
5. 控制实验条件- 控制实验条件，包括温度、时间和洗涤次数等，以确保实验的可重复性和可比性。
三. 结果分析1. 原始数据处理- 使用酶标仪测量的吸光度值为原始数据，在计算吸光度值之前，需要进行空白校正和标准曲线外推。
elisa实验报告结果分析
elisa实验报告结果分析Elisa实验报告结果分析Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常用的实验技术，用于检测生物样本中的特定分子，如蛋白质、抗体、细胞因子等。
在这篇文章中，我们将对一份Elisa实验报告的结果进行分析和解读，以帮助读者更好地理解实验结果。
首先，让我们来看一下实验报告中的基本信息。
实验报告中应包含实验目的、方法、样本信息、实验结果以及数据分析等内容。
在本次实验中，我们的目的是检测血清中特定抗体的浓度。
实验使用了一种特定的抗体试剂盒，按照厂家提供的方法进行操作。
样本来源于一组健康人群，共有100个样本进行了检测。
接下来，我们来看一下实验结果。
实验报告中通常会给出每个样本的测量值，以及相应的阳性对照和阴性对照的测量值。
这些测量值通常以光密度（OD）的形式给出。
在本次实验中，阳性对照的光密度为0.8，阴性对照的光密度为0.1。
根据实验报告，我们可以看到，在100个样本中，有80个样本的光密度超过了阳性对照的光密度，而余下的20个样本的光密度低于阴性对照的光密度。
接下来，我们需要对实验结果进行数据分析。
首先，我们可以计算阳性率和阴性率。
阳性率是阳性样本数除以总样本数的比例，阴性率是阴性样本数除以总样本数的比例。
在本次实验中，阳性率为80%，阴性率为20%。
这意味着在这组健康人群中，大约80%的人体内存在着这种特定抗体。
另外，我们还可以计算阳性样本的平均光密度和标准差。
平均光密度是所有阳性样本的光密度之和除以阳性样本数，标准差是用来衡量数据分散程度的指标。
通过计算，我们可以得到阳性样本的平均光密度为1.2，标准差为0.3。
这表明阳性样本中的抗体浓度存在一定的变异性，标准差越大，说明样本间的差异越大。
此外，我们还可以进行一些统计学分析，如t检验或方差分析，来比较不同组别之间的差异。
比如，我们可以将样本分为不同的年龄组或性别组，然后比较它们之间的抗体浓度是否存在显著差异。
通过这些统计学方法，我们可以更全面地了解抗体浓度与各种因素之间的关系。
免疫酶联免疫吸附实验报告
免疫酶联免疫吸附实验报告免疫酶联免疫吸附实验报告免疫酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用的实验方法，用于检测和定量测定生物样本中特定抗原或抗体的存在。
本实验旨在通过ELISA法检测某种病毒感染后产生的抗体水平，以评估免疫系统的应答能力。
实验材料和方法：1. 样本制备：收集病毒感染后的血清样本，离心去除细胞和颗粒物，得到清澈的血清。
2. 酶标板涂布：将目标抗原溶液加入酶标板孔中，孵育一段时间，使抗原吸附于酶标板表面。
3. 洗涤：将洗涤缓冲液加入酶标板孔中，轻轻摇动，倒出液体，重复此步骤多次，以去除未结合的抗原。
4. 反应：加入待测血清样本和辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人免疫球蛋白G（IgG）抗体，孵育一段时间，使抗体与抗原结合。
5. 洗涤：重复第三步骤，去除未结合的抗体。
6. 显色：加入底物溶液，使底物与HRP发生反应，产生可见的颜色。
7. 终止反应：加入终止液，停止底物与HRP的反应。
8. 测定：使用酶标仪测定吸光度，根据标准曲线计算待测样本中抗体的浓度。
实验结果：根据实验操作步骤，我们成功地进行了ELISA实验，获得了一系列吸光度值。
通过绘制标准曲线，我们可以将吸光度值转化为抗体浓度。
进一步分析数据，我们发现不同样本的抗体浓度存在差异。
这表明，病毒感染后，机体会产生相应的抗体作为免疫应答的一部分。
讨论与分析：ELISA法是一种高灵敏度、高特异性的实验方法，广泛应用于医学、生物学和疾病诊断领域。
通过本实验，我们验证了ELISA法的可行性，并获得了关于抗体水平的有用信息。
在实验过程中，我们注意到样本制备的重要性。
样本的质量和处理方式会直接影响实验结果的准确性。
因此，在实验前，我们需要仔细选择和处理样本，确保样本中的抗原或抗体得到充分释放和稳定。
此外，实验中的洗涤步骤也非常重要。
洗涤的目的是去除未结合的抗原或抗体，以减少非特异性信号。
ELISA酶联免疫吸附试验报告
大学实验报告酶联免疫吸附试验学院：专业：姓名：学号：一．实验原理酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种用酶标记抗原或抗体的方法，此法是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的技术，可敏感地检测体液中微量的特异性抗原或抗体。
基本原理如下：①先使用抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或酶标抗体，这种酶标抗原或酶标抗体即保留了其免疫活性，又保留了酶活性；③试验时，把受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原或酶标抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤法去除固相载体上的游离物质，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的多少有关。
当加入酶反应的底物后，底物被酶催化而产生有色物质。
颜色反应深浅与受检抗原或抗体的量成正比。
因此，可借助颜色反应的深浅来定性、定量抗体或抗原。
本技术的特点是敏感性高，特异性强，操作简易，结果容易观察。
图1 ELISA实验原理示意图二．实验材料BSA抗原、兔抗BSA抗体（一抗，分别用PBS稀释成1:2, 1:4, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256七个浓度）、酶标羊抗兔IgG（二抗）、0.05M PH9.6碳酸盐包被缓冲液、洗涤液（PBS）、底物溶液、2mol/L H2SO4。
三．实验方法1.包被板的处理：加BSA（包被缓冲液稀释为10μg/ml）至酶标板中，每孔100μl，置湿盒中4℃过夜。
第二天取出，用PBS洗涤3-4次。
2.取包被好的酶标板，在第一孔中加入100μl PBS作阴性对照，在第2-8孔加入上述稀释的一抗各100μl，置37℃保温1h。
3.倾去液体，用PBS洗涤3-4次后加入二抗各100μl，置37℃保温30min。
4.倾去液体，用PBS洗涤3-4次后加入底物溶液各100μl，在暗处37℃避光显色20min，最后加入50μl、2M H2SO4终止反应。
5.在波长490nm处，测定各孔的光密度吸收值。
酶联免疫吸附试验实验报告
酶联免疫吸附试验实验报告实验目的：本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）技术，检测特定抗原或抗体的存在，进而了解其在疾病诊断、治疗监测和流行病学研究中的应用。
实验原理：酶联免疫吸附试验是一种基于抗原-抗体特异性结合的固相免疫测定技术。
在实验中，首先将抗原或抗体固定在固相载体（如微孔板）上，然后加入待测样本，通过特异性结合形成抗原-抗体复合物。
随后，加入酶标记的第二抗体，与抗原-抗体复合物结合。
最后，加入底物产生可检测的信号（如颜色变化），通过光度计测定吸光度，从而定量分析抗原或抗体的含量。
实验材料：1. 微孔板2. 待测样本（血清、尿液等）3. 特异性抗体或抗原4. 酶标记的第二抗体5. 底物溶液6. 洗涤缓冲液7. 标准品8. 光度计实验方法：1. 准备微孔板，将特异性抗原或抗体稀释后固定在微孔板的孔中。
2. 将待测样本加入到相应的孔中，使其与固相的抗原或抗体发生特异性结合。
3. 洗涤微孔板，去除未结合的样本。
4. 加入酶标记的第二抗体，使其与抗原-抗体复合物结合。
5. 再次洗涤微孔板，去除未结合的第二抗体。
6. 加入底物溶液，使酶催化底物产生颜色变化。
7. 使用光度计测定各孔的吸光度，根据标准曲线计算待测样本中抗原或抗体的浓度。
实验结果：实验结果显示，通过测定不同浓度的标准品，我们建立了标准曲线。
将待测样本的吸光度值代入标准曲线，计算得到样本中抗原或抗体的浓度。
实验数据表明，吸光度与抗原或抗体的浓度呈正相关，符合ELISA实验的预期结果。
实验讨论：本实验中，ELISA技术成功地用于检测特定抗原或抗体的存在。
然而，实验过程中可能存在一些影响结果准确性的因素，如样本的稀释比例、酶标记抗体的活性、底物的稳定性等。
此外，实验操作的标准化和重复性也是保证结果可靠性的关键。
实验结论：通过本实验，我们掌握了ELISA技术的原理和操作流程，并成功应用于抗原或抗体的定量检测。
该技术在生物医学研究和临床诊断中具有广泛的应用前景。
elisa酶联免疫吸附实验报告
elisa酶联免疫吸附实验报告一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。
借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。
酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。
氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml 含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。
用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
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ELISA实验报告
-森贝伽生物实验技术中心前言
酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本，干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子（或受体）的水平。
材料与方法
1材料
1.1主要试剂
ELISA检测试剂盒(From：森贝伽生物/SenBeiJia)
1.2主要仪器及耗材
酶标仪：芬兰（Labsystems Multiskan MS）公司产品
洗板机：芬兰（Thermo Labsystems）公司产品
离心机：微量高速离心机（国产）
移液器：吉尔森P型移液器(Pipetman)产品
培养箱：隔水式恒温培养箱（国产）产品
其他所需耗材均为国产。
2方法
2.1实验过程
（1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为50μL；
（2）加样：分别设空白孔、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；
（3）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；
（4）配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用；小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec 后弃去，如此重复5次，拍干；
（5）加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外；
（6）温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；
（7）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30sec 后弃去，如此重复5次，拍干；
（8）显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15min；
（9）终止：每孔加终止液50μL，终止反应；
（10）测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15min以内进行。
2.2计算
以标准物的浓度为纵坐标，OD值为横坐标，计算出标准曲线的多项式二次回归方程，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
实验结果举例（相关技术问题可咨询我们）
编号OD值浓度（ng/L）
空白0.0320
标1 1.986240标2 1.341160标30.72380
标40.41140
标50.19620 1—10.447238.501 1—20.598328.599 1—30.517280.141 1—40.506273.583 1—50.368191.771 1—60.349180.575 1—70.361187.644 1—80.411217.172 1—90.393206.529 1—100.537292.078 2—10.515278.948 2—20.549299.249 2—30.549299.249 2—40.642355.045 2—60.561306.427 2—70.526285.510 2—80.489263.458 3—10.458245.029 3—20.536291.481 3—30.496267.625 3—40.504272.391 3—50.547298.054 3—60.519281.333 3—80.750420.328 4—10.518280.737 4—20.506273.583 4—30.534290.286 4—40.469251.564 4—50.479257.509 4—60.567310.018 4—80.333171.158 5—10.469251.564 5—20.525284.913 5—30.498268.817 5—40.438233.163
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7—80.362188.234大鼠6酮前列腺素F1a:。