过氧化氢酶CAT试剂盒说明书

小鼠过氧化氢酶(CAT)ELISA检测试剂盒使用说明书

小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被过氧化氢酶（CAT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CAT）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。

严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80U/ml 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

碧云天生物技术过氧化氢酶检测试剂盒说明书

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站微信公众号过氧化氢酶检测试剂盒产品编号产品名称包装 S0051过氧化氢酶检测试剂盒100次产品简介：过氧化氢酶检测试剂盒(Catalase Assay Kit)是一种简单易行的通过显色反应来检测细胞、组织或其它样品中过氧化氢酶(Catalase)活性的试剂盒。

在过氧化氢相对比较充足的情况下，过氧化氢酶可以催化过氧化氢产生水和氧气。

残余的过氧化氢在过氧化物酶(Peroxidase)的催化下可以氧化生色底物，产生红色的产物(N-(4-antipyryl)-3-chloro-5-sulfonate-p- benzoquinonemonoimine)，最大吸收波长为520nm 。

用过氧化氢标准品，制作标准曲线，这样就可以计算出样品中的过氧化氢酶在单位时间单位体积内催化了多少量的过氧化氢转变为水和氧气，从而可以计算出样品中过氧化氢酶的酶活力。

过氧化氢酶分布非常广泛。

在肝脏、肾脏和红细胞中，过氧化氢酶的水平非常高，是清除能导致氧化损伤的过氧化氢的主要场所。

过氧化氢酶的活性也可以用紫外分光光度计测定A 240，但蛋白质或其它组份在A 240附近都有比较强的吸收，会对测定产生严重干扰。

因此，用紫外法测定过氧化氢酶的活性，比较适合纯化的过氧化氢酶。

本试剂盒通过检测A 520来测定过氧化物酶催化下由过氧化氢氧化生色底物产生的红色产物，受干扰的因素小，检测灵敏度高，可以检测出低达1U/ml 的过氧化氢酶。

本试剂盒可以检测全血、红细胞裂解产物、血清、组织匀浆产物、细胞裂解产物等生物样品中的过氧化氢酶的活性。

一个试剂盒共可以进行100次检测。

包装清单：产品编号产品名称包装 S0051-1 过氧化氢酶检测缓冲液 60ml S0051-2 过氧化氢 (约1M) 5ml S0051-3 过氧化氢酶反应终止液50ml S0051-4 显色底物 20ml S0051-5 过氧化物酶 20µl —说明书1份保存条件：-20ºC 保存，一年有效。

过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒（紫外微板法）

过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒（紫外微板法）过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)简介：过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD。

CAT 能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px 共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。

Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)检测原理是血清或血浆等样品H 2O 2在240nm 处有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过H 2O 2，使待测溶液吸光度随反应时间而减少，通过紫外酶标仪测定240nm 处吸光度，该酶的检测对于研究植物代谢强度及抗旱、抗病能力有一定的价值。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水、生理盐水2、研钵或匀浆器3、离心管4、96孔板5、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制CAT Assay buffer 工作液：按CAT Assay buffer(2.5×)：蒸馏水=的比例稀释，即获得CAT Assay buffer 工作液，4℃预冷，待用。

2、配制100mM H 2O 2基液：本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为1M。

由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。

而计算出本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2的实际浓度。

然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制100mMH 2O 2基液。

3、准备样品：①植物、动物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织(或动物组织)，清洗干净，擦干，切碎，编号名称TO1072100T Storage试剂(A):H 2O 2基液2×1ml RT 试剂(B):CAT Assay buffer(2.5×)500ml4℃避光使用说明书1份迅速称取，按样品：CAT Assay buffer工作液的比例，加入预冷的CAT Assay buffer工作液后匀浆或研磨，转移至15ml离心管。

人过氧化氢酶CAT定量检测试剂盒ELISA使用说明书

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

人过氧化氢酶（CAT）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人过氧化氢酶（CAT）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人血清、血浆及相关液体样本中过氧化氢酶（CAT）的含量。

【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。

将标准品、待测样本加入到预先包被人过氧化氢酶（CAT）多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。

依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人过氧化氢酶（CAT）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人过氧化氢酶（CAT）含量。

【试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7底物夜A6mL2标准品：40ng/ml0.6mL8底物夜B6mL320倍浓缩洗涤液20mL9终止液6mL4标准品稀释液6mL10说明书1份5样本稀释液6mL11封板膜2张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：40、20、10、5、2.5、1.25ng/ml【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书

过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理：过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力。

试剂一(ml)二、试剂组成与配制：试剂一：液体100 ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂二：底物液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂三：显色粉剂×1瓶，4℃保存6个月。

加双蒸水至100 ml溶解，4℃保存1个月。

（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果）试剂四：液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。

天冷时会凝固，临用前37℃水浴至透明方可使用。

三、组织样本的检测1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测(最佳取样浓度摸索减附录)。

2、操作表：混匀，波长405nm ，光径0.5cm ，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1-2管对照即可。

如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。

3.组织中CAT 活力的计算：（1）定义：每毫克组织蛋白每秒种分解1umol 的H2O2的量为一个活力单位。

（2）计算公式： )ml /mgprot (601271)OD -OD ()mgprot /U (CAT *待测样本蛋白浓度取样量值测定值对照活力组织匀浆中÷⨯⨯⨯=注：*271为斜率的倒数（3）计算举例：取10%水稻叶片匀浆0.05ml 做CAT 检测，测得对照管吸光度为0.605，测定管吸光度为0.332，同时测得10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为3.1303 mgprot/ml 。

则计算结果为：()/mgprotU 7351.101303.305.0601271332.0704.0)mgprot /U (CAT =÷⨯⨯⨯-=活力组织匀浆中注：1.测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸水代替额样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照。

过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)

过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)简介：过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD。

CAT 能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px 共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。

Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)检测原理是血清或血浆等样品H 2O 2在240nm 处有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过H 2O 2，使待测溶液吸光度随反应时间而减少，通过紫外酶标仪测定240nm 处吸光度，该酶的检测对于研究植物代谢强度及抗旱、抗病能力有一定的价值。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水、生理盐水2、研钵或匀浆器3、离心管4、96孔板5、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制CAT Assay buffer 工作液：按CAT Assay buffer(2.5×)：蒸馏水=的比例稀释，即获得CAT Assay buffer 工作液，4℃预冷，待用。

2、配制100mM H 2O 2基液：本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为1M。

由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。

而计算出本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2的实际浓度。

然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制100mMH 2O 2基液。

3、准备样品：①植物、动物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织(或动物组织)，清洗干净，擦干，切碎，编号名称TO1072100T Storage试剂(A):H 2O 2基液2×1ml RT 试剂(B):CAT Assay buffer(2.5×)500ml4℃避光使用说明书1份迅速称取，按样品：CAT Assay buffer工作液的比例，加入预冷的CAT Assay buffer工作液后匀浆或研磨，转移至15ml离心管。

土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)试剂盒使用说明

土壤过氧化氢酶（Solid-Catalase，S-CAT）试剂盒使用说明微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0105规格：100管/48样产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃保存；临用前加入29.7mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

产品说明：S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。

H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水操作步骤：一、样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。

2、加样表试剂名称测定管无基质管无土管风干土样（g）0.030.03试剂一（μL）260260双蒸水（μL）26025℃振荡培养20min试剂二（μL）101010混匀8000g，25℃离心5min，取全部上清试剂三（μL）303030混匀，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，240nm处记录各管吸光值A。

注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。

三、S-CAT活性计算：A、用微量石英比色皿测定的计算公式如下单位的定义：每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=16.5×（A无土管-A测定管+A无基质管）V反总：反应体系总体积，3×10-4L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，20min=1/72d；W：样本质量，0.03g。

土壤过氧化氢酶测定试剂盒使用说明

土壤过氧化氢酶测定试剂盒使用说明分光光度法50管/24样货号:BC0100产品简介：S-CAT 是土壤微生物代谢的重要酶类，在H 2O 2清除系统中具有重要作用。

H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT 活性的高低。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容：试剂一：液体×5瓶，4℃保存；临用前每瓶加入9.9mL 蒸馏水充分溶解后待用。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入2mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存。

试剂三：液体×1瓶，4℃保存。

操作步骤：试剂名称测定管无基质管无土管风干土样（g ）0.10.1试剂一（μL ）10001000双蒸水（μL ）1000振荡培养20min试剂二（μL ）252525混匀8000g ，常温离心5min ，取全部上清试剂三（μL ）120120120混匀，用蒸馏水调零，240nm 处记录各管A 值。

注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。

S-CAT 活力的计算：单位的定义：每天每g 风干土样催化1μmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式：S-CAT（U/g）＝[(A 无土管-A 测定管+A 无基质管)×V 反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=18.9×（A 无土管-A 测定管+A 无基质管）V 反总：反应体系总体积，1.145×10-3L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，20min=1/72d；W：样本质量，0.1g。

过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书

过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理：过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力。

试剂一(ml)二、试剂组成与配制：试剂一：液体100 ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂二：底物液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。

试剂三：显色粉剂×1瓶，4℃保存6个月。

加双蒸水至100 ml溶解，4℃保存1个月。

（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果）试剂四：液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。

天冷时会凝固，临用前37℃水浴至透明方可使用。

三、组织样本的检测1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测(最佳取样浓度摸索减附录)。

2、操作表：混匀，波长405nm ，光径0.5cm ，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1-2管对照即可。

如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。

3.组织中CAT 活力的计算：（1）定义：每毫克组织蛋白每秒种分解1umol 的H2O2的量为一个活力单位。

（2）计算公式： )ml /mgprot (601271)OD -OD ()mgprot /U (CAT *待测样本蛋白浓度取样量值测定值对照活力组织匀浆中÷⨯⨯⨯=注：*271为斜率的倒数（3）计算举例：取10%水稻叶片匀浆0.05ml 做CAT 检测，测得对照管吸光度为0.605，测定管吸光度为0.332，同时测得10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为3.1303 mgprot/ml 。

则计算结果为：()/mgprotU 7351.101303.305.0601271332.0704.0)mgprot /U (CAT =÷⨯⨯⨯-=活力组织匀浆中注：1.测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸水代替额样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照。

过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书

过氧化氢酶（CAT ）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0200规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一液体60 mL×1瓶4℃保存试剂二液体320 μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP 管中，使用前需先离心。

2、检测工作液的配制：取100μL 试剂二加入20mL 试剂一，充分混匀（约20T ），作为工作液，现用现配；或者根据比例配制。

产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备a 、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率200w ，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

b 、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积（mL ）为1：5-10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

S0051-过氧化氢酶检测试剂盒说明书(碧云天)

2. He Z, Sun X, Mei G, Yu S, Li N. Nonclassical secretion of human catalase on the surface of CHO cells is more efficient than classical secretion. Cell Biol Int. 2008 Apr;32(4):367-73.
3. He Z, Yu S, Mei G, Zheng M, Wang M, Dai Y, Tang B, Li N. Maternally transmitted milk containing recombinant human catalase provides protection against oxidation for mouse offspring during lactation. Free Radic Biol Med. 2008 Oct 15;45(8):1135-42.
A520 (空白对照－样品)
Blank
－
－
－
1.17 (空白对照实测值)
Human red blood cell lysate
0.2mg/ml
4μl
2min
0.46
Rat liver lysate
0.3mg/ml
7.5μl
1min
0.57
Rat kidney lysate
0.3mg/ml
7.5μl
3min
2. 样品的准备：
用适当的裂解液裂解细胞或组织(可以使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)进行裂解)。用本试剂盒提供的过
氧化氢酶检测缓冲液稀释样品，裂解好的样品至少加入等体积的过氧化氢酶检测缓冲液进行稀释。具体的稀释倍数可

鱼过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析(ELISA)

鱼过氧化氢酶（CAT）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鱼血清，血浆及相关液体样本中过氧化氢酶（CAT）的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼过氧化氢酶（CA T）水平。

用纯化的鱼过氧化氢酶（CA T）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入过氧化氢酶（CA T），再与HRP标记的过氧化氢酶（CAT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CA T）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鱼过氧化氢酶（CAT）的浓度。

样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

加入一定量的PBS，PH7.4。

用液氮迅速冷冻保存备用。

标本融化后仍然保持2-8℃的温度。

过氧化氢酶检测试剂盒

3.标准曲线测定：
a.取0、12.5、25、50或75微升配制好的5mM过氧化氢溶液至1.5ml或0.5ml塑料离心管中，分别加入过氧化氢酶检测缓冲液至最后体积为100微升，混匀。
b.各取10微升，加入到96孔板中的一个孔内。加入200μl显色工作液。25°C至少孵育15分钟后测定A520，但孵育时间不宜超过45分钟。
d 1.对于细胞或组织样品的过氧化氢酶活力计算：
[样品过氧化氢酶酶活力]=[消耗过氧化氢微摩尔数] X [稀释倍数]/（[反应分钟数] X [样品体积] X [蛋白浓度]）；[样品过氧化氢酶酶活力]的单位为units/mg蛋白
[消耗过氧化氢摩尔数]=[空白对照残余过氧化氢微摩尔数]--[样品残余过氧化氢微摩尔数]；
2.样品的准备：
用适当裂解液裂解细胞或组织（可使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液（0013）进行裂解）。用本试剂盒提供的过氧化氢酶检测缓冲液稀释样品，裂解好的样品至少加入等体积的过氧化氢酶检测缓冲液进行稀释。具体的稀释倍数可以参考表1
样品名称
蛋白浓度
检测时的样品使用量
反应时间
A520(空白对照-样品)
[稀释倍数]=250；
[反应分钟数]即为实际的反应分钟数；
[样品体积]为表2中的x微升，以毫升来表示即为x/1000毫升；
[蛋白浓度]为取x微升样品时，样品中的蛋白浓度，单位为mg/ml。
d 2.对于血浆等液体样品的过氧化氢酶活力计算：
[样品过氧化氢酶活力]=[消耗过氧化氢微摩尔数] X [稀释倍数]/（[反应分钟数] X [样品体积]）；[样品过氧化氢酶活力]的单位为untis/ml样品。
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1.17（空白对照实验组）

过氧化物酶检测试剂盒使用说明

过氧化物酶检测试剂盒使用说明货号：BC0090规格：50管/48样产品简介：POD广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL试剂一，现配现用；试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。

操作步骤：一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3秒，间隔10秒。

重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

二、POD测定操作表试剂名称（μL）测定管试剂一520试剂二130试剂三135蒸馏水270样本15测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）放置10min。

在1mL 玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，加入样本后立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。

计算ΔA=A2-A1注意：如果ΔA小于0.005，可将反应时间延长到5min。

如果ΔA大于0.5，可将样本提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数POD活性计算：1、血清（浆）POD活力的计算:单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD（U/L）＝反应总体积（1070ul）÷样本体积（15ul）÷0.01×ΔA=7133×ΔA2、组织POD活力计算：（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

过氧化氢酶(CAT)测定

实验器材：紫外分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、天平、100微升枪2支、10ml容量瓶、10 mL试管、具塞试管、5 mL枪一支、研钵试剂：（1）0.05mo l·L-1磷酸缓冲液（PH7.0）。

pH 0.05mol/L NaH2PO4(ml) 0.05mol/L Na2HPO4(ml)5.7 93.56.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.9 7.0 93.08.0 5.3 94.7（2）200 mmo l·L-1H2O2溶液，30% H2O2 45.44 mL溶于磷酸缓冲液，定容至1 L。

（3）50 mmo l·L-1Tris-HCl缓冲液（PH7.0）(Tris三羟甲基氨基甲烷；氨基丁三醇；缓血酸胺，C4H11NO3):250ml 0.2mol/L的Tris（含三羟甲基氨基甲烷24.23g/L）+450mL 0.1mol/L的HCl(取83ml浓度为37.2%的盐酸定容至1L)，加水稀释至1L。

步骤：1、酶液提取：取0.5g新鲜植物样品，置于预冷研钵中，加2mL磷酸缓冲液及少量石英砂，在冰浴上研磨匀浆。

2、将研磨好的匀浆转移至10mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵2-3次（每次1-2mL）,转移至容量瓶，定容至10 mL。

3、取提取液5 mL于离心管中，在4℃、15000g下离心15min，上清液即为酶提取液，4℃下保存备用。

过氧化氢试剂盒说明书

过氧化氢试剂盒说明书过氧化氢试剂盒是一种用于检测过氧化氢（H2O2）浓度的化学试剂盒。

过氧化氢是一种强氧化剂，广泛应用于医疗、环境保护、食品加工等领域。

本试剂盒提供了一种简便、快速、准确的检测方法，适用于实验室和生产现场。

使用过氧化氢试剂盒前，首先要准备好实验器材和试剂。

试剂盒包含有氢过氧化物和某种指示剂，可以购买商家提供的成套试剂盒，也可以单独购买所需试剂。

同时还需要一些实验仪器，如移液枪、比色计等。

实验操作的步骤如下：1. 取适量样品，并将其转移到试剂容器中。

样品可以是液体、固体或气体。

2. 使用移液枪向试剂容器中加入适量的试剂。

试剂中的某种成分将与过氧化氢发生反应，并可视化表现出颜色变化。

3. 摇匀试剂容器，使试剂与样品充分混合。

注意避免气泡的产生。

4. 静置适当的时间，让反应充分进行。

具体的反应时间根据试剂盒的说明进行调整。

5. 观察试剂容器中的颜色变化，可以使用比色计进行精确测量。

6. 根据试剂盒的说明书，将颜色变化与过氧化氢浓度进行对应。

一般来说，颜色的深浅与过氧化氢浓度成正比关系。

7. 根据测得的结果，进行相应的数据处理和分析。

可以参考相关文献了解检测指标的单位和范围。

使用过氧化氢试剂盒时，需要注意以下几点：1. 严格按照试剂盒的说明书操作，确保实验的准确性和可重复性。

2. 注意安全操作，避免试剂接触皮肤和眼睛，避免吸入试剂蒸汽。

3. 试剂喷洒或泼溅到衣物或实验室周围时，应及时用大量水冲洗。

4. 使用过程中，注意对试剂进行正确、干燥、防潮密封保存，避免受潮和降解。

总结起来，过氧化氢试剂盒是一种非常实用的化学试剂盒，可以用于快速准确地测定过氧化氢浓度。

通过遵循正确的操作步骤和注意事项，可以获得可靠的实验结果。

这将有助于各个领域的科研工作者、生产工作者和环境监测人员开展实验和工作，为保护环境和改善生活做出贡献。

G0105F 过氧化氢酶(CAT)说明书-分光法-48样

过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒说明书（货号：G0105F分光法48样）一、产品简介：过氧化氢酶(CAT，EC1.11.1.6)普遍存在于植物动物组织中，其活性与生物体的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系。

本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，即CAT催化过氧化氢产生水与氧气，剩余的过氧化氢与一种新型显色探针显色，其在510nm处有最大吸收峰。

通过过氧化氢的减少量来计算样本中CAT酶的活力。

本试剂盒突出特点是从紫外波长（240nm：过氧化氢的检测波长）转换到可见波长（510nm）检测，无需使用石英比色皿或UV板。

而且由于过氧化氢极其不稳定，直接检测造成读值不稳定，且蛋白质等组分在此紫外波长下也有光吸收，影响结果精确性。

二、试剂盒组分与配制：试剂名称规格保存要求备注提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体60mL×1瓶4℃保存试剂二液体×1支4℃保存用前甩几下使试剂落入底部，取80μL至新EP管中，再加1.56mL蒸馏水混匀备用。

试剂三液体8mL×1瓶4℃保存试剂四液体15mL×1瓶4℃保存标准品液体1mL×1支4℃保存若重新做标曲，则用到该试剂三、所需的仪器和用品：分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵。

四、过氧化氢酶（CAT）活性测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。

4℃×12000rpm离心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。

②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm4℃离心10min，取上清，置冰上待测。