ABTS_法测定葡萄酒抗氧化活性的研究
葡萄酒中的抗氧化物质及测定方法
葡萄酒中抗氧化物质及检测方法姓名：冯朝朝指导老师：阎贺静河北科技师范学院食品科技学院酿酒工程专业摘要：目的: 建立高效液相色谱.二苯基三硝基苯肼在线法评价葡萄酒清除自由基的活性，研究其抗氧化活性物质基础方法: 葡萄酒样品经分离，在柱后与工作液在三通处混合，于管中充分反应后，流经检测器记录反应信号，以水溶性维生素类似物为标准计算活性成分的抗氧化当量，比较不同地区葡萄酒总抗氧化能力及活性成分差异；结果: 通过定性分析得出葡萄酒样品中没食子酸、原儿茶酸、原花青素、咖啡酸和没食子酸乙酯对自由基具有清除活性自由基的作用，但原花青素二聚体香草酸、丁香酸和对香豆酸没有清除活性自由基的作用，不同地区葡萄酒总抗氧化能力不同，所含抗氧化活性成分也有较大差异，其中原花青素二聚体与没食子酸活性最强，目的: 建立高效液相色谱.二苯基三硝基苯肼在线法评价葡萄酒清除自由基的活性，研究其抗氧化活性物质基础方法: 葡萄酒样品经分离，在柱后与工作液在三通处混合，于管中充分反应后，流经检测器记录反应信号，以水溶性维生素类似物为标准计算活性成分的抗氧化当量，比较不同地区葡萄酒总抗氧化能力及活性成分差异；结果: 通过定性分析得出葡萄酒样品中没食子酸、原儿茶酸、原花青素、咖啡酸和没食子酸乙酯对自由基具有清除活性自由基的作用，但原花青素二聚体香草酸、丁香酸和对香豆酸没有清除活性自由基的作用，不同地区葡萄酒总抗氧化能力不同，所含抗其次是儿茶素和未知物，活性较弱的是咖啡酸#原儿茶酸和没食子酸乙酯；结论: 葡萄酒中含有多种抗氧化活性物质; 该法能够实现对天然产物抗氧化活性的分析，具有在线无损高通量筛选快速分析的特点。
关键词：葡萄酒；抗氧化活性；测定方法人们的生活水平一直在不断提高，葡萄酒也渐渐地在中国得到普及和流行，它已经发展成为新时代大众所喜爱的时尚饮品。
适量的消费葡萄酒可以降低心血管疾病、动脉粥样硬化、血小板聚集和癌症等多种疾病的发病率。
葡萄酒的各种保健功效被认为与这些物质的抗氧化能力有关。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结抗氧化物活性测定方法是通过对样品中的抗氧化物质含量和抗氧化活性进行定量分析，评估其对自由基的清除能力和抗氧化能力。
随着抗氧化研究的不断深入，测定方法也逐渐完善。
以下是对常见的抗氧化物活性测定方法的总结。
1. ORAC法（氧化应激反应活性测定法）：该方法通过测定样品清除自由基的能力来评估其抗氧化活性。
实验中，将样品与荧光试剂（如2,2'-azobis(2,4-dimethylvaleronitrile)）共同作用，观察其清除自由基的能力，并通过建立标准曲线计算样品的ORAC值。
2.DPPH法（1,1-二苯基-2-苦味基-苦味酸磷）：该方法是一种常用的快速测定抗氧化活性的方法。
实验中，将样品与DPPH稳定自由基共同作用，通过比色反应观察DPPH自由基被样品清除的程度，从而评估抗氧化活性。
3.ABTS法（2,2'-联氮双5-苯砜酸）：该方法通过ABTS离子自由基的生成和清除反应来测定样品的抗氧化活性。
实验中，ABTS与过氧化氢反应生成ABTS离子自由基，通过观察样品对其的清除能力来评估抗氧化活性。
4.FRAP法（亚铁离子还原能力）：该方法基于样品对人造抗坏血酸（Fe3+）的还原能力，通过测量还原后的Fe2+离子的生成量来评估抗氧化活性。
实验中，将样品与Fe3+离子反应生成Fe2+离子，通过比色反应来测定Fe2+的含量。
5. 碘标法（Iodine value）：该方法用于测定油脂、脂肪等样品的抗氧化活性。
实验中，将已知量的碘与样品中的不饱和化合物反应，在光反应下观察反应终点的颜色变化，并根据标准曲线计算样品的抗氧化活性。
6. 硝酸盐法（Nitrite method）：该方法用于测定样品中亚硝酸盐的含量，从而评估其抗氧化活性。
实验中，样品经过还原反应生成亚硝酸盐，然后与DANO（N-乙基-N-（2-苯基乙基）-对硝基苯胺）反应生成稳定的偶氮染料，通过比色测定反应终点的吸光度来计算样品中亚硝酸盐的含量。
抗氧化物活性测定方法总结
抗氧化物活性测定方法总结引言：抗氧化物活性测定在食品、医药、化妆品以及生命科学等领域具有重要应用。
目前，常用的抗氧化物活性测定方法主要包括化学法、生物法和物理法。
本文将对这几种方法进行总结。
一、化学法1.1.DPPH自由基法该方法是目前应用最广泛的抗氧化活性测定方法之一、通过DPPH自由基与抗氧化物发生反应，使DPPH自由基得以还原为无色溶液，测定溶液的吸光度来评估抗氧化活性。
1.2.ABTS自由基法该方法通过生成具有特定吸光度的ABTS自由基，评估抗氧化物对自由基的清除能力。
与DPPH自由基法相比，ABTS自由基法具有更高的灵敏度和稳定性。
1.3.羟自由基清除法该方法利用特定的化学反应，测定样品对羟自由基的清除能力，评估其抗氧化活性。
该方法适用于抗氧化物活性测定和体外抗氧化活性评价。
1.4.过氧化物清除法该方法测定样品对过氧化物的清除能力，通过测定生成的不稳定的自由基产物的分解速率，评估抗氧化活性。
该方法适用于测定生物样品的抗氧化活性。
二、生物法2.1.脂质过氧化抑制能力测定法该方法通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力，评估其抗氧化活性。
常用的指标包括丙二醛生成量、硫代巴比妥酸反应物（TBA）生成量等。
2.2.DNA损伤保护能力测定法该方法通过测定样品对DNA损伤的保护能力，评估其抗氧化活性。
常用的指标包括DNA链断裂率、碱基损伤率等。
2.3.超氧化物歧化酶（SOD）活性测定法该方法测定样品中SOD的活性，评估其清除超氧自由基的能力。
常用的指标包括抑制率、相对酶活等。
2.4.过氧化氢酶（CAT）活性测定法该方法测定样品中CAT的活性，评估其清除过氧化氢的能力。
常用的指标包括催化剂浓度、酶单位等。
三、物理法3.1.相对电子自旋共振法该方法通过测定样品中的自由基产物的电子自旋共振信号的强度，评估抗氧化物的活性。
常用的指标包括g值、线宽等。
3.2.高温氧化法该方法利用样品在高温条件下的氧化反应，评估其抗氧化活性。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性测定方法是评估化合物或材料抗氧化性能的一种重要手段。
随着抗氧化活性的研究日益深入，目前已经发展出很多种测定方法。
以下将介绍三种常用的抗氧化活性测定方法：DPPH自由基清除法、Fe2+/Fe3+还原能力法和ABTS自由基清除法。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色的自由基，常用于评估化合物或材料的抗氧化活性。
该方法基于DPPH自由基与抗氧化物质发生反应后，颜色由紫色变为淡黄色或无色。
测定方法简单，操作方便。
其原理是待测样品与DPPH混合后，通过电子或氢的转移反应，DPPH自由基将被清除，溶液颜色由紫色转变为淡黄色。
根据吸光度变化可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
2.Fe2+/Fe3+还原能力法：该方法基于还原能力测定抗氧化物质对Fe3+离子的还原能力。
常用的试剂是FeCl3溶液和TPTZ（2,4,6-三聚吡啶甲酸）、酸性pH缓冲液。
其原理是待测样品能够还原Fe3+离子为Fe2+离子，Fe2+离子与TPTZ反应生成有颜色的络合物，通过分光光度计测定络合物的吸光度变化，进而计算出还原能力。
较高的吸光度变化表示较高的抗氧化活性。
3.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双(3-乙基苯并噻唑啉-6磺酸)）自由基是一种蓝绿色自由基，其浓度在紫外可见光区域有最大吸收。
该方法基于ABTS自由基清除率来评估抗氧化物质的抗氧化活性。
该方法较DPPH法和还原能力法更为灵敏。
其原理是待测样品与ABTS自由基反应后，ABTS自由基将被清除，溶液颜色由蓝绿色变为无色或浅黄色。
通过测定吸光度的变化，可以计算出自由基清除率，进而评估抗氧化活性。
除了上述常用的抗氧化活性测定方法外，还有很多其它方法也被广泛应用于抗氧化活性的评估，如氧化还原测定法、Fenton反应法、还原剂抑制能力法等。
每一种测定方法都有其独特的原理和适用范围，研究人员可以根据具体的研究目的和样品性质选择合适的测定方法。
红酒中多酚化合物的提取及抗氧化性能评估
红酒中多酚化合物的提取及抗氧化性能评估红酒是一种古老而神秘的饮品，它在全球范围内都备受喜爱。
除了其美妙的香味和口感外，红酒中还含有丰富的多酚化合物，这对于我们的健康具有重要意义。
多酚化合物被广泛认为具有抗氧化的作用，可以帮助我们抵抗自由基的损伤，从而保护我们的身体免受疾病的侵害。
那么，如何提取红酒中的多酚化合物呢？首先，我们需要从红酒中分离出多酚化合物。
一种常用的方法是固相萃取法。
通过将红酒样品通过固相萃取柱，多酚化合物会被吸附在柱上，然后通过洗脱剂将其释放出来。
此外，还有一种更常见的方法是液-液萃取法。
通过将红酒样品与有机溶剂混合，多酚化合物会从水相转移到有机相中。
然后，通过蒸发有机溶剂，我们可以得到纯净的多酚化合物。
得到红酒中的多酚化合物后，我们接下来就需对其抗氧化性能进行评估。
抗氧化性能评估是衡量多酚化合物对抗自由基损伤能力的重要方法。
在这个过程中，我们通常会使用一些化学试剂来模拟体内的自由基环境，例如2,2-二苯基-1-苦肼基-苦肼（DPPH）和超氧阴离子自由基。
通过将多酚化合物与这些化学试剂反应，我们可以测量其抗氧化活性。
另外，还有一种常用的评估多酚化合物抗氧化性能的方法是通过细胞模型。
在这种方法中，我们通常会使用细胞培养技术来培养人体细胞。
然后，将多酚化合物加入培养基中，观察其对细胞的保护作用。
比如，我们可以通过测量细胞内的玻璃酸洗出物来评价多酚化合物的抗氧化能力。
除了提取和评估红酒中的多酚化合物，红酒的酿造过程也对其多酚化合物的含量和抗氧化性能有着重要影响。
事实上，红酒中的多酚化合物主要来自于葡萄皮和葡萄籽中的原花色素。
在葡萄酒的酿造过程中，这些原花色素会渗出到酒液中，进而形成多酚化合物。
此外，发酵的过程中也会产生一些酿酒酵母或乳酸菌等微生物，它们能够进一步转化葡萄中的化合物，使其具有更好的抗氧化性能。
总结起来，红酒中的多酚化合物是一种珍贵的天然物质，具有重要的抗氧化性能。
通过适当的提取方法和抗氧化性能评估，我们可以更好地了解红酒中多酚化合物的特性和功效。
3种抗氧化活性测定方法
3种抗氧化活性测定方法抗氧化活性是指物质对氧化过程的抑制作用，能够减缓或阻断自由基对细胞和组织的损害。
目前，常用的抗氧化活性测定方法主要包括DPPH 自由基清除法、ABTS自由基清除法和铁还原能力测定法。
以下将对这三种方法进行详细介绍。
1.DPPH自由基清除法：DPPH（2,2-二苯基-1-若氧基-苯基-π-苦味噁唑）自由基清除法是一种常用的抗氧化活性测定方法。
该方法是通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
DPPH自由基是一种紫色稳定的自由基，在接触到氢供体（抗氧化剂）后，会发生颜色变化从紫色转变为黄色。
可以通过测定样品溶液的吸光度来评估其抗氧化能力。
吸光度的降低表明样品对DPPH自由基的清除能力较强。
2.ABTS自由基清除法：ABTS（2,2'-联氨基双（3-乙基苯并噻唑））自由基清除法也是一种常用的抗氧化活性测定方法。
ABTS自由基是一种无色可溶性自由基，其生成主要通过氧化剂与ABTS反应而产生。
测定方法是将ABTS与过氧化氢反应，生成蓝色自由基溶液，然后将样品加入到溶液中，通过测定吸光度的变化来评估样品的抗氧化活性。
吸光度的降低表明样品对ABTS自由基的清除能力较强。
3.铁还原能力测定法：铁还原能力测定法是一种评估抗氧化活性的常用方法，通过测定样品对Fe3+还原为Fe2+的能力来评估其抗氧化能力。
在这个方法中，还原剂（如抗氧化剂）会与Fe3+反应，生成Fe2+，并且Fe2+的浓度可以通过测量其吸光度来确定。
浓度越高，吸光度越高，表明样品的抗氧化能力越强。
这三种抗氧化活性测定方法各有其优势和适用范围。
DPPH自由基清除法适用于评估样品对自由基的清除能力，但其结果受其他化合物的影响较大；ABTS自由基清除法对于水溶性和脂溶性样品均适用，但其结果也受其他化合物的影响；铁还原能力测定法适用于样品中还原型物质的测定，可评估样品对金属离子的还原能力。
因此，在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法来评估样品的抗氧化活性。
改良的ABTS_法及其在优化抗氧化活性物质提取中的应用_韩光亮
第5期
韩光亮 , 等 . 改良的 ABTS+ 法及其在优化抗氧化活性物质提取中的应用
621
倍子 酸 ) 、 catechin ( 儿 茶 素 ) 、 naringenin ( 柚 皮 素 ) 、 及 p coumaric acid( 香豆酸 ) 由 Sigma ( Saint Louis, MO) 公 司购 买。 Rutin( 芸香素 ) 由 Aldrich 化学试剂公司购买 , Cyanidin chloride ( 盐 酸 花 青 素 ) 、 kuromanin chloride 由 Extrasynthese ( Genay, France) 公司 购 买。Sodium metabisulphite ( Na2 S2 O5 ) ( 重 亚 硫酸 钠) 则由 BDH ( Toronto, ON ) 公 司 购买。 Blackcurrants ( Ribes nigrum L. cv. Ben Lomond) ( 黑 醋 栗 ) 来 自 加 拿 大 BC 省 Abbotsford 的 M & G Bros 农 场。所有 使用的试剂均为优级纯 , 标准样品为色谱 纯 , 用 乙酸来调 节 pH 值 , Milli Q 水被 用来配 制试剂 , 无水乙醇被用来稀释 ABTS + 和配制标准品。 酶标仪、 5 100 l 和 50 300 l 八通道移液器为分子生物学仪 器 公 司 产 品 ( Spectra max Plus384 型 , Molecular Devices Corporation, Sunnyvale, CA) 。Wiley 粉碎 机 ( ED 5 型 , Arthur H Thomas Co, Philadelphia, PA) 。Beckman 离心机 ( Avanti J25 I 型 , JLA 10 5 转 子 , Beckman Instruments Inc. , Mississauga, ON ) 。 Beckman 分光光度 计 ( Beckman DU 640 型 , Beckman Instruments Inc. , Fullerton, CA ) 。 Whatman N 541 滤 纸 ( Fisher Scientific, Nepean, ON) 。直径 25 mm 、 孔 径 0 45 m 的 PVDF 一 次性滤膜 ( Pall Gelman Sciences, Ann Arbor, MI) 。5ml 注射器。平底 96 孔 ELISA 板 ( Molecular Devices Corporation, Sunnyvale, CA) 。 1 2 方法 1 2 1 水果中抗氧化物质的提取 Blackcurrants 采集来后 , 立 即单个冷冻 , 存放于 - 36 的避光冷库中。使 用时取出 水果 , 加入一定量的液氮 , 在冷 库中以 用液氮 预冷的 粉碎机 粉碎样 品 , 粒度为 1 6 m, 密封保存于 - 36 的避光冷库中。 提取时 , 使用两种提 取液进 行提取。乙 醇的 浓度分 别为 39% 、50% 、67% 、84% 和 94% , 重亚 硫 酸钠 的 浓 度 分别 为 28 、 300、 700、 1100、 和 1372mg L。提 取液用 乙酸调 节 pH 至 3 8 ~ 4 1, 分别在 6 、 17 、 20 、 30 、 40 、 60 和 74 的条件 下完全提取 ( 以分光光度仪在 280nm 检测吸光度 , 当达到平台 时为提取完全 , 大约需要 1h) 。提取 后 , 以 8000~ 10000 g 的速 度 , 在 10~ 20 的总体积。 条件下离心 30min, 分离 上清 液 , 测量提 取液
抗氧化活性研究方法
ABTS法优缺点
3.优缺点
简便，快速，适合于大量样品的检测。 ABTS在与氢原子供体的反应中选择性差是此法的一个不足 ，它可与任何羟基化的芳香族化合物反应，这与它们的实 际抗氧化能力关，因此,TEAC值也包括对抗氧化不起作用 的羟基。
六.TBARS法
简介
脂质体系中氧化反应抑制或中止的判断主要通过测量被氧 化物的浓度，氧的去除或氧化产物的形成。因此，反应物 (不饱和脂肪酸，自由基等)的消失，氧化产物的定量可能 是判断氧化阶段的最合适方法。通过直接或者间接检测氧 的消失和自由基的电子自旋光谱，适用于氧化过程的初始 阶段。通常采用TBARS法来评价脂质的过氧化.
抗氧化活性研究方法
以酶标法清除DPPH自由基为主
目录
一.检测抗氧化活性的原因 二.自由基的产生及抗氧化的重要性 三.检测方法 四.DPPH法（原理，一般方法，酶标法） 五.ABTS法 六.TBARS法 七.铁离子还原能力(FRAP)
一.检测抗氧化活性的原因
1.天然植物中许多化学物质具有抗氧化活性 2.抗氧化剂有延缓衰老等功效，越来越受到人们关注 3.据文献记齐墩果酸型三萜有较好的抗氧化活性 4.抗氧化活性测试简单，快捷，经济
实验步骤 2.实验步骤
将样品用甲醇配制成一系列浓度,取0.15mL样品加入 2.85mLABTS自由基工作液，混合，放置10min后,在734nm 处测定吸光度。每份样品平行操作3次。 计算公式为：清除率(％)=[A(溶剂)- A(样品)] /A（溶剂）× 100％
A（溶剂）为2.85 mLABTS溶液与0.15mL甲醇混合后的吸度， A（样品）为2.85mLABTS溶液与0.15mL样品混合后的吸光度。
VitE清除DPPH自由基抗氧化量效曲线
葡萄酒中多酚物质抗氧化活性测定方法的研究
· 2011 年第 7 期 （ 总第 205 期 ） LIQUOR－MAKING SCIENCE ＆ TECHNOLOGY 2011 No．7(Tol．205)
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葡萄酒中多酚物质抗氧化活性测定方法的研究
史红梅， 丁 燕， 孙玉霞， 王恒振
济南 （ 山东省酿酒葡萄科学研究所 ， 山东
250100 ）
收稿日期 ：2011－03－30
法 ；根据实验所用仪器可分为 ：分光光度计法 、 荧光法 、 化 学发光法 、 色谱法等 。 本文主要介绍了葡萄酒中主要的多 酚物质 ，及其抗氧化活性的几种常用测定方法的优缺点 。
1
葡萄酒中的多酚抗氧化活性物质
多酚物质是含有酚羟基的物质 。 从化学结构上讲 ，是
苯环上联有一个或多个羟基的化合物 。 葡萄和葡萄酒中 的多酚物质按其化学结构可分为两大类 ： 类黄酮和非类 黄酮 [1]； 按分子质量可以分为单宁化合物 （ 相对分子量为
Vinayak V. Kedage 等 [5] 分别采用 TBARS、 铁离子还原能
力 （FRAP）、ORAC 法 、DPPH 法 、ABTS 法测定了 11 种欧 亚葡萄品种的抗氧化能力 ， 试验结果表明 ， 某些品种的葡 萄具有很高的抗氧化能力 ， 还表明 ， 这种抗氧化能力与葡 萄的多酚和黄酮含量有关 。
史红梅 （1979- ）， 女 ， 研究生 ， 工程师 ， 从事葡萄酒 、 果露酒新工艺新产品研究开发及天然产物分离的研究 。 作者简介：
96
酿酒科技
· 2011 年第 7 期 （ 总第 205 期 ） LIQUOR－MAKING SCIENCE ＆ TECHNOLOGY 2011 No．7(Tol．205)
摘 要： 对葡萄酒中酚类物质抗氧化活性检测方法的研究状况进行概述， 重点阐述了体外非酶法测定抗氧化活性 的几类方法， 比较了它们的优缺点； 分析了国内外抗氧化测定方法的使用现状， 并展望了抗氧化活性的测定方法。 关键词： 葡萄酒； 酚类物质； 抗氧化活性； 测定方法 中图分类号 ：TS262.6 ；TS261.4 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001－9286 （2011 ）07－0095－03
abts抗氧化实验流程
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试剂和仪器：ABTS（2,2'-叠氮苯并咪唑-6-磺酸铵）溶液（7 mM）。
abts检测原理
abts检测原理宝子们！今天咱们来唠唠ABTS检测原理这个超有趣的事儿。
ABTS呀，它是一种可用于检测抗氧化活性的试剂呢。
想象一下，在一个小小的化学世界里，ABTS就像一个特别的小侦探。
它原本是一种蓝绿色的溶液哦。
这个溶液里的ABTS分子就像是一群整装待发的小士兵，每个分子都有着自己独特的结构和性质。
当我们要检测某个东西的抗氧化能力的时候呢，就把这个待检测的样品，比如说可能是一种植物提取物，或者是某种营养补充剂，放进ABTS溶液里。
如果这个样品具有抗氧化性，那就像是这个样品里有一群超级英雄。
这些超级英雄呢，会和ABTS小士兵发生反应。
抗氧化物质会把ABTS小士兵从原本的蓝绿色状态变成另一种颜色，一般是变成绿色或者无色。
这就好比超级英雄把小士兵的蓝绿色制服给换了，或者直接让小士兵隐身了一样，超级神奇呢！那为啥会这样呢？这是因为抗氧化物质具有提供电子或者氢原子的能力。
ABTS分子呢，在溶液里是一种阳离子自由基的状态，它特别渴望得到电子或者氢原子来让自己变得更稳定。
当抗氧化物质出现的时候，就慷慨地把电子或者氢原子给了ABTS阳离子自由基。
这个过程就像是一场慷慨的赠予仪式。
ABTS得到了这些电子或者氢原子之后，它的化学结构就发生了变化，从而导致颜色也跟着改变啦。
而且呀，这个颜色变化的程度和抗氧化物质的抗氧化能力是成正比的哦。
如果我们放进ABTS溶液里的样品抗氧化能力特别强，那ABTS溶液的颜色就会变得特别淡，甚至完全无色。
就像超级英雄的力量特别强大，一下子就把所有的ABTS小士兵都改变了状态。
相反，如果样品的抗氧化能力比较弱，那ABTS溶液的颜色可能只是稍微变浅一点，从蓝绿色变成浅绿色这样。
我们还可以通过一些仪器，像分光光度计来精确地测量ABTS溶液颜色变化前后在特定波长下的吸光度。
根据吸光度的变化值，就能准确地算出这个样品的抗氧化活性啦。
这就像是给超级英雄们的能力打分一样，吸光度变化大的，抗氧化能力得分就高，变化小的，得分就低。
ABTS汇总
ABTS法抗氧化能力检测试剂配制方案汇总基于不同原理的各种体外抗氧化活性检测方法已广泛用于抗氧化剂的检测，这些方法虽然能够在不同的条件下反映抗氧化剂的多种功能特性，但也各有其局限性。
下面是ABTS法抗氧化法的一些基本原理：ABTS的英文全名为2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)，中文名为2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐，CAS号为：30931-67-0，分子式：C18H24N6O6S4，分子量548.68。
ABTS与过硫酸钾反应生成稳定的蓝绿色阳离子自由基ABTS·+，向其中加入被测物质，如果该物质中存在抗氧化成分，则该物质会与ABTS·+发生反应而使反应体系褪色，然后在ABTS·+这种自由基的最大吸光波长下(一般选择734nm或405nm)检测吸光度的变化来反映物质的抗氧化能力。
根据实验的需求收集查阅的部分文献基本上得出三个比较常用的ABTS的配置方法以及所需要的浓度和测试仪器。
如下：1.ABTS自由基清除实验参照文献[1]方法。
用pH 7．4的PBS配制5 mmol·L_1的ABTS储液，与MnO2反应后用0．2 tan的PVDF膜过滤，再用PBS(pH 7．4)稀释到734nm处吸光度为0．70士0．02，--20℃保存备用。
在反应体系中，于10 m-L比色管中加入50vL不同浓度的样品或参比溶液(DMSO)，再加入3mL的ABTS反应溶液，振荡摇匀，于室温下避光静置6min，测定溶液在734nm处的吸光值，并扫描UV-Vis光谱。
ABTS自由基清除率：(J％)=(1一瓜他)×100％，其中As为样品管的吸光值；Ao为对照管的吸光值。
2.[2]ABTS·+ 法测定葡萄酒抗氧化活性的研究ABTS工作液的配制。
将5mL7mmol/L ABTS和88μL140mmol/L过硫酸钾溶液混合,在室温、避光条件下静置过夜,形成ABTS·+储备液,该储备液在室温、避光的条件下表现稳定[3],使用前用无水乙醇稀释成工作液,要求其在734nm波长下的吸光度为0.70 ±0.02。
葡萄酒抗氧化活性测定方法研究
葡萄酒抗氧化活性测定方法研究酒类饮料是欧洲文化影响下，人们普遍喜爱的饮品，特别是小酌在商务活动中也尤为重要。
葡萄酒除了具备美味之外，也被称为“活性果酒”，因为它的营养成分中含有丰富的抗氧化物质，具有很强的抗氧化活性。
近年来，随着人们对葡萄酒的健康功效的日益重视，相关研究也变得越来越重要。
抗氧化活性对葡萄酒的质量品质有着直接的影响。
近几十年来，已有许多研究人员使用多种不同的测定方法，主要用于研究葡萄酒中抗氧化物质的种类、含量以及抗氧化活性。
其中，共振增强抗原子磁共振（SAR-EPR）技术、桂皮浓度测定、自由基化学性试验、脂肪过氧化脂质体破坏分子检测、氧化还原电位测定等为常用方法。
SAR-EPR技术是一种穿透性分析技术，主要用于测定葡萄酒中抗氧化活性物质的种类、含量以及抗氧化活性。
它利用的原子磁共振仪的反应原理，可以测定出酒类产品中各类抗氧化物质的含量，以及这些成分本身的抗氧化活性，提示出酒类产品的品质好坏。
桂皮浓度测定是用于测定葡萄酒中抗氧化物质的一种方法。
它采用的原理是：当抗氧化物质与桂皮混合在一起，桂皮可以通过氧化变色，从而测定出抗氧化物质的含量，并通过测定其褪色程度来评估抗氧化物质的活性。
自由基化学性试验近年来被越来越多的研究人员用来测定葡萄酒中的抗氧化物质。
该方法以木素为催化剂，自由基对木素进行氧化，从而产生明亮的蓝色荧光，可以根据测定结果确定葡萄酒中抗氧化物质的含量以及抗氧化活性。
脂肪过氧化脂质体破坏分子测定可以用于测定葡萄酒中脂质过氧化分子，这些分子是葡萄酒抗氧化活性的主要来源。
该方法是利用抗氧化剂在特定条件下可以抑制脂肪过氧化脂质体的形成，从而间接测定葡萄酒中的抗氧化活性物质的含量。
氧化还原电位测定被广泛用于测定葡萄酒中抗氧化物质的活性，它根据酒类产品在指定pH值下的氧化还原电位，来评估抗氧化物质的活性。
上述是抗氧化活性测定方法中常见的几种，它们对葡萄酒的质量品质有着重要的影响。
因此，为此，人们必须深入研究这些不同测定方法，以更准确地评估葡萄酒的抗氧化活性，从而提高葡萄酒的品质。
abts抗氧化实验流程
abts抗氧化实验流程Antioxidant experiment is an important process to determine the ability of a substance to inhibit the oxidation of other molecules. 抗氧化实验是确定物质抑制其他分子氧化能力的重要过程。
Antioxidants are crucial in preventing cell damage and maintaining overall health, making it important to have a standardized approach to conducting antioxidant experiments. 抗氧化剂对于预防细胞损伤和维持整体健康至关重要，因此有一种标准化的方法来进行抗氧化实验是非常重要的。
In this essay, we will discuss the importance of antioxidant experiments, the general procedure for conducting an antioxidant experiment, and the potential challenges and tips for conducting a successful antioxidant experiment. 在本文中，我们将讨论抗氧化实验的重要性，进行抗氧化实验的一般程序，以及进行成功的抗氧化实验可能面临的挑战和技巧。
First and foremost, it is important to understand the significance of antioxidant experiments in the field of biochemistry and health research. 首先，重要的是要理解抗氧化实验在生物化学和健康研究领域的重要意义。
抗氧化活性测定方法的比较
抗氧化活性测定方法的比较1.DPPH自由基清除法：DPPH是一种紫色自由基，具有很强的吸收特性。
该方法通过测定样品对DPPH自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
这种方法简单、快速，广泛用于抗氧化活性的初步筛选。
但是该方法只能反映样品对一种自由基的清除能力，不能全面评估其抗氧化性能。
2.ABTS自由基清除法：ABTS是一种蓝色自由基，其吸收波长与DPPH不同，具有更广的吸收范围。
该方法通过测定样品对ABTS自由基的清除能力来评估其抗氧化活性。
与DPPH法相比，ABTS法可以更全面地评估样品的抗氧化性能。
但是该方法需要较长时间才能得到准确结果。
3.过氧化氢清除法：该方法通过测定样品对过氧化氢的清除能力来评估其抗氧化活性。
过氧化氢是一种常见的氧化剂，可以导致细胞损伤。
该方法简单、快速，适用于多种样品的抗氧化活性测定。
但是过氧化氢法只能评估样品对过氧化氢的清除能力，不能反映其对其他自由基的清除能力。
4.铁离子还原能力法：该方法通过测定样品对Fe3+的还原能力来评估其抗氧化活性。
Fe3+是一种常见的氧化剂，可以与还原剂发生反应，形成Fe2+。
该方法简单、快速，适用于多种样品的抗氧化活性测定。
但是铁离子还原能力法只能评估样品对Fe3+的还原能力，不能全面评估其抗氧化性能。
5.脂质过氧化抑制能力法：该方法通过测定样品对脂质过氧化的抑制能力来评估其抗氧化活性。
脂质过氧化是一种常见的氧化反应，可以导致脂质的氧化损伤。
该方法能够全面评估样品的抗氧化性能，适用于多种样品的抗氧化活性测定。
但是该方法操作繁琐，需要较长时间才能得到准确结果。
总体来说，不同的抗氧化活性测定方法各有优劣。
在实际应用中，可以根据需要选择适合的方法进行测定。
此外，多种方法的综合比较可以更全面地评估样品的抗氧化性能。
红酒中植物提取物的抗氧化性能研究
红酒中植物提取物的抗氧化性能研究红酒一直以来被誉为健康的代表，而红酒中所含的植物提取物更是备受瞩目。
这些植物提取物具有丰富的抗氧化性能，对于保护人体健康具有重要意义。
本文将就红酒中植物提取物的抗氧化性能进行深入探讨。
首先，抗氧化性能是红酒中植物提取物备受关注的主要原因之一。
红酒中所含的植物提取物，如多酚类化合物（包括儿茶素、原花青素等），具有卓越的抗氧化能力，可以中和体内自由基，减少氧化损伤，保护细胞免受损伤。
其中，儿茶素是一种非常重要的活性成分，它不仅具有抗氧化作用，还具有抗炎、抗癌等多种生物活性。
研究表明，红酒中植物提取物的抗氧化性能可以有效预防和治疗一些慢性疾病，如心脑血管疾病、癌症等。
其次，红酒中植物提取物的抗氧化性能还与酿造工艺密切相关。
红酒的酿造过程中，植物提取物与葡萄皮和籽渗透物质相互作用，形成了一系列复杂的化学反应，包括聚合、缩合和氧化等。
这些反应会产生大量的多酚类化合物，极大地增加了红酒中植物提取物的含量和抗氧化性能。
因此，合理的酿造工艺能够提高红酒中植物提取物的抗氧化性能，使其更具保健功效。
另外，研究人员还发现，红酒中植物提取物的抗氧化性能受到多种因素的影响。
首先是葡萄品种的选择。
不同品种的葡萄所含的植物提取物种类和含量不同，其抗氧化性能也会有所差异。
其次是气候条件的影响。
日照、温度和降水等气候因素会影响葡萄生长和成熟的过程，进而对红酒中植物提取物的抗氧化性能产生影响。
此外，土壤类型、植物生长环境等因素也会对植物提取物的抗氧化性能产生一定的影响。
最后，红酒中植物提取物的抗氧化性能虽然备受赞誉，但仍存在一些问题。
例如，红酒中植物提取物含量的测定方法存在差异，导致不同研究结果之间存在差异性。
此外，植物提取物的剂量和摄入途径也需要进一步研究，以确保其抗氧化性能的充分发挥，同时避免潜在的毒副作用。
综上所述，红酒中植物提取物的抗氧化性能在保护人体健康方面具有重要作用。
通过合理的酿造工艺和葡萄品种选择，可以提高红酒中植物提取物的含量和抗氧化性能。
abts抗氧化实验步骤
abts抗氧化实验步骤ABTS抗氧化实验步骤引言：抗氧化实验是研究食物、药物或其他化合物抵抗氧化应激的能力的重要方法之一。
ABTS（2,2'-联氨基二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)）是一种常用的抗氧化实验试剂，通过测定其与自由基的反应来评估物质的抗氧化能力。
本文将介绍ABTS抗氧化实验的步骤。
一、实验前准备1. 准备所需试剂和仪器：ABTS、过氧化氢、乙酸乙酯、磷酸盐缓冲液、离心管、离心机、分光光度计等。
2. 预热分光光度计：将分光光度计设定在所需的波长（通常为734 nm），并预热至稳定状态。
二、制备ABTS溶液1. 称取适量ABTS粉末，并加入适量磷酸盐缓冲液，溶解后稀释至所需浓度（通常为7 mM）。
2. 加入相同体积的过氧化氢溶液（通常为 2.45 mM），混匀后静置室温下30分钟，使ABTS与过氧化氢反应生成自由基。
三、样品预处理1. 根据需要，将待测样品（食物、药物或其他化合物）制备成适当的浓度溶液。
2. 对样品进行必要的预处理，如过滤、离心等，以去除杂质。
四、测定抗氧化能力1. 取适量ABTS溶液，并加入等体积的样品溶液，混匀后静置室温下反应一段时间（通常为6分钟）。
2. 将反应液倒入离心管中，离心5分钟使样品沉淀。
3. 取上清液，用离心机离心5分钟，以去除残留的样品颗粒。
4. 用预热好的分光光度计测定上清液的吸光度（OD值）。
5. 测定空白对照组，即只加入样品溶液的ABTS溶液的吸光度。
6. 根据所测得的吸光度计算样品的抗氧化能力。
一般来说，吸光度越低，抗氧化能力越强。
五、数据分析1. 计算样品的抗氧化能力指数（TEAC值），通常使用标准曲线法或对照差法。
2. 根据所使用的方法，将样品的TEAC值转化为抗氧化能力指数单位，如mmol TE/100 g。
六、结果与讨论1. 根据实验结果，评估样品的抗氧化能力。
2. 结果的解释应结合样品的特性和实验条件，进行合理的讨论。
结论：ABTS抗氧化实验是一种常用的评估物质抗氧化能力的方法，通过测定样品与ABTS自由基的反应来评估其抗氧化活性。
葡萄酒抗氧化活性测定方法研究
葡萄酒抗氧化活性测定方法研究葡萄酒作为一种古老的饮品，其抗氧化性是葡萄酒营养价值的重要指标之一。
随着饮用葡萄酒的普及，对葡萄酒抗氧化活性的研究也变得越发重要。
抗氧化活性是由多种化学物质共同作用，如酚类、多酚类、维生素、抗氧化酶等组成，以起到抗氧化作用。
因此，研究葡萄酒抗氧化活性的测定方法十分重要。
目前常用的抗氧化活性测定方法有多种，例如DPPH自由基清除试验、邻苯二甲酸二酯抗氧化活性、ABTS中和实验，以及多酚、酚类的分析。
以上抗氧化活性测定方法都伴随一定的特定程序，它们的测定结果都具有良好的再现性和重复性，能够用来生产葡萄酒。
在实验室中，采用DPPH自由基清除试验来检测葡萄酒的抗氧化活性更为简便可靠。
它通过测定葡萄酒对DPPH自由基之间的作用来检测葡萄酒抗氧化活性。
实验方法是将葡萄酒和DPPH溶液混合，在特定时间内观察反应的过程，然后测定吸光度变化，以此作为判定抗氧化活性的依据。
另外，邻苯二甲酸二酯抗氧化活性测定法也是被广泛使用的抗氧化活性测定方法之一。
它以邻苯二甲酸二酯的无色状态，以及葡萄酒处理后邻苯二甲酸二酯呈褐色的颜色变化，作为抗氧化活性的依据。
此外，ABTS中和实验是另一种常用的抗氧化活性测定方法，通常也采用葡萄酒及其混合物的处理后，观察ABTS溶液的颜色变化，以此作为抗氧化保护物质的存在的依据。
此外，多酚类和酚类抗氧化活性的分析也是重要的抗氧化活性测定方法，通常采用高效液相色谱仪来检测葡萄酒中的多酚类和酚类的含量，以此作为其抗氧化活性的依据。
最后，除了上述常见的抗氧化活性测定方法外，还可以使用其他分析测试工具如紫外光谱法、气相色谱法等，用以研究葡萄酒及其混合物的抗氧化活性。
结论：葡萄酒的抗氧化活性是葡萄酒营养价值的重要指标之一，而其抗氧化活性的测定方法也是体现葡萄酒营养价值的重要技术手段之一。
目前有多种抗氧化活性测定方法，采用它们来测定葡萄酒中的抗氧化物质，可以更全面地了解葡萄酒抗氧化活性。
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第37卷 第11期2009年11月西北农林科技大学学报(自然科学版)Journal of Northwest A&F University(Nat.Sci.Ed.)Vol.37No.11Nov.2009ABTS・+法测定葡萄酒抗氧化活性的研究3李 华,李 勇,吴 莹,王 华(西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西省葡萄与葡萄酒工程技术研究中心,陕西杨凌712100)[摘 要] 【目的】确定AB TS・+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间和葡萄酒的最佳稀释倍数。
【方法】应用福林肖卡比色法(FC)测定36种葡萄酒样品的总酚含量(Total phenol index,TPI),从中选出9种总酚含量具代表性的葡萄酒样品,并采用AB TS・+法测定反应不同时间和稀释不同倍数葡萄酒样品的抗氧化活性。
【结果】AB TS・+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间为2～5min;红葡萄酒的最佳稀释倍数为0.2∶10～0.4∶10,桃红葡萄酒的最佳稀释倍数为1∶10～4∶10,白葡萄酒的最佳稀释倍数为3∶10～7∶10。
【结论】得到了AB TS・+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间和葡萄酒的最佳稀释倍数,且无需事先测定总酚含量,简化了试验步骤。
[关键词] 葡萄酒;抗氧化活性;AB TS・+法;反应时间;稀释倍数[中图分类号] TS262.6[文献标识码] A[文章编号] 167129387(2009)1120090208Research of antioxidant activity of wine s determinedby the ABTS・+methodL I Hua,L I Y ong,WU Y ing,WAN G Hua(College of Enolog y,Engineering Research Center f or V iti2V i nicult ure,N ort hwest A&F universit y,Yangli ng,S haanx i712100,China)Abstract:【Objective】The p resent st udy aimed to confirm t he best reaction time and wine dilution of t he AB TS・+met hod.【Met hod】The Folin2Ciocalteu colorimetry was used to measure t he total p henol in2 dex of36kinds of wines and t hen9kinds of rep resentative samples were selected f rom t hem,AB TS・+ met hod was used to measure t he antioxidant activities of wines wit h different reaction time and different di2 lutio ns,and was analyzed t he experiment result.【Result】The result s showed t hat t he best reaction time of t he AB TS・+met hod is2to5minutes,t he best dilution range,0.2∶10to0.4∶10for red wines,1∶10to 4∶10for ro se wines,and3∶10to7∶10for white wines.【Conclusion】The st udy has obtained t he best re2 action time and wine dilution to measure antioxident activity of wines by AB TS・+met hod,and t here is no need to measure total p henol content beforehand,so t he test p rocedure is simplified.K ey w ords:wine;antioxidant activity;AB TS・+met hod;reaction time;dilution 经过研究和分析发现,葡萄酒中含有大量的多酚类物质,如白藜芦醇、儿茶酚、表儿茶精、槲皮酮和芸香苷等,这些多酚类物质具有抗氧化活性,除了抑制低密度脂蛋白的氧化、预防心血管疾病以外,还有抗癌、抗炎症和抗血小板凝聚等功能[1],但不同的品种、气候、地理条件和工艺措施,导致葡萄酒中酚类物质在数量和种类上都有明显不同[223]。
因此,如何评价葡萄酒中酚类物质的抗氧化活性很有现实意义。
AB TS・+在414,645,734和815nm处均有特征吸收[4]。
Miller等[5]在1993年首次介绍了用AB TS・+法来评价一些化合物的抗氧化活性,即根据待测化合物清除AB TS・+引起的吸光度变化来评价其抗氧化活性。
此后,AB TS・+法成为一种被广泛采用的抗氧化活性测定方法,用于饮料和食3[收稿日期] 2009203206[基金项目] 陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项“陕西省葡萄与葡萄酒产业关键研究”(2007ZD KG209) [作者简介] 李 华(1959―),男,重庆市梁平人,教授,博士生导师,主要从事葡萄与葡萄酒研究。
E2mail:lihuawine@品[629]以及一些植物提取物[10211]抗氧化活性的测定,同时也被广泛用于测定葡萄酒的抗氧化活性[6,12214]。
但众多研究者未明确提出测定的最佳条件,不同的研究者采用的样品稀释方案和反应时间也不相同,使所得数据难以比较。
一些研究者运用AB TS・+法研究了酚类标准品浓度对其抗氧化活性的影响[6,14215]。
在此领域,Yu等[16]找到了标准品浓度与其抗氧化活性的线性关系,即抗氧化活性与其浓度的增加呈正相关;López2Vélez等[17]研究发现, 4种葡萄酒酒多酚纯品的浓度与抗氧化活性呈正相关,但很少有人以混合物为材料进行研究。
此外,抗氧化活性也与反应时间有关,一些研究者只设定几个时间点进行分析[7,14,16],而有些研究者观察、检测整个反应时间的动力学曲线[13,16219]。
这两种方法共同的缺点是没有考虑最佳反应时间,研究者采用不同反应时间得到的Trolox等价抗氧化能力T EA C (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity,以1L葡萄酒的AB TS・+清除能力以达到相同自由基清除能力所需Trolox的量表示)各不相同,而且对AB TS・+和葡萄酒样品的反应曲线还不明确。
本试验对AB TS・+法测定葡萄酒抗氧化活性的反应时间和样品稀释倍数进行研究,以确定AB TS・+法测定葡萄酒抗氧化活性的最佳反应时间和葡萄酒的最佳稀释倍数。
1 材料与方法1.1 材料、试剂与仪器供试36种葡萄酒样品由国内11个厂家提供,其中红葡萄酒23种,桃红葡萄酒3种,白葡萄酒10种(表1)。
AB TS[2,2′2Azino2bis2(32et hylbenzot hiazo2 line262sulfonic acid)]、Trolox(62hydroxy22,5,7,82 Tet ramet hylchroman222carboxylic acid)和没食子酸(Gallic acid),均为Sigma公司产品;其他化学试剂均为国产分析纯。
ΜV21700紫外可见光分光光度计,由上海精密科学仪器有限公司生产。
表1 供试的葡萄酒样品Table1 Wine samples样品Sample 编号Num葡萄品种Cultivar产地Location年份Vintage酒精度/%(V/V)Alcohol是否橡木桶陈酿Barrel aged红葡萄酒R21赤霞珠Cabernet Sauvignon宁夏Ningxia200312是Yes Red wine R22赤霞珠Cabernet Sauvignon宁夏Ningxia200312.5是Yes R23赤霞珠Cabernet Sauvignon宁夏Ningxia200611.5-R24赤霞珠Cabernet Sauvignon河南Henan200412是YesR25赤霞珠Cabernet Sauvignon河南Henan200412.5是YesR26赤霞珠Cabernet Sauvignon内蒙Neimeng200513是YesR27赤霞珠Cabernet Sauvignon北京Beijing200612否NoR28赤霞珠Cabernet Sauvignon河北Hebei200611.5否NoR29赤霞珠Cabernet Sauvignon河北Hebei---R210赤霞珠Cabernet Sauvignon新疆Xinjiang---R211蛇龙珠Cabernet Gernischt河南Henan200412是YesR212蛇龙珠Cabernet Gernischt宁夏Ningxia200611.5-R213蛇龙珠Cabernet Gernischt甘肃Gansu---R214三珠Blend宁夏Ningxia2005--R215三珠Blend新疆Xinjiang---R216梅鹿辄Merlot宁夏Ningxia200612-R217梅鹿辄Merlot甘肃Gansu---R218赤霞珠(30%)、玫瑰香(70%)Cabernet Sauvignon(30%)&Muscat Hamburg(70%)河南Henan200512否NoR219蛇龙珠、赤霞珠Cabernet Gernischt&CabernetSauvignon山东Shandong---R220解百纳Cabernet Sauvignon河北Hebei---R221玫瑰蜜Rose Honey云南Yunnan200512否NoR222法国野Blend云南Yunnan200312否NoR223玫瑰香Muscat Hamburg河南Henan200511.5否No 桃红葡萄酒S21玫瑰香Muscat Hamburg河北Hebei200611.5否No Rose wine S22玫瑰香Muscat Hamburg河北Hebei---S23水晶Blend云南Yunnan200312否No 19第11期李 华,等:AB TS・+法测定葡萄酒抗氧化活性的研究续表1 Contiued Table1样品Sample 编号Num葡萄品种Cultivar产地Location年份Vintage酒精度/%(V/V)Alcohol是否橡木桶陈酿Barrel aged白葡萄酒W21霞多丽Chardonnay河北Hebei2006 11.5否NoWhite wine W22霞多丽Chardonnay宁夏Ningxia200611-W23贵人香Italian Riesling河南Henan200412是Yes W24贵人香Italian Riesling北京Beijing200412否No W25贵人香Italian Riesling宁夏Ningxia200611-W26霞多丽、贵人香Chardonnay&Italian Riesling山东Shandong---W27雷司令Riesling宁夏Ningxia200611是Yes W28白诗兰Chenin Blanc新疆Xinjiang2006--W29赛美蓉Semillon甘肃Gansu---W210龙眼Longyan内蒙Neimeng200512否No1.2 总酚含量的测定参照王华[20]的方法,利用福林肖卡比色法(FC)测定总酚含量。