专家讲座核酸检测实验室建立与应用
核酸检测实验室建设方案书
核酸检测实验室建设方案书一、平面布局（一）实验室功能分区普通核酸检测PCR实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、核酸扩增、产物分析等四个区域。
全自动定量PCR实验室通常设置三个工作区，即试剂准备区、标本制备区、核酸扩增和产物分析区，普通PCR 实验室后两个区合并。
一体化自动化分析PCR 实验室原则上设置两个工作区，即试剂准备区、自动检测区，普通PCR实验室后三个区合并。
各个区可组合布置，也可分散布置。
（二）实验室平面布局实验室应在建筑物中自成隔离区，应有出入控制。
试剂准备区、标本制备区和核酸扩增及产物分析区等四个区域在物理空间上必须是完全相互独立的。
可以分散布置。
为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
不能将工作服带出。
每个工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内设备、物品混用。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
整体划分为∶PCR区域、独立缓冲间，及辅助房间区域，缓冲间可兼做防护服更换间。
当缓冲间的门设置互锁时，应在互锁门的附近设置紧急手动解除互锁开关。
保持合理梯度，保证气流从辅助房间流向核心区。
可降低扩增区内的气压以避免气溶胶从本区漏出。
（三）人流、物流流向人流∶工作人员→一更→二更→缓冲间→洁净走廊→缓冲→核心试验区域洁物∶原料→入口→样品接收→传递窗→洁净走廊→缓冲→核心试验区域污物∶污物→洁净走廊→传递窗→高压灭菌→传递窗→外部进入各个区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开时，不得将工作服带出。
这种人员的单向流动可以降低因人员的流动带来的交叉污染风险。
所有的物品进入实验区必须经过双扉互锁传递窗，利用传递窗消毒后才可进入，实验室内所有物品也必须经过传递窗才可以传递到实验室以外的清洁公共区。
这种物品有组织的单向流动可以降低物品的差错和混淆的风险。
儿童呼吸道感染病原体核酸检测专家共识解读PPT课件
一名3岁女孩，出现高热、咳嗽、呼吸急促等症状。核酸检测结果显示为呼吸道合胞病毒感染。经过对症治疗和 氧疗，患者病情逐渐稳定，并在两周内康复。
常见问题解答
问题一
核酸检测在儿童呼吸道感染中的意义是什么？
答
核酸检测能够快速、准确地确定病原体类型，为临床诊 断和治疗提供重要依据。
问题二
核酸检测的敏感性和特异性如何？
03
核酸检测在儿童呼吸道感染的诊断和治疗中具有重 要作用。
经验总结与展望
• 临床医生应熟悉和掌握各种病原体的核酸 检测方法和技术。
经验总结与展望
01 02 03 04
展望
未来可进一步完善儿童呼吸道感染病原体核酸检测的技术和方法。
加强临床医生对核酸检测技术的培训和教育，提高检测准确性和效率 。
探索将核酸检测与其他检测技术相结合，提高儿童呼吸道感染的诊断 和治疗水平。
03
儿童呼吸道感染可导致发热、咳嗽、喘息、呼吸困难等症状 ，严重者可出现并发症，如肺炎、中耳炎、心肌炎等，甚至 危及生命。
03
核酸检测技术原理与方法
核酸检测技术原理
核酸提取
01
从临床样本中提取核酸，通常采用化学或物理方法破坏病原体
细胞壁，释放核酸。
核酸扩增
02
利用PCR技术，在特定条件下将目标核酸片段进行指数级扩增
质量控制体系建立及持续改进
室内质控
实验室应建立室内质控体系，包括阴性对照、阳性对照、内标等，以确保实验结果的准确性和可靠性。同时，应定期 对室内质控数据进行统计分析，及时发现并解决问题。
室间质评
实验室应积极参加国家或省级临床检验中心组织的室间质评活动，以评估实验室的检测能力和水平。对于室间质评不 合格的项目，应进行整改并重新参加质评。
新冠病毒检测的生物安全管理与防护(新冠肺炎核酸检测学习专家课堂)
• （四）管控原则：生物安全实验室建设之初应做好对拟从事的病 原微生物进行危险度评估，一定要有科学、合理的总体构思和概 念设计，在此基础上应根据操作过程的梗概进行平面布局工艺设 计，然后再进行空调通风和电控等的具体设计。国内的生物安全 实验室一定要按照国务院发布的《病原微生物实验室生物安全管 理条例》进行管理。该条例对病原微生物的管理原则是：病原微 生物是分类管理，实验室是分级管理。
表1 生物安全柜技术参数及应用对象的异同
生物安全柜类型 I级
正面气流速度 （m/s）
0.36
II级 A1型
0.38-0.51
A2型
0.51
B1型
0.51
气流方式
前面进，后面出， 顶部通过HEPA过滤 器 70%通过HEPA在工 作区内循环，30% 通过HEPA排出到实 验室内 同II级A1，但箱内 排气管道呈负压 30%通过HEPA在工 作区内循环，70% 通过HEPA和气密管 道排出
• ⑴ 院内运输：运送人员进行二级防护并随身携带75%酒精，以便 发生意外时能及时处理。条件允许时，应配备标本转运监控装置。
• ⑵ 长距离运输：
• ①应当按照《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样 本运输管理规定》办理《准运证书》。
• ② 2019-nCOV标 本 运 输 包 装 属 于 A类，对应的联合国编号为 UN2814。
• 2、风险（risk）：危险发生的概率及其后果严重性的综合； • 3、风险评估（risk assessment）：评估风险大小以及确定是否可
容许的整个过程；
• 4、风险控制（risk control）：减低风险而采取的综合措施；
• 5、气溶胶（aerosol）： 是固态或液态微粒悬浮在气体介质中的分散 体系。其中的气体介质称为连续相，一般为空气；微粒称为分散相， 大小不一，一般粒经为0.001-100微米，属于气溶胶研究的对象。
核酸检测实验室(PCR),你了解吗
核酸检测实验室（PCR），你了解吗发表时间：2020-12-23T14:40:05.267Z 来源：《中国医学人文》2020年9月9期作者：曾庆凌[导读] 核酸检测实验室（PCR），你了解吗曾庆凌（眉山市人民医院；四川眉山620000）【中图分类号】R2 【文献标号】A 【文章编号】2095-9753（2020）09-0003-01 核酸检测实验室的建成是为疫情提供科学、有效、有力的数据支撑，对打响抗疫，赢得抗疫具有重大的意义。
核酸检测实验室又叫做基因扩增实验室，PCR 的中文翻译为橘核链式反应。
事先准备好设计的引物、耐热的 DNA 聚合酶以及反应原料，即可在体外进行 DNA 的复制过程。
首先将需要扩增的 DNA 模版进行加热使其变性解链。
之后待温度达到能使引物与待扩增的模版序列发生结合时可完成退火结合；核酸检测实验室一般需要包含以下四个独立区域即：核酸扩增区以试剂配置区、产物分析区、样品处理区。
核酸检测实验室可以有分散形式的也可以有组合形式的。
试剂选择、样品处理、核酸扩增以及产物分析四个步骤通常是一组完整实验需要经历的必要过程。
分散形式的核酸检测实验室。
分散形式的实验室就是指各个实验过程的独立单位没有紧密相邻，成分布状态。
对着这种分散形式的实验室由于相互之间几乎不产生相互干扰，因此没有特殊条件的需要。
组合形式的核酸检测实验室。
是指完成一组实验过程中每个实验用房彼此相邻，形成一个实验区域。
由于组合形式的核酸检测实验室各用房之间相邻因此会造成彼此之间的干扰，对此对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。
每个实验入口需要外设缓冲间，以减少室内空气之间的交换。
核酸检测是什么？核酸检测是临床用于艾滋病的一种检测方式。
如果在感染艾滋病毒以后进行核酸检测可以了解身体内含有的艾滋病毒素，对此可以在医生的指导下进行抗病毒药物的治疗。
如果在治疗后的 11 周经过核酸检测结果为阴性，则可以排除没有出现艾滋病毒感染的结果，但是需要定期复查。
【专家讲座】核酸检测实验室建立与应用PPT课件
6
5
7
1
2/8
25
0/5
0
2019/9/30
20
应用SAS9.0软件PARnaOlyBsiIsTo分f Pa析ram结eter果Estimates
ChiParameter
ChiSq
DF Estimate
Standard 95% Confidence
Error
Limits
Square Pr >
Intercept 0.0028 log10(Dose) 1 0.0011
2019/9/30
12
标准操作规程(SOP)的编写
核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
内标的作用 –质控整个反应。 –提示假阴性检测结果。 –监控反应的外部条件 –内标浓度要合适 –保持适度的内标失控.(<0.2%)
2019/9/30
18
核酸试剂灵敏度评估
概率单位回归分析 (PROBIT） 用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-
反应比较，反应结果应该是以二分类形式 表达的。 概率单位的回归方程为：
PROBIT Pi=A+BXi
2019/9/30
19
用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV 核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检 出限量及可信范围CI
序号 浓度 （IU/ml） 阳性数/重复数 概率
新冠核酸检测实验室质量控制和生物安全培训课件ppt
（一）实验室要求——检测要求
实验室应当将重点人员样本和一般健康筛查人群样本分区存 放、分批检测
在检测过程中，由于样品盖的打开、核酸提取的振动和离心 作用，可能产生气溶胶，存在感染和污染的风险。所有的实 验操作要轻柔，避免气溶胶的产生。
生物安全柜每次使用后应该用消毒剂消毒后紫外线照射至少 30min；核酸提取仪、荧光PCR等，离心机等设备每天用酒 精擦拭消毒；必要时用去核酸污染试剂擦拭上述设备，擦拭 完毕后必须用清水彻底清洁，以免出现假阴性。
加样枪切勿 插 进管内
加阴性对照和 室 内弱阳性质 控品 • 先加样本核酸
和 试剂阴性对 照 • 封膜或盖管 • 最后加阳性对照
4、核酸扩增间
个人防护：本区域专用实验服
主要功能： 核酸扩增
核对扩增程序 确保反应板或管密封
离心、上机
结果判定严格按照试剂盒说明书进行
扩增结束后，严禁开盖，及时清理反应板，按一般医疗废弃物处理
核酸提取间
产物分析间 核酸扩增间
试剂准备间
缓冲间
缓冲间
缓冲间
缓冲间
人员流动严格按照单一方向，试剂准备区→核酸提取间→扩增区→ 扩增产物分析区 不同工作区域内的设备、物品不得混用 不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）
1、采样——收样
标本接收人员的个人防护：按采样人员防护装备执行 样本双签收：标本运送人员+接收人员
）
4
二、实验室质量控制
实验室要求
质量控制
（一）实验室要求
1、实验室基本要求：
➢符合《病原微生物实验室生物安全管理条例 ➢具备经过卫生健康行政部门审核备案的ห้องสมุดไป่ตู้物安全二级及 以上实验室条件 ➢ 具备基因扩增检验实验室条件。
核酸检测建设工程施工方案
核酸检测建设工程施工方案一、工程概况随着新冠病毒疫情的发展，核酸检测成为了疫情防控的重要手段。
为确保疫情防控工作的顺利进行，提高核酸检测效率，我们计划在原有实验室基础上，新建一座核酸检测实验室。
本项目位于某地进行建设，主要包括实验室土建工程、设备采购及安装、系统调试等。
二、施工目标1. 确保工程质量：严格按照国家相关规范和标准进行施工，确保实验室质量达到设计要求。
2. 保证工程进度：合理安排施工计划，确保工程按时完成。
3. 确保施工安全：加强施工现场安全管理，确保施工人员生命安全和工程安全。
4. 保证环境保护：施工过程中，做好环境保护工作，减少对周边环境的影响。
三、施工内容1. 土建工程：包括实验室主体结构、内部装修、通风空调、给排水、电气等施工。
2. 设备采购及安装：采购核酸检测设备、实验室仪器、通风设备等，并负责安装调试。
3. 系统调试：包括实验室设备、通风系统、监控系统等调试，确保各项设备正常运行。
四、施工组织与管理1. 施工组织：项目成立专门施工组织机构，负责施工过程中的协调、管理和监督。
2. 人员配置：根据施工内容，合理配置施工人员，确保施工顺利进行。
3. 质量管理：实施严格的质量管理制度，对施工过程进行全程监控，确保工程质量。
4. 进度管理：制定详细的施工计划，明确各阶段施工任务，确保工程按时完成。
5. 安全管理：加强施工现场安全管理，定期进行安全教育培训，提高施工人员安全意识。
6. 环境保护：制定施工现场环境保护措施，严格执行环保法规，确保施工过程中对周边环境的影响降到最低。
五、施工技术措施1. 土建工程：根据设计图纸，按照相关规范进行施工，确保实验室主体结构安全可靠。
2. 设备安装：遵循设备安装规范，确保设备安装牢固、运行稳定。
3. 系统调试：在设备安装完成后，进行系统调试，确保各项设备正常运行。
六、施工质量保证1. 材料验收：对进场的材料进行严格验收，确保材料质量符合国家标准。
核酸检测室-实验室初步规划与布局
核酸检测室-实验室初步规划与布局XXX布局规划建设依据：XXX生物安全通用要求»、«生物安全实验室建筑技术规范»、«临床扩增实验室管理暂行办法»、«检测和校准实验室能力认可准则在基因扩增检测领域的应用说明»。
实验室分为洗消区、样品受理区、换衣区、试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区，并设有专用走廊，其中试剂准备区、样品处理区、扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域应设缓冲间，工作区与缓冲间宜安装连锁装置。
不同功能的工作区应是分隔独立的，各工作区有明显的标志，不能直通，如果紧密连接，需安装物品传递窗，不得逆向流动。
实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。
各工作区顶部应该安装紫外灯，紫外灯波长为254mm,每20㎡一支40W的紫外灯。
一、各区的功能洗消区：放置清洁用具,清洗实验用具等。
样品受理区：样品的接收与受理。
换衣区：换工作服。
试剂准备区：试剂的配制、分装和保存。
样品处理区：样品登记、分装;核酸提取、保存。
扩增区：扩增反应混合物的配制、加样。
扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
扩增前区与扩增后区应严厉分隔，须使用不同的房间，两区之间有一定的间隔。
二、PCR实验室主要设备洗消区：烘箱样品受理区：电脑、打印机。
试剂筹办区：仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等，加样器、天平除了要专用外，还应有定期校准。
试剂分装应在超净台中进行，扩增反应混合液应使用分子生物学级的。
标本制备区：仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、干浴器、混匀器、水浴锅、冰箱等。
扩增区：扩增区的主要仪器是PCR扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、冰箱等。
PCR扩增仪需进行校准。
并配备UPS电源，以防止由于电压的波动，停电对扩增效果的影响。
扩增产物分析区：本区所使用的仪器设备有测序仪、实时荧光定量PCR仪、加样器等。
核酸扩增检测实验室建设及质量管理体系建立(新冠肺炎核酸检测学习专家课堂)
室内外空气交换，也用于更换工作衣和工作鞋。 2 各区互相独立，各区必须有明确的标识，各区物品专用，
设置相应的仪器和设备。 3 各区内的任何物品不可移至其它区。各区之间应有传递窗
，用于传递实验过程中的物品。
• 3、各区的功能： • 1）试剂准备区：负责试剂的配制、分装、主反应混合液配制和 • 保存， 处于正压状态，以保证试剂的稳定性。 • 2）样品制备区：负责样品登记、分装，核酸提取纯化、保存和 • 加样，配有生物安全柜。处于负压状态。 • 3）基因扩增区：负责核酸扩增及其产物的测定； • 4）产物分析区：负责扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
• 4、工作流向 •：
•
试剂准备区 样品制备区
基因扩增区 产物分析区
5、避免污染的设计
• 如何避免污染是核酸扩增实验室设计的关键。因此，围绕这一核 心问题展开实验室布局、空调通风系统设计和风量控制等。一般 的核酸扩增实验室建设具有如下要求。
• 1）实验室现场要求高
• ① 需要标准的四区分离和气流控制。 • ② 每个独立的实验区都有一个缓冲间，同时，每个区域均采用气
核酸扩增检测实验室建设及质量管理体系建立
主要内容
一、核酸扩增实验室的分区设计及各区的功能。 二、“无基因”或“无核酸”概念。 三、实验室清洁及防止标本间交叉污染和扩增产物遗留污染的方法。 四、质量管理体系的建立（标准操作程序、实验记录表格等的编写）。
• 国外新冠疫情仍在蔓延，国内防控措施正确获得巨大成功， 进入了常态化防控和复工复产阶段。不过，有时个别地区仍出现 聚集性病例，需要快速有效的方法及时对疑似病人进行诊断，病 毒核酸检测作为诊断新冠病毒感染的金标准，可为诊断提供直接 证据。因为新冠病毒暂定为第二类病原微生物，而且致病力尚未 完全明确，因此，操作者存在较大的感染风险。
核酸实验室培训计划方案
核酸实验室培训计划方案一、培训目标1. 了解核酸实验室的基本原理和作用；2. 掌握核酸提取、PCR扩增、蛋白质电泳等实验技术；3. 熟悉实验室安全操作规程，具备化学品和实验仪器的正确使用方法；4. 提高实验室工作的操作技能和实验数据的分析能力。
二、培训内容1. 核酸实验室概论（1）核酸的结构和功能（2）核酸实验室的作用和意义（3）实验室安全操作规程2. 核酸提取技术（1）基本原理和方法（2）实验操作步骤（3）常见问题的解决方法及注意事项3. PCR扩增技术（1）基本原理和方法（2）样本准备和反应体系的设计（3）实验操作步骤（4）PCR产物的分析和应用4. 蛋白质电泳技术（1）基本原理和方法（2）凝胶制备和电泳条件的设置（3）实验操作步骤（4）蛋白质定量和分析5. 实验室安全操作（1）化学品的存储和处理（2）实验仪器的使用和维护（3）紧急情况的处理和应急措施6. 实验数据的分析和报告（1）实验结果的记录和整理（2）数据的统计分析方法（3）实验报告的撰写和审核三、培训方法1. 专业讲座：邀请相关领域的专家教授讲解核酸实验室的原理和技术；2. 实验操作演示：由专业技术人员进行实验操作的演示，让学员可以观摩并学习；3. 实验室实训：组织学员进行实验操作的训练，加强实际操作能力；4. 案例分析：通过真实案例进行分析和讨论，加深学员对实验数据分析的理解；5. 交流讨论：组织学员进行实验经验和技术交流，促进学习氛围的形成。
四、培训评估1. 学员学习情况的评估：制定学习任务和测试考核内容，以监测学员的学习情况；2. 培训效果的评估：通过实验操作和考核成绩来评估培训效果，并根据评估结果进行课程调整。
五、课程实施计划1. 培训周期：3个月2. 定期课程安排：每周安排2-3次课程，每次2-3个小时3. 实训场地：利用实验室或专门的实训基地进行实验操作和演示4. 培训资源：提供相关教材、实验仪器和化学试剂，保证培训设施和材料的完善。
新冠肺炎病毒核酸检测实验室PCR负压实验室建设要求及技术要点
新冠肺炎病毒核酸检测实验室PCR负压实验室建设要求及技术要点一.PCR实验室系统要求新冠PCR（核酸检测实验室）为加强型二级生物（P2+）安全实验室，对室内环境要求较高，根据本项目现场情况，将实验室分为三个区域，分别为试剂配置区、样品制备区、扩增分析区。
二.设计规范及标准《生物安全实验室建筑技术规范》（GB50346-2011）《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）《工业建筑供暖通风与空气调节设计规范》（GB50019-2015）《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》（WS233-2017）《洁净厂房设计规范》（GB50073-2013）《洁净室施工及验收规范》（GB50591-2010）《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》（卫办医政发【2010】194号）《医学生物安全二级实验室建筑技术标准》CECS662-2020三.流程布局PCR实验室按流程布局分为：★试剂准备室设计为正压（+25Pa）,缓冲室设计为正压（+10Pa）。
★样品处理室设计为正压（+15Pa），缓冲室设计为正压（+10Pa）。
★扩增分析区设计为负压（-15pa），缓冲室设计为负压（-5Pa）。
★PCR专用走廊设计为正压（+5Pa）。
核心工作间不设可开启外窗。
人流走向：缓冲通道→试剂准备区→缓冲通道→样品制备区→缓冲通道→扩增分析区；物流走向：试剂准备区→样品制备区→扩增分析区→灭菌消毒→医废暂存间；气流流向：缓冲通道→试剂准备区/样品处理区/扩增分析区→高效过滤→排至室外。
PCR实验室内部的气体需经过滤消毒后排放，杜绝有害微生物泄露，对工作人员造成危害及污染环境。
四.洁净系统技术要求1、吊顶部分实验室隔墙与吊顶均选用50mm厚玻镁彩钢板，钢板厚度0.426mm，夹心板燃烧性能为不然性，环氧树脂底漆，具有耐化学腐蚀性面漆，双面覆膜，企口白灰色，铝合金采用R50毫米优质专用配套型材。
★提供玻镁彩钢板的防火检测报告。
新冠病毒核酸检测实验室设计与建设SICOLAB
新冠病毒核酸检测实验室设计与建设SICOLAB一、PCR实验室设计规范PCR（聚合酶链式反应）实验室又叫基因扩增实验室《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字[2002]8号）二、PCR实验室简介及分类SICOLAB实验室内会为核酸检测准备4个区域，分别是试剂准备区、样本准备区、扩增区、扩增产物分析区。
其中试剂准备区负责接收患者样本，样本准备区则负责进行对样本的核酸进行提取，扩增区则是扩增复制核酸样本，扩增后分析区就是分析样本内核酸能能否与标准样配对，通过仪器检测的到，就判断成阳性，如果检测不到就是阴性。
PCR实验室分类：普通PCR实验室、全自动定量PCR实验室、一体自动化分析PCR实验室。
三、PCR实验室功能区域SICOLAB试剂准备区：是PCR实验室中最为“洁净”的区域，它不应有任何核酸成分的存在，否则将严重影响检测结果的准确性。
标本的制备应在生物安全柜内进行。
主要设备：冰箱、低温冰箱、混匀器、微量加样器（0.2-1000ul）、移动紫外灯。
样本准备区：核酸提取、贮存，扩增反应管制作。
主要设备：冰箱、超低温冰箱、高速冷冻离心机、混匀器、微量加样器（0.2-1000ul）、移动紫外灯、水浴锅、生物安全柜。
扩增区：扩增反应体系的配置和核酸的提取加入要在扩增区内进行。
主要设备：扩增仪、离心机、微量加样器（0.2-1000ul）、移动紫外灯。
扩增产物分析区：产物分析区最后一个工作区域，用于扩增片段的分析。
主要设备：凝胶成像分析仪、电泳仪、电泳槽、微量加样器（0.2-1000ul）、移动紫外灯。
四、PCR实验室工作流向SICOLAB进入各工作区域必须严格按照单一方向进行。
即试剂准备区→样本准备区→扩增区→扩增产物分析区。
五、PCR实验室压差及气流控制SICOLAB1）试剂准备区是工艺流线的开始，设计为正压或常压，避免外界环境的污染。
2）样品制备区一般为常压或负压，大多数情况下设计成二级生物安全实验室，避免实验产物溢出，污染外界环境。
医院新冠核酸检测实验室设计及施工技术规范及要求--厦门铭珺实验室建设
医院新冠核酸检测实验室设计及施工技术规范及要求一、设计满足技术规范外且达到以下要求：1、实验室操作对象：新型冠状病毒核酸检测。
2、实验室级别：生物安全二级加强型（P2+）。
3、技术要求：（1）墙面及顶面：墙面、顶面采用净化彩钢板。
（颜色甲方选择）房间内墙体、地面、顶板交接处无死角。
（2）地面：采用优质2mm厚防静电PVC胶地板（颜色甲方选择），阴角：要求采用圆弧形密封，缓冲间：要求门能自动连锁，密闭（3）门窗：均采用手动门，表面均采用钢板板饰面，钢板色调与墙面协调，具气密封，门洞净尺寸为900*2100mm（以实际为准），按照要求设置气密观察窗，窗户采用彩钢板专用窗料，与墙面协调，具气密封。
（4）分区明确：清洁区---缓冲区---污染区，功能分区：试剂准备区---标本制备区---扩增区及产物分析区（要求配备：更衣室，淋浴间）（5）气流组织要求：主实验区负压-15Pa～-20Pa;相邻房间压差10 Pa以上，洁净度：十万级。
（6）实验室主入口的门、放置生物安全柜实验间的门应可自动关闭；实验室主入口的门应有进入控制措施。
（7）实验室工作区域外应有存放备用物品的条件。
（8）应在实验室或其所在的建筑内配备压力蒸汽灭菌器或其他适当的消毒、灭菌设备，所配备的消毒、灭菌设备应以风险评估为依据。
（9）应在实验室工作区配备洗眼装置，必要时，应在每个工作间配备洗眼装置。
（10）应在操作病原微生物及样本的实验区内配备二级生物安全柜（甲方采购）。
（11）应按产品的设计、使用说明书的要求安装和使用生物安全柜。
（12）如果使用管道排风的生物安全柜，应通过独立于建筑物其他公共通风系统的管道排出。
（13）实验室入口应有生物危害标识，出口应有逃生发光指示标识。
（14）实验室设计缓冲间和核心工作间，缓冲间可兼作防护服更换间。
必要时，可设置准备间和洗消间等，缓冲间的门宜能互锁。
如果使用互锁门，应在互锁门的附近设置紧急手动互锁解除开关。
核酸检测实验室生物安全要求(新冠病毒核酸检测专题培训课件)
一级生物安全防护
医用外科口罩、乳胶手套、工作服，可戴医用防护帽
标本 运送人员
口罩气密性测试
PPCAR实R验T室 T检H测R安E全E
医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册
基本要求
• 标本灭活及检测应当在生物安全二级实验室进行 • 同时采用生物安全三级实验室的个人防护 • 制定实验室生物安全体系文件（包括管理手册、程序文件、作业指导书、记录）
压力排风系统
风机
生物安全柜 摆放位置
气流的完整性容易受人员走动、窗 户的开关、门的开启和关闭、空调 运行等因素的影响。为避免上述因 素的干扰，生物安全柜应放在远离 人员活动、物品流动以及可能会扰 乱气流的地方。在安全柜的后面、 左右两侧面各留30 cm的空间，以利 于安全柜的维护。上端应留30～35 cnl空间，以便准确测量空气通过排 风过滤器的速度及排风过滤器的更 换。
核酸提取和检测 安全要求
在生物安全柜内操作
实验结束后安全要求
实验室空气消毒
紫外消毒30分钟或紫 外消毒机照射消毒1小 时。必要时可采用核 酸清除剂等试剂清除
实验室残留核酸。
工作台面消毒
每天实验后，使用0.2% 含氯消毒剂或75%酒精 进行台面、地面消毒
生物安全柜消毒
医疗废物垃圾袋包扎 后用0.2%含有效氯或 75%酒精喷洒外表面。 试管架、实验台面、 移液器等用75%酒精擦 拭。关闭生物安全柜， 紫外灯消毒30分钟。
手部 防护
足部 防护
防护 面屏
手消毒
呼吸
医用垃
防护
圾袋
13
14
l 呼吸道防护是核心！ Ø 穿戴时要先戴口罩再戴帽子，才能保证最后脱口罩。注意摘除口罩的场 所是否安全！
核酸实验室可行性研究报告
核酸实验室可行性研究报告一、研究背景核酸实验室是一种用于分析和检测DNA和RNA等核酸序列的实验室。
在近年来，随着基因工程和生物技术的发展，核酸实验室的应用范围日益扩大，包括但不限于疾病诊断、病毒检测、基因编辑、DNA指纹鉴定等领域。
然而，目前我国尚缺乏一家专业的核酸实验室，以满足日益增长的核酸检测需求。
因此，本报告旨在对建设一家核酸实验室的可行性进行深入探讨。
二、市场需求分析1. 发展前景：近年来，疾病的早期诊断和治疗已成为医疗领域的重点。
核酸检测技术的发展使得相关疾病可以更早被发现，有助于提高治疗效果和提升生活质量。
因此，核酸实验室在未来将有着广阔的市场前景。
2. 竞争情况：虽然核酸实验室的市场潜力巨大，但目前我国仍缺乏专业的核酸实验室，这意味着创业者将面临较少的竞争压力。
3. 潜在客户：核酸实验室的潜在客户群体包括但不限于医院、疾控中心、科研机构、生物科技企业等单位。
这些客户对核酸检测有着迫切需求，将为核酸实验室的发展提供有力支持。
三、技术可行性分析1. 设备需求：建设核酸实验室需要一系列先进的实验设备，包括PCR仪、电泳仪、实时荧光定量PCR仪、蛋白质分析仪等。
这些设备的选购将直接影响实验室的检测能力和服务水平。
2. 人员需求：为了保障实验室的正常运转，需要拥有一支专业的团队，包括但不限于实验员、技术员、研究员等。
这些人员需要具备较高的专业技能和实验经验，以确保实验室的检测结果准确可靠。
3. 资金投入：建设一家核酸实验室需要相当的资金投入，包括设备购置、人力成本、实验室租赁费用等方面。
因此，创业者需要充分评估成本，确保资金充足。
四、市场营销策略1. 宣传推广：在核酸实验室建设完成后，应积极开展宣传推广工作，包括但不限于媒体报道、专业展会参加、科普活动举办等，以提升实验室的知名度和美誉度。
2. 客户维护：建设一家核酸实验室并非难事，难的是如何留住客户。
因此，实验室应致力于提供高质量的检测服务，并建立健全的客户维护体系，以留住老客户，吸引新客户。
新冠病毒核酸检测实验室新建，设计方案拿去~
新冠病毒核酸检测实验室新建，设计方案拿去~新冠病毒核酸检测实验室应当配备与所从事的实验活动相适应的实验设施、设备及个体防护措施，满足《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2008）等国家标准规定；新冠病毒核酸检测实验室应当符合生物安全二级实验室建设标准，样本制备区推荐按《病原微生物实验室生物安全通用准则》（WS 233-2017）、《临床基因扩增检验实验室工作导则》（卫办医政发〔2010〕194号）建设加强型生物安全二级实验室。
一、实验室布局基本要求（一）分区布局。
采用实时荧光PCR仪进行新冠病毒核酸检测的实验室，至少设置三个区域：试剂准备区、样本制备区、扩增分析区，如实验室采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则样本制备区和扩增分析区可合并；条件允许，可增设单独的产物分析区和高压消毒区。
各区域可以采用集中布置或分散布置形式，但物理空间上必须完全相互独立。
实验室各区域面积应满足设备摆放、实验操作和样本检测量的需求，总面积建议80平方米以上。
（二）各分区建设要求。
在采用集中布置形式的实验室中，建议设单一走向的专用走廊，各区应相对独立分区，设立缓冲间，各区要设置传递窗传递样本等物品，采取定向气流控制原则进行设计。
各区域在使用中应当始终处于完全的分隔状态，相邻相通区域不能有空气的直接相通，各区域缓冲间、传递窗的门应能互锁。
1.试剂准备区：用于保存和准备新冠检测相关的试剂。
该区域相对独立，应为正压或常压。
若为正压，与室外大气压的压差值可为10Pa～15Pa。
2.样本制备区：用于样本的处理、核酸的提取和扩增反应体系中模板的加入。
该区域涉及新冠标本处理，面积应大于其他区域。
应按照加强型生物安全二级实验室进行建设，该区域压力为负压，核心工作区相对于大气压宜为-20Pa～-30Pa缓冲区相对于大气压宜为-10Pa。
缓冲区面积稍大，以满足生物安全二级病原微生物实验室个人防护装备穿脱的需求。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2020/1/23
16
核酸实验室污染后措施
实验室污染后，如何处理？
通风 次氯酸钠溶液（扩增区不宜使用） HCL溶液（吸头） 紫外线（固定、移动） 酒精喷洒（空气）
应设计有备用实验室 : 如开设独立的报 告发放区作为备用
2020/1/23
17
血筛核酸检测的内标的作用
中心理念：监测全程的实验过程包含病毒核 酸提取、反转录及扩增过程的效率。
合格标本发布结果
单项目反应性 无反应性
阳性或可疑 结果淘汰
11
标准操作规程(SOP)的编写
核酸实验室设置与管理规范 核酸实验室标本检测流程 核酸实验室岗位职责 核酸实验室关键试剂管理规范 核酸实验室仪器设备管理规范 核酸实验室检测标本管理规范 核酸实验室室间质量评价规范 核酸实验室记录管理制度 核酸实验室生物防护规范 核酸反应性献血者追踪规程 核酸实验室检测应急措施
6
5
7
1
2/8
25
0/5
0
2020/1/23
20
应用SAS9.0软件PROBIT分析结果
Analysis of Parameter Estimates Standard 95% Confidence Chi-
Parameter DF Estimate Error Limits Square Pr > ChiSq Intercept 1 -4.6852 1.5659 -7.7542 -1.6161 8.95 0.0028 log10(Dose) 1 4.8000 1.4699 1.9190 7.6810 10.66 0.0011
每个循环可以生成100-1000个复制物， 在15-30分钟内可增加10亿倍复制物
以2n扩增，2～3 h就能将待 扩目的基因扩增放大10亿倍
2020/1/23
5
TMA的优点
自动化程度高 灵敏度高
扩增效率高：10n
缺点
不能绝对定量
2020/1/23
6
PCR的优点
缺点
易于自动化 灵敏度高 扩增效率高
合格标本发布结果
2020/1/23
待查标本复检
合格标本
不合格标本
单人份拆分 反应性标本
淘汰 不合格标本
9
检测流程(2):常规筛查合格单人份标本检测流程
2020/1/23
10
检测流程(3):平行检测流程
常
规
检
样测
本
清
点 交
核 酸 单
接份
检
测
不合格标本 合格标本
阴性标本
反应性标本
2020/1/23
阳性或可疑 结果淘汰
汇集拆分过程繁琐
拆分可减低非反应性比率
2020/1/23
7
核酸试剂质控
试剂的确认 试剂运输过程的控制(温度\条件\时限) 灵敏度的要求 内标的要求
试剂涵盖的基因型
2020/1/23
8
检测流程(1):常规筛查合格汇集标本检测流程
标本清点、离心 常规检测
合格标本 标本交接、电脑锁定
8 人份汇集 核酸提取 扩增检测 阴性标本
核酸检测实验室建立与应用
核酸扩增检测实验室的建立
人员 场地 检测方法选择 实施方案
依据：卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》
（卫医发[2002]10号）
2020/1/23
2
核酸实验室人员要求
资质:经过临检中心PCR培训班培训并取 得上岗证；通过血站核酸实验室岗前培 训考试合格。
内标的作用 –质控整个反应。 –提示假阴性检测结果。 –监控反应的外部条件 –内标浓度要合适 –保持适度的内标失控.(<0.2%)
2020/1/23
18
核酸试剂灵敏度评估
概率单位回归分析 (PROBIT） 用于描述剂量-反应或不同因素间的剂量-
反应比较，反应结果应该是以二分类形式 表达的。 概率单位的回归方程为：
PROBIT Pi=A+BXi
2020/1/23
19
用国际标准品稀释成不同浓度评估血液HBV 核酸筛查方法，结果如下。请计算95%的检 出限量及可信范围CI
序号 浓度 （IU/ml） 阳性数/重复数 概率
1
5003/3100源自21006/6
100
3
50
8/8
100
4
30
7/8
87.5
5
10
4/8
50
培训:①无”核酸”的概念形成, ②防污 染的概念③良好工作习惯的培养. ④报告 的正确发放.
后备人员的培养.
2020/1/23
3
样本离心交接区
试剂准备区
核
酸
实
标本制备区
验
场
地 扩增区及扩增产物分析区
报告发放区
2020/1/23
4
方法选择: TMA与PCR
TMA
扩增原理 模拟自然 DNA 转录成 mRNA 的过程
2020/1/23
12
标准操作规程(SOP)的编写
核酸标本离心交接操作规程 核酸标本提取及汇集操作规程(科华) 核酸标本扩增检测操作规程（科华） 核酸标本全自动检测分析系统操作规程（CHIRON） 核酸标本检测报告发布操作规程（唐山软件） 核酸标本检测复检操作规程 生物安全柜标准操作规程 可移动紫外线灯标准操作规程 低温高速离心机标准操作规程 ABI 7300型核酸扩增荧光检测仪标准操作规程
靶目标 酶
RNA MMLV逆转录酶及T7 RNA聚合酶
PCR 模拟自然 DNA复制的过程
DNA DNA聚合酶
反应体系
两种酶，两条引物，dNTP, NTP
一种酶，一对引物，dNTP
温度条件
扩增仪器 扩增产物
恒温（41.5℃ ） 水浴箱或者加热块
RNA
循环导热 （变性，退火，延伸）
热循环仪
DNA
扩增速度
2020/1/23
13
核酸实验室防污染措施
主要的污染源
扩增产物 标本之间产生的气溶胶 操作人员
手 衣服
2020/1/23
14
核酸实验室防污染措施
要有独立的空气处理系统. 各区始终处于完全分隔的状态，不能有空气的
直接相通 实验室保持合理的通风 对各区内的设备、物料进行标示，专区专用；
其他物品不得混用（例如：笔、纸张） 空气：试剂准备区→标本制备区→扩增区→产
物分析区 试剂阳性对照储存在标本制备区 使用带滤芯的吸头
2020/1/23
15
核酸实验室防污染措施
使用外排式的生物安全柜 自配试剂应分装成小规格，未用完的试剂应废
弃 使用次氯酸钠溶液消毒（台面、地面） 使用1mol/L的HCL溶液（吸头） 使用紫外线照射（空气和台面） 使用无水乙醇溶液（空气喷雾）