结核分枝杆菌IgG抗体TB检测试剂盒
TB(天津)
结核分枝杆菌（TB）抗体诊断试剂盒 （胶体金法）
天津中新科炬生物制药有限公司
目录
结核病简介 产品的基本原理 产品的成品展示 产品知识问答
结核病简介
简介
结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染 病。结核菌可能侵入人体全身各种器官，但 主要侵犯肺脏，称为肺结核病。结核病又称 为痨病和‘’白色瘟疫‘’，是一种古老的 传染病，自有人类以来就有结核病。每年3月 24日为“世界防治结核病日” 。结核病还是 因病致贫、因病返贫的主要疾病。结核病还 是一种人畜共患传染病。结核病不仅是一个 公共卫生问题，也是一个社会经济问题。
结核分枝杆菌是胞内感染菌，其免疫主要是以T细 胞为主的细胞免疫。以PPD作为抗原的ELISA方法 检测抗体灵敏度在60%以上，特异性为90%左右。 随着相关研究的深入，研究较为深入的结核抗原有： 脂阿拉伯甘露聚糖抗原、Ag85 复合物、38KD 蛋白、 A60 抗原、16KD 蛋白、MPT64、ESAT6、CFP10、 MTB48，这些抗原各有其优缺点，任何一种抗原都 不能含盖所有的结核病感染。选择好的抗原是制备 好的结核病血清学诊断试剂的关键之一。本试剂盒 应用38KD和16KD抗原联合使用，制备结核分技杆 菌抗体快速诊断试剂盒。38KD和16KD均为相关研 究证明为结核病诊断的理想抗原，联合运用理论上 能检测出90%以上的结核病感染，同时具有很好的 特异性。
试验结果表明 ：高血脂、溶血、黄疸血；其它传染 病HAV-IgM 阳性、HIV抗体阳性、HBsAb阳性、 HCV抗体阳性和幽门螺旋杆菌抗体阳性血清；含不 同抗凝剂肝素、EDTA和枸椽酸钠血浆，含防腐剂 叠氮钠血清不会对本试剂特异性产生明显的影响。
产品的成品展示
25人份/盒 40人份/盒
结核感染T细胞(TB-IGRA)检测及意义
注：感染后发病与否和机体易感性有关！
复燃
暴露 感染
1% 9%
疾病进展
Latency 潜伏
活动性结核病
2-5% 5-10% HIV>10%
治愈
未根治
一直存在活菌
90%
LTBI 自愈
需预防性服药
细菌全部被清除
不发展为结核病
不需要预防性服药
结核病的免疫主要是细胞免疫
Dheda K, et al.The immunology of tuberculoisis:From bench to beside.Respirogy,2010,15:433-450
目录
contents
1. 结核病的诊断现状
2. TB-IGRA介绍 3. TB-IGRA的临床应用
4. TB-IGRA检测方法及结果解释
临床应用案例
肺结核辅助诊断：
某院呼吸科病人，男 临床症状：发热1周，咳嗽 检测结果：TB-IgG(-)，TB-IGRA（+）T-N的值是21.5pg/ml 结果分析：TB-IgG灵敏度低，易漏检。 临床诊断：肺结核 备注：2011年，WHO建议不再使用结核抗体检测结核感染
•原理: 感染者体内被结核菌（TB）抗原致敏的效应T细胞，
在体外受到相同抗原的刺激（在APC辅助下）后，会分泌大 量IFN- γ(细胞因子)。通过IFN- γ的检测，判断结核感染情况。
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目录
contents
1. 结核病的诊断现状
2. TB-IGRA介绍 3. TB-IGRA的临床应用
4. TB-IGRA检测方法及结果解释
潜伏性感染监控
一起小规模结核暴发流行的调查与控制
某中学高三年级小规模结核爆发
T-SPOT_TB操作说明电子版(中文版)
4．用PBS缓冲液200倍稀释浓缩标记抗体试剂。
4．不能用含有Tween或其它去污成分的PBS缓冲液，
这会导致高的本底结果。确保标记抗体工作液有少
量剩余（考虑到耗损）。因而，对于8孔板条（每孔
需要50ul），配制500ul标记抗体工作液，取2.5ul的
浓缩标记抗体试剂加497.5ul的PBS缓冲液
5．每个反应孔加入50ul标记抗体工作液，2-8℃孵 5．不按照推荐的孵育时间会导致检测结果的不正
3.每吸取100ul细胞终溶液前都必须保证彻底混匀。 推荐每孔加样后都更换新的枪头以避免4个反应孔 出现交叉污染。 4. 为避免干扰，培养板应立即放入孵育箱。不要把 培养板堆叠，会导致温度的不均匀和空气的不流通。 不按照推荐的时间孵育会导致不正确的检测结果。
2.斑点记数
在培养板的洗涤和斑点形成阶段，不要让移液枪枪头或洗板仪枪头触碰反应孔底部的膜。移液枪枪头或洗板仪枪头产生的凹
注意：细胞培养液使用前需预温至 37℃
步骤 1.依照说明书的要求采集全血样本。室温保存 （18-25℃），不能冷冻或冷藏 2.对于使用CPT采血管的，根据厂家说明书要求来分 离PBMCs。 对于其它方法采集血样的，利用Ficoll-PaqueTMPlus 按照操作说明分离PBMCs
3.用吸液管吸取白色、云雾状PBMCs层并转移至15ml 尖底离心管中。加入细胞培养液至10ml。 4.600g离心7分钟。弃去上清液用1ml培养液重悬沉 淀。 5.加培养液至10ml，350g离心7分钟。 6.弃去上清液加0.7ml培养液重悬沉淀。
痕会导致斑点假象，影响斑点记数。
步骤
注意点
1．从培养箱中取出培养板弃去细胞培养液。
1．此时从试剂盒取出底物显色溶液恢复至室温。
TB-IGRA酶联免疫分析试剂盒说明书
人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T10pg/ml-240pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）水平。
用纯化的人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA），再与HRP标记的结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
T-SPOT.TB产品简介
结核感染T细胞检测试剂盒（T-SPOT.TB）一、T-SPOT.TB产品介绍我国是世界上仅低于印度的第二大结核病国家。
受限于检测手段，中国的结核感染率较难准确统计，2009年流行病调查结果为总人口的44.5% （因采用PPD检测，假阳性较多）。
而年新发活动性结核患者超过107万人次，年死亡人数达13万。
结核病的早期快速诊断已经成为制约结核病控制的关键因素。
目前，常规结核感染实验室检测方法诊断检出率不到50％。
2011年7月20日，世界卫生组织（WHO）发出正式声明，要求禁止将血清学检测方法用于肺结核和肺外结核的诊断。
因此，开发特异、敏感、快速、简便的结核病感染的诊断方法已经成为全球共识。
结核感染T细胞检测试剂盒（T-SPOT.TB））是由英国Oxford Immunotec 公司研发生产的体外诊断产品，用于结核感染的筛查，结核病辅助诊断及疗效评价等。
它改变了以往的结核检测方法特异性低，敏感度差，耗时长的缺点。
作为当前全球最先进的结核感染诊断产品，该产品已经成为发达国家结核感染检测的首选方法，获得欧盟CE 认证、美国FDA认证。
美国CDC、美国胸科学会、英国及欧洲的结核病防治指导原则中，均已将本试剂盒方法列为结核感染诊断的推荐实验室诊断标准，并已经在欧洲（英国、德国、法国、意大利、瑞士、西班牙、爱尔兰、荷兰、丹麦、挪威、瑞典）、北美洲(加拿大、美国)、非洲（南非）、澳大利亚、亚洲（韩国、新加坡、日本、中国）等国家均已上市销售，并写入部分国家的诊疗指南中。
T-SPOT.TB用于结核感染的诊断与鉴别诊断具有独特优势：高灵敏度和特异性:特异性达到97.1％（美国FDA临床研究数据），敏感度达到95.6％（美国FDA临床研究数据），不受环境分枝杆菌感染和卡介苗（BCG）接种影响基本不受机体免疫抑制影响，适用于HIV感染和免疫抑制剂治疗人群简单的实验室血液检查，24小时快速报告结果结核感染T细胞检测试剂盒（T-SPOT.TB）应用的方法学为酶联免疫斑点技术（ELISPOT）。
结核杆菌核酸扩增检测试剂盒说明书
结核杆菌(TB)核酸扩增检测试剂盒说明书(PCR-荧光探针法)【名称】通用名：结核杆菌(TB)核酸检测试剂盒说明书英文名：Mycobacterium Tuberculosis Fluorescence quantitative Polymerase Chain Reaction(PCR)Diagnostic kit汉语拼音：jie he fen zhi gan jun he suan kuo zeng jian ce shi ji he【目的】本试剂盒适用于检测疑似患者痰液、血液、及乳液或肺脏组织等样本中结核分支杆菌(TB)DNA，用于结核分支杆菌(TB)感染的辅助诊断及流行病学调查。
其检测结果仅供参考。
【原理】本试剂盒选取一对结核分支杆菌(TB)一段高保守区域特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法提取DNA，后者在耐热DNA聚合酶（Taq酶）作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对结核分支杆菌(TB)进行扩增，从而达到快速实时定量检测之目的。
【组成】名称数量规格核酸提取液B4管500μl/管Taq酶系1管80μl/管TB PCR MIX1管960μl/管TB-阳性质控品1管50μl/管(1×107Copies/ml)阴性质控品1管500μl/管【标本采集、保存和运输】1.适用标本：血液、痰液、乳液或肺脏组织等。
2.标本采集：血液：无菌注射器抽取待检者静脉血2-3ml，置于EDTA2Na抗凝管中，充分混匀，密闭送检。
痰液：无菌条件下取受检者深部痰液2-3ml，置入5ml离心管，密闭送检。
3.保存和运输：上述处理后的标本可保存于-20℃，保存期为6个月，-70℃可长期保存。
运送应采用0℃冰壶。
【适用仪器】主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM7300、LightCycler等毛细管的仪器，MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。
人(Human)结核分枝杆菌相关γ-干扰素(TB-IGRA)-NEWA
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）结核分枝杆菌相关γ-干扰素（TB-IGRA）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被结核分枝杆菌相关γ-干扰素（TB-IGRA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的结核分枝杆菌相关γ-干扰素（TB-IGRA）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
结核杆菌IgG抗体检测试剂盒(酶免ELISA法)
结核杆菌IgG抗体检测试剂盒（酶免ELISA法）结核杆菌概述：结核分枝杆菌（M.tuberculosis）,简称结核杆菌,此菌主要引起肺结核病，肺结核是一种通过呼吸道传染、具有强烈传染性的慢性消耗性疾病。
肺结核的诊断方法主要以细菌学痰涂片显微镜检查，而免疫血清学对结核杆菌IgG抗体水平检测，可辅助诊断结核病，并为结核病监测提供有力的手段。
产品简介：结核杆菌IgG抗体检测试剂盒采用了间接ELISA法定性检测人血清/脑脊液/胸积水样本中的结核分枝杆菌IgG抗体水平，适用于结核病的辅助诊断及结合临床症状该病情发展IgG抗体水平的监测。
试剂盒组成：1、含纯化TB-IgG抗原包被的酶标反应板2、样品稀释液1瓶3、TB-IgG酶结合物试剂1瓶4、浓缩洗涤液(25×)1瓶5、TB-IgG阴性对照液和TB-IgG阳性对照液各1瓶6、显色剂A和显色剂B各1瓶7、终止液1瓶8、自封袋2个、封板膜2片、说明书1份产品相关信息：灵敏度：阳性血清最大稀释比例≤1:800。
精密度：试验内精密度CV＜10%，试验间精密度CV＜15%。
适用仪器：450nm波长测读的酶标仪包装规格：48/96T（盒）储存有效期：2-8℃保存，有效期12个月。
生产企业：广州市标健生物科技有限公司结果的计算与判断：壹：记录质控品及各样本的吸光度值，取复孔的平均值进行结果判定。
贰：在白色的背景下观察各孔的显色，有明显黄色且显色深于临界对照品者为阳性。
叁：在450nm波长的酶标仪测读，结果的判断以临界对照品为标准:1、阳性:[样本的吸光值]/[临界对照品的吸光值]≥1.22、阴性:[样本的吸光值]/[临界对照品的吸光值]≤0.803、灰区:0.80<[样本的吸光值]/[临界对照品的吸光值]＜1.2注：对于灰区样本，应对同一血清进行重复试验，重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告阳性或是对同一病人2-4周后再留取血清标本进行检测。
质量控制：每块酶标板均采用阳性，阴性和临界对照品进行质量控制，以确保测定结果的可靠性。
结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒(胶体金法)说明书
结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒（胶体金法）说明书【产品名称】通用名称：康珠生物结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒（胶体金法）【包装规格】1人份/袋，10人份/盒，20人份/盒，50人份/盒，100人份/盒。
【预期用途】本产品用于体外定性检测人血清、血浆或抗凝指尖末梢血中的结核分枝杆菌IgG抗体。
在临床诊断中作为结核分枝杆菌感染的辅助诊断试剂。
结核分枝杆菌（MTB）是结核病的致病菌，属分枝杆菌属，是一种特殊的圆杆状细菌，细胞壁富含脂类，抗酸染色，又叫抗酸杆菌。
MTB的宿主是人，主要通过结核病人含有该细菌的气溶胶（aerosol）进行传播。
人体除毛发外几乎全身所有组织都可以感染结核病，如肠结核、骨结核、淋巴结核等。
由于结核病主要经呼吸道进行传播，因此肺结核的感染率比其他器官高，占人体结核病的90%，其余组织感染的结核病统称为肺外结核。
常用的细菌学检查方法包括：（1）痰涂片镜检法。
（2）痰结核菌常规培养法。
（3）分枝杆菌菌种鉴定。
（4）痰结核菌快速培养系统等。
【检验原理】本试剂盒是采用胶体金法免疫层析技术原理，在硝酸纤维素膜上的T线包被重组TB抗原，在C线包被羊抗鼠IgG抗体，在金标垫上包被胶体金标记的鼠抗人IgG单抗。
用于定性检测血清（浆）样本中的结核分枝杆菌IgG抗体。
检测阳性样本时，样本中的结核分枝杆菌IgG抗体可与胶体金标记的鼠抗人IgG单抗结合，形成免疫复合物，由于层析作用复合物及样本在硝酸纤维素膜内部向前流动。
当复合物经过T线时与包被的重组TB抗原结合，形成“胶体金标记鼠抗人IgG单抗--TB--IgG--重组抗原”而凝聚显色。
若样本中不含结核分枝杆菌IgG抗体，致使不能形成免疫复合物，（T）线不显色。
无论结核分枝杆菌IgG抗体是否存在于标本中，胶体金标记的鼠抗人IgG扩散到质控线（C）区域被羊抗鼠抗体捕获，在质控区（C）内部都会出现一条红色条带。
质控区（C）内所显示的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
结核杆菌TBPCR荧光扩增检测说明书
结核杆菌TBPCR荧光扩增检测说明书【正文】结核分枝杆菌（TB）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒说明书 Operation Introduction for Mycobacterium tuberculosis(TB) PCR Fluorescence Diagnostic Kit 前言本试剂盒采用一对PCR引物和一个荧光双标记的探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，从而将PCR技术和荧光检测技术结合起来，实现了对TB 核酸的自动化检测。
检测灵敏度为10个TB菌/毫升。
试剂盒在PCR循环结束后无需开盖。
试剂盒中采用了dUTP-UNG酶防污染系统。
本品可用于可疑结核病患者经处理的痰液标本结核分枝杆菌核酸的定性检测，可用于结核病的辅助诊断。
试剂盒组成※ 贮存条件及有效期本试剂盒贮存于-20℃的条件下有效期为一年（请于有效期内使用）。
自备试剂 4％ NaOH、灭菌生理盐水样本采集、存放及运输1．采集：以清晨第一口痰为宜。
先用清水漱口，嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管，密封，即可送检。
2．存放：待测样本在2-8℃保存不应超过24小时；-20℃保存不超过三个月；-70℃以下长期保存。
应避免反复冻融。
3．运输：采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。
适用仪器 1．BIO-RAD iCycler荧光PCR检测仪、PE Gene Amp 7700荧光PCR检测仪 2．Roche LightCycler荧光PCR检测仪 3．其它荧光PCR检测仪，如PE-5700、PE-7000、基因公司Rotor-Gene、MJ公司Opticon Monitor、大和Line-Gene荧光定量PCR检测仪等使用方法1．样本处理（样本处理区）1.1. 首先对痰液样本进行目测，若样本中唾液占绝大部分，则需重新采集样本。
1.2. 目测合格后，在样本中加入2～3倍体积4%的NaOH溶液，置于摇床上，在150rpm、37℃条件下处理30min或常温下1Hr，使其充分液化（无明显固状物并且吸出时无拖丝现象即为液化完全；若液化不完全，可适当再加入少量4%的NaOH溶液直至液化完全）。
TB-IGRA酶联免疫分析试剂盒说明书
人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T 10pg/ml-240pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）水平。
用纯化的人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA），再与HRP标记的结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人结核分枝杆菌Y-干扰素（TB-IGRA）浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
结核杆菌抗体检测试剂盒
2.试验方法与意义 常规试验分别取2种PPD 5个单位注射两前臂皮内，48～72h后红肿硬结超过5mm者为阳性，≥15mm为强阳性，对临床诊断有意义。若PPD-C侧红肿大于BCG-PPD侧为感染。反之，BCG-PPD侧大于PPD-C侧，可能系卡介苗接种所致。
阴性反应表明未感染过结核分枝杆菌，但应考虑以下情况：①感染初期，因结核分枝杆菌感染后需4周以上才能出现超敏反应；②老年人；③严重结核患者或正患有其他传染病，如麻疹导致的细胞免疫低下；④获得性细胞免疫低下，如艾滋病或肿瘤等用过免疫抑制剂者。为排除假阴性，国内有的单位加用无菌植物血凝素（PHA）针剂 ，0.1ml含10μg作皮试。若24h红肿大于PHA皮丘者为细胞免疫正常，若无反应或反应不超过PHA皮丘者为免疫低下。
Bergamini等应用QFT-G、QFT-GIT和T-Spot.TB技术对496个0-19岁的儿童和青少年LTBI进行检测，结果发现2种QFT检测得出的结果更相似，QFT相对于T-Spot.TB在4岁以下儿童中得到的非确定性结果更多。Chun等研究显示，QFT-GIT比TsT在诊断接种过BCG的儿童中LTBI的特异性更强。
肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种促炎细胞因子，在多种自身免疫性疾病中起重要的病理作用。但是，抗TNF-α的治疗会导致潜伏性肺结核转变为活动性肺结核，而自身免疫性疾病患者由于免疫抑制。TST容易产生假阴性。研究显示，QFT-G和T-Spot.TB在免疫介导炎症疾病（IMID）患者中检测LTBI的敏感性和特异性都比TST高。终末期肾病（ESRD）患者感染结核分枝杆菌的几率比健康人高10～25.3倍。Lee等比较了QFT-G、T-Spot.TB和TsT在ESRD患者中LTBI的诊断，结果显示QFT-G和T-Spot.TB的结果较类似，但TsT和QFT-G、T-Spot.TB的实验结果相差较远。T-Spot.TB的检出率比QFT-G高（分别为46.9%和40.0%）。然而，也有研究显示QFT-G由于有许多不确定性结果，因此不能用于类风湿性关节炎LTBI的检测。
结核抗体检测(ELISA)标准操作程序SOP文件
2、加样：设空白对照，阴、阳性对照。分别加阴、阳性对照血清各2滴（100ul）和100ul待测样本于相应孔内。置37℃10分钟。
3、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次后在吸水纸上拍干。
4、加酶：除空白对照孔外，每孔加2滴（100ul）酶标记物，轻轻振荡，置37℃水浴10分钟。
8、严格按说明书操作，每次操作应紧凑。终止后，须在10分钟内测试或判断结果，以免颜色发生变化。
9、对于TB抗体阳性检出者，应结合病史，临床症状及体征等综合判断。
[试剂盒组成]
1、包被微孔板5、底物液
2、阴性对照血清6、显色剂
3、阳性对照血清7、终止液
4、酶标给合物8、洗涤液
（用蒸馏水500ml稀释后使用）
[试剂厂家]
郑州博赛生物工程有限责任公司
[试剂的稳定性与贮存]
试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内稳定。
[标本的收集与处理]
标本为无溶血血清。
[操作步骤]
注：阴性对照孔OD值小于0.05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。
[质量控制]
每批检测同步进行标准和质控品测定，绘制室内质控图。其它按室内质量控制管理规定进行。
[参考范围]
酶联免疫吸附试验（ELISA）：阴性
[注意事项]
1、不同批号的试剂不可混用。
2、试剂用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。
结核抗体检测( TB-IgG-ELISA )
版序：ABCD
页码：第2页，共2页
2、酶标仪检测（选波长450nm）：每孔加终止液2滴后，用空白孔校零，测定各孔OD值。
1150817803结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒（PCR-荧光法）说明书
结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒(PCR-荧光法) 说明书【产品名称】通 用 名 称：结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)【包装规格】32人份/盒【预期用途】本试剂盒用于定性检测患者痰液中结核分枝杆菌核酸,可作为临床结核分枝杆菌检测的辅助手段。
适应症：由结核分枝杆菌感染引起的肺结核、肠结核、结核性腹膜炎等疾病。
【检验原理】本试剂盒选用结核分枝杆菌保守基因片段设计特异引物及特异Taqman 探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Tap酶的外切酶活性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团的屏蔽，既能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对结核分枝杆菌核酸的自动化检测。
【主要组成成份】组成 组成成分 规格核酸提取液 含0.5％Triton-100、5％Chelex-100 1.8mL×1TB反应混合液 含Tris-HCl、KCl、MgCl2、dNTP、引物、荧光探针 1.2mL×1Taq酶含TapDNA酶及抗体 14μL×1阳性对照品 主要成分为含TB基因组DNA（重组克隆）人工构建的质粒100μL×1阴性对照品 主要成分为TE Buffer 100μL×1注：不同批号试剂盒中各组份不可以互换。
【储存条件及有效期】试剂-20℃可保存12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过三次。
【适用仪器】具有FAM荧光通道的ABI 7300 、ABI 7500 荧光PCR扩增仪。
【样本要求】1.标本：人痰液。
2. 采集：将患者用力咳出肺深部的痰液采集于无菌样本保存管，密闭送检。
采集具体方法请参考《微生物标本采集手册》一书。
3. 存放：2-8℃保存，不超过24小时；-20℃下保存，不超过3个月；-70℃下长期保存，但应避免反复冻融。
结核杆菌IgG抗体检测试剂盒操作(新版本)
结核杆菌IgG抗体检测试剂盒实验操作流程
1、标本的采集：采集指尖血；
2、洗涤液的配制：
在2-8℃贮存的洗涤液（浓缩）可能在瓶底形成结晶，用500ml容器将整瓶浓缩洗涤液充分溶解于480ml蒸馏水或去离子水中。
3、检验方法：
1、指尖血采集后，使用生理盐水进行1:10稀释，配成稀释指尖血；
2、取出冷藏试剂盒，平衡至室温；
3、每次实验预设空白对照1孔，阴性对照1孔，阳性对照1孔，各加
100ul阳性、阴性对照。
在样品孔中分别加入100ul样品稀释液，
每孔加稀释指尖血上清液25ul。
混匀后置37℃孵育30分钟
4、取出反应板，甩尽板中液体，用200—300μl洗涤液洗5次，每次均需
拍干；
5、每孔加酶结合物两滴或100μl，空白孔不加，置37℃30分钟；
6、取出反应板，甩尽板中液体，洗5次，每次拍干；
7、每孔加显色液A和显色液B各一滴或各50μl，充分混匀，置37℃10分
钟。
8、每孔加终止液1滴（50μl）轻拍混匀，用酶标仪（450nm波长）以空白
对照调零，测定各孔OD.值。
结核杆菌TBPCR荧光扩增检测说明书
【正文】结核分枝杆菌（TB）核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒说明书Operation Introduction for Mycobacteriumtuberculosis(TB) PCR Fluorescence Diagnostic Kit前言本试剂盒采用一对PCR引物和一个荧光双标记的探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，从而将PCR技术和荧光检测技术结合起来，实现了对TB核酸的自动化检测。
检测灵敏度为10个TB菌/毫升。
试剂盒在PCR循环结束后无需开盖。
试剂盒中采用了dUTP-UNG酶防污染系统。
本品可用于可疑结核病患者经处理的痰液标本结核分枝杆菌核酸的定性检测，可用于结核病的辅助诊断。
试剂盒组成※贮存条件及有效期本试剂盒贮存于-20℃的条件下有效期为一年（请于有效期内使用）。
自备试剂4％NaOH、灭菌生理盐水样本采集、存放及运输1．采集：以清晨第一口痰为宜。
先用清水漱口，嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管，密封，即可送检。
2．存放：待测样本在2-8℃保存不应超过24小时；-20℃保存不超过三个月；-70℃以下长期保存。
应避免反复冻融。
3．运输：采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。
适用仪器1．BIO-RAD iCycler荧光PCR检测仪、PE Gene Amp 7700荧光PCR检测仪2．Roche LightCycler 荧光PCR检测仪3．其它荧光PCR检测仪，如PE-5700、PE-7000、基因公司Rotor-Gene、MJ公司Opticon Monitor、大和Line-Gene荧光定量PCR检测仪等使用方法1．样本处理（样本处理区）1.1. 首先对痰液样本进行目测，若样本中唾液占绝大部分，则需重新采集样本。
1.2. 目测合格后，在样本中加入2～3倍体积4%的NaOH溶液，置于摇床上，在150rpm、37℃条件下处理30min或常温下1Hr，使其充分液化（无明显固状物并且吸出时无拖丝现象即为液化完全；若液化不完全，可适当再加入少量4%的NaOH溶液直至液化完全）。
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结核分枝杆菌IgG抗体(TB)检测试剂盒
一、检测原理------斑点金免疫渗滤法
二、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阳性
（一）、抗细胞壁脂多糖LAM抗体呈阳性
1、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，具有较强的免疫原性和免疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体。
2、检测到此抗体阳性，结合临床症状和其他检查要考虑是活动性结核病患者。
3、由于在某些呼吸道炎症等良性疾病中，此抗体也会呈现阳性，所以，请医生要结合其他的临床信息加以鉴别诊断。
（二）、38KDa抗体阳性
1、38KDa抗原是定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白。
2、检测到此抗体阳性，结合临床病史，非常有助于活动性结核的诊断。
3、由于此抗原和大肠埃希菌(简称大肠杆菌)同源蛋白有30％以上的交叉，所以，在肠道感染患者中有一定的假阳性，要注意加以鉴别。
4、值得注意的是在部分接种过卡介苗（BCG）的患者中，也会出现阳性，要注意鉴别。
（三）、16kDa抗体阳性
1、16kDa蛋白又被称为HSP16.3蛋白，是小分子热休克蛋白（sHSP）家族成员之一。
2、此抗体在结核病患者中有相当高的阳性率（46～50% )，检测到此抗体阳性，并结合临床要考虑是活动性结核病患者。
3、在大多数接种过卡介苗（BCG）的患者中，并不会出现阳性，能将结核病患者与BCG 接种患者区别开来。
4、作为儿童结核的早期诊断指标，敏感性为64.8%左右，特异性96.2%左右。
（四）、MPT63抗体阳性
1、MPT63抗原是结核杆菌的分泌蛋白之一。
2、它的灵敏度为15～40％，特异性很高，约为98％左右。
即在检测到此抗体阳性时，临床
上基本就可诊断是活动性结核病患者。
三、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阴性
（一）不是结核病患者
（二）病情好转
（三）在结核病患者病情加重、合并人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的结核病患者、痰涂片、
痰培养呈阴性的患者中，由于机体免疫能力低下等原因，导致产生的抗体滴度太低，以至于
不能被检测到，会呈现假阴性的结果，需要结合临床加以鉴别。
四、多指标联合检测的优势
（一）多指标联合检测，提高了阳性率
由于单个抗原不可能捕获全部或大多数抗体，所以，多指标联合检测，提高了阳性率，减少
了漏检，是结核血清学诊断的发展趋势。
指标组合灵敏度
LAM 56.5%
LAM+38KD 68.3%
LAM+38KD+16KD 75.2%
LAM+38KD+16KD+MPT63 77.4%
（二）多指标独立的检测结果，有助于医生对患者病情的监控
结核菌侵入机体后刺激机体产生一系列体液免疫反应，体液免疫随着病变的加重（或血行播散）而增加。
当多个抗体呈现阳性时，提示病情有加重的迹象，所以，临床医生可以根据不
同时期的抗体谱，并结合患者的临床病症，进行病情的监控和疗效的判断。