动物细胞培养技术思考题
细胞工程习题总结及参考答案
一．思考题1. 为什么要严格保持细胞工程操作环境和物品的无菌？答：植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。
培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。
2. 配制培养基时，为什么要先配制母液？答：1.方便配置其他培养基；2.保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取第三章一．思考题1. 胚状体与合子胚有何异同？答：异：体细胞胚又称胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
子胚是指由植物的雌雄配子融合形成的合子继而发育形成的胚，经过受精作用。
同：都含有一整套遗传信息,都可以发育成新一代生物个体.二．练习一、单选题1、植物组织培养是建立在___理论基础上的。
(B)A进化论 B植物细胞全能性C基因决定论 D细胞多样性2、植物组织培养的培养基不含___。
(C)A含N物质 B碳源 C血清 D生长素3、过滤除菌适用对象___。
(D)A玻璃器皿 B塑料器皿 C金属器皿D易被高温破坏的材料如抗生素、激素等试剂4、将___重新转移到成分相同的新鲜培养基上生长的过程称为继代培养。
(B)A外殖体 B愈伤组织 C 生根苗 D 幼苗5、下列植物细胞全能性最高的是（A）A. 形成层细胞B. 韧皮部细胞C. 木质部细胞D. 叶肉细胞6、植物组织培养过程中的脱分化是指（C）A. 植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B. 未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程C. 植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程D. 取植物的枝芽培育成一株新植物的过程三、判断题•1、非胚性愈伤组织与胚性愈伤组织具有同样的再生能力（×）•2、一个细胞由分生状态转变为成熟状态的过程，叫脱分化。
（×）•3、所有的植物培养材料都必须高压灭菌锅灭菌121℃、15分钟。
高中生物(新人教版)选择性必修三课后习题：动物细胞培养(课后习题)【含答案及解析】
动物细胞工程动物细胞培养必备知识基础练1.(2021山东青岛高二期中)动物细胞培养是动物细胞工程的基础,科研人员将数量相等的动物肝脏肿瘤细胞和肝脏正常细胞分别置于相同培养液中培养。
下列叙述正确的是()A.在培养过程中通常要通入5%的CO2刺激细胞呼吸B.细胞培养液中通常含有维生素、激素、糖等多种能源物质C.定期更换培养液可以防止代谢产物的积累对细胞造成危害D.为了防止细菌污染,可向培养液中加入适量的干扰素5%的CO2,目的是维持培养液的pH,A项错误;维生素和激素不是能源物质,B项错误;定期更换培养液可以防止代谢产物的积累对细胞造成危害,C项正确;为了防止细胞培养过程中被细菌污染,可向培养液中加入适量的抗生素,D项错误。
2.右图表示动物细胞培养过程中,动物细胞增殖情况的变化曲线(图中B、D两点表示经筛选后继续培养),下列相关叙述错误的是()A.OA段的培养称为原代培养B.AB段可能发生了接触抑制C.BD段的培养需用胰蛋白酶处理和更换培养液D.动物细胞培养过程中,细胞可通过有丝分裂和减数分裂实现细胞增殖段的培养称为原代培养,为动物组织经处理后的初次培养,A项正确;AB段细胞几乎不再增殖,可能发生了接触抑制,需要用胰蛋白酶等处理,使组织细胞分散开来,形成单个细胞才能继续培养,B 项正确;BD段的培养需用胰蛋白酶处理和更换培养液,C项正确;减数分裂是有性生殖生物形成配子的方式,而动物细胞培养是通过有丝分裂实现细胞增殖的,D项错误。
3.下列关于动物细胞培养的有关叙述,正确的是()A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等C.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理D.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白,A项错误;动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、动物血清等,不需要生长素,B项错误;动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理,使细胞分散,C项正确;动物细胞培养的目的是获得细胞产物或细胞群,D项错误。
《动物细胞培养》思考题
《动物细胞培养》思考题1、细胞培养的一代生长过程如何？答：原代培养的过程就是动物细胞培养的第一代细胞。
原代培养是这样的：取出动物胚胎或者幼龄动物组织或器官后用胰蛋白酶使其分散为单个细胞，然后配置成一定浓度的悬浮液放入培养瓶（其液体培养基含动物血清）中置于培养箱中培养。
2、什么是原代培养、传代培养？答：原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。
传代培养是指当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。
3、细胞生长需要满足哪些条件？4、操作人员如何保持无菌？5、无菌操作的要点是什么？6、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？7、器材包装有何要求？8、叙述超净工作台的工作原理？9、正压过滤器为何会除菌？10、配制后液体呈黄色意味着液体的ph发生了什么变化？11、用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D－Hanks液或PBS液配制？Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。
因此，用于分离细胞的消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。
12、L－谷氨酰胺在营养液中有何作用？L－谷氨酰胺属于生长因子的一种，是细胞生长所必需的。
13、营养液配制后为什么要小剂量分装？避免污染后全军覆没。
14、你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么？1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。
用筛网滤掉未消化的组织块。
2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。
3）、用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
4）、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
15、培养瓶移入CO2恒温培养时，瓶盖为何要稍松？拧紧瓶盖无法进行气体交换，瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳，尤其是二氧化碳特别重要，细胞在酸性培养液中生长的更好16、如何初步判断胰蛋白酶的消化时间？17、细胞培养到一定时间为何要传代？18、你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污染？19、你认为组织培养成功需要哪些条件？20、原代细胞和传代细胞培养有哪些区别？。
大规模动物细胞培养的问题及对策
大规模动物细胞培养动物细胞培养开始于本世纪初，到1962 年规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，已成为医药生物高技术产业的重要部分。
由于动物细胞体外培养的生物学特性、相关产品结构的复杂性和质量以及一致性要求，动物细胞大规模培养技术仍难于满足具有重要医用价值生物制品的规模生产的需求，迫切需要进一步研究和发展细胞培养工艺。
目前，世界众多研究领域集中在优化细胞培养环境、改变细胞特性、提高产品的产率并保证其质量和一致性上。
1. 细胞培养环境细胞培养环境中抑制因素的积聚是提高细胞密度的主要限制因素。
体外动物细胞培养中氨离子的积累是抑制细胞生长的主要因素之一。
氨的积聚使细胞内UDP氨基己糖(UDP-N-乙酰葡糖胺和UDP-N-乙酰半乳糖胺)增加，影响细胞的生长及蛋白的糖基化过程。
氨抑制Gln 代谢途径，使Asp 和Glu 消耗增加。
细胞消耗Asp 增加，可能是细胞线粒体膜上苹果酸－天冬氨酸泵转运NADH 加快，使细胞维持糖酵解途径的需要。
Asp 消耗增加可能会从Gln 代谢多经天冬氨酸转氨酶途径而不是丙氨酸转氨酶或谷氨酸脱氢酶途径得以补偿。
氨来源于两方面：一是直接来源于培养基，一是细胞代谢所产生。
但两者都涉及谷氨酰胺，因此需要防止培养基中Gln 自然分解，限制Gln 用量，并尽量去除培养基中的氨。
乳酸是细胞糖代谢的产物。
高浓度乳酸会抑制乳酸脱氢酶(LDH )，从而减少乳酸产生。
LDH 受抑制后阻止了NADH 向NAD 的再生及其偶联的丙酮酸/乳酸转换，从而导致NADH 增加。
NADH 增加，部分抑制糖酵解。
乳酸抑制糖酵解也导致低浓度丙酮酸，从而导致Gln 消耗减少。
由于糖酵解和Gln 的分解速度降低，能量产生减少，更多的能量用于维持离子浓度梯度，因此高乳酸浓度必将抑制细胞生长。
氨和乳酸对细胞的毒性作用已在多种不同的细胞系有大量报道，不同细胞系对于这两种代谢产物的耐受性差别很大，原因可能是不同细胞系葡萄糖和谷氨酰胺代谢过程中关键酶的敏感性不同，或者在不良生长环境下，细胞转换代谢途径，特别是氨基酸代谢的改变。
生物技术导论思考题及答案
思考题1、什么是生物技术，生物技术的基本内容包括哪些，这些基本内容之间的关系如何？答：生物技术是指人们以现代生命科学为基础，结合其他基础学科的科学原理，采用先进的工程技术手段，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的。
生物技术的基本内容：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程和蛋白质工程。
它们之间的关系：这五项技术并不是各自独立的，它们彼此之间是互相联系、互相渗透的。
其中，基因工程技术是核心技术，它能带动其他技术的发展。
2、基因工程的定义及其研究的基本理论依据和基本技术路线是什么？答：基因工程的定义：通过体外DNA 重组和转基因技术，有目的改造生物种性，实现有的物种在短时间内趋于完善，创造出更符合人们需求得新生物类型，或者利用这种技术对人类疾病进行基因治疗。
基因工程的理论依据： （1）不同基因具有相同的物质基础， （2）基因是可以切割的， （3）基因是可以转移的，（4）多肽与基因之间存在对应关系， （5）遗传密码是通用的，（6）基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代。
基本技术路线：获得目的基因和克隆载体→目的基因与克隆载体结合，得到重组DNA 分子→将重组DNA 分子导入受体细胞→克隆子的筛选→重组子的鉴定基因工程工程菌 细胞工程蛋白质或酶发酵工程优良动植物品系蛋白质工程或酶工程微生物产品动植物个体或细胞3、基因工程的目的基因的分离基本途径包括哪些？答：（1）利用限制性内切核酸酶酶切法直接分离目的基因；（2）利用PCR 直接扩增目的基因； （3）目的基因的化学合成；（4）通过构建基因组文库或cDNA 文库分离目的基因。
4、因工程中用于转化的受体细胞应具备哪些基本的条件？答：应具备的条件有：（1）便于重组DNA 分子的导入和筛选克隆子； （2）重组DNA 分子在受体细胞能稳定维持；（3）适于外源基因的高效表达，表达产物的分泌或积累，对于真核目的基因的高效表达，应具有较好的翻译后加工机制；（4）遗传性稳定，对遗传密码的应用上无明显偏倚性；（5）易于扩大培养或发酵生长，具有较高的生产应用价值和理论 研究价值；（6）安全性高，不会对外界环境造成生物污染。
《动物细胞培养》课堂反思
《动物细胞培养》课堂反思一、教学目标简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
二、教学重点、难点1. 教学重点动物细胞培养的过程及条件。
2. 教学难点动物细胞培养的过程及条件三、教学过程【课堂导入】师：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？生：取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植师：如何获得大量健康的自体皮肤来治疗？【新知学习】请同学们阅读课本后，简述动物细胞培养的基本过程？学生结合图2-16简述细胞培养的过程，教师强调其中原代培养和传代培养的含义，及细胞贴壁和接触抑制现象。
师：结合以上过程思考以下问题1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？2、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？3、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？4、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？5、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成分？6、细胞膜的主要成分是什么？7、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？8、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？9、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？11、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？12、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？13、如此时细胞数量并未达到人们的需求，应该怎样办？14、如何理解原代培养和传代培养？15、传代培养的细胞能一直传代下去吗？16、有些为何能一直传下去吗？17、动物细胞培养就是为了得到这些细胞吗？18、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？同桌之间相互讨论后回答，教师点评或指正。
师布置任务：1﹑请同学根据以上内容总结出动物细胞培养的定义2﹑多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，请根据所学的知识，分析体外培养细胞应该模拟内环境的哪些内容？同桌之间相互讨论后回答，教师点评或指正。
2.2 动物细胞工程(第1课时 动物细胞培养)
2.2 动物细胞工程第1课时动物细胞培养一、单选题1.下列相关植物细胞工程和动物细胞工程的对比叙述不合理的是（）A. 动物细胞可以传代培养而植物细胞不能B. 动物细胞培养和植物组织培养所用培养基不同C. 动物细胞培养和植物细胞培养都需要在无菌的条件下进行D. 烟草叶片离体培养能产生新个体，小鼠杂交瘤细胞可以离体培养增殖2.下列关于细胞工程的叙述，错误的是（）A. 动物细胞培养体现了动物细胞的全能性B. 去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理C. 小鼠骨髓瘤细胞和经抗原免疫小鼠的B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体D. 电刺激可诱导植物原生质体融合或动物细胞融合3.关于细胞工程的下列叙述正确的是（）A. 二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的B. 动物细胞核移植的受体细胞必须是卵细胞C. 克隆动物的性状与供体动物完全相同D. 用于核移植的供体细胞一般都选用10代以内的培养细胞4.下表细胞工程技术应用中各组所选择的实验材料及材料特点与实验目的匹配错误的是（）A. 1和2B. 2和3C. 3和4D. 1和45.对某种动物的肝肿瘤细胞进行细胞培养，下列说法错误的是（）A. 在利用肝组织块制备细胞悬液时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理B. 在合成培养基中，通常需加入血清、血浆等天然成分C. 为了防止动物细胞培养过程中的污染，可向培养液中加入适量的抗生素D. 动物细胞培养应在含5% CO2的恒温培养箱中进行，CO2的作用是刺激细胞呼吸6.2017年11月27日，世界上首个体细胞克隆猴在上海诞生。
如图是克隆过程，下列相关叙述错误的是（）A. a细胞是卵细胞B. 克隆猴的性状与乙相同C. 重组细胞具有全能性D. ①过程运用了细胞核移植技术7.治疗性克隆有希望最终解决供体器官的短缺和器官移植出现的排斥反应。
下图表示治疗性克隆的过程，下列说法正确的是（）A. 图示过程利用了动物细胞培养和动物体细胞融合技术B. 图示过程实现了动物细胞的全能性，其优点是用上述方式获得的各种脏器组织细胞、神经细胞等进行移植降低了免疫排斥反应C. ①过程的细胞学基础是细胞的增殖和分化D. ①②过程需要进行DNA复制和蛋白质合成，同时还需要在培养液中不断补充细胞所需ATP8.下列有关动物细胞培养的叙述中，正确的是（）A. 动物细胞培养的目的就是获得大量的分泌蛋白B. 对动物组织块和分散的细胞进行培养，效果是基本相同的C. 细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中D. 培养高度分化的动物体细胞一般不能发育成幼体9.下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是（）A. 胰蛋白酶能消化细胞中的胶原纤维和其他成分，获得单细胞悬液B. 动物细胞只能贴壁生长，不能进行悬浮培养C. 细胞进行一次传代培养所需时间等于一个细胞周期的时间D. 能连续传代的细胞通常具有异倍体核型，其贴壁性下降10.作物脱毒、改善畜产品的品质、抗除草剂作物、可保存的干扰素、检测有毒物质、性别鉴定依次是下列哪项生物技术的应用（）①基因工程②细胞工程③蛋白质工程④胚胎工程A. ①②②③④④B. ②①①③②④C. ②①②③②④D. ②①②④③②11.下列有关细胞工程的说法正确的是（）A. 在愈伤组织形成过程中，除适宜的温度、pH和无菌条件外，还需要有植物激素进行调节B. 植物体细胞杂交前需要用酶去除细胞壁获得原生质体，然后再用灭活的病毒促进融合C. 利用动物体细胞核移植的方法得到克隆动物是培育新物种的一种方式D. 动物细胞培养应在含5%CO2的恒温箱中培养，CO2的作用是为细胞提供碳源12.下列叙述，不正确的是（）A. 每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体B. 在动物细胞培养过程中，贴壁细胞会出现细胞的接触抑制现象C. 哺乳动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植D. 植物组织培养、动物细胞培养、植物体细胞杂交和动物细胞融合得到的都只是细胞或杂交（种）细胞13.某研究小组对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行培养，下列叙述正确的是（）A. 制备肝细胞悬浮液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶B. 肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸C. 为了防止培养过程中杂菌的污染，可向培养液中加入适量的干扰素D. 用血球计数板计数的方法，可推断乙细胞比甲细胞增殖周期长14.关于动物细胞培养和植物组织培养的叙述，错误的是（）A. 动物细胞融合过程中可用灭活的病毒、聚乙二醇（PEG）等B. 用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子C. 植物体细胞杂交过程中，需用不同浓度的细胞分裂素和生长素培养杂种体细胞D. 动物细胞培养可用于检测有毒物质，茎尖培养可用于植物脱除病毒15.下列关于细胞工程的相关判断正确的有（）A. 去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理B. 乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养C. 培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞D. 动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体体现了细胞的全能性16.下列有关动物细胞培养技术应用的说法错误的是（）A. 利用动物细胞培养技术可以生产病毒疫苗B. 动物细胞是基因工程中常见的受体细胞C. 利用培养的动物细胞可以生产抗癌药物D. 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质17.下列实验中相关操作的叙述正确的是（）A. 在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒B. 在植物体细胞杂交中加入灭活的病毒诱导原生质体融合C. 用胰蛋白酶处理后的动物细胞需在生理盐水中进行传代培养D. 植物组织培养实验中需使用无菌水对消毒后的外植体进行多次漂洗18.某生物兴趣小组的同学从资料上获知：二氯二乙胺能够阻止参与DNA复制的酶与DNA相互作用。
安立国第二版动物细胞工程思考题参考答案
哺乳动物的克隆方法：胚胎干细胞核移植、胚胎细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核移植。
第一章绪论课后习题答案1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。
2.追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。
第二章细胞培养1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。
离体细胞必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。
有机体的绝大部分细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长。
动物细胞培养中，大多数细胞必须贴附在固相表面才能生长，当细胞布满表面后即停止生长。
从生长表面脱落进入液体得细胞通常不再生长而逐渐退化，这种细胞称为单层附壁细胞。
贴壁生长的细胞在活体体内时，形态各异，而体外培养状态下则在形态上比较单一而失去其在体内时原有的特征。
按照培养细胞的形态，主要可分为以下几类：成纤维细胞型、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞；少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，如血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞等，这些细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察使细胞呈圆形。
由于悬浮生长于培养液中，因此其生存空间大，具有能够提供繁殖大量细胞、传代方便、易于收获细胞等优点，易于大规模生产，便于过程的控制。
动物细胞培养
4.干细胞的应用 （1）应用原理：有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、 器官的发育、再生和修复等密切相关。 （2）应用实例： 造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的 造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
加培养液
细胞悬液
转入
培养瓶内培养 （原代培养）
（ 细胞贴壁长成单层细胞,有接触抑制现象）
1.取动物组织 （1）取材:一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。 （2）取材原因: 细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养
2.制成细胞悬液
（1）将组织分散成单个细胞
①方法: 机械法 用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间
细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物的细胞增殖能 力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞则相反。所以，一般来 说，幼龄动物的细胞比老龄动物的细胞易于培养。同样，分化 程度越低的细胞，增殖能力越强，所以更容易培养。
2.动物细胞培养和植物组织培养有什么相同和不同之处？
思考-讨论:
（1）培养前为什么分散成单个细胞？
②原因: Ⅰ.从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼 此限制了生长和增殖； Ⅱ.能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。
（2）用培养液将细胞制成细胞悬液。
去掉组织
（一）
动 物
动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官
间蛋白 胰蛋白酶
单个细胞
剪碎
加培养液
细胞 悬浮液
细
分化程度低， 增殖能力强
胞
①成块组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长与增殖 ②利于与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出。
【细胞工程习题总结及参考答案】第12.13章
第十二章动物细胞培养技术一. 思考题1.动物细胞培养所用的培养基有几种类型？答：（1）天然培养基（2）合成培养基（3）无血清培养基2.离体动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？答：不能，动物细胞的全能性随分化程度提高而受到限制，分化潜能变弱，所以动物细胞培养只能是细胞数目增多而不能发育成新的动物个体。
二. 练习题1、一般来说，动物细胞体外培养具有一定的生存期，而且细胞分裂次数也是有限的。
（√）2、分化程度高的比分化低的容易培养;肿瘤组织比正常组织容易培养。
（×）3、利用成纤维细胞比上皮细胞贴壁过程快，大部分成纤维细胞能在短时间内完成附着过程，而上皮细胞在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，以此差别来纯化细胞的方法称酶消化法。
（×）4、在倒置显微镜下可看到动物细胞培养液中有纵横交错的丝状、管状和树枝状菌丝，可判定是已被细菌污染了。
（×）5、中期阻断法是适于贴壁细胞的选择性同步化的方法（×）6、培养液由桃红色变为黄色，是由于CO2积累过多，培养液发生酸化，需要及时调整pH，否则会对细胞发生不利影响，严重时细胞脱落发生死亡。
（√）三、问答题1、在动物细胞培养中常添加血清，血清起到什么作用？答：血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。
氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。
血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。
因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清，动物血清还可起到酸碱度缓冲液的作用。
或者答：血清在动物细胞培养中起着多方面的作用：①提供细胞生存和增殖所必需的生长调节因子。
细胞生物学实验思考题
细胞生物学实验思考题第一篇：细胞生物学实验思考题细胞生物学实验思考题1、为什么暗视场照明的视场暗黑，而样品像明亮？相差显微镜镜检时，为什么要用绿色滤色镜观察活体样本？暗视场显微镜照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的；为获得好的效果，要用波长范围窄的单色光，选用绿色滤光镜，不但可满足这个要求，而且绿色可吸收红外光，减少发热。
2、为什么活细胞不易染色，从细胞生物学角度解释原因。
染色剂一般有剧毒，而细胞膜具有选择透过性，会将一部分对细胞有害的物质阻挡在细胞外，所以活细胞难以染色。
而当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，染色剂得以进入，细胞就被染色。
3、简述中性红染液、詹纳斯绿B染液用于细胞超活染色的原理。
Janus green B活体细胞染色的机理：Janus green B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
Neutral red 碱性染料活体染色的机理：neutral red为弱碱性染料，对液泡系（即高尔基体）的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。
4、什么是细胞骨架？它有何主要功能？生物学中细胞骨架指真核细胞中与保持细胞形态结构和细胞运动有关的纤维网络。
包括微管、微丝和中间丝。
细胞骨架不仅在维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用，而且还参与许多重要的生命活动，如：在细胞分裂中细胞骨架牵引染色体分离，在细胞物质运输中，各类小泡和细胞器可沿着细胞骨架定向转运；在肌肉细胞中，细胞骨架和它的结合蛋白组成动力系统；在白细胞(白血球)的迁移、精子的游动、神经细胞轴突和树突的伸展等方面都与细胞骨架有关。
动物细胞培养技术思考题
《动物细胞培养技术》复习思考题1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高?你认为该如何保证器皿中无杂质?如果器皿中有杂质,会对细胞培养产生什么样的影响?答:①离体细胞对各种毒物都很敏感,若所用器材清洗效果未达到要求,各种毒物会损坏细胞影响实验。
②器皿使用高压灭菌锅,121.3℃,20~30分钟,在取拿的时候用经过高压灭菌后的镊子取拿,避免造成污染。
③2.叙述超净工作台的工作原理?答:超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程,在这个过程中风机起到了心脏的作用。
鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化,净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走,使工作区构成无菌环境。
3.正压过滤器为何会除菌?答:正压式过滤器没有内置灭菌灯,正压式过滤器利用的是两层0.22um孔的过滤膜,这层膜可以将细菌阻挡在膜上,过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗?如果不精确,会导致什么后果?请举例说明。
你认为精确配制各种溶液?答:5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化?答:配制后的液体应呈桃红色,PH值为7.4左右。
苯酚红的变色域:1.2(橙)~3.0(黄), 6.5(棕色)~8.0(紫色),若为黄色,则液体呈酸性,不利于细胞的生存。
6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制答:Ca+2、Mg+2是细胞膜的重要组分,具有使细胞凝聚的作用。
因此,用于分离细胞的消化液宜用无Ca+2、Mg+2离子的D-Hanks液或PBS液。
7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用?答:L-谷氨酰胺是细胞的能量来源;是一种必须氨基酸,是使物体合成核酸、蛋白质、嘌呤、嘧啶的重要前体,也是蛋白质合成分解的调节物;是细胞内氨的清除剂,氨对一些细胞有毒性。
8.HEPES溶液的作用机理?答:它是一种氢离子缓冲剂。
主要作用是防止培养基pH迅速变动9.平衡盐溶液的组成与基本作用?小牛血清在细胞培养中有哪些作用?答:①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
兽医细胞生物学章节思考题及答案
第一章细胞概述8.请简述病毒的生活史。
答：病毒的生活史分为5个基本过程:吸附(absorption): 病毒对细胞的感染起始于病毒蛋白外壳同宿主细胞表面特殊的受体结合，受体分子是宿主细胞膜或细胞壁的正常成分。
因此，病毒的感染具有特异性。
侵入(penetration): 病毒吸附到宿主细胞表面之后，将它的核酸注入到宿主细胞内。
病毒感染细菌时，用酶将细菌的细胞壁穿孔后注入病毒核酸；对动物细胞的感染，则是通过胞吞作用，病毒完全被吞入。
复制(replication): 病毒核酸进入细胞后有两种去向，一是病毒的遗传物质整合到宿主的基因组中，形成溶原性病毒；第二种情况是病毒DNA(或RNA)利用宿主的酶系进行复制和表达。
成熟(maturation): 一旦病毒的基因进行表达就可合成病毒装配所需的外壳蛋白，并将病毒的遗传物质包裹起来，形成成熟的病毒颗粒。
释放(release): 病毒颗粒装配之后，它们就可从被感染的细胞中释放出来进入细胞外，并感染新的细胞。
有些病毒释放时要将被感染的细胞裂解，有些则是通过分泌的方式进入到细胞外。
第二章细胞生物学研究方法1．举例（3～5个）说明研究方法的突破对细胞生物学发展的推动作用。
答：①细胞培养技术，②离心分离技术，③流式细胞分离技术，④基因敲除技术，⑤干细胞培养技术，⑥……7．什么是细胞培养?答：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术为细胞培养技术。
第三章细胞质膜与跨膜运输14. 膜的流动性的生理意义何在？答：①细胞质膜适宜的流动性是生物膜正常功能的必要条件。
②酶活性与流动性有极大的关系，流动性大活性高。
③如果没有膜的流动性，细胞外的营养物质无法进入，细胞内合成的胞外物质及细胞废物也不能运到细胞外，这样细胞就要停止新陈代谢而死亡。
④膜流动性与信息传递有着极大的关系。
⑤如果没有流动性，能量转换是不可能的。
⑥膜的流动性与发育和衰老过程都有相当大的关系。
09动物细胞培养实验
实验一清洗与灭菌（4学时）一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒, 掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作, 了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步, 是组织培养中工作量最大, 也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿, 不仅要求干净透明, 无油迹, 而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质, 哪怕残留0. 1个, 也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要, 对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对, 即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品1. 材料: 无臭氧型紫外灯, 微孔滤膜(直径25): 孔径为0. 22μm, 微孔滤膜(直径90): 孔径为0. 22 μm, 过滤器(直径25)。
2．药品：70％或75％酒精, 0．1％新洁尔灭, 煤酚皂溶液(来苏儿水), 0．5％过氧乙酸, 乳酸, 37％甲醛, 高锰酸钾, NaOH, 盐酸, 重铬酸钾, 浓硫酸(工业)。
3．仪器：超净台, 干燥箱, 高压蒸气灭菌锅, 过滤器, 过滤泵。
四、实验步骤(一)清洗1. 新玻璃器皿的清洗先用自来水刷洗, 再浸泡5％稀盐酸以中和玻璃表面的碱性物质和其他有害物质。
2. 使用过的玻璃器皿的清洗(1)使用过的培养用品应立即浸入清水, 避免干涸难洗。
(2)用洗涤剂清洗玻璃器皿, 自来水清洗数遍, 倒置自然干燥。
(3)浸酸性洗液过夜。
(4)从酸性洗液捞出后自来水冲洗10. 15次去除残余酸液, 蒸馏水涮洗3次, 倒置烘干。
(5)包装(牛皮纸或一般纸)。
(6)高压(15磅20 min)或干热(170℃2 h)灭菌。
(7)贮存备用。
3. 胶塞的处理(1)新胶塞应先用清水清洗之后再用0. 2％NaOH煮沸lO-20 min。
动物细胞培养实验
试验一：试验器材预备【试验原理】细胞培育技术与其他一般试验室工作的主要区分在于要求保持无菌操作，避开微生物及其他有害因素的影响。
一般标准的细胞培育室应包括配液室、预备室和培育室。
三室既相互连接又相对独立，各自完成培育过程中的不同操作。
【试验目的】①培育室的设置和设备。
②无菌概念和无菌操作要领。
【操作步骤】1.试验室设置（1）配液室（2）预备室（3）培育室培育室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要留意以下几点：①培育室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照耀的地方，防止室内温度增高。
②天花板的高度不要超过 2 米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流淌。
④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角积存灰尘。
2.试验室常用设备（1）预备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。
②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。
③枯燥箱：洗涤完的玻璃器皿用枯燥箱烘干。
④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、局部液体、塑料器具等灭菌。
不同物品其有效灭菌压力和时间不同。
⑤储品柜 1：放置未消毒物品。
⑥储品柜 2：放置已消毒物品。
预备室留意事项：①预防蒸馏器被烤干。
②勿将酸液溅到衣物或地面。
③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。
④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
（2）配液室的设备①天平〔扭力天平和电子天平〕：称量用②pH计。
③磁力搅拌器。
（3）细胞培育室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，缓缓通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
依据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，根本原理大致一样，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的干净气流从确定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高干净度工作环境。
细胞工程思考题
细胞工程（动物部分）思考题生技1402 李静1402140105一、动物原代细胞培养应注意哪些问题?答：动物原代细胞培养分为取材、分离细胞、制备成可用于培养的组织块或细胞、接种到合适的无菌培养液中、在适宜的环境条件下进行体外培养等,每个阶段需要注意的问题如下：1)在取材阶段我们需要注意取材部位是否准确、所取材料是否保持活性、材料处理是否得当等问题，一般选择在动物幼小时取材。
整个取材过程一般要在超净工作台或其他工作台面上进行。
在无菌条件下取出组织和器官，放在BSS或培养液中，立即送往实验室。
如果不可避免的要延误时间，如去屠宰场或临床手术室取材时，解取的组织应立即冷却，然后尽快送往实验室;；2)在分离细胞时，由于组织均由多种细胞和纤维成分组成，一般体积大于1mm3 的组织块置于培养瓶后，处于周边的少量细胞可能生存和生长，而大部分细胞因营养物质穿透有限而代谢不良，且受纤维成分束缚而难以移出。
为获取较大量生长良好的细胞，必须把组织分散开，使细胞充分解离出来，但不伤害细胞本身；一定要注意多余水分的去除，水分若不除去，会使组织块剪切不细，消化后的细胞悬液清亮（细胞数少），并可见消化液中有线状或絮状物漂浮。
原代培养的贴壁细胞需控制消化时间。
吹打已消化的细胞应减少机械损伤。
3)在培养细胞时，为促进组织块尽快粘贴在培养瓶上，可以在接种前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。
细胞培养过程中，胶原中的促细胞贴附因子先吸附于培养瓶底壁上，悬浮的圆形细胞再与已吸附有促细胞贴附因子的底壁附着；4)用组织块培养时，要及时观察。
当发现细胞向外迁移出来后，要记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，因为已漂浮的组织块和那些细胞碎片已死亡，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长，要及时清除；5)加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。
6)组织块接种后的前3d，从组织块向外迁移的细胞数很少，组织块的粘附不牢固。
在观察和移动过程中，注意不要引起液体的振荡。
动物细胞培养习题.doc
动物细胞培养习题名词解释1、细胞工程（cell engineering）是指应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论与方法，按照人们的需要和设计，在细胞水平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变生物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。
2、细胞培养（cell culture）将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。
3、细胞核移植(nuclear transplantation)细胞核移植，就是将一个细胞核用显微注射的方法放进另一个细胞里去。
前者为供体，可以是胚胎的干细胞核，也可以是体细胞的核。
4、染色体工程(chromosome engineering )是人们按照一定的设计,有计划地消减,添加或代换同种或异种染色体,从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术.5、胚胎工程(embryonic engineering)胚胎工程：指在胚胎发育过程中进行的生物技术。
包括：胚胎移植、胚胎融合、胚胎分割、胚胎冷冻、胚胎性别鉴定、胚胎细胞核移植、转基因操作。
6、干细胞（stem cell）是一类具有自我复制能力(self-renewing)的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。
7、组织工程；组织工程是指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长的机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。
8、初代培养也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。
9、继代培养对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养10、酶连免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术( immunoenzymatic techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术.它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定.测定的对象可以是抗体也可以是抗原.11、抗原抗原是指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和致敏淋巴细胞结合，发生免疫效应的物质。
生物选修3主动训练2.2.1 动物细胞培养和核移植技术含解析
主动成长夯基达标1。
为了使用于培养的动物组织细胞分散开来以配制一定浓度的细胞悬浮液，选取动物组织后应先用哪种物质处理……（）A。
胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.盐酸D。
胰脂肪酶解析：应先用胰蛋白酶来破坏细胞与细胞之间的连接，使细胞分散开。
答案:B2.在动物细胞培养中，所培养的动物细胞大都取自…（)A。
幼龄动物器官B。
老年动物器官C.中年动物器官D。
中年动物组织解析：动物细胞培养时应选用分裂能力较强的细胞.答案：A3。
下列有关动物细胞培养的叙述中正确的是( ）A.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白B.动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理,以使细胞分散C。
细胞癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中D.培养到50代后的传代细胞称为细胞株解析：动物细胞培养的目的是多方面的，不只是为了获得分泌蛋白。
在细胞培养中,某些细胞癌变发生在50代以后，即传代培养过程中，这些细胞称为细胞系.答案:B4.下列动物细胞中，恢复其全能性相对较容易的是…（）A。
神经细胞B。
骨细胞C。
囊胚期细胞D.肝细胞解析:神经细胞、骨细胞和肝细胞属于体细胞,其分化程度高，恢复全能性相对十分困难。
囊胚期细胞属于动物胚胎细胞，其分化程度低,恢复其全能性相对容易。
答案：C5.下列不属于克隆的是（）A。
植物体通过体细胞进行的无性繁殖B.将某种瘤细胞在体外大量培养繁殖C。
扦插和嫁接D.将鸡的某个DNA。
片段导入小鼠的细胞中,并得以表达解析：将鸡的某个DNA片段导入小鼠的细胞中,并得以表达，属于基因工程；植物体通过体细胞进行的无性繁殖属于植物组织培养；将某种瘤细胞在体外大量培养繁殖属于动物细胞培养技术；扦插和嫁接属于无性生殖中的营养生殖。
答案:D6.动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于（）A。
培养基不同B。
动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C。
动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株解析：动物细胞培养所需的营养物质与体内基本相同，由于人们对动物细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分，而植物组织培养则不需要加上述物质.答案：A7.动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是（）A。
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《动物细胞培养技术》复习思考题
1.动物细胞培养的实验器皿清洗要求为何较高你认为该如何保证器皿中无杂质如果器皿
中有杂质，会对细胞培养产生什么样的影响
答：①离体细胞对各种毒物都很敏感，若所用器材清洗效果未达到要求，各种毒物会损坏细胞影响实验。
②器皿使用高压灭菌锅，℃，20~30分钟，在取拿的时候用经过高压灭菌后的
镊子取拿，避免造成污染。
③
2.叙述超净工作台的工作原理
答：超净工作台最主要的是空气循环过滤的过程，在这个过程中风机起到了心脏的作用。
鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化，净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、
细菌甚至病毒颗粒带走，使工作区构成无菌环境。
3.正压过滤器为何会除菌
答：正压式过滤器没有内置灭菌灯，正压式过滤器利用的是两层孔的过滤膜，这层膜可以将细菌阻挡在膜上，过滤的液体流下去就基本上完成了灭菌过程
4.各种细胞培养用液的配制需要很精确吗如果不精确，会导致什么后果请举例说明。
你认
为精确配制各种溶液
答：
5.配制后平衡盐溶液呈黄色意味着液体的pH发生了什么变化
答：配制后的液体应呈桃红色，PH值为左右。
苯酚红的变色域：（橙）~（黄），（棕色）~（紫色），若为黄色，则液体呈酸性，不利于细胞的生存。
6.用于分离细胞的消化液为什么宜用无Ca、Mg离子的D-Hanks液或PBS液配制
答：Ca＋2、Mg＋2是细胞膜的重要组分，具有使细胞凝聚的作用。
因此，用于分离细胞的
消化液宜用无Ca＋2、Mg＋2离子的D-Hanks液或PBS液。
7.L-谷氨酰胺在营养液中有何作用
答： L－谷氨酰胺是细胞的能量来源；是一种必须氨基酸，是使物体合成核酸、蛋白质、嘌
呤、嘧啶的重要前体，也是蛋白质合成分解的调节物；是细胞内氨的清除剂，氨对一些细胞
有毒性。
8.HEPES溶液的作用机理
答：它是一种氢离子缓冲剂。
主要作用是防止培养基pH迅速变动
9.平衡盐溶液的组成与基本作用小牛血清在细胞培养中有哪些作用
答：①平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH 稳定及提供简单的营养.主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。
②
作用：a提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及某
些低分子营养物质；b提供结合蛋白，识别维生素、脂类、金属离子，并与有毒金属和热
源物质结合，起解毒作用；c是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源；d起酸碱度缓冲液作用；
e提供蛋白酶抑制剂，细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受损伤。
10.营养液制备后为什么要小剂量分装
答：避免营养液被污染后，全部的营养液都被污染。
营养液一次用完过后，下一次的实验就不能用，会引起污染，影响实验，若冷冻营养液，则
营养液的营养成分会有所损失，影响细胞的生长
11.10万U/mL单位青霉素、链霉素的配制方法
答：用注射器吸10毫升双蒸水溶解100万单位的链霉素，弃去2ml，用剩余的8ml链霉素溶解80万单位的青霉素，配制成每毫升青霉素、链霉素各10万单位的母液。
12.细胞培养过程中对无菌的要求很高，你认为该如何操作才能保证培养过程中无微生物污
染请详细阐述。
答：①实验进行前，无菌室及无菌操作台（laminarflow）以紫外灯照射30-60分钟灭菌，
以70%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作
②无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验③进无菌室前要
彻底洗手④使用培养液前不宜过早开瓶，开瓶后的培养液应保持斜位，避免直立，以防止下
落细菌的污染。
⑤操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。
⑥）吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用⑦⑧
13.你认为组织块培养成功需哪些条件你们小组为了实验成功采取了哪些具体的措施你在
本次实验中做了什么工作
答：①实验所用的器材必须保证无菌无毒，用胰蛋白酶（浓度适中）消化的时间不宜过长和
过高、营养、温度
14.组织块培养的基本原理如何
答：细胞增殖
15.何时须更换培养基进行传代可否使用与原先培养条件不同之血清种类来进行后期的培
养
答：①一般两天换一次,如果细胞贴壁率变化不大,可以适当延长,到细胞贴壁率达到85左右,可以传代②不能。
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对
于细胞的生长会产生极大的影响。
来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上
都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
16.培养细胞时不用CO2或使用 5 % 或10% CO2是否都可以说明原因
答：不是。
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH 的缓冲系统,而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度.当培养基中NaHCO3 含量为每公升 g时,细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3为每公升时,则应使用 5 %CO2培养细胞.
17.你认为心肌细胞培养的基本操作要点是什么你在其中参与了什么操作有什么体会
答：①要点：1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据
组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。
用筛网滤掉未消化的组织块。
2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计
数并用培养液调整细胞密度。
3）、用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
4）、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
18.培养瓶移入CO2恒温箱培养时，瓶盖为何要稍松又如何避免细胞污染如果细胞污染有何
挽救措施
答：①拧紧瓶盖无法进行气体交换，瓶盖稍松才能为细胞生长提供必要的氧气和二氧化碳，
尤其是二氧化碳特别重要，细胞在酸性培养液中生长的更好②
19.胰蛋白酶的消化原理如何如何初步判断胰蛋白酶的消化时间
答：①原理：细胞外含有多种胞外蛋白,如胶原蛋白；使细胞间或细胞与培养瓶内壁粘连起
来.用胰蛋白酶分解这些蛋白质后就可以使它们分开了! ②显微镜下观察细胞：倒置显微镜
下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再链接成片，表明此时细胞消化适度。
2~10
分钟
20.细胞培养到一定时间为何要进行传代能一直传代下去吗阐述其机理。
答：①因为进入衰亡期,细胞发生接触抑制,营养逐渐耗尽,有毒废物积累,细胞变大自溶.这时就要重新接种培养。
②不能。
正常细胞每分裂一次端粒会逐渐缩短，分裂次数过多会衰老直至死亡。
但肿瘤细胞除外。