菊花的组织培养(市公开课)

③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分
思考：你打算做几组重复？打算设置对照实验 吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
课题1 菊花的组织培养
学习目标
掌握植物组织培养相关理论知识。 熟悉植物组织培养的基本过程。 理解细胞分化概念及脱分化，再分化。
课题重点与难点
课题重点细胞分化，脱分化，再分化。
活动一：
1.什么是细胞分化？原因和结果？ 2.什么是脱分化、再分化？ 3.愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？ 4.组织培养的过程？以及组织培养的理论基础？
植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势
使用顺序
先使用生长素，后使用 细胞分裂素
先使用细胞分裂素后使 用生长素
同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响
基础知识----相关概念
1.细胞分化：
概念：在个体发育中，相同细胞的后代在形态、 结构、生理功能上发生稳定性差异的过程
原因：基因在特定的时间和空间条件下的 选择性表达的结果
结果： 形成各种组织器官
2.脱分化：
由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织 的过程，又叫去分化。
3.再分化：
脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可 以重新分化成根或芽等器官。
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成， 每次使用器械后，都需要用 火焰灼烧灭菌，接种后立即 盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－ 4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充 分利用培养基中的营养成分和光照条件
活动二：
1. 影响组织培养的因素？ 2.菊花组织培养应注意的问题？ 活动三：用自己的话把菊花组织培养的操作 流程给描述出来?（提示：怎样配制MS培 养基?外植体消毒应如何进行?接种、培养、 移栽时应注意什么问题? ）
活动一：
什么是细胞分化？原因和结果？ 什么是脱分化、再分化？ 愈伤组织是怎样形成的？有什么特点？ 组织培养的过程？以及组织培养的理论基础？
实验操作
制备MS固体 培养基
外植体消毒
接种
冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌 水冲洗至少三次之上
培养
栽培
移栽
（二）外植体消毒 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝
2、消毒：
流水冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞— 无菌水冲洗至少三次之上
（三）接种
1、接种室消毒
用70％的酒精喷雾使空气消 毒，酒精或新洁尔灭搽洗工 作台并用紫外线照射20分钟
生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化
生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑 制根的分化
生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长
（4）、消毒 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境
（5）、pH、温度、光照 菊花： pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光 照12h
活动三：
用自己的话把菊花组织培养的操作流程给 描述出来?（提示：怎样配制MS培养基?外 植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时 应注意什么问题? ）
（3）植物激素的影响
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素
生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、 吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、 吲哚丁酸（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT）
赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用
菊花的组织培养：一般选择未开化植株的 茎上部新萌生的侧枝
（2）、培养基的配制(MS培养基)
大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
4.愈伤组织
愈伤组织是外植体通过 细胞分裂形成的，其细胞 排列疏松而无规则，高度 液泡化呈无定形状态的薄 壁细胞。
5.外植体：由活体植物体上提取下来的，接种
在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。
6.植物组织培养的基本过程
离体器官、 组织或细胞
脱分化 愈伤组织
再分化 根、芽
植物体
离体条件下利用人工培养条件在无菌情况下 培养、生长、发育再生出完整植株的过程。
（五）移栽 1、打开封口膜 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养 瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过 毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间
珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、 透性好，适合栽培 3、移栽
幼苗长壮后，移栽到土壤中
（六）栽培
7.植物组织培养的理论基础：
细胞全能性：具有某种生物全套遗传信息的 任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的 能力，即每个生物细胞都具有全能性。
细胞全能性表达条件： 离体、一定的营养物质、激素和其他
外界条件
活动二：
影响组织培养的因素？ 菊花组织培养应注意的问题？
影响植物组织培养的因素：
（1）、外植体的选取 不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞 的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满 足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后 所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营 养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需 提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长 必须的大量元素和微量元素两大类。