体液蛋白质检验-天然药物化学精品课程

2. 溴甲酚绿结合清蛋白法（BCG法） 灵敏 度高，血清用量少，操作简便，但特异性不高， 部分球蛋白也能与之结合（α1-球蛋白、运铁蛋 白、触珠蛋白等），是目前临床上测定清蛋白的 常规方法。
（五）利用沉淀后借浊度或光折射测定 如 比浊法、折光测定法，方法简便，试剂易得， 但浊度的强弱受反应的条件影响大（加试剂的 方法、温度等），结果准确性差，一般用于尿、 脑脊液蛋白测定。
【试剂】双缩脲试剂 未失结晶水的硫酸 铜（CuSO4·5H2O）3.0g溶于500ml新鲜制备的蒸 馏水或刚煮沸冷却的去离子水中，加酒石酸钾钠 （ NaKC4O4H6·4H2O ） 9.0g ， 碘 化 钾 5.0g ， 待 完 全溶解后加入6mol/L NaOH溶液100ml，最后加 蒸馏水至1L，置聚乙烯瓶内盖紧保存。
2. 紫外吸收法 在280nm处有一吸收峰，快 速、简单，不需加任何试剂，保留蛋白质活性， 化学干扰大。
（四）利用与染料的结合能力
1. 考马斯亮蓝G-250结合蛋白法（CBB法） 1976年Bradford应用于蛋白质测定，操作简便、 快速、重复性好，灵敏度高，干扰因素少，但特 异性不高，大分子肽（分子量300以上），也参 与反应，线性范围窄，临床上主要用于尿、脑脊 液蛋白质测定。
（六）电泳法 CAE、PAGE目前临床上常 用电泳技术，但只能测定各种蛋白质的百分含 量。
（七）利用免疫学特性 免疫化学法，特异 性、灵敏度高，只能用于某种特异蛋白的测定。
二、血清总蛋白的测定（双缩脲法）
【原理】蛋白质分子中的肽链在碱性条 件下能与二价铜离子作用生成紫红色的络合 物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质 的含量成正比，但双缩脲反应并非蛋白质特 有的颜色反应，分子中含二个以上肽键者均 有此反应。
（十一）C-反应蛋白（CRP） 是一种能结合 肺 炎 双 球 菌 细 胞 壁 C- 多 糖 的 蛋 白 质 ， 分 子 量 11.5～14万，五条肽链组成，肝细胞合成。CRP 能激活补体，促进粒细胞、巨噬细胞的运动和吞 噬，具有调理素样作用。
CRP测定方法 免疫扩散法，火箭免疫电泳 法，ELISA法，放免法，
1. 维持血浆胶体渗透压 清蛋白。
2. 作为某些物质的载体 如清蛋白能 与多种物质结合（FA、胆红素），而某 些球蛋白具特异地运输某些物质的功能， 运铁蛋白、运皮质醇蛋白。
3. 维持体液pH恒定 血浆蛋白PI一 般都小于7.4是弱酸，一部分的弱酸盐形 式存在，构成缓冲对。
4.免疫功能 血浆中汗多具有免疫功 能的球蛋白，主要由浆细胞合成，电泳时 位于r区带，如IgG、IgA、IgM、IgD、 IgE，此外，还有具有免疫作用的非特异 球蛋白，如补体。
【参考范围】1.25～4.10g/L
【临床意义】白（CER）含铜的糖蛋白，分 子量约12～16万，含糖量约10％，因含铜而呈蓝 色，故名铜蓝蛋白。主要由肝脏合成。
CER具有氧化酶活性，使血液中Fe2+氧化成 Fe3+，故又称亚铁氧化酶。CER还起着抗氧化剂 的作用。防止组织中脂质过氧化物和自由基的生 成。
CER测定方法 免疫化学法或酶活性测定。
【参考范围】0.2～0.5g/L。
【临床意义】CER属于急性时相反应蛋白。 在感染、创伤和肿瘤时上升，Wilson病（肝豆状 核变性）CER下降。
（九）转铁蛋白（TRF） 血浆中主要含铁 蛋白质，分子量7.7万，含糖约6％，由肝及网 状皮系统合成，半寿期7天。
（十）β2-微球蛋白（BMG） 由淋巴细胞合 成，分子量11800，pI5.7，存在于所有有核细胞 的表面，特别是淋巴细胞和肿瘤细胞并由此释放 入血，半寿期107min。
BMG测定方法 常用放免法，ELISA法。
【参考范围】1.0～2.5mg/L。
【临床意义】主要用于监测肾小管功能，特 别是肾移植后，如有排异反应，BMG在尿中排 出量上升，肾功能衰竭，炎症、肿瘤血浆BMG 上升。
5.凝血与纤溶作用 凝血与纤溶是一 对矛盾的统一、凝血因子与纤溶因子绝大 部分是血浆蛋白质，它们促进血液凝固， 防止血液流失和溶解血栓，防止重要脏器 的动脉栓塞。
6.营养作用 血浆蛋白质可分成 AA，用于合成组织蛋白或氧化供能。
7.催化作用 血浆中有汗多酶类， 其中部分在血浆中发挥作用，称血浆功 能性酶，如凝血酶原、纤溶酶原、铜蓝 蛋白、LPL、LCAT、肾素等。
当严重肾病是肾小球失去分子筛作用， 可导致非选择性蛋白质丢失，表现为广泛 地低血浆蛋白质血症。
第二节 体液蛋白质测定
生化检验中测定蛋白质的方法很多，主 要利用蛋白质的分子组成，结构或性质进行。
一、蛋白质测定方法及评价
（一）测定蛋白质特征元素——氮 如凯 氏定氮法，是测定蛋白质的经典方法，1883 年Kjeldahl首创，精密度准确度高，但操作复 杂、费时、技术性强，不适合临床常规检测， 一般用于标准血清的标定和校正。
（二）利用重复的肽链结构 如双 缩脲法，1914年首创，操作简便，重 复性好，各种蛋白产生的颜色反应相 近，但灵敏度较低，是目前临床上测 定总蛋白的常规方法。
（三）利用酪氨酸、色氨酸残基与试剂的反 应或紫外吸收特性
1. 酚试剂法 1921年，Folin首创，1951 年改良成广泛使用的Lowry法，灵敏度高（较双 缩脲法高100倍），主要用于微量蛋白质检测， 但各种蛋白质中酪氨酸含量不一，故准确性较差， 试剂配制复杂且不稳定，化学干扰大，目前临床 上仅用于粘蛋白测定。
（七）α2-巨球蛋白（α2MG或AMG）是血 浆中分子量最大的蛋白质，分子量为62.5～80 万，含糖量8％。 AMG由肝细胞与单核吞噬细 胞系统合成，半寿期5天。
AMG最突出的特性能与多种分子和离子 结合，特别是它能与不少蛋白水解酶结合而影 响这些酶的活性，有选择地保护某些蛋白酶活 性的作用。
AMG测定方法 免疫化学法，
（六）结合球蛋白（ Hp）又名触珠蛋 白，是一种糖蛋白，主要由肝合成，电泳 时位于α2区带，是一种急性时相反应蛋白， 为两对肽链组成的四聚体（α2β2）。α链有 α1和α2两种，其中α1有两种遗传变异体。
Hp的主要功能与血浆中游离血红蛋白 结合，（不可逆结合），并送至肝细胞内 降解，因此Hp在溶血后含量急剧下降。
主要运载由消化道吸收的铁和RBC降解释 放的铁，此外还可逆地结合多价金属离子，如 Ca、Zn、Cu等。
TRF测定方法 放免法、散射比浊法。
【参考范围】2.5～4.3g/L。
【 临 床 意 义 】TRF 在 急 性 时 反 应 中 下 降 ， 如炎症、恶性病变时、TRF、Alb、PA同时下 降，慢性肝现营养不良亦下降，妊娠、口服避 孕药，注射雌激素TRF上升。
（二）肝脏疾病
血浆蛋白质大多数由肝脏合成，因此肝 脏疾病可导致多种血浆蛋白质发生变化。
如乙肝活动期AAT↑，Hp、PA、Alb↓， 特别是血浆PA的含量是肝功能损伤的敏感指 标。
肝硬化时AAT、IgA、AMG↑↑，CER、 CRP↑ ， 而 AAG 、 Hp 、 C3↓ ， PA 、 Alb 、 TRF↓↓。
（四）α1-酸性糖蛋白（α-AG或AAG）分 子量约4万，含糖约45％，pI2.7～3.5，主要 由肝细胞合成，某些肿瘤组织也可合成。 AAG是主要的急性相反应蛋白，急性炎症时 上升，与免疫防御功能有关。
AAG测定方法 使用AAG抗体，进行免 疫散法或免疫比浊法检测，
【参考范围】0.25～2.0g/L
第一节 概 述
一、血浆蛋白质的组成、功能及分类
（一）血浆蛋白质的组成 血浆蛋白 质是血浆固体成份中含量最多、组成复 杂、功能广泛的一类化合物。占血浆固 体成份90％左右，目前已经研究的血浆 蛋白质有500多种，分离出的纯品物200 来种，除免疫球蛋白外，主要由肝细胞 合成。
（二）血浆蛋白质的功能
（三）肾脏疾病
肾脏疾病可出现蛋白尿而导致血浆蛋 白质丢失，丢失的蛋白质与其分子量有关。 小分子量蛋白质丢失最明显，而大分子量 的蛋白质因肝细胞代偿性地合成增加，绝 对含量升高。所以血浆Alb、PA、AAG、 AAT 、 TRF↓ ， 而 AMG 、 β-LP 、 Hp↑ ， 这 称为选择性蛋白质丢失。
二、个别血浆蛋白质
（一）前血蛋白（pueallumun PA）分子 量5.4万，由肝细胞合成，电脉时移速较白蛋 白快，位于其前方面得名，半寿期短12h，PA 是一类运载蛋白，一种能与甲状腺素结合， 称为甲状腺结合蛋白，一种能与VitA结合， 称为VitA结合蛋白，常用测定方法是免疫化 学方法，
【参考范围】0.2～0.4g/L,
【参考范围】＜8.0mg/L。
【临床意义】作为急性时相反应的一个极灵 敏指标 ，急性心肌梗死，创伤、感染、炎症、 外科手术、肿瘤浸润迅速上升。
上述蛋白质除PA、Alb、BMG 外都属于糖蛋白，含糖量最高的是 AAG、45％，除BMG外都主要由肝 细胞合成。
三、疾病时的血浆蛋白质
（一）炎症、创伤
在炎症、创伤、感染、心肌梗塞、肿瘤 等情况下其血浆浓度会发生明显改变的蛋白 质 称 为 急 性 时 相 反 应 蛋 白 （ acute phase reactants APR）。主要包括AAG、AAT、 Hp、CER、C3、C4、纤维蛋白原、CRP↑； PA、Alb、TRF↓。
【参考范围】35～55g/L
【临床意义】血浆白蛋白增高临床少见， 主要见于严重失水引起血液浓缩。血浆白蛋 白降低临床常见。①合成障碍急、慢性肝炎。 ②丢失过多，肾病综合症、慢性肾小球、肾 炎、糖尿病、系统性斑狼疮等。③分解过多， 营养不良，慢性胃肠道疾病。
（三）α1-抗胰蛋白酶（α1AT或AAT）， 分子量5.5万，pI4.8，含糖10％～12％，电泳 时位于α1区带，占90％左右，由肝细胞合成， 能抑制多种酶活性，尤其是蛋白酶，占血清 中抑制蛋白酶活力的90％左右，抑制作用有 明显的pH依赖性，在中性和弱碱性中活力最 大。
【临床意义】主要作为急必时相反应的指 标，风湿病、恶性肿瘤、心肌梗塞患者上升， 营养不良、严重肝病下降。