DNA 的粗提取与鉴定
《DNA 的粗提取及鉴定》 讲义
《DNA 的粗提取及鉴定》讲义一、引言DNA 作为生命的遗传物质，承载着生物体的遗传信息。
对 DNA 的研究有助于我们深入了解生命的奥秘、疾病的发生机制以及进行法医学鉴定等。
DNA 的粗提取及鉴定是分子生物学中的基础实验技术，下面我们就来详细了解一下。
二、实验目的1、了解 DNA 粗提取的原理和方法。
2、学习 DNA 的鉴定方法。
三、实验原理1、 DNA 在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同在014mol/L 的氯化钠溶液中，DNA 的溶解度最低。
利用这一特点，可以使 DNA 从细胞中析出。
2、 DNA 不溶于酒精溶液但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，从而可以将 DNA 与蛋白质进一步分离。
3、 DNA 遇二苯胺会呈现蓝色这一特性可用于鉴定 DNA。
四、实验材料和用具1、材料新鲜的鸡血细胞液（也可以使用菜花、洋葱等材料）2、用具研钵、烧杯、玻璃棒、漏斗、纱布、试管、量筒、体积分数为 95%的酒精溶液、2mol/L 的氯化钠溶液、0015mol/L 的氯化钠溶液、二苯胺试剂等。
五、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入抗凝剂，离心或静置沉淀，除去上清液，得到鸡血细胞液。
2、破碎细胞，释放 DNA取 20mL 鸡血细胞液倒入烧杯中，加蒸馏水到 100mL，搅拌均匀。
然后向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞破裂，释放出 DNA。
3、去除杂质（1）过滤用纱布过滤含 DNA 的溶液，取滤液。
（2）去除核蛋白向滤液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液 40mL，搅拌 1min，使核蛋白充分溶解。
然后缓慢加入蒸馏水，同时轻轻搅拌，直至溶液中氯化钠浓度达到 014mol/L，此时 DNA 会析出，用多层纱布过滤，取纱布上的黏稠物。
4、 DNA 的进一步提纯将上述黏稠物放入 20mL 体积分数为 95%的酒精溶液中，搅拌，使DNA 沉淀。
然后用玻璃棒卷起沉淀，放入试管中。
5、 DNA 的鉴定（1）向两支试管中分别加入 2mol/L 的氯化钠溶液 5mL。
dna粗提取与鉴定实验知识点
dna粗提取与鉴定实验知识点一、实验原理。
1. DNA的溶解性。
- DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。
在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，在此浓度下，DNA的钠盐形式会从溶液中析出；而在2mol/L的NaCl溶液中，DNA的溶解度较高。
- DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。
利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。
2. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性。
- 蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。
- 大多数蛋白质不能忍受60 - 80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
- 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA无影响。
3. DNA的鉴定原理。
- 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
二、实验材料的选取。
1. 选用鸡血细胞作为实验材料的原因。
- 鸡血细胞中红细胞有细胞核，含有丰富的DNA，而植物细胞需要研磨等复杂操作才能释放出DNA。
- 鸟类的血红细胞有细胞核，而哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，不能用于提取DNA。
三、实验步骤及注意事项。
1. 实验步骤。
- 制备鸡血细胞液：取鸡血细胞液（加柠檬酸钠抗凝），离心或静置后取下层血细胞。
- 提取细胞核物质：将血细胞放入蒸馏水中，细胞吸水涨破，释放出核物质（包括DNA和蛋白质等），然后用纱布过滤，取滤液。
- 溶解DNA：在滤液中加入2mol/L的NaCl溶液，使DNA溶解。
- 析出含DNA的黏稠物：向上述溶液中缓慢加入蒸馏水，使NaCl溶液浓度降低至0.14mol/L，此时DNA的溶解度最低，会析出，过滤后取黏稠物。
- 将DNA的黏稠物再溶解：将黏稠物放入2mol/L的NaCl溶液中，使DNA再次溶解。
- 过滤含DNA的NaCl溶液：用纱布过滤，除去不溶的杂质。
- 提取较纯净的DNA：向滤液中加入冷却的酒精溶液（体积分数为95%），DNA不溶于酒精，会析出白色丝状物，这就是较纯净的DNA，用玻璃棒搅拌后可以卷起。
DNA的粗提取与鉴定
DNA 的粗提取与鉴定
一、实验原理：
1、析出DNA 的原理：DNA 在NaCL 溶液中的溶解度是随着NaCL 浓度的变化而变化的，当NaCL 的物质的量浓度为0.14mol/L 时，DNA 的溶解度最低，高于或低于这一浓度溶解度都会增高。
如图：
2、提纯DNA 的原理：
DNA 不溶于冷酒精，而细胞中某些物质可溶于冷酒精。
3、鉴定原理：DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色。
二、方法步骤：
材料准备：常用鸡血细胞液
柠檬酸钠(抗凝剂)+鸡血−−−→静置或离心
血浆(弃去)+鸡血细胞液。
如图：
说明：①柠檬酸钠防止血液凝固。
②弃去上清液，是因为DNA 存在于血细胞中，血浆很少(没有)。
③用鸟类血细胞是因为鸟类成熟红细胞含DNA ，而哺乳动物成熟红细胞不含DNA ，所以不能用。
④本实验还可以用菜花或动物肝脏等作实验材料。
第一次在2中，使DNA与蛋白质分离
①两次加入高浓度NaCL
第二次在5中，DNA再溶解
第一次在1中，使细胞吸水涨破
②两次加入蒸馏水
第二次在3中，降低DNA的溶解度
第一次在1中，取滤液(含核物质)
③三次过滤第二次在4中，取黏稠物质
第三次在6中，取滤液
说明：在第一、三次取滤液时，纱布1—2层，第二次取黏稠物时纱布应多层。
④5次搅拌均要求超一个方向，轻缓，防止DNA断裂。
(二
璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA。
高中生物实验—DNA的粗提取和鉴定
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4
3、方法与过程
1).制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌， 离心或静置沉淀。 活鸡鲜血180mL
血浆
血细胞 离心或静置后去掉上清液
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关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较， 最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题： （1）鸡血中红细胞 含有完整的、成形的细胞核，家鸡属于鸟类， 新陈代谢旺盛，因而血液中 红 细胞数目较多，可以提供丰富的 DNA量，所以一般采用鸡血 （2）实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料，而不用 鸡全血，主要原因是 鸡的全血包括血浆和血细胞，血浆中无DNA， 全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液，DNA的相对含量提高了。
）
DNA在不同浓度的NaCl 溶液中的溶解度不同 溶于NaCl ，在0.14 mol/L的 溶液中并 NaCl溶液中的溶解度 稀释 最低
DNA不被蛋白酶所水解 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质（酶的专一性
DNA耐高温
DNA不溶于酒精溶液
高温
DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA 热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～ 80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。
2)实验方法步骤：
提取细胞核物质： 利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，后用纱布过滤取其滤液。 血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得出含核DNA的溶液。
溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质)
8 用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。 洋葱的鳞片叶表皮细胞
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注
意
DNA的粗提取与鉴定
二、实验原理 2.DNA的分离和提纯
DNA溶于2mol /L的NaCl溶液,但 不溶于冷酒精，细胞中的其它杂 质溶于冷酒精。
二、实验原理 3.DNA的鉴定
DNA与二苯胺作用生成蓝色沉 淀用来鉴定 DNA（沸水浴）
实验步骤
一、取材：香蕉去皮、洗洁精、食盐溶液、95％酒精等
二、DNA的释放、溶解、获取
实验材料
研磨提取粗提取、提纯恒 温 水 浴 加 热实验现象一
实验现象二及比较
作业： 1.如果选用实验材料是鸡的血细 胞，请写出实验操作步骤； 2.你做的实验现象是怎样的？请 分析或推测原因，并拟定证明你 的推测的进一步实验方案。
1.往研钵香蕉加入10mlNaCl溶液和少量的洗洁进行研磨； 2.用漏斗一层纱布过滤，取滤液； 3.往滤液中加入等量的95%的酒精，静置2--3分钟； 4.用玻棒卷起白色絮状物，用吸水红吸去水分后放入试 管，加入4ml 2mol /L的NaCl溶液充分溶解。
三、DNA的鉴定：找实验老师加4ml二苯胺溶液，在 恒温水浴锅加热2--3分钟，观察现象并分析实验结果。
一、实验目标 1.用15分钟左右的时间尝试对
香蕉组织中的DNA进行粗提取； 2.学会用二苯胺对粗提取的DNA
进行鉴定； 3.能对实验结果进行分析评价。
二、实验原理 1.DNA的释放 洗涤剂等去污剂可以溶解香
蕉细胞的细胞壁，破坏细胞膜， 同时也能使蛋白质变性。 （教材P55)洗涤剂能够瓦解细胞 膜,但对DNA没有影响。
dna的粗提取与鉴定
dna的粗提取与鉴定DNA的粗提取与鉴定一、粗提取粗提取的方法是通过物理和化学方法从一个或多个生物样品中提取DNA样品，通常是为了进行DNA分子生物学分析、基因组学以及其他科学研究。
1. 用拆解液拆解细胞使用拆解液拆解细胞是最常用的粗提取DNA技术。
主要使用的拆解液有Tris-EDTA（TE buffer）、Cetyltrimethyl ammonium bromide （CTAB）、Sarkosyl（SDS）和NaOH溶液等。
各种拆解液的比例和温度可以根据每个实验的要求进行调整。
2. 用磁珠或磁性分选器抽提也可以使用磁珠或磁性分选器来抽提DNA样品。
这种方法可以从多种生物样品中提取DNA，如血清、血浆、细胞粗提物以及血液细胞等。
磁珠抽提的原理是利用磁性珠子来吸附DNA样品，而磁性分选器则是利用磁场将DNA分离出来。
磁珠抽提的优点是简单快捷，缺点是提取的DNA质量不够高。
3. 改良的拆解方式一些改良的拆解方式可以用来考察某一特定细胞类型。
这些方法包括冷冻破碎、湿热破裂、极限温度破裂和化学破裂等。
这些技术可以有效地提高蛋白质和DNA的提取效率，但缺点是需要较高的技术要求，而且操作步骤较多，比较耗时。
二、DNA的鉴定DNA的鉴定是指用特定的方法和技术，明确某个DNA样品的鉴定。
常见的DNA鉴定技术有定性分析、定量分析和活性检测等。
1. 定性分析定性分析是指对DNA样品进行定性鉴定，识别出它们是哪种DNA，以确定其基本性质。
常用的定性分析方法有紫外光检测和酶切检测等。
紫外光检测是将DNA浓度调整至1μg/ml，然后放置在紫外光228纳米的紫外灯管（UV lamp）下，通过分析紫外光吸收光谱来鉴定DNA 样品。
酶切检测是将DNA样品与特定的酶进行反应，用来分析DNA的特征。
常用的酶有限制性内切酶（restriction enzymes），例如EcoRI、BamHI、PstI和HindIII等。
2. 定量分析定量分析是指对某一DNA样品的浓度和数量进行测量，以了解其容量。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定
方法步骤：
1.溶解鸡血细胞核内的DNA
取一个125mL烧杯，注入15mL蒸馏水，注入1mL制备好的鸡血细胞液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向快速搅拌5min，血细胞吸入大量水分而被胀破（搅拌加速破开裂），释放出DNA。
向烧杯中注入20mL 2mol/L的NaCl溶液，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向搅拌1min，混合均匀，DNA溶解。
2.析出含DNA的粘稠物
取150mL蒸馏水，沿烧杯壁缓慢加入，同时，用玻璃棒沿顺（或逆）时针方向缓慢不停地搅拌，大量含DNA的粘稠物逐渐析出，并吸附在玻璃棒周围，此时，溶液中NaCl浓度为0.14mol/L.
3.洗涤粘稠物——提取含杂质较少的DNA
取一个100mL的烧杯，注入25mL 95%酒精（常温），持玻璃棒连同吸附的粘稠物转移到注入酒精的烧杯中，沿顺（或逆）时针方向搅拌1—2min，血色及大部分杂质被洗去，缠绕在玻璃棒上的丝状物，其主要成分是DNA（含杂质较少）。
4.DNA的鉴定
取两只试管，分别加入2mL 0.015mol/L NaCl溶液，1号试管中加入丝状物，用玻璃棒搅拌，混合均匀，两只试管中分别加入2mL二苯胺试剂，振荡，水浴3min，1号试管变深蓝色（说明DNA 的量多），冷却后蓝色略深，2号试管无颜色变化。
注意：操作步骤2中搅拌不能快，以免析出的粘稠物被搅碎，搅拌后难以进行后面的操作。
DNA的粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定（一）实验原理鸟类血液中红细胞有细胞核，细胞核内DNA与蛋白质结合成染色质。
利用DNA在0.14mol/L的氯化钠溶液中溶解度最低，而蛋白质此时的溶解度高的特点，可以使DNA与蛋白质分离，形成沉淀析出，通过过滤，得到粗提取的滤出物DNA。
再利用DNA不溶于酒精，但细胞中的其他物质可溶于酒精的特点，进一步提取出含杂质较少的DNA。
利用DNA遇二苯胺（沸水浴）成蓝色的特性，可以鉴定提取的DNA。
（二）实验材料（以鸡血为例）鸡血细胞液：先配备10%的柠檬酸钠溶液，按180mL新鲜鸡血混合100mL10%柠檬酸钠溶液的比例，立即将血液与柠檬酸钠充分混合，同时用玻璃棒搅拌以免凝血。
然后，用离心机以2000转/min的速度离心4min后，用吸管除去离心管上清液，就可获得所需的鸡血细胞悬液。
每组大约需要5—10mL鸡血细胞悬液。
如果无离心机，可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀后，也可获得所需的鸡血细胞悬液。
（三）试剂与仪器1、2mol/L的NaCl溶液称取117g的NaCl，加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解，即可获得2mol/L 的NaCl，须按此配方配备大量的2mol/L 的NaCl。
2、二苯胺试剂A液——1.5g二苯胺溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。
B液——体积分数为0.2%的乙醛溶液。
实验前，将0.1mL的B液加入到10mL的A液中，现配现用。
3、0.015mol/L的NaCl溶液称取0.88g氯化钠加蒸馏水至1000mL，使之完全溶解。
4、塑料杯和试管DNA易吸附在玻璃器皿上，用塑料杯和试管可减少提取过程中DNA的损失。
（四）实验方法与步骤1、提取细胞核物质取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中，加蒸馏水20mL，同时，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌，使血细胞过度吸水破裂，细胞核内物质释放出来，然后用纱布过滤取其滤液。
2、溶解核内的DNA在滤液中加入2mol/L的NaCl40mL，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，核中DNA游离并充分溶解，染色质中的DNA和蛋白质分离。
dna粗提取与鉴定
dna粗提取与鉴定DNA粗提取与鉴定DNA是生命的基础，它携带了生物体的遗传信息。
在现代分子生物学中，DNA的提取和鉴定是非常重要的技术。
本文将介绍DNA粗提取和鉴定的方法。
一、DNA粗提取1.1 细胞破碎法细胞破碎法是一种常见的DNA粗提取方法。
它通过机械或化学手段破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的DNA。
机械方法包括高压均质和超声波破碎等，化学方法包括SDS、NaOH等。
这些方法都可以有效地破坏细胞结构，但同时也会对DNA造成一定程度的损伤。
1.2 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA粗提取方法，它利用酚对蛋白质和核酸有不同的溶解度来分离DNA。
首先用盐水或缓冲液洗涤样品，然后加入酚/氯仿混合液，在离心后上层为水相（含RNA）、中间为界面层（含蛋白质）和下层为有机相（含DNA）。
通过抽取下层的有机相，可以得到粗提的DNA。
1.3 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效的DNA粗提取方法，它基于DNA和硅胶之间的亲和力。
首先将样品加入硅胶柱中，然后用盐水或缓冲液洗涤硅胶柱，最后用低盐缓冲液洗脱DNA。
这种方法可以得到较纯的DNA，并且适用于大量样品处理。
二、DNA鉴定2.1 凝胶电泳凝胶电泳是一种常见的DNA鉴定方法，它利用电场将带电的DNA分子移动到凝胶上。
根据不同长度的DNA片段在凝胶中行进速度不同来分离不同大小的DNA片段。
通过比较样品中不同长度的DNA条带，可以确定样品中是否存在目标序列。
2.2 PCR扩增PCR扩增是一种高效、敏感、特异性强的鉴定方法。
它通过引物特异性识别目标序列，在体外进行大量扩增。
PCR扩增可以检测极少量的目标序列，并且能够对复杂混合物进行分析。
2.3 DNA测序DNA测序是一种直接读取DNA序列的方法。
它通过将PCR扩增的目标片段或提取的DNA样品，进行测序仪读取，得到目标序列的具体信息。
这种方法可以检测出极少量的变异或突变，并且可以对整个基因组进行分析。
三、总结DNA粗提取和鉴定是现代分子生物学中非常重要的技术。
DNA的粗提取与鉴定
4.DNA的再溶解。 用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。 5.DNA的沉淀和浓缩。 对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进 一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的 DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可 以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物， 悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰 箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒 （玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。 6.DNA的鉴定。 100℃ DNA＋二苯胺 蓝色物 鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。
二、方法与过程
1.制鸡血细胞液
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌， 离心、分离或静置沉淀。 活鸡鲜血180mL 2.提取DNA ⑴.提取细胞的核物质： ①取鸡血细胞液5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个 方向快速搅拌。 ②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。 ③原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速 搅拌，加速细胞破裂。 ⑵.溶解核内的DNA： 滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向 轻缓搅拌，使DNA充分溶解。
DNA的粗提取与鉴定
一、实验原理 1.血细胞在蒸馏水中因渗透吸水过度而导致细胞膜和细 胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。 2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度 的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14 mol／L 的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使 溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶 于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少 的DNA。 4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺 可以作为鉴定DNA的试剂。
DNA的粗提取与鉴定
DNA粗提取及鉴定实验原理及说明1.DNA在氯化钠中溶解度是随着氯化钠的浓度的变化而变化。
当氯化钠的物质的量的浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低。
利用这一原理可以使溶解在氯化钠溶液中DNA析出。
2.DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些物质则可溶于酒精溶液；3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
实验内容和步骤1.实验准备：（1）用具：铁架台，酒精灯，石棉网，玻璃棒，滤纸，滴管，量筒（1000ml）,烧杯（100ml、500ml、50ml、1000ml各8个。
试管20ml8支），漏，试管夹，纱布。
（2）药品：95%酒精（实验前冷却24小时），蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L和0.015 mol/L的氯化钠溶液饲料，二苯胺试剂。
2.实验方法和步骤（1）制备鸡血细胞：取质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液（抗凝剂）100ml，置于500 ml的烧杯中。
将宰杀活鸡血（约180 ml，两只鸡）注入烧杯，搅拌，离心机离心2min（1000r/min），使血细胞沉淀，吸出上清夜，得到血细胞。
（2）提取核物质：取5-10ml血细胞至50ml烧杯中，加20ml蒸馏水，搅拌5min，过滤至1000ml 烧杯中，取其滤液。
（3）溶解DNA：将2mol/L的氯化钠溶液40ml加到滤液中，搅拌1min。
（4）析出DNA的粘稠物：向烧杯中加如蒸馏水，轻轻沿一个方向搅拌，当粘稠物不再增加时停止加水(约20 ml左右)。
（这时氯化钠浓度相当于0.14mol/L）。
（5）滤取含DNA的粘稠物：用放有多层纱布的漏斗过滤上步的溶液至1000ml的烧杯中，含DNA 的粘稠物被留在纱布上。
（6）DNA的粘稠物再溶解：向50ml烧杯中注入2mol/L氯化钠溶液20ml，将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，搅拌3min。
（7）过滤含有DNA的氯化钠溶液：取100ml烧杯，两层纱布漏斗过滤上步溶液。
2023高中生物人教版DNA的粗提取与鉴定实验教案
2023高中生物人教版DNA的粗提取与鉴定实验教案一、实验目的通过本实验，学生将了解到DNA的结构和提取方法，并学会进行DNA的粗提取与鉴定实验。
二、实验原理DNA是一种复杂的分子，存在于细胞核中。
DNA的提取是将细胞溶解，分离出DNA分子的过程。
本实验采用CTAB法进行DNA的提取。
CTAB（正十六烷基三甲基溴化铵）可与DNA中的脂质结合，使其在酒精中沉淀出来，然后进行纯化。
三、实验材料1. 鸽子肌肉组织2. CTAB提取液（含CTAB、EDTA等）3. 去离子水4. 洗涤溶液（含乙醇、酒精等）5. 漂白粉溶液6. 碘酒溶液7. NB试剂液（含甲酚、硫酸等）8. DNA鉴定试剂盒9. 细胞破碎管10. 离心管11. 显微镜四、实验步骤1. 取适量鸽子肌肉组织，用漂白粉溶液清洗约5分钟，然后用去离子水洗净。
2. 将清洗后的组织切成小块，加入细胞破碎管中。
3. 加入适量的CTAB提取液，轻轻颠倒破碎管，使其均匀混合。
4. 将混合液放入水浴中加热，温度控制在60℃，保持30分钟。
5. 在水浴中加热过程中，制备NB试剂液。
取一定体积的NB试剂液加入离心管中。
6. 完成加热后，将破碎管置于冷水中快速降温。
7. 按顺序加入等体积的NB试剂液和酒精，轻轻摇晃离心管。
8. 静置一段时间后，观察管内是否有白色物质沉淀，即DNA。
9. 使用显微镜观察提取的DNA样品，并拍照记录。
五、实验结果与分析通过上述实验步骤，我们成功从鸽子肌肉组织中提取到了DNA。
观察显微镜下的DNA样品，可以观察到DNA的纤维状结构，证明DNA成功提取。
通过DNA鉴定试剂盒，可以进一步鉴定DNA的质量和纯度。
六、实验扩展1. 不同来源的细胞组织是否存在DNA含量差异？2. 不同提取方法对DNA的效果有何不同？3. 通过PCR技术对提取的DNA进行进一步分析。
七、实验注意事项1. 实验过程中需注意个人安全，避免接触有害物质。
2. 实验器材需干净无污染，避免杂质对实验结果的影响。
实验05DNA的粗提取与鉴定
专题05DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1．提取DNA的原理利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。
(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2 mol/L 的NaCl溶液。
2．鉴定DNA的原理在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。
二、方法步骤1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。
2．去除滤液中的杂质方案一在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液方案二直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液3．DNA方案一在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分方案二将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干4.DNA取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。
将丝状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。
三、操作提示1．以血液为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3 g柠檬酸钠，防止血液凝固。
2．加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
四、关键点拨1．利用动物细胞提取DNA时，破碎细胞的方法：动物细胞无细胞壁，可直接使其吸水涨破。
2．不能选用哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料，原因是哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。
《DNA 的粗提取及鉴定》 讲义
《DNA 的粗提取及鉴定》讲义一、DNA 粗提取及鉴定的原理1、 DNA 在不同浓度氯化钠溶液中的溶解度不同在 014mol/L 的氯化钠溶液中，DNA 的溶解度最小；随着氯化钠溶液浓度的升高，DNA 的溶解度逐渐增大。
利用这一原理，可以将 DNA 与其他杂质分离。
2、 DNA 不溶于酒精溶液但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精溶液。
利用这一特点，可以进一步提纯 DNA。
3、 DNA 遇二苯胺试剂会呈现蓝色这是鉴定 DNA 的常用方法。
二、实验材料的选择1、材料选取的原则应选取 DNA 含量相对较高的生物组织，以保证实验能够提取到足够量的 DNA。
同时，材料应新鲜，以避免 DNA 降解。
2、常见的实验材料鸡血细胞是进行本实验的常用材料之一。
鸡血细胞中 DNA 含量丰富，且取材方便。
三、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入柠檬酸钠溶液中，防止血液凝固。
然后离心或静置，使血细胞沉淀，去除上清液，留下鸡血细胞液。
2、破碎细胞，释放 DNA向鸡血细胞液中加入蒸馏水，使细胞吸水涨破，释放出细胞内的物质，包括 DNA。
3、去除杂质（1）过滤：用纱布过滤，去除较大的杂质。
（2）溶解：向滤液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液，使 DNA 充分溶解。
（3）析出：缓慢加入蒸馏水，使氯化钠溶液浓度降低至014mol/L，此时 DNA 溶解度最小，析出白色丝状物。
（4）过滤：用多层纱布过滤，收集 DNA 黏稠物。
4、 DNA 的进一步提纯将 DNA 黏稠物放入 2mol/L 的氯化钠溶液中溶解，然后加入等体积冷却的酒精溶液，轻轻搅拌，DNA 会析出，而蛋白质等杂质则溶解在酒精溶液中。
再次过滤，得到较纯净的 DNA。
5、 DNA 的鉴定取两支洁净的试管，分别编号为 1、2。
向 1 号试管中加入 2mL 氯化钠溶液（0015mol/L），作为对照。
向 2 号试管中加入 2mL DNA 提取液。
然后向两支试管中各加入 4mL 二苯胺试剂，混合均匀后，在沸水浴中加热 5 分钟。
dna的粗提取与鉴定实验报告
dna的粗提取与鉴定实验报告DNA 的粗提取与鉴定实验报告一、实验目的1、了解 DNA 粗提取的原理和方法。
2、学习并掌握 DNA 鉴定的基本技术。
二、实验原理1、 DNA 在氯化钠溶液中的溶解度随氯化钠浓度的变化而改变。
在014mol/L 的氯化钠溶液中，DNA 的溶解度最低。
2、 DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质（如蛋白质）则溶于酒精。
3、 DNA 与二苯胺试剂在沸水浴条件下会呈现蓝色反应，从而可以鉴定 DNA 的存在。
三、实验材料和用具1、材料新鲜的鸡血细胞液（抗凝剂处理）2、用具（1）烧杯、玻璃棒、滴管、量筒、离心机、纱布、漏斗、铁架台、酒精灯、石棉网、三角架、火柴。
（2）体积分数为95%的酒精溶液、2mol/L 的氯化钠溶液、蒸馏水、二苯胺试剂。
四、实验步骤1、制备鸡血细胞液将新鲜的鸡血加入抗凝剂，静置一段时间后，离心处理，去除上清液，留下鸡血细胞液。
2、提取细胞核物质向鸡血细胞液中加入 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌均匀，使血细胞破裂，释放出细胞核物质。
3、溶解 DNA沿烧杯壁缓缓加入蒸馏水，并不断搅拌，直到溶液中氯化钠浓度降至 014mol/L 时，DNA 溶解度最小，此时会有白色丝状物析出。
4、过滤含 DNA 的黏性物用多层纱布过滤上述溶液，滤去杂质，留下含 DNA 的黏性物。
5、进一步提纯 DNA将上述黏性物再溶解于 2mol/L 的氯化钠溶液中，然后过滤，除去不溶的杂质。
6、析出 DNA向滤液中缓缓加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为 95%的酒精溶液，并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现白色的丝状 DNA。
7、 DNA 的鉴定取两支洁净的试管，分别编号为 1、2。
向 1 号试管中加入 2mol/L的氯化钠溶液 2mL，向 2 号试管中加入 DNA 丝状物和 2mol/L 的氯化钠溶液 2mL。
然后向两支试管中各加入 4mL 二苯胺试剂，混合均匀后，将试管置于沸水浴中加热 5 分钟，观察颜色变化。
DNA粗提取和鉴定实验
DNA的粗提取与鉴定实验一、实验原理①DNA主要存在于细胞核②DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的.当NaCl的物质的量浓度为 mol／L时,DNA的溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出.③DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA.⑷DNA遇二苯胺沸水浴会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂.二、实验材料和用具鸡血细胞液5~10ml；体积分数为95%的冷酒精溶液实验前置于冰箱内冷却24h；蒸馏水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯化纳溶液新教材不要求0、015的浓度了,都是用的2mol/L；二苯胺试剂；铁架台；镊子；水浴锅；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒100ml,一个；烧杯；1000ml,一个,50ml、100 ml 、500ml 各二个；试管20ml,二个；漏斗；试管夹；纱布.三、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液抗凝剂100ml,置于500ml烧杯中.注入新鲜的鸡血约180ml,同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血.将烧杯中的血液置于冰箱内,精置一天,使血细胞自行沉淀.也可以将血液倒入离心管内,用1000r/min转每分的离心机离心2min,血细胞沉淀于离心管底部.实验时.用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液.四、方法步骤①提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL,注入到50 mL烧杯中.向烧杯中加入蒸馏水20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌5 min,使血细胞加速破裂.然后,用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000mL.取其滤液.②溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态 .③析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色.继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于 mol／L经验值：需加约570mL蒸馏水,且分多次加入.将溶液中的DNA与其他杂质分离,这一步骤是实验成败的关键.实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子的附着和缠绕.④滤取含DNA的粘稠物用放有多层纱布的漏斗,过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中,含 DNA的粘稠物被留在纱布上,滤液丢弃.⑤将DNA的粘稠物再溶解取 1个 50 mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL.用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中,用玻璃棒不停地搅拌,约3分钟,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中.⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液取1个100 mL烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液.取其滤液,DNA溶于滤液中.⑦提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中,加入等体积的、冷却的、体积分数为 95％的酒精溶液使用冷却的酒精,对DNA的凝集效果较佳,并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少的白色丝状物.用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分.这种丝状物的主要成分就是DNA.⑧ DNA的鉴定取两支20 mL的试管,各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂.混合均匀后,将试管置于沸水中加热 5 min,待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化.五、讨论①两次使用蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第一步第二次：使 DNA黏稠物析出第三步②三次过滤第一次： DNA存在于滤液里第一步第二次： DNA被留在纱布上第四步第三次： DNA存在于滤液里第六步过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关,第二次要用其滤出的黏稠物有关,所以要使用多层纱布,第一次和第三次均要用其滤液,使用的纱布为1－2层③两次析出第一次：用 mol／L 的NaCI溶液含杂质多第三步第二次：用冷却的95％的酒精第七步④六次搅拌：第一、二、三、五、七、八步其中除第八步外,其余均要朝一个方向搅拌,在第三、五步搅动还要轻缓,玻璃棒不要直插烧杯底部,这样才能保证得到完整的DNA为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质.因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质在NaCl溶液浓度低于 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在 mol/L 时,DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大.。
DNA粗提取与鉴定
DNA的粗提取与鉴定2 .操作过程⑴操作流程选取材料一破碎细胞，获取含DNA的滤液一去除滤液中的杂质—DNA的析出与鉴定。
⑵材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织。
⑶破碎细胞①动物细胞：易破碎，可通过吸水破裂。
②植物细胞：加入洗涤剂、食盐后研磨。
⑷除去杂质的方法方法一：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过调节NaCl溶液的浓度除去溶于和不溶于NaCl溶液中的杂质。
方法二：利用DNA对酶的耐受性，直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10〜15 min,嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质，而不会破坏DNA。
方法三：利用DNA对高温的耐受性，将滤液放在60〜75 ℃的恒温水浴箱中保温10〜15 min,使蛋白质变性沉淀而DNA分子还未变性。
⑸DNA的析出：向处理后的滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液体积分数为95%）,静置2〜3 min,溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。
⑹DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。
易错警示（1）本实验不能用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，原因是哺乳动物成熟红细胞无细胞核。
可选用鸡血细胞作材料。
⑵实验中两次使用蒸馏水，第一次的目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA,第二次的目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。
1 •下图表示以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取与鉴定的操作程序，请分析回答下列问题:(1)步骤一中，向鸡血细胞液中加入并搅拌，可使鸡血细胞破裂。
⑵步骤二中，过滤后收集含有DNA的。
⑶步骤三、四的操作原理是 _______________________________________________________________________________________________________ ；步骤四中，通过向溶液中加入调节NaCl溶液的物质的量浓度至_____________________ mol/L时，DNA 将会析出，过滤去除溶液中的杂质。
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DNA 的粗提取与鉴定
实验目标
初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。
实验原理
DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。
当氧化钠的物质的量浓度为0. 14 ml/L时DNA的容解度最低。
利用这原理，可以使溶解在氧化钠溶液中的DNA析出。
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原
理,可以进步提取出含杂质较少的DNA。
DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
实验器具
鸡血细胞液(5~ 10 mL)。
铁架台、铁环、镊子、三角架、酒精灯、石棉网、载玻片、玻璃棒、滤纸、滴管、量筒(100 mL,1个)、烧杯(100 mL,1个;50mL,500 mL各2个)、试管(20 mL,2个)、漏斗试管夹、纱布。
体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24 h)蒸馏水、质量浓度为
0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液、物质的量浓度分别为2 mol/L和0.015 mol/L 的氯化钠溶液、二苯胺试剂。
实验探究与过程
实验前需要制备鸡血细胞液(由教师完成),制备的方法是:取质量依度为0.1gml
的柠檬酸钠济液(抗凝剂)100 ml,置于500 ml烧杯中。
将宰杀活鸡流出的鸡血(约
180mt)注人烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。
然后，将血液倒人离心管内,用1000 r/min(转每分)的离心机离心2 min,此时血细胞沉淀于离心管底部。
实验时,用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。
(如果没有离心机，可以将烧杯中的血液置于冰箱内，静置天,使血细胞自行沉淀。
)
1.提取鸡血细胞的细胞核物质
将制备好的鸡血细胞液5~10 mL,注人到50 ml,烧杯中。
向烧杯中加人燕馏水探
20 m,同时用坡璃棒沿一个方向快速搅拌5 min ，使血细胞加速破裂。
然后,用放有纱布的漏斗将血细胞液过德至500ml,的烧杯中,取其滤液。
2.溶解细胞核内的DNA
将物质的量浓度为2 mol/L的氯化钠溶液40 mL加人到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1 min, 使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。
3.析出含DNA的黏稠物
沿烧杯内璧缓级加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿-一个方向不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。
继续加人蒸馏水，浴液中出现的黏稠物会越来越多。
当黏稠物不再增加时停止加人蒸馏水。
(这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol/L.)
4.滤取含DNA的黏稠物
用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至500mL的烧杯中，含DNA的黏稠物被留在纱布上。
5.将DNA的黏稠物再溶解
取一个50 mL烧杯，向烧杯内注人物质的量浓度为2 mol/L的氯化钠溶液20mL。
用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至氯化钠溶液中,用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌3min, 使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。
6.过滤含有DNA的氯化钠溶液
取一个100 mL.烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。
取其滤液,DNA溶于滤液中。
7.提取含杂质较少的DNA
在上述滤过的溶液中，加入冷却的、体积分数为95%的酒精溶液50 mL(使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳),并用玻璃棒沿一个方向搅拌，溶液中会出
现含杂质较少的丝状物。
用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。
这种丝状物的主要成分就是DNA。
注意观察丝状物是什么颜色的。
DNA的鉴定
取两支20 m的试管，各加人物质的量浓度为0.015 mol/L的氯化钠溶液5 ml.o
将丝状物放人其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物落解。
然后，向两支试管中各加入4 mL的二米胺试剂。
混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min,
待试管冷却后,观察并月比较两支试管中溶液颜色的变化。
归纳整理
本实验成功的关键是，能否提取到较纯净的DNA丝状物。
为此，操作过程中应注意如下几点:
1.血细胞液加水后,必须充分搅拌.不应少于5 min.否则血细胞不会充分破碎,释放出的DNA就会减少。
过滤时采用单层纱布。
2.当NaCl溶液加人到山细胞液中之后，必须充分晃动烧杯,使者混合均匀。
这样可以加速核蛋白解聚，游离出DNA,并使DNA充分溶解于浓NaCl溶液中。
3.“析出DNA"的步骤中，必须充分加水，才能稀释NaCl溶液，使DNA溶解度变小，蛋白质溶解度增大,二者分离。
同时，应用玻璃棒不停地缓缓搅动，使DNA聚集(玻璃有吸附DNA的作用)。
如果在此步骤中，再增加离心或过滤(多层纱布过滤)，则可得较黏稠的丝状物(含DNA)。
4.在“析出的DNA再溶解”的步骤中，加入浓NaCl溶液之后，必须充分揽拌，使DNA 充分溶解。
5.用冷酒精浓缩和沉淀DNA时,所用的95%酒精必须经过充分预冷后才能使用，因此应在冰箱中(至少5C以下)至少存放24h。
二者的体积比为1:2.即将1份含DNA的NaCl溶液加入到2份的冷酒精中。
卷起DNA丝状物的方法是，缓缓旋转玻璃棒。
如果用冷酒精处理后悬浮于溶液中的丝状物较少，可将混合液放人冰箱中再冷却几分钟,然后再用玻璃棒卷起丝状物。
6.正确搅拌含有悬浮物的溶液:实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。
在进行步骤3、5时，玻璃棒不要直插烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。
进行步骤7时，要将玻璃棒插人烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动5~10min(因玻璃棒有吸附DNA 的作用)。