组培实验课件
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《植物组织培养实验》PPT课件
• 6-BA：1mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏 水定容）。
• NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后
以蒸馏水定容）。
精选PPT
6
三、作业：
• （一） 一般可将MS培养基分为哪四个部分？分别含有几 种试剂？各种试剂的浓度（mg/L）如何？
• （二） 如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、 100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA（浓度为 1 mg/mL）各50 mL，则应分别称取多少量的各种试剂？ 注意要点有哪些？
精选PPT
12
（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等 浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。 这是进一步减少污染的处理。
同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。
精选PPT
13
• （三） 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从 高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。打开超净工 作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30 min 后关掉紫外灯。
•目的与要求：
熟悉MS培养基的组成，掌握 贮备液的配制方法.
•实验步骤：
称量 定容。
分别溶解
混合
精选PPT
2
一，MS培养基的组成
1、大量成分→贮备液I mg/L
NH4NO3 KNO3 CaCl2 2H2O 40
1650 1900
4
MgSO4 7H2O
370
KH2PO4
170
00mL.
配制20倍浓度贮备液5
• （二）操作人员坐到超净台前，用浸有70%酒精的棉球擦 超净台面、操作者手等部分。
• （三）点燃酒精灯，从装有无菌苗的培养瓶中取出无菌 苗，置于无菌的培养皿中的无菌滤纸上，用灭过菌的刀 和镊子配合操作，从叶柄处切下，将所有叶片去除，只 留下近茎部的一小段叶柄。
• NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后
以蒸馏水定容）。
精选PPT
6
三、作业：
• （一） 一般可将MS培养基分为哪四个部分？分别含有几 种试剂？各种试剂的浓度（mg/L）如何？
• （二） 如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、 100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA（浓度为 1 mg/mL）各50 mL，则应分别称取多少量的各种试剂？ 注意要点有哪些？
精选PPT
12
（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等 浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。 这是进一步减少污染的处理。
同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。
精选PPT
13
• （三） 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从 高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。打开超净工 作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30 min 后关掉紫外灯。
•目的与要求：
熟悉MS培养基的组成，掌握 贮备液的配制方法.
•实验步骤：
称量 定容。
分别溶解
混合
精选PPT
2
一，MS培养基的组成
1、大量成分→贮备液I mg/L
NH4NO3 KNO3 CaCl2 2H2O 40
1650 1900
4
MgSO4 7H2O
370
KH2PO4
170
00mL.
配制20倍浓度贮备液5
• （二）操作人员坐到超净台前，用浸有70%酒精的棉球擦 超净台面、操作者手等部分。
• （三）点燃酒精灯，从装有无菌苗的培养瓶中取出无菌 苗，置于无菌的培养皿中的无菌滤纸上，用灭过菌的刀 和镊子配合操作，从叶柄处切下，将所有叶片去除，只 留下近茎部的一小段叶柄。
组培课件
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对 植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑 制根的分化 生长素 ＝ 细胞分裂素： 促进愈伤组织生长 （4）pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日 用日光灯照射12h.
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种
4、接种注意事项 ①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种. ②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－4 块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充分 利用培养基中的营养成分和光照条件. ③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分.
人工种子
组织培养与常规繁殖相比优点众多
同常规的无性繁殖方法相比，组织培养快速繁殖法主要具有以 下优点： （1）快速。 采用常规的方法如分株法，一棵花卉一年一般只能生产几株或几十 株，但用组织培养的方法则每年可以繁殖出几万甚至数百万的 小植株。 （2）全年生产。花卉组织培养快速繁殖是在实验室中进行，因条 件可控，所以不受季节限制，可以全年进行连续生产。而常规 的无性繁殖则受季节限制，只能在花卉生长季节进行繁殖。 （3）经济效益高。花卉组织培养快速繁殖所需要的空间小，在一 个200平方米的培养室内一年可生产试管苗上百万株。如按每株 1元计算，每年产值上百万元。 （4）以组织培养繁殖的种苗与母株有著相同的遗传基因。所以使 用这项技术可让优良的品种不断地延续。
菊花的组织培养
《组织培养》PPT课件
力。
整理课件
30
3、逐步添加和逐步排除的试验方法：
在植物组织分化与再生的研究中，在没有 取得可靠的分化与再生之前，往往添加各种 有机营养成分，而在取得了稳定的再生之后， 就可以逐步减少这些成分。在逐步添加时是 使试验成功，在逐步减少时是缩小范围，以 便找到最有影响力的因子，或是为了实用上 的需要竭力使培养基简化，以降低成本和利 于推广。在寻求最佳激素配比时，也经常用 到这种加加减减的简单方法。
整理课件
4
二、培养基特点
1.MS培养基：无机盐和离子浓度较高， 比较稳定的离子平衡溶液。养分数量和比 例较合适，硝酸盐含量较其他培养基高， 广泛应用于植物的器官、花药、细胞和原 生质体培养。
2.B5培养基：含有较低的铵，这个成分可 能对不少培养物生长有抑制作用，双子叶 特别是木本植物适合于B5培养基。
铁(Fe)、硼(B)、锰(Mn)、锌(Zn)、铜(Cu)、钼 (Mo)、钴(Co)、氯(Cl)。
整理课件
8
2）有机成分
有机成分（organic compound）： 指植物生长发育时必需的有机碳、、 氢、氮等物质。主要有糖、维生素、 肌醇、氨基酸等。
整理课件
9
①糖（sugar）
糖既可作为碳源，为培养的外植体 提供生长发育所需的碳骨架和能源外， 还具有维持培养基一定渗透压的作用。 常用蔗糖，浓度为1～5%。
4)水解酪蛋白（CH） 为蛋白质的水解物，主要成分为氨基酸， 使用浓度为100—200mg／L。受酸和酶的作用易分解，使用时要 注意。
5)其他 酵母提取液(YE)(0.01%-0.05%)，主要成分为氨基酸和维 生素类；麦芽提取液(0.01%～0.5%)、苹果和番茄的果汁、黄瓜的 果实、未熟玉米的胚乳等。遇热较稳定，大多在培养困难时使用，
实验植物的组织培养.精选ppt
〔四〕生长素与细胞分裂素使用配比对实验结果的影响
二、实验操作
制备MS固体 培养基
外植体消毒
接种 培养
栽培
移栽
〔一〕制备MS固体培养基
1、配制母液
按照MS培养基成分表, 分别配制培养基的母液。 (1)大量元素母液(10倍液)
分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约 800ml热的〔60-80℃〕蒸馏水中。〔一种成分完全溶解 后再参加下一种，最后加水，定容至1000ml后装入试剂 瓶中，(2)冰微量箱元内素贮母存液备(10用0〕倍液。)
第四部分 浅尝现代生物技术
实验植物的组织培养
实验目的
1、进行菊花的组织培养 2、尝试植物激素的应用
一、根底知识分析
〔一〕组织培养的生殖方式
通过必修课的学习，我们已经了解到大多 绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有 没有不用种子来培育植物的方法呢？
扦插
营养繁殖
嫁接
无性繁殖
压条
组织培养
〔二〕植物组织培养的根本过程
四、本课题知识小结
概念
菊 原理：细胞的全能性 基础
花
条件
的 组
植物组织培养 的基本过程： 外植体
愈伤 组织
根、芽 植株
外植体的选择
织 影响植物组织
营养因素
培 培养的因素
环境因素（温度、PH、光照）
养
制备
植物激素配比
实验过程：
MS培 养基
外植体 消毒
接种
培养 移栽
栽培
五、练习
１．在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列 的消毒，灭菌，并且要求无菌操作？
做好统计和对照，填好结果记录表，培养严谨的科学 态度。从实验的第一步开始就要求做好实验记录，实验 小组配制不同培养基，如诱导愈伤或直接分化丛芽的培 养基，然后做不同配方的比较。
植物的组织培养课件
应用领域与前景展望
要点一
应用领域
植物组织培养技术已广泛应用于快速繁殖、无病毒苗培育 、种质资源保存、次生代谢产物生产、基因工程等方面。 例如，通过植物组织培养技术可以快速繁殖名贵花卉、果 树等经济作物；培育无病毒苗可以提高作物产量和品质； 利用植物细胞培养生产次生代谢产物如紫杉醇等具有重要 药用价值的化合物。
选用高效外植体
选择生长旺盛、再生能力强的 外植体，提高诱导率和增殖倍 数。
引入新技术
如微繁殖技术、胚胎培养技术 等，降低实验成本和提高实验
效率。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
培养箱
提供恒定的温度、湿度和光照 条件，用于植物组织的培养。
高压灭菌器
对培养基、器械等进行高温高 压灭菌处理，确保无菌操作。
显微镜及成像系统
观察植物组织生长情况，记录 实验数据。
实验室安全管理与操作规范
实验室安全制度
制定并执行实验室安全管理制度，确保实验 人员遵守安全规定。
无菌操作规范
遵守无菌操作原则，避免污染培养物。
06 植物组织培养技术应用实 例分析
快速繁殖优质种苗技术
实验室条件下的无菌操作
利用植物组织培养技术，在实验室内进行无菌操作，可以快速繁 殖出大量优质种苗。
缩短繁殖周期
通过组织培养技术，可以缩短植物的繁殖周期，提高繁殖效率。
保持优良品种特性
组织培养繁殖可以保持母株的优良性状，避免品种退化。
脱毒苗生产技术
营养物质和添加剂对增殖分化的影响
营养物质
植物组织培养需要充足的营养物质，包括碳源、氮源、无机盐、维生素等。这些营养物质为细胞提供 能量和合成物质的原料，对细胞的增殖和分化具有重要影响。
植物组织培养PPT课件
在植物体内
限制
游离
表现
植物体的任何一个细胞，都有长成完整个体的潜在能力
.
5
01
培养基
在组织细胞生长过程中提供所需的营养物质
.
6
02
组培苗的生长过程
.
7
02
组培苗的生长过程
转苗
出瓶
.
8
03
植物组织培养的意义
.
9
03
快速繁殖
稀有植物 繁殖能力低或不能用种子繁殖的植物 受地理环境及季节因素限制的植物
.
10
04
组培的实验条件
.
11
04
超净工作台
提供无菌无尘的工作环境
照明灯
紫外线灯
风机
视频介绍
.
12
04
培养室
控制光照、温度，并 保持相对的无菌环境
.
13
05
转苗操作步骤
.
14
05
操作步骤
准备工作 01
1.将操作时需要用到的物品（酒精灯、一对镊子、托盘、培养基等） 放于超净工作台台内喷洒70%酒精后开启超净台紫外灯照射消毒 30min左右 2.戴口罩，70%酒精消毒双手 3.取一对镊子于酒精灯火焰的外焰灼烧约1-2min后放置至恢复室温 备用
.
18
05
每瓶接7-10株
接苗深度：将根部插入培 养基，露出根茎结合部 （过深不利于苗的生长） 尽量使苗直立固定
.
19
The end 希望同学们学有所成
.
20
1.取适量的苗于托盘中后，将培养瓶盖上盖子 （盖前同样转动灼烧瓶口） 2.左右手各持一把镊子，将托盘里的苗分成一株 株同时把夹带的培养基、枯叶等杂质与苗分开
植物组织培养试验课件
四、实验报告 将本次实验内容整理成实验报告并探讨外 植体灭菌不彻底的可能原因有哪些。
实验三 无菌材料的继代培养
一、 实验目的
进一步熟悉无菌操作的过程，为后续实 验培养植物材料。
二、材料、试剂与用具 1、材料：植物组培苗。 2、仪器：超净工作台、长手术剪、长镊子、 烧杯（500ml）、培养皿等。 3、试剂：培养基 （MS+0.2mg/LIBA+0.5mg/L6-BA）、70% 乙醇。
三、方法步骤 1、接种人卫生处理及准备 洗净双手，剪掉长指甲，更衣，戴帽和口 罩，换拖鞋。 2、超净工作台操作及接种准备 预先打开紫外灯照射20min,同时打开风机， 空白培养瓶放入超净工作台。接种用具齐全。 接种前关闭紫外灯，打开日光灯。
3、手及工作台面消毒 自瓶中倒出酒精棉球，先手心后手背手指 尖擦试，然后用酒精棉球擦试接种活动区域。 4、接种器材消毒灭菌操作 点燃酒精灯。然后自灭菌过的塑料袋中取 出接种工具及培养皿，分别用酒精棉球按先 后顺序擦试培养皿和接种工具，而后灼烧灭 菌。接种工具灼烧后置于距胸前的培养皿上。
H3BO3 0.31g，NaMoO4· 2H2O 0.0125g， MnSO4· 4H2O 1.115g， CuSO4· 5H2O 0.00125g， ZnSO4· 7H2O 0.43g CoCl2· 6H2O 0.00125g KI 0.0415g
（2）母液2的配制 称量：用电子天平称取CaCl2.2H2O22.0g。 定容：加蒸馏水定容至500ml成100倍液 （3）母液3的配制 称量：用电子天平称取KH2PO48.5g 定容：加蒸馏水定容至500ml成100倍液。
（4）母液4的配制 称量：用电子天平称取下列药品，分别放 入烧杯。 Na2-EDTA 1.85g FeSO4.7H2O 1.39g 混合：用少量蒸馏水将药品分别溶解后混 合。 定容：加蒸馏水定容至500ml成100倍液。
选修一 第四部分 实验11 植物的组织培养 ppt（26张PPT）浙科版
1.MS培养基(用于配置发芽和生根培养基) 2.萘乙酸用少量0.1mol/LNaOH溶液溶解，苄基腺嘌呤 用少量0.1mol/LHCL溶解 3.发芽培养基(灭菌) 4.生根培养基(灭菌)
MS固体培养基成分及比例
培养基需具备五大类营养要素
大量元素 微量元素 有机成分：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
实验步骤:
•①超净台中 无菌条件下 切取无菌培 养菊花苗段, 每段至少带 有1张叶片
•②丛状苗培养:酒精灯 旁将每段放入发芽培养 基,茎部分插入,盖上封 口膜,每瓶可放2-3段, 日 光灯下保持18-25℃,每 天光照不少于14.5h,2-3 周培养成丛状苗
实验11 植物组织培养
试管苗大规模培养
实验目的:
1.进行菊花的组织培养 2.尝试植物激素的应用
通过必修课的学习，我们已经了解到大 多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那 么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？
扦插
营养繁殖
嫁接
无性繁殖
压条
组织培养
一、组织培养概述
1.概念
组织培养就是取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、 花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基 上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生 根发芽。
蛭石是一种天然、无机，无毒的矿物质，在高温 作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物 ，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从它的 外形看很像云母。
污染途径
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
MS固体培养基成分及比例
培养基需具备五大类营养要素
大量元素 微量元素 有机成分：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗
污染的预防措施
（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保证接种与培养环境清洁
实验步骤:
•①超净台中 无菌条件下 切取无菌培 养菊花苗段, 每段至少带 有1张叶片
•②丛状苗培养:酒精灯 旁将每段放入发芽培养 基,茎部分插入,盖上封 口膜,每瓶可放2-3段, 日 光灯下保持18-25℃,每 天光照不少于14.5h,2-3 周培养成丛状苗
实验11 植物组织培养
试管苗大规模培养
实验目的:
1.进行菊花的组织培养 2.尝试植物激素的应用
通过必修课的学习，我们已经了解到大 多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那 么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？
扦插
营养繁殖
嫁接
无性繁殖
压条
组织培养
一、组织培养概述
1.概念
组织培养就是取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、 花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基 上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生 根发芽。
蛭石是一种天然、无机，无毒的矿物质，在高温 作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物 ，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从它的 外形看很像云母。
污染途径
1、外植体带菌 3、接种操作时带入
2、培养基及接种 器具灭菌不彻底
4、环境不清洁
植物组织培养PPT课件
1978年，Melchers等进行了番茄和马铃薯的体细胞杂交。
1979年，Marton提出了利用植物原生质体和土壤农杆菌共培养的方法进行转化。 1981年，Larkin和Scowcroft引入“体细胞无性系变异（Somaclonal variation）”这一术语。 1982年，Krens等的工作证明，原生质体可以摄入裸露的DNA，表明可以用外源DNA对原生 质体进行遗传转化。 1982年，Zimmermann利用电刺激进行原生质体融合。 1985年，Horsch等用土壤农杆菌对叶盘进行感染和转化，并得到再生的转化植株。
1948年，Skoog等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发生由生长素/腺嘌呤的比例决 定。
1950年，Ball从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。
1952年，Morel和Martin通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同年，首次应用微型嫁接技 术。
1953年，Tuleche首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。
蒜等。
茎尖培养脱毒
virus-free tissue
脱毒马铃薯种薯生物反应器液体培养
2、用于植物遗传育种
包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培 养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质 体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选； 用于植物基因转移操作等。
2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植物生长发育的控制起重要 作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层诱导形成的愈伤组织连续 生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细胞培养也得到了类似的结果。
1979年，Marton提出了利用植物原生质体和土壤农杆菌共培养的方法进行转化。 1981年，Larkin和Scowcroft引入“体细胞无性系变异（Somaclonal variation）”这一术语。 1982年，Krens等的工作证明，原生质体可以摄入裸露的DNA，表明可以用外源DNA对原生 质体进行遗传转化。 1982年，Zimmermann利用电刺激进行原生质体融合。 1985年，Horsch等用土壤农杆菌对叶盘进行感染和转化，并得到再生的转化植株。
1948年，Skoog等通过对烟草茎段和髓培养发现，不定芽和不定根的发生由生长素/腺嘌呤的比例决 定。
1950年，Ball从红杉愈伤组织培养中再生获得器官。
1952年，Morel和Martin通过分生组织培养获得大丽花的脱毒植株，同年，首次应用微型嫁接技 术。
1953年，Tuleche首次从花粉培养中获得银杏的单倍体愈伤组织。
蒜等。
茎尖培养脱毒
virus-free tissue
脱毒马铃薯种薯生物反应器液体培养
2、用于植物遗传育种
包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培 养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质 体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选； 用于植物基因转移操作等。
2、植物组织培养技术的初步形成（1930-1960年）
1933年，我国植物生理学家李继侗培养银杏胚胎，并发现银杏胚乳提取液可促进离体胚的生长。
1937年，White发现B族维生素对离体根培养的重要性。并指出IAA对植物生长发育的控制起重要 作用。
1937,1938年，Gantheret在培养基中加入上述生长因子，使得柳树形成层诱导形成的愈伤组织连续 生长。Nobecomt对烟草种间杂种茎段的形成层细胞培养也得到了类似的结果。
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5
2
3 4 5 序号 1 2
ZnSO4· 7H2O
H3BO3 KI Na2MoO4· 2H2O 成分 CuSO4· 5H2O CoCl2· 6H2O
8.6
6.2 0.83 0.25 规定量 (mg/L) 0.025 0.025
1720
1240 166 50 扩大 称取量 倍数 (mg) 500 500 母液体积 (ml) 100 每升培养基 吸取量(ml)
2,4-D 不溶于水，可用1mol/L的 NaOH溶解后再定容； KT 和 6-BA 先溶于1 mol/LHCl中，再加水定容; 玉米素ZT先溶于少量95%酒精中，再加水定容.
MS培养基大量元素母液用量表
序号 1 2 成 分 KNO3 NH4NO3 规定量 (mg/L) 1900 1650 扩大 倍数 10 10 称取量 (mg) 19000 16500 母液体积 (ml) 1000 每升培养基 吸取量(ml) 100
扩大 倍数
200
称取量 (mg)
400 20 100 100 20000
母液体积 (ml)
1000
每升培养基 吸取量 (ml)
5
1 2 3 4 5
甘氨酸 盐酸硫胺素VB1 盐酸吡哆醇VB6 烟酸 肌醇
3
4 5
MgSO4·7H2O
KH2PO4 CaCl2·2H2O
370
170 440
10
10 10
3700
1700 4400
MS培养基微量元素母液用量表
序号
1
成分
MnSO4· H2O
规定量 (mg/L)
16.9
扩大 称取量 倍数 (mg)
200 3380
母液体积 (ml)
1000
每升培养基 吸取量(ml)
MS培养基贮备液的配置和保存
d. 有机化合物母液：主要是维生素和氨基酸类物质，一般配成50-100倍的母 液，用时按比例吸取。 e. 激素：每种激素必须单独配成母液，其浓度为0.1、0.5或1mg/ml，多数激素 难溶于水，配法如下： IAA、 IBA、 GA3先溶于少量酒精，再加水定容；
NAA 可溶于热水或少量酒精中，再加水定容；
MS培养基铁盐母液用量表
序号
1 2
成分
Na2 –EDTA FeSO4 · 7H2O
规定量 (mg (mg)
200 7460 5560
母液体积 (ml)
1000
每升培养基 吸取量(ml)
10
MS培养基有机物母液用量表
序号 成分 规定量 (mg/L)
2.0 0.1 0.5 0.5 100
实验一
MS培养基贮备液的配置和保存
实验的目的：
熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法。
实验的内容：
称量 分别溶解 混合 定容。
MS培养基贮备液的配置和保存
配制母液有两个好处：可减少每次配制称量药品的麻烦；减少极微 量药品称量时造成的误差。 以MS培养基为例，一般需要准备四种母液： a.大量元素母液：可配成10倍母液，用时按比例吸取。配制母液时应 注意：分别称量；充分溶解；注意混合秩序：Ca2+应最后加入，与 SO42-和HPO42-错开，以免产生沉淀；混合时要缓慢，边搅拌边混 合。 b.微量元素母液：因含量低，一般配成100倍甚至1000倍，用时按比 例吸取。注意的原则同大量元素。 c. Fe盐母液：必须单独配制，一般扩大200倍，用时按比例吸取。在 配制时，EDTA钠盐需用温水溶解，然后与FeSO4液混合，在7580℃之间使其螯合1小时。使用螯合铁的目的：避免沉淀；缓慢不 断地供应铁。
2
3 4 5 序号 1 2
ZnSO4· 7H2O
H3BO3 KI Na2MoO4· 2H2O 成分 CuSO4· 5H2O CoCl2· 6H2O
8.6
6.2 0.83 0.25 规定量 (mg/L) 0.025 0.025
1720
1240 166 50 扩大 称取量 倍数 (mg) 500 500 母液体积 (ml) 100 每升培养基 吸取量(ml)
2,4-D 不溶于水，可用1mol/L的 NaOH溶解后再定容； KT 和 6-BA 先溶于1 mol/LHCl中，再加水定容; 玉米素ZT先溶于少量95%酒精中，再加水定容.
MS培养基大量元素母液用量表
序号 1 2 成 分 KNO3 NH4NO3 规定量 (mg/L) 1900 1650 扩大 倍数 10 10 称取量 (mg) 19000 16500 母液体积 (ml) 1000 每升培养基 吸取量(ml) 100
扩大 倍数
200
称取量 (mg)
400 20 100 100 20000
母液体积 (ml)
1000
每升培养基 吸取量 (ml)
5
1 2 3 4 5
甘氨酸 盐酸硫胺素VB1 盐酸吡哆醇VB6 烟酸 肌醇
3
4 5
MgSO4·7H2O
KH2PO4 CaCl2·2H2O
370
170 440
10
10 10
3700
1700 4400
MS培养基微量元素母液用量表
序号
1
成分
MnSO4· H2O
规定量 (mg/L)
16.9
扩大 称取量 倍数 (mg)
200 3380
母液体积 (ml)
1000
每升培养基 吸取量(ml)
MS培养基贮备液的配置和保存
d. 有机化合物母液：主要是维生素和氨基酸类物质，一般配成50-100倍的母 液，用时按比例吸取。 e. 激素：每种激素必须单独配成母液，其浓度为0.1、0.5或1mg/ml，多数激素 难溶于水，配法如下： IAA、 IBA、 GA3先溶于少量酒精，再加水定容；
NAA 可溶于热水或少量酒精中，再加水定容；
MS培养基铁盐母液用量表
序号
1 2
成分
Na2 –EDTA FeSO4 · 7H2O
规定量 (mg (mg)
200 7460 5560
母液体积 (ml)
1000
每升培养基 吸取量(ml)
10
MS培养基有机物母液用量表
序号 成分 规定量 (mg/L)
2.0 0.1 0.5 0.5 100
实验一
MS培养基贮备液的配置和保存
实验的目的：
熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法。
实验的内容：
称量 分别溶解 混合 定容。
MS培养基贮备液的配置和保存
配制母液有两个好处：可减少每次配制称量药品的麻烦；减少极微 量药品称量时造成的误差。 以MS培养基为例，一般需要准备四种母液： a.大量元素母液：可配成10倍母液，用时按比例吸取。配制母液时应 注意：分别称量；充分溶解；注意混合秩序：Ca2+应最后加入，与 SO42-和HPO42-错开，以免产生沉淀；混合时要缓慢，边搅拌边混 合。 b.微量元素母液：因含量低，一般配成100倍甚至1000倍，用时按比 例吸取。注意的原则同大量元素。 c. Fe盐母液：必须单独配制，一般扩大200倍，用时按比例吸取。在 配制时，EDTA钠盐需用温水溶解，然后与FeSO4液混合，在7580℃之间使其螯合1小时。使用螯合铁的目的：避免沉淀；缓慢不 断地供应铁。