高效液相色谱

高效液相色谱

高效液相色谱仪

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。

目录

化学信息

基本信息

性状描述

物理说明

药理作用

危险说明

历史

特点

主要类型

结构组成

综述

高压输液泵

色谱柱

进样器

检测器

馏分收集器

数据获取和处理系统

分离原理

液—固色谱法

离子交换色谱法

离子对色谱法

离子色谱法

空间排阻色谱法

流程

使用方法

综述

色谱柱的理论板数分离度

拖尾因子

测定方法

综述

面积归一化法

主成分自身对照法内标法

外标法

设备选型

综述

相对分子质量

溶解度

化学结构

仪器设备

综述

高压泵

梯度洗提

进样装置

色谱柱

检测器

应用实例

化学信息

基本信息

性状描述

物理说明

药理作用

危险说明

历史

特点

主要类型

结构组成

综述

高压输液泵

色谱柱

进样器

检测器

馏分收集器

数据获取和处理系统

分离原理

液—固色谱法

离子交换色谱法

离子对色谱法

离子色谱法

空间排阻色谱法

流程

使用方法

综述

色谱柱的理论板数

分离度

拖尾因子

测定方法

综述

面积归一化法

主成分自身对照法

内标法

外标法

设备选型

综述

相对分子质量

溶解度

化学结构

仪器设备

综述

高压泵

梯度洗提

进样装置

色谱柱

检测器

应用实例

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化学信息

基本信息

中文名称：葛根素(HPLC),98%

中文别名：葛根黄酮，8-beta-D-葡萄吡喃糖-4',7-二羟基异黄酮

英文名称：Puerarin

英文别名：8-(β-D-Glucopyranosyl-7-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one 纯度：98%

CAS号：3681-99-0

分子式：C21H20O9

分子量：416.38

HPLC

[1]

性状描述

高含量为白色针状结晶粉末，属于黄酮类。

物理说明

熔点187-189°C

药理作用

具有提高免疫，增强心肌收缩力，保护心肌细胞，降低血压，抗血小板聚集等作用。危险说明

危险品标志:F,C

危险类别码:11-34

安全说明:22-24/25-45-36/37/39-26-16

历史

1906年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法”（Chromotography）和“

实验室最常用的P230高效液相色谱仪

色谱图”（Chromatogram）的概念。他在论文中写到：

“（原文）一植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”

1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。

1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。

1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。

1960年中后期，气相色谱理论和实践的发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。

1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱，进一步提高了仪器的自动化水平和分

1990年以后，生物工程和生命科学在国际和国内的迅速发展，为高效液相色谱技术提出了更多、更新的分离、纯化、制备的课题，如人类基因组计划，蛋白质组学有HPLC作预分离等。

特点

高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点：

高效液相色谱HPLC流程示意

①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在uL数量级。

④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。

主要类型

1．吸附色谱（Adsorption Chromatography）

2．分配色谱（Partition Chromatography）

3．离子色谱（Ion Chromatography）

4．体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography）

5．亲和色谱（Affinity Chromatography）

结构组成

综述

高效液相色谱仪可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。

高压输液泵

功能

驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统；

性能要求

流量稳定（±1），耐高压（30～60Mpa），耐各种流动相：例如：有机溶剂、水和缓冲液；

种类

往复泵和隔膜泵。

色谱柱