实验五 用大肠杆菌生长曲线的测定

四、实验步骤
1.南湖水中微生物的测定 N-乙酰葡糖胺
无菌操作采用10-1， 10-2 ， 10-3稀释液涂布牛肉膏 蛋白胨平板;每个稀释度2个重复。
每个培养皿 加0.1ml 稀 释液
2.口腔、人民币和门把手微生物的测定
用棉签分别从牙周、人民币纸币和门把手表面
挑取微生物，然后放入装有0.5 ml无菌水的EP管
五、思考题
➢ 你所测定的南湖水的污染程度如何？ ➢ 通过本次实验，在防止培养物的污染与防
止细菌的扩散方面，你学到了什么？有什 么体会？
本次实验安排
每组6人
➢ 比浊法测定大肠杆菌生长曲线。 ➢ 倒牛肉膏蛋白胨平板12个。 ➢ 南湖水稀释分离涂布(6皿)。 ➢ 口腔、人民币、门把手、空气（10，20，
中，颠倒均匀后，用移液器全部吸入牛肉膏蛋白胨
平板中，涂布均匀。
(LTA)
3.实验室空气中微生物的测定
将牛肉膏蛋白胨平板盖揭开，分别置实验台10， 20，30，40，50，60 min后，盖上皿盖，倒置培 养。
4.自来水、橙汁中微生物的测定
取1 ml涂布牛肉膏蛋白胨平板。自来水用无菌三 角瓶收集。
四、实验结果 观测实验结果时间？
实验67 水、环境中微生物的测定 一、实验目的
➢ 比较不同场所和不同条件下细菌的数量和 类型。
➢ 观察不同类群微生物的菌落形态特征。 ➢ 体会无菌操作的重要性。 ➢ 掌握水和环境中微生物的测定方法。 ➢ 检测污染水域微生物的类型和数量。
二、实验原理
➢ 应用平板菌落计数技术测定污染水的细菌 总数。由于细菌种类繁多，不可能找到一 种培养基在一种条件下，使所有的细菌均 能生长繁殖。因此，计算出来的细菌总数 仅是一种近似值。
比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样 品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光 面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。
比色皿之间吸光度进行比较。
四、实验结果
记录不同大肠杆菌培养液的OD600值， 并绘制大肠杆菌的生长曲线。
培养时间 （h）
光密度值 OD600
4 8 12 16 20 24
五、思考题
➢光电比浊计数的原理是什么？这种计数法有何 优缺点？ ➢如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有 什么不同？两者各有什么优缺点？
➢ 计算每ml南湖水中含有微生物的数量。 ➢ 你所测定的环境中微生物的数量和种类；
并试着分别记录每种细菌的大小、形态、 干湿、透明度、颜色以及边缘等特征。
名
称 10-1
数量
形 态
南湖水 10-2 10-3
总数
自来水 （个 /mL）
口腔 （百度文库 /cm2
人民币 门把手 空 气 （个 （个 （分钟） /cm2） /cm2） （个）
重复数：
5
5
5555
有菌生长管数： 5
5
5410
根据上述结果，数量指标为“541”，查表得近似值为17，乘 以第一位数的稀释倍数，得出原始培养物的活菌数=17×105个
优点：活菌计数，适用于特殊细菌。 缺点：计数结果为概值。
➢光电比浊法
光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细 胞浓度与透光度成反比的原理。当细菌细胞在 溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中 测定时所吸收的光线越多。
➢ 盖好样品室盖，在T MODE下，按0%T键 调零透射比。
➢ 取出挡光体，按100%T/OA键调100%透 射比。
2.样品测定
➢ 将参比溶液（未接种的LB液体培养基）以及 被测溶液倒入比色皿中。
➢ 打开样品室盖，将参比溶液放在样品架的第 一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位。
➢ 将参比溶液推入光路，按100%T/OA键调满 度。
➢最大概率法
待测菌液经十倍系列稀释，每稀释度做3-5个 重复，经培养后，检查细菌的生长，以有细菌 生长的最后三个稀释度的管数作数量指标，由 数理统计表查出近似值，再乘以数量指标第一 位的稀释倍数，即为原菌液中的菌数。
➢最大概率法
例如：某细菌在稀释培养法中生长情况如下：
稀释度：
10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8
30，40，50，60 min）、自来水和橙 汁微生物的测定。（1种/人）
本次实验完
大肠杆菌生长曲线的测定 水、环境中微生物的测定
裴国风 程国军
实验31 大肠杆菌生长曲线的测定
一、实验目的
➢ 了解光电比浊计数法的原理。 ➢ 学习、掌握光电比浊计数的操作方法。 ➢ 通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物
特征和规律，绘制生长曲线。
二、实验原理
➢生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。 一个典型的生长曲线分为延缓期、对数期、 稳定期和衰亡期四个时期
➢ 按 MODE ， 将 测 试 方 式 调 至 吸 光 度 方 式 （A）。此时,显示器显示“0.000”。
➢ 将被测溶液推入光路，显示器显示为被测样 品的吸光值。
在600 nm波长下，用未接种的LB液体培养 基作空白对照，分别对培养了0、4、8、12、 16和20 h的大肠杆菌培养液，进行光电比浊 测定。对于高浓度的大肠杆菌培养液,要用未 接 种 的 LB 培 养基 进 行 稀 释 ， 使 其 吸 光 值 在 0.1-0.65范围内。
➢ 利用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基可以大 致测定不同环境中存在的微生物。
三、实验器材
➢ 样品的采取
自来水 取自自来水管道。 橙汁 购于超市。 口腔、人民币、门把手和实验环境中的微生物。 南湖水 距水面10-15 cm的深层水样。
➢ 培养基
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 。
➢ 仪器或其他用具
灭菌培养皿，无菌枪头，涂棒等。
微生物数量的测定方法
➢稀释平板计数法 ➢显微镜直接计数法 ➢最大概率法 ➢光电比浊法
➢稀释平板计数法
对样品稀释培养，据形成的菌落数计数。 优点：活菌计数方法，对设备要求不高。 缺点：操作复杂。
➢显微镜直接计数法
使用血球计数板在显微镜下直接计数。 优点：操作简便，计数直观。 缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和。
优点：简便快速，适合于自动控制。 缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品 样品不适合用此法。
三、实验器材
➢ 菌种 培养不同时段的大肠杆菌。
➢ 仪器或其他用具 分光光度计，比色皿等。
四、实验步骤
1.样品测试前的调试
➢ 开电源，仪器预热20 min，将波长调至 600 nm处。
➢ 打开样品室，将挡光体插入比色皿架，将 其推或拉入光路。