实验一 种子活力测定

高级植物生理实验报告

种子生理

农学院

农药学

东保柱2013202054

2013年12月27日

种子活力

种子活力即种子的健壮度，是种子发芽和出苗率、幼苗生长的潜势、植株抗逆能力和生产潜力的总和，是种子品质的重要指标。长期以来都用发芽试验检验种子的质量，生产实践表明，实验室的发芽率与田间的出苗率之间往往存在很大差距。由于种子活力是一项综合性指标，因此靠单一活力测定指标判定其总活力水平或健壮度是不科学的。

实验 1 种子活力的测定

种子发芽率、发芽势和发芽指数的测定（垂直板发芽法）

一 原理

种子在适宜的水分、氧气、温度条件下经一段时间可以萌发。在最适宜条件和规定天数内，发芽的种子数与供试的种子的百分比，叫发芽率。为了表示萌发速度与整齐度，反映种子活力程度，规定在短时间内能正常萌发的种子数叫发芽率（测定发芽与发芽天数可参看下述的《种子发芽试验的技术规定》）。发芽数与发芽相应天数之比的和叫发芽指数。 二 材料与设备

1 材料 ：小麦种子。

2 设备：玻璃板 滤纸或湿沙 恒温箱 镊子

3 药品： 1%次氯酸钠（NaClO ） 三 实验步骤

1 选取完整健壮的种子10-15粒，三个重复，用1%次氯酸钠消毒0.5—1min,将种子均匀地排列在有滤纸的培养皿中，种子之间留有一定距离，加入适量蒸馏水，放于所需温度条件下萌发。

2 每天定时记录发芽粒数。根据附表《种子发芽试验的技术规定》计算种子的发芽势、发芽率和发芽指数。

3 计算

正常发芽的种子数 1、发芽率（%）= ×100

供试种子数 2、发芽指数(∑=Dt Gt

Gi )

式中：Gi —发芽指数

Gt ——在时间t 日发芽日数 Dt ——相应的发芽日数

四 注意事项

1 对于1—2天内全部萌发的迅速发芽类型种子，不适用上述公式计算，宜采用简化活力指数（见实验21）。

2 种子发芽试验的技术规定（附表）

实验2 种子活力指数的测定

一 原理

萌发种子幼根的生长势是反映活力的一个较好生理指标，如将发芽指数与幼苗生长量联系起来（二者的乘机），以活力指数（Vl ）来表示，可以作为种子的活力指标。但是，对于一些萌发迅速的种子，不必要计算活力指数，可用发芽率乘幼苗生长量的简化活力指数（G ·S ）表示。对于具明显主根的种子如花生 大豆等，幼苗生长量可用胚根长或胚根重表示。 二．材料与设备

1 材料：小麦种子。

2 设备：玻璃板 恒温箱 发芽缸（或箱）约20cm 高 尺子或天平 滤纸 细绳或橡皮筋

3 药品 1% 次氯酸钠（NaOCl ） 三．实验步骤

1 选取完整 健壮的10-15种子，在水中吸胀2—4小时后，采取玻璃板直立发芽法。玻板直立发芽法： 发芽箱由塑料板制成，规格为20×15×20cm,玻板规格20×15cm ，滤纸规格42×15cm,对折滤纸，平铺在玻板，掀开上层滤纸，用蒸馏水湿润下层滤纸，将种子横向排列在滤纸中部，胚向下，保持一定粒距。然后将上层滤纸覆盖在种子上。如种子较大，可用细绳或橡皮筋缚扎在覆盖种子处的滤纸外面，防止种子滑落。玻板垂直插入发芽箱中，玻板间保持一定距离。在发芽箱中加入约2cm 深蒸馏水层，加盖，留气孔，放在所需温度条件下萌发。

2. 萌发3天（72小时）后统计发芽率及测量胚根长度和下胚轴长度（大豆 花生 棉花），如小麦 水稻，则需剪下须根称重，或测量幼苗长度。

3. 计算

S Dt

Gt

vl ⨯=∑)(

式中：vl ——活力指数

Gt ——在时间t 日的发芽数 Dt ——相应的发芽日数

S ——幼苗生长势（平均长度或干、鲜重）

简化活力指数（G ·S 值）=发芽率（%）×生长量（平均长度或干量，鲜重）

四 注意事项

1 玻板直立发芽时应在密闭的容器中，保持饱和湿度。

2 对于根毛不多的种子，可用重量来表示生长量。

3 为了防止发霉，种子萌发前应进行消毒（用1%次氯酸钠消毒0.5-1min ）.

实验 3 氯化三苯基四氮唑（TTC）法

一原理

有生命力的种胚在呼吸过程中产生氧化还原反应，而无生命的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶Ⅰ或Ⅱ（NADH2或NADPH

2

）上的氢还原时，便由无色的氯化三苯基四氮唑（TTC）变为红色的三苯基甲（TTF）.染色后经丙酮提取，用分光光度计测出光密度值，从标准曲线查出TTC含量（µg/ml）,定量计算脱氢酶的活性。TTC含量高即脱氢酶活性强，表示种子活力高。

二材料与设备

1 材料小麦种子

2 设备试管烧杯容量瓶（10ml）微量注射器或微量吸移管恒温水浴箱分光光度计研钵

3 药品丙酮 0.1%TTC溶液连二亚硫酸钠NA

2s

2

O

4

（保险粉）

三实验步骤

1 待测小麦种子浸泡至充分吸胀，取种胚（（30粒胚））或整粒种子。将样品放入试管中，加10 ml 0.1%TTC溶液，加盖，放在38℃左右的恒温水浴中（加盖保持黑暗条件）。反应时间长短随种子不同而异（2-3小时）。

2 反应到一定时间，清出TTC以终止反应，立刻用水冲洗样品2—3次，以粗滤纸吸取浮水，将样品倒入研钵，加少许分析纯石英砂及丙酮，充分研磨，把研磨液倒入10ml的容量瓶中，再用丙酮冲洗研钵2—3次，全部倒入容量瓶，定容10ml。

3 提取液在4000g下离心10分钟。

4 倾出红色上清液供比色用。在490nm波长下测光密度值。从标准曲线中查出相应的还原态TTC量。

附：标准曲线的绘制

配制0.1% TTC(即1000ug/ml),取10ml容量瓶5个，用微量注射器或吸移管分别加入0.1%TTC溶液50 100 150 200 和250μl。再往每个容量瓶中加入少许强还原剂连二亚硫酸钠（保险粉），加蒸馏水定容摇匀，配制成每毫升含TTC 5 10 15 20或25μg的标准溶液。在490nm波长下测定光密度值。绘出标准曲线（生成的红色不很稳定，最好是配完一个标准溶液，即进行测定；然后配第二个标准溶液测定。）

5、TTC还原量（µg·g-1或胚数量）=V·C/W

式中 V—为样品定绒时体积；C—为标准曲线上查得的TTC含量（μg/ml）；W—为样品重量或胚数量