0040沙门氏菌生化试验检验操作规程
简述沙门氏菌的检验流程
简述沙门氏菌的检验流程
当然可以，让我用更简单的话说说怎么检查沙门氏菌吧：
唤醒细菌：首先，从食物或者其他样本里取一点点（比如一小块肉或者一些蔬菜），放到一种能让细菌“醒过来”和长大的特殊水里。
然后，让它们在适合的温度下美美地“睡”上一晚。
帮好菌壮大多起来：第二天，从第一步得到的溶液里取点液体，转移到两种特别设计的“营养餐”里，一种是让沙门氏菌特别喜欢的，另一种是考验它们的。
接着，再让它们各自在一个暖暖的地方长一长。
找不同：等细菌长得差不多了，挑一点出来涂在几种颜色不一样的“细菌专属培养皿”上，这些盘子能帮助我们看清楚哪些是沙门氏菌。
确认身份：在培养皿上，我们会看到各种小点点，这些是细菌长出来的。
挑几个可疑的小点，做些小实验，看看它们的行为像不像沙门氏菌，甚至用专门的“血液测试”来确认是不是真的沙门氏菌家族的。
高科技快速验证（如果需要）：有时候，为了更快更准，我们会用一种叫做PCR的技术，直接检查细菌的DNA，就像用指纹一样确定它们的身份。
整个过程就像是在众多的细菌中找出沙门氏菌这个“嫌疑犯”，确保我们的食物安全，或者帮助医生诊断疾病。
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用
沙门氏菌的检验流程及每一步检验过程的作用下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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沙门氏菌检测操作规程
沙门氏菌检测操作规程1 原理沙门氏菌的检测需要四个连续的阶段见下图：1.1 用非选择性液体培养基预增菌将试料接种到缓冲蛋白胨水（BPW），在36℃±1℃下培养16~20h。
（样品中可能存在少量的沙门氏菌却含大量的肠杆菌科的其他菌，所以选择性增菌是必须的；为了检测受伤的沙门氏菌，常须进行预增菌。
）1.2 在选择性液体培养基上增菌将1.1中的培养物接种到四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液和亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液中。
于TTB增菌液内42℃±1℃培养18h～24h；SC 增菌液内36℃±1℃培养18h～24h。
1.3 初步筛选将1.2的培养物接种到以下两个选择性培养基：亚硫酸铋（BS）琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂，于36℃±1℃分别培养40h～48h（BS 琼脂平板）或18h～24h（XLD 琼脂平板），根据菌落特性，辨别可疑沙门氏菌菌落。
1.4再次筛选挑出1.3中的可疑沙门氏菌菌落，在沙门氏菌显色培养基中培养再次筛选，再用合适的生化和血清学试剂进行鉴定。
2 试剂与仪器2.1所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基2.3.1缓冲蛋白胨水培养基（BPW）称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。
2.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。
将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。
2.3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液取SC培养基23g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装锥形瓶，冷至常温备用。
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式
沙门氏菌检验国标检验步骤及接种方式沙门氏菌是一种常见的细菌引起的食源性疾病，可能会导致严重的胃肠道感染。
为了保障食品安全，确保公众的健康，我们需要进行沙门氏菌的国标检验。
下面是一份生动、全面且有指导意义的文章，详细介绍了沙门氏菌检验的国标检验步骤和接种方式。
第一步：样品准备在进行沙门氏菌检验之前，我们首先需要准备样品。
常见的样品包括食品、水、动物排泄物等，可能携带沙门氏菌。
样品应该收集自具有代表性的地点，并采取无菌采样容器进行收集。
收集样品时要注意避免污染，并确保样品的数量足够进行检验。
第二步：样品处理样品处理的目的是将潜在的沙门氏菌分离出来，并进行后续的检测。
可以采用不同的方法进行样品处理，常见的方法包括富集培养和选择性培养。
富集培养是将样品放入富集培养基中，利用培养基中的营养物质以及特定条件促使沙门氏菌生长。
选择性培养则是利用培养基中的特殊抑制剂抑制其他细菌的生长，从而使沙门氏菌生长出来。
第三步：菌落鉴定在样品处理后，我们需要对培养基上的菌落进行鉴定，确认是否为沙门氏菌。
常见的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定和分子生物学鉴定。
形态学鉴定主要通过观察菌落的形状、颜色和大小等特征来判断细菌的种类。
生理生化鉴定则是通过检测菌落对特定物质的代谢情况来确定细菌的种类。
分子生物学鉴定是利用特定的DNA序列来识别沙门氏菌的基因，通常使用PCR技术进行检测。
第四步：抗菌药敏试验沙门氏菌的抗菌药敏性检测是为了确定对何种抗生素具有敏感性。
通过抗菌药敏试验，我们可以选择合适的药物来治疗感染。
可以使用各种常见的抗生素盘进行试验，然后观察沙门氏菌对不同抗生素的反应。
根据抗生素的抑菌效果，可确定沙门氏菌的耐药性情况。
第五步：结果分析与报告最后一步是对检验结果进行分析，并撰写检验报告。
检验结果要结合国家标准进行评估，确定样品是否合格。
如果样品中检测到沙门氏菌，还需要评估其数量以及对公众健康可能造成的风险。
在撰写报告时，需要详细记录样品的来源、处理方法、检验步骤和结果，以及相应的建议和措施。
沙门氏菌检验程序
沙门氏菌检验程序沙门氏菌是一种常见的致病微生物，能引起人类和动物的感染疾病。
因此，在食品、水源、环境等方面对沙门氏菌的检测尤其重要。
下面我们将介绍一下沙门氏菌检验的步骤和方法。
1. 样品采集对于食品、水源等样品的采集需要遵守严格的规定。
例如，食品样品需要在加工、贮存和分配之前采集，以确保沙门氏菌检验的准确性。
样品应当在采集之后尽快送到实验室进行检测。
2. 样品处理根据不同的样品类型和特性，采用不同的处理方法。
例如，对于牛奶、鸡蛋等液态食品，需要进行破坏性处理，以确保沙门氏菌的释放。
对于土壤、粪便等样品，需要进行外层细菌的去除处理。
3. 培养培养基选择含有适当氧气和营养物质的培养基，如SS（Salmonella-Shigella）培养基、XLD（Xylose-Lysine-Desoxycholate）培养基等。
将样品分别接种到不同的培养基上。
4. 培养将分别接种的培养基放入恒温箱中进行培养。
将温度设定为37°C至42°C，进行18小时至24小时的培养。
在培养过程中观察样品的生长和变化。
5. 分离取出培养好的样品进行观察。
将预处理样品浸泡在缓冲液中，将溶液过滤。
过滤的溶液留下来，转移到盘子上。
用肉眼观察菌落的形态，观察不同菌落的特点。
根据菌落的特点进行分离。
6. 鉴定在鉴定步骤中，需要进行各种化学试剂处理，如氧化氢酶测试、葡萄糖测试等。
同时需要使用专业仪器，如API试剂盒、ELISA试剂盒等。
通过这些鉴定手段，确定检测出的菌落是否为沙门氏菌。
7. 结论最后，根据检测结果得出客观和准确的结论，以便针对食品、水源或环境污染等问题采取相应的措施。
总之，沙门氏菌的检验程序是一个非常复杂和严谨的过程，需要专业的实验室和技术人员进行操作。
我们应当高度重视沙门氏菌检验的重要性，以确保我们的食品质量和健康安全。
沙门氏菌生化鉴定完整版
沙门氏菌生化鉴定 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】沙门氏菌生化试验判定步骤三糖铁琼脂赖氨酸脱羧酶初步判断斜面底层产气硫化氢产碱红产酸黄＋（－）＋（－）黑＋紫可疑沙门氏菌产碱红产酸黄＋（－）＋（－）黑－黄可疑沙门氏菌产酸黄产酸黄＋（－）＋（－）黑＋紫可疑沙门氏菌三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。
用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。
该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。
而发酵乳糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。
如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。
底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。
斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。
因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。
2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。
4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。
3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气。
赖氨酸脱羧酶试验1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。
2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。
请述疑为沙门杆菌感染患者的标本的微生物检验程序
请述疑为沙门杆菌感染患者的标本的微生物检验程序现如今人们越来越重视食品安全,很多鸡鸭等家禽会感染沙门氏菌,导致禽流感,如果有人吃了感染了沙门氏菌的家禽,同样也会被感染,会出现发热,腹泻等症状,这是就需要及时就医,否则将会有生命危险。
所以有人就会问那如何检测沙门氏菌,具体步骤是什么?下面就介绍一下沙门氏菌检验程序的步骤。
1、前增菌:在盛有90MLBPW的无菌均质杯中放入10g(mL)样品,用拍击式均质器拍打1min ~ 2min ,在36°C +1°C的温度中培养8h ~ 18h。
2、增菌:将培养过的样品混合物轻轻摇动,移取1mL ,种于10 ML TTB内,在42°C士1°C的温度中培养18h~ 24h。
同时,另取1mL,种于10mLSC内,在36°C+ 1'C的温度中培养18h ~ 24h。
3、分离:分别在一个BS琼脂平板和一一个H琼脂平板用接种环取增菌液1环。
在36°C土1°C的温度中分别培养18h ~ 24h(HE 琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板)或40h ~ 48h(BS琼脂平板) ,在各个平板上观察生长的菌落。
4、生化试验:三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验:分别在选择性琼脂平板上挑取2个以上典型或可疑菌落,接种三糖铁琼脂,先在斜面划线,再在底层穿刺;接种针不要灭菌,直接在试验培养基和营养琼脂平板接种赖氨酸脱羧酶,在36°C土1°C的温度中培养18h ~ 24h ,在必要的时候可延长至48h。
系列生化反应试验:在试验培养基接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶的同时,可直接接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基,也可在初步判断结果后,从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。
在36°C土1'C的温度中培养18h ~ 24h ,必要的时候可延长至48h ,按表3判定结果。
食品微生物检验技术W4304沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-传统鉴定-4-微教材
《农产品/食品微生物检验》课程-微教材知识讲解沙门氏菌操作程序及要点——传统鉴定沙门氏菌操作程序及要点分为检验程序和操作步骤一、检验程序根据国标，沙门氏菌的检验程序为: 检样经无菌处理后，称取25 g(mL)样品加入到225 mL BPW中36±1℃培养8~18h；取培养物1mL 接种到10mL的TTB中同时取1mL 接种到10mL 的SC中，分别于42±1℃和36±1℃培养18~24h；取培养后的增菌液分别划线接种于BS琼脂平板和XLD琼脂平板（或HE琼脂平板、显色培养基平板）中，于36±1℃培养18~24h，BS 需延长至40~48h；培养后挑取可疑菌落做生化试验。
挑取2 个以上典型或可疑菌落——接种三糖铁琼脂，赖氨酸脱羧酶试验管和对照管、供做靛基质试验的色氨酸肉汤、尿素（pH7.2)，KCN试验管和对照管，同时划线营养琼脂平板——如5项生化都符合——则直接判定为沙门氏菌——如五项中靛基质阳性——则补做甘露醇和山梨醇试验，如果两项均为阳性——为可疑沙门氏菌，但需结合血清学鉴定结果进行判定——如五项中H2S阴性——则需补做ONPG试验，ONPG阴性，同时赖氨酸脱羧酶阳性——为沙门氏菌——也可在三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验初步判断结果后，使用商品化的生化鉴定系统进行生化鉴定——判定是否为沙门氏菌——如果5项反应中有2项以上不符合——则沙门氏菌阴性——最后报告结果二、操作步骤主要分为：1、样品处理与前增菌；2、增菌；3、分离；4、传统生化鉴定试验；5、系统生化鉴定试验；6、血清学鉴定。
其中传统生化鉴定试验又分为三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验，靛基质、尿素和氰化钾试验、甘露醇、山梨醇以及ONPG试验三个部分。
本片以鸡肉为样品，演示沙门氏菌检验的样品处理和前增菌的操作过程。
1、前增菌：在无菌室内，以75%酒精擦拭样品外包装，尤其是包装的开口处，用无菌剪刀在样品封口处剪开包装袋，换用一个无菌剪刀将鸡肉样品剪碎至无菌罐内，用无菌镊子称取25 g样品至盛有225 mL BPW的样品瓶中，再转入注明样品信息、检测人员以及检测日期的均质袋中，密封，用拍击式均质器拍击2 min。
沙门氏菌检验详细流程
新的血清型名称的批准必须有巴斯德研究所、德国汉 堡卫生研究所及美国CDC 3个实验室的一致同意。
精品课件
沙门氏菌检验程序
精品课件
前增菌
目的：修复损伤的细菌细胞； 方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无菌均
57个O抗原 116个H抗原 Vi抗原
被分成2500多个血清型 。
Vi抗原 O抗原 H抗原
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沙门氏菌命名与书写方式
目前的命名方法规定：
肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用 标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且 亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠 伤寒血清型应书写为Salmonella enterica subsp.enterica serotype Typhimurium，但在实际工 作中，可简写为S. Typhimurium。
精品课件
血清学鉴定时的注意要点：
做血清凝集时，同时应用生理盐水做对照。 O血清不凝集时，可将菌株转接于琼脂量较高(如
2.5%-3%)的斜面上，再做凝集。 如果由于Vi抗原的存在而阻止了O抗原的凝集反应
时，应挑取菌苔于1mL生理盐水中做成菌悬液。煮 沸后再检查。(常见于伤寒沙门菌)。 有极少数的二相沙门菌会同时出现2相H抗原，也 有一些沙门氏菌在培养过程中H抗原会出现第1项 和第2项之间的转变，所以血清诱导实验要用新鲜 的培养物进行诱导。
GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
精品课件
沙门菌概况
沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行 时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏 对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门 菌属。
沙门氏菌检验
三糖铁斜面培养结果： 底层（+）、产H2S（黑 色）、产气（有气泡） 或不产气
红色：产碱 黄色：产酸 黑色：产硫化氢
尿素斜面 培养结果： 颜色变黄 （产酸）
尿素 斜面
三糖铁斜面培养结果：底层（+）、产H2S（黑色）、 产气（有气泡）或不产气
赖氨酸脱羧酶试验结果：颜色变化（加深），为阳性 尿素斜面培养结果：颜色变黄（产酸）
培养
阳性 1环 SC 1环
BS平板，划线 显色平板，划线
36℃±1℃ 40~48h
培养
36℃±1℃ 18~24h
培养
开始处
开始处
平板划线示意图
沙门氏菌在科玛嘉显色平板上的菌落特征： 紫红色菌落
沙门氏菌在BS琼脂平板上的菌落特征： 黑色有金属光泽，棕褐色或灰色，菌落周围培
养基可呈黑色或棕色，有些菌落呈绿色 ，周围培 养基不变色。
番红或沙磺复染：在涂片薄膜上滴加番红1 滴，染色1 ~ 2 min。
水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。
干燥：于室温下自然干燥。 观察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴
，置油镜下观察。 结果:
革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。
革兰氏染色结果： G-（红色，无芽孢，
杆菌）
凝集 试验
① 滴1~2滴灭菌 生理盐水
玻片
② 从有典型沙门氏菌三 糖铁斜面上用接种环取 1环
①滴1~2滴沙门 氏菌多价血清
用记号笔在玻片 中间画条线
结果：沙门氏菌多价血清：凝固 灭菌生理盐水：不凝固
另：从有典型沙门氏菌三糖铁斜面 取1环，染色。
在无菌室中固 定，到微生物 实训室染色
染色
涂片—— 火焰固定—— 结晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒染—— 乙醇脱色 —— 水洗—— 吸干—— 番 红或沙磺复染—— 水洗 —— 干燥—— 镜检
沙门氏菌实验标准操作程序
5、HE琼脂（HE）：称取75.7g HE琼脂溶于1000mL蒸馏水中，加热煮沸灭菌，冷却至55℃左右摇匀，倾注平板备用。
6、生化鉴定试剂盒
设备和材料
微生物实验室常规灭菌及培养设备
2、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：称取23g亚硒酸盐胱氨酸增菌液溶于1000mL蒸馏水中，加热煮沸灭菌，不要过度加热，定量分装备用，勿需高压灭菌。
3、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）：称取93.5g四硫磺酸钠煌绿增菌液溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌20min,临用前按每100ML加入碘液一支和P-73 0.1%煌绿一支，混匀后分装。现配先用，不宜久留。
沙门氏菌实验标准操作程序岗位名称检验员执行人员检验员技能要求掌握实验技能监控人员检验员监控频率实验过程检验方法对照试验作业条件在无菌室内操作作业步骤1超净工作台与无菌室紫外灯照射半小时通风半小时后进入无菌室操作
沙门氏菌实验标准操作程序
岗位名称
检验员
执行人员
检验员
技能要求
掌握实验技能
监控人员
检验员
监控频率
恒温培养箱，冰箱，电炉，天平，均质器，灭菌枪头，移液枪，无菌培养皿，精密Ph试纸，接种针。
关键控制点
1、操作台的卫生；
2、操作时房间风扇的开关，超净台的风扇开微风。
3、操作过程中注意无菌操作，冲枪后连枪头带里面的液体一并打入垃圾桶，并用酒精棉球清洗移液器枪口，切勿将液体打回原试管或三角瓶中。
注意事项
无菌操作将样品转至500 mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8 h～18h。
沙门氏菌检验步骤
沙门氏菌检验步骤引言：沙门氏菌是一种常见的致病菌，可以通过食物、饮水、接触传播等途径引起人类感染。
为了及时检测和预防沙门氏菌感染，科学家们开发了一系列的检验步骤。
本文将介绍沙门氏菌检验的详细步骤，以帮助读者更好地了解和应对这一疾病。
一、样本采集：沙门氏菌检验的第一步是采集样本。
常见的样本来源包括食物、粪便、尿液、血液等。
通过正确采集样本，可以保证后续检验的准确性。
二、样本处理：采集到的样本需要进行处理，以提取潜在的沙门氏菌。
处理的方法主要包括离心、过滤、稀释等。
这一步的目的是将样本中的沙门氏菌浓缩到一个较小的体积中，方便后续的培养和检测。
三、培养：处理后的样本需要进行培养，以使沙门氏菌得到生长。
常用的培养基包括MacConkey琼脂、XLD琼脂等。
将样本均匀涂布在琼脂培养基上，并在适宜的温度下孵育。
沙门氏菌通常在37摄氏度下生长，因此需要将培养基放置在恒温箱中。
四、形态鉴定：沙门氏菌在琼脂培养基上形成典型的菌落，通过观察菌落的形态特征可以初步判断是否为沙门氏菌。
沙门氏菌的菌落通常呈现灰白色、凹陷的特点。
此外，还可以通过显微镜观察菌体形态，沙门氏菌的形态为革兰氏阴性杆菌。
五、生化试验：形态鉴定只能初步判断是否为沙门氏菌，为了进一步确诊，需要进行生化试验。
常用的生化试验包括气体产物检测、酶反应检测等。
通过观察沙门氏菌在不同培养基中的反应情况，可以准确判断是否为沙门氏菌。
六、分子检测：生化试验可以初步确诊沙门氏菌感染，但为了提高检测的敏感性和准确性，科学家们还开发了分子检测方法。
这些方法主要包括PCR、实时荧光PCR等。
通过检测沙门氏菌特有的基因序列，可以快速准确地诊断沙门氏菌感染。
七、药敏试验：沙门氏菌感染对抗生素的敏感性存在一定的差异，因此药敏试验是非常重要的一步。
通过将沙门氏菌培养在含有不同抗生素的培养基中，观察菌落的生长情况，可以确定沙门氏菌对抗生素的敏感性，从而指导临床治疗。
结论：沙门氏菌感染是一种常见的疾病，及早检测可以帮助医生采取有效的治疗措施。
食品微生物检验技术W4304沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-传统鉴定-5-微测试
《农产品/食品质量安全检测技术》课程-微测试一、单选题1、沙门氏菌检验时，取BPW培养物1mL 接种到10mL的TTB中于（）℃±1℃培养18~24h？A、36B、28C、41.5D、42参考答案：D难度：低2、沙门氏菌检验时需挑取（）个以上典型或可疑菌落接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基（）A．1B．2C．3D．4参考答案：B难度：低3、沙门氏菌检验时用到的色氨酸肉汤是来做哪个生化试验的？A、三糖铁B、赖氨酸脱羧酶C、氰化钾D、靛基质参考答案：D难度：中二、多选题1、沙门氏菌检验的5项生化试验包含以下哪几个？（）A、三糖铁B、靛基质C、尿素D、VP参考答案：ABC难度：中三、判断题1、沙门氏菌检验室将接种后的TTB增菌液和SC增菌液都置于36 ℃培养18 h～24 h。
参考答案：F难度：中2、沙门氏菌氰化钾试验时无需设置空白对照。
参考答案：F难度：低四、填空题1、沙门氏菌的分离鉴定要在里的内进行。
参考答案：BSL-2实验室，生物安全柜难度：中2、沙门氏菌检验时，反应序号A1后三项全符合，直接判定沙门氏菌阳性，后三项指的是、、。
参考答案：赖氨酸脱羧酶、氰化钾、尿素难度：中五、问答题1、沙门氏菌血清学鉴定的步骤有哪些？参考答案：（1）在玻片上划出两个区域，分别标记对照和O抗原，从营养琼脂上挑取 1 环待测菌，各放1/2 环于玻片上的每一区域上部，（2）在标记为O抗原的区域下部加 1 滴O抗血清（或H抗血清），在标记为对照区域的下部加入1 滴生理盐水，作为对照。
（3）再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液（4）将玻片倾斜摇动混合1min ，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。
H抗血清实验步骤与O抗血清相同。
难度：中。
沙门氏菌检验程序
沙门氏菌检验程序一、引言沙门氏菌是一种常见的细菌，可以引起人类的食物中毒，其检验程序被广泛应用于食品安全监测和疾病防控工作中。
本文将详细介绍沙门氏菌检验程序的流程和方法。
二、沙门氏菌检验程序的流程沙门氏菌检验程序主要包括样品采集、前处理、培养、鉴定和确认等步骤。
以下将逐一详细介绍每个步骤。
1. 样品采集样品采集是沙门氏菌检验程序中非常重要的一步，直接影响到后续的检验结果。
在采集样品时应注意选择合适的容器，并在采集前进行消毒处理，以避免外源性污染。
此外，还应注意采集样品的数量和位置，以保证样品的代表性和准确性。
2. 前处理前处理是为了提高沙门氏菌的检出率，通常包括以下几个步骤：•外消毒：对样品外表面进行消毒处理，可以使用酒精或其他合适的消毒剂。
•清洗：对样品进行充分清洗，以去除表面的杂质和细菌。
•细碎：对于固体样品，可以进行细碎处理，使细菌更易于检测。
3. 培养培养是沙门氏菌检验程序中的核心步骤，主要通过培养细菌来增加其数量。
培养需要使用含有适当营养成分的培养基，常用的培养基有菌落计数法和液体培养基。
在培养过程中，应保持适宜的温度和湿度，并定期观察培养基上的细菌生长情况。
4. 鉴定和确认鉴定和确认是确定培养基上细菌是否为沙门氏菌的重要步骤。
常用的鉴定方法包括生化试验、血清学试验和分子生物学检测等。
通过这些方法，可以检测沙门氏菌的生物学特征和遗传特征，进一步确认其身份。
三、沙门氏菌检验程序的方法沙门氏菌检验程序的方法主要包括传统方法和快速检测方法。
以下将详细介绍这些方法的特点和应用。
1. 传统方法传统的沙门氏菌检验方法包括菌落计数法、血清学试验和生化试验等。
这些方法操作相对繁琐，结果需要较长的时间才能得出，但其结果可靠性较高，被广泛应用于食品安全监测和临床诊断。
•菌落计数法：通过培养菌落来计数菌落的数量，从而估计样品中沙门氏菌的含量。
这种方法可以判断出样品是否存在沙门氏菌，但无法确定具体的种属和品系。
沙门氏菌检测操作步骤
沙门氏菌检测操作步骤沙门氏菌是一种常见的细菌，其存在于许多环境中，包括食物、水源和动物体内。
由于沙门氏菌可能引起严重的食物中毒症状，因此对其进行检测和控制非常重要。
在本文中，我将介绍沙门氏菌检测的操作步骤，以帮助您了解如何进行有效的沙门氏菌检测。
1. 选择适当的检测方法在进行沙门氏菌检测之前，首先需要选择适当的检测方法。
常见的检测方法包括传统培养法、分子生物学方法和免疫学方法。
传统培养法需要将样品在富含营养物的培养基上培养并观察有无沙门氏菌生长。
分子生物学方法利用PCR技术检测沙门氏菌的DNA，而免疫学方法则使用抗体来检测沙门氏菌的存在。
根据您的需求和实验条件，选择合适的检测方法非常重要。
2. 样品采集在进行沙门氏菌检测之前，需要采集样品。
这些样品可以是食物、水源、表面物体或动物组织。
确保在采集样品之前，正确消毒采样工具以避免任何污染。
确保将样品收集到干净、密封的容器中，以避免污染和交叉感染。
3. 样品准备收集样品后，需要进行适当的样品准备以便于后续的沙门氏菌检测。
对于食物样品，可以使用均匀悬浮液方法将样品与适当的缓冲液混合均匀。
对于水样或表面物体样品，可以使用封闭的容器直接收集样品。
对于动物组织样品，需要先将样品进行处理，如挤压、切割或研磨，以获得足够的样品量进行检测。
4. 样品分析根据选择的检测方法，进行相应的样品分析。
如果使用传统培养法，可以将样品转移到含有适当培养基的培养皿中，并进行孵育。
培养过程中，需要注意培养皿的环境条件，如温度、pH值和氧气含量。
如果使用分子生物学方法，可以提取样品中的DNA，并使用PCR技术进行检测。
如果使用免疫学方法，可以使用特定的抗体与样品中的沙门氏菌结合，然后观察是否发生免疫反应。
5. 结果解读根据样品分析的结果，进行结果解读。
对于传统培养法，可以观察培养皿中是否有沙门氏菌的典型形态或颜色变化。
对于分子生物学方法，可以通过PCR扩增的产物的大小和带状图样来判断是否存在沙门氏菌的DNA。
沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项
沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项在我们平时的微生物检测工作中，沙门氏菌是非常常见的检测项目之一，沙门氏菌属于致病性细菌，要求在食品中每25g样品中不得检出沙门氏菌，因此对于沙门氏菌检测过程中的培养基和试剂的要求比较高，在这里跟大家讨论一下沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项。
01预增菌样品加入缓冲蛋白胨水（BPW）中进行预增菌，任何样品均需进行预增菌。
有盆友问啦，为什么要用BPW呢？那是因为啊，食品在加工过程中采用加热、干燥等加工工艺使得细胞存在不同程度的受损，而缓冲蛋白胨水（BPW）呢，作为非选择性的增菌培养基，较高pH的缓冲体系可以帮助受损的细胞恢复到稳定、活力满满的生理状态，此处也可使用即用型的BPW，因为它操作方便，节省时间。
02选择性增菌这里要注意啦，增菌接种前一定要把预增菌后的BPW样品溶液轻轻摇动混匀，这样做的原因是有些沙门君是懒得动的（因为有些沙门氏菌没鞭毛），它们会潜伏在溶液底层，所以我们要把增菌液“摇摆、摇摆”，让不动的沙门君们在增菌液中都漂浮起来，吸出，分别接入TTB和SC培养基中。
此步骤防止漏检的方式是采用两种不同的选择性增菌液（TTB和SC）进行增菌，是因为沙门君的家族太庞大了，血清型都有2000多种，所以得加强引诱措施，采用不同的培养温度和不同抑制性的培养基来给不同的沙门君提供安逸的环境来繁衍后代，同时尽量阻拦革兰氏阳性菌和其他大多数的肠道菌来捣乱，有些细菌还是会趁虚而入的。
咱们来说一下TTB和SC使用过程中的注意事项：TTB培养基：待基础培养基冷却至50℃以下时，加入煌绿和碘液，因为培养基中含有不溶解的CaCO3（用来中和吸收有毒性的代谢物质），会有大量的白色沉淀，在分装时应边摇匀边分装，接种后培养条件为：42℃±1℃培养18h-24h；SC培养基：千万不可高压灭菌，不可过度加热，最好是现用现配。
发现干粉或溶液变红就不要使用了。
培养基开封后建议用封口膜密封后冷藏保存，可延缓培养基变质，接种后培养条件为：36℃±1℃培养18h-24h；03分离TTB与SC增菌液在接种选择性分离培养基前，均应轻轻摇动混匀，原因同选择性增菌一样，也是为了防止不运动的沙门氏菌漏检；混匀后，用直径为3mm的接种环（也就是实验室用的10μL接种环）将TTB与SC增菌液“分别”划线接种于两种选择性平板，一种是BS琼脂，为必选的选择性分离培养基，另外一种选择性分离培养基是从XLD琼脂、HE琼脂、沙门显色培养基中选择一个即可；沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征参考下图：注意：在一种选择性琼脂培养基上不同沙门氏菌会长出不同的菌落形态，在做样品检验时要参考上图中沙门氏菌的菌落特征，将典型菌落及可疑菌落纯化后做生化和血清鉴定，避免漏检，例如：在XLD琼脂接菌培养18h-24h时，鼠伤寒沙门氏菌为粉红色菌落，呈现大的带光泽的黑色中心，大肠埃希氏菌为黄色菌落，猪霍乱沙门氏菌为淡黄色菌落，比大肠埃希氏菌的颜色略浅，易混淆，为防止漏检，XLD 琼脂平板上黄色菌落也应做生化和血清鉴定，不可忽视。
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目的建立沙门氏菌生化检验操作规程，确保检验数据的准确性。
依据《中国药典》2000版一部附录XIIIC-（80-81页）。
范围本标准适用于沙门氏菌生化检验操作。
责任人QC负责人、化验员。
内容
1使用仪器、玻璃器皿、培养基、染色剂及试剂。
1.1仪器：
托盘天平
1.2玻璃器皿：
150ml锥开瓶、试管、载玻片
1.3试液：
1.3.1靛基质试液：取对二甲基苯甲醛5.0g，加入乙醇75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取浓盐酸25ml徐徐滴入（边滴边振摇，以免骤热使溶液色泽变深）即得。
1.3.2 0.9%氯化钠溶液：取氯化钠0.9g，加入蒸馏水100ml，微热使溶解，121℃灭菌30分钟，放冷，备用。
1.4染色剂：
1.4.1结晶紫染液：取结晶紫1.0g，加入95%乙醇20ml使溶解，加1%草酸铵水溶液80ml，混匀，静置48小时使用，置密闭棕色瓶中贮存。
1.4.2碘液：取碘化钾
2.0g，加水3-5ml使溶解，加入碘片1.0g，使全部溶解后加水稀释至300ml，置密闭棕色瓶贮存。
1.4.3沙黄试液：取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml，使完全溶解后，加水100ml。
1.5培养基：
1.5.1营养肉汤增菌液：取营养肉汤试药22g，加蒸馏水1000ml微热使溶解，按每瓶100ml分装，121℃灭菌15分钟，备用。
1.5.2四硫磺酸盐增菌液：取四硫磺酸盐试药4.6g，加蒸馏水100ml微热使溶解，121℃灭菌30分钟，备用。
1.5.3胆盐硫化琼脂培养基：取胆盐硫化琼脂培养基试药48g，加蒸馏水1000ml加热溶化后，116℃灭菌30分钟，冷却至60℃灭菌，倾注平皿，备用。
1.5.4曙红亚甲蓝琼脂培养基：取营养琼脂培养基（取营养琼脂试药4g，加水100ml，116℃灭菌备用）加热溶化后，取100ml，冷至60℃按无菌操作加入灭菌的20%乳糖溶液5 ml，曙红钠指示液2ml和亚甲蓝指示液1.5ml，摇匀，倾注平皿。
1.5.5沙门、志贺菌属琼脂：取沙门、志贺菌属琼脂试药60g，加蒸馏水1000ml，放置20分钟，用石棉网微火煮沸使完全溶解，冷至50℃左右倾入无菌平皿中凝固后，备用。
麦康凯琼脂培养基：取麦康凯琼脂试药55g，加蒸馏水1000ml加热使溶解，116℃灭菌30分钟，备用。
1.5.6三糖铁琼脂培养基斜面：取三糖铁琼脂试药6.4g，加蒸馏水100ml，分装小试管，121℃灭菌20分钟，倾斜摆放，凝固后备用。
脲琼脂培养基：取脲琼脂试药2.9g加蒸馏水100ml，加热使溶解，121℃灭菌20分钟，备用。
1.5.7氰化钾培养基：取氰化钾培养基试药两份，每份1.4g，分别加蒸馏水100ml，加热使溶解，121℃灭菌20分钟，冷却后，一份加氰化钾试液1.5ml，另一份不加氰化钾试液，分别分装于12mm×100mm灭菌试管内，每管4ml，立即用灭菌橡胶塞塞紧，置冰箱4℃备用。
1.5.8赖氨酸脱羧酶培养基：取赖氨酸脱羧酶培养基试药两份，每份0.9g，分别加蒸馏水100ml加热溶解后；一份加L—赖氨酸0.1g，另一份不加作为对照，分别按每管
2.5ml 分装小试管，并滴加一层液体石蜡，121℃灭菌20分钟备用。
2操作步骤：
2.1增菌、分离培养：
2.1.1取供试品10g，加灭菌生理盐水100ml作供试品溶液，取营养肉汤增菌液3份，每份100ml，2份分别加入10ml供试品溶液，其中1份加入对照菌溶液作阳性对照，第3份加入10ml灭菌生理盐水作阴性对照。
置36±1℃培养18—24小时，阴性对照应无菌落生长。
取其余2份培养物各1ml，分别接种于四硫磺酸盐增菌培养基10ml 中，再置36±1℃培养18—24小时。
分别划线接种于胆盐硫乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基的平板上，置36±1℃培养18—24小时或延至40—48小时。
当阳性对照的平板呈现阳性菌落时，供试品的平
板无菌落生长，或有菌落生长但不同于沙门氏菌菌落形态特征表时，可判为未检出沙门氏菌。
2.1.2如供试品平板有菌落生长，或与沙门氏菌菌落形态特征表相符或疑似者，应挑选2—3个菌落分别接种于三糖铁琼脂培养基斜面上，阳性对照同时接种该培养基，置36±1℃培养18—24小时后阳性对照的斜面应为红色底层为黄色，硫化氢阳性，而供试品的疑似菌斜面未见红色，底层未见黄色，可判为未检出沙门氏菌。
否则，应继续做以下生化试验。
沙门氏菌菌落形态特征表
2.2生化试验：
取沙门氏菌疑似菌株的三糖铁琼脂培养基斜面培养物，作以下试验：
2.2.1靛基质试验：用接种环取少量培养物，接种于蛋白胨水培养基中，培养24小时，沿管壁加入靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试液本色为阴性。
2.2.2尿酶试验：用接种环沾取培养物，划线接种于脲琼脂培养基斜面置36±1℃培养24小时红色为阳性，不变色为阴性。
2.2.3氰化钾试验：取36±1℃培养24小时的疑似菌株营养肉汤培养液，用接种环沾取1环接种于氰化钾培养基中，另取1环接种于对照培养基中，接种后即用橡胶塞塞紧，36±1℃培养24—48小时观察结果，两管均有菌落生长为阳性，而对照管有菌落生长，试验管无菌落生长为阴性。
2.2.4赖氨酸脱羧酶试验：取疑似菌斜面培养物分别接种于赖氨酸脱羧酶培养基及对照培养基，置36±1℃培养24—48小时，对照管应为黄色，试验管呈紫色为阳性，呈黄色为阴性。
2.2.5动力试验：取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基中，置36±1℃培养24小时，细菌沿穿刺外周扩散生长，为动力阳性，否则为阴性。
阴性培养物，应在室温保留2—3天后，再判定。
2.2.5血清凝集试验：在洁净载波片一端，以接种环取沙门氏菌属A—F“0”多价血清2—3环，再取斜面上部的培养物少许，与血清混合，将玻片前后侧动，如出现凝集现
象，应以0.9%氯化钠溶液与同株培养物作对照试验，无凝集现象时判为血清凝集阳性，时有反应迟缓，需将玻片与湿棉球置平皿内，约过20分钟，再观察。
仍未出现凝集时，应取斜面培养物，置少量0.9%氯化钠溶液溶液中，制成浓菌悬液，在100℃水浴中保温30分钟，待冷，再作凝集试验。
如出现凝集，应判为阳性否则为阴性。
上述各项试验反应，一般为硫化氢阳性（或阴性），靛基质阴性，脲酶阴性，氰化钾阴性，赖氨酸脱脂酶阳性，动力阳性，A—F“0”多价血清凝集试验阳性。
各鉴定结果按下表判定。
沙门氏菌检查结果判定。