083016-冰冻切片注意事项
冰冻切片机的使用指南及注意事项
冰冻切片机使用步骤1、按电源开关I/O侧的I（开）侧，接通仪器电源。
待仪器进行短暂时间的初始化（屏幕上将显示一个沙漏标志）后，请检查上方显示屏是否亮起，是否显示语言选择菜单。
2、请检查速冻台、冷冻箱及其切片厚度是否为实验所需要的相关数据，通常速冻台为-35℃，冰冻箱为-20℃，切片厚度为6µm。
如若不是，在屏幕上点击或调节到需要的数据。
调节好后，等待机器降到要修改的事项，用3、将手轮手柄旋转到12点钟的位置，然后进行制动。
将样品利用冰冻胶固定在样本托上，并放于速冻台上降温。
10min后，将带样品的样本托从速冻台取出，然后用样本夹钳将其固定在切片机头上。
4、取下护刀架，如果样本运行指示器上显示有足够“剩余移动距离”，那么，您可以使用仪器左侧控制面板上的样本推进按键，使样本向刀架方向前进。
另外您也可以采用，将手轮旋转到3点钟，并且将其锁定在该位置。
将刀架左下方（黑色）的操控杆拉向你，然后小心地将刀架底座沿着滑槽向远离你的方向（前方）滑动，直至刀片快要接触到样本。
将操控杆沿着远离你的方向推动，将刀架锁定在适当位置上。
如果需要，可使用控制旋钮将样本精确定位在靠近刀架的位置。
每旋转控制钮一个刻度，可将样本移动8µm。
5、打开手轮柄锁，顺时针（朝前）均力旋转摇手柄轮一圈，即出一张相应厚度的切片。
待切到样品位置时，放下防卷板再次切片。
切好后，请将手轮锁定在6点或12点位置，使样本头移动到最低或最高位置便于取出切片，掀起玻璃防卷板用载玻片上靠，切片立即附着在载玻片上。
玻璃防卷板可以用螺丝左右调节平行。
如刀上或防卷板上粘有脏东西，可用冷冻台内的毛笔刷干净。
6、当把最后一个组织切片取走后，请放好刀片护刀架，然后握住样本托的手柄将其从夹钳处取出。
锁定手轮，使用冰冻台内的刷子扫除多余组织碎片，将其清扫到后面的废物铲上，并清理出冰冻箱体。
7、关闭仪器。
按开关的I/O侧的O（关）侧，即可把仪器的电源关闭。
冰冻切片制片实验步骤及注意事项
冰冻切片制片实验步骤及注意事项冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
冰冻切片制片实验步骤1、组织固定：新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。
将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整。
2、脱水：将修切好的组织放于15%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底后转入30%的蔗糖溶液内4°冰箱脱水沉底。
3、OCT包埋：将脱好水的组织取出用滤纸将表面水稍吸干后切面朝上放于包埋台上，组织周围滴上OCT包埋剂，将包埋台放在冰冻切片机的速冻台上速冻包埋，OCT变白变硬后即可进行切片。
4、切片：将包埋台固定于切片机上，先粗切将组织面修切平整后即可开始切片，切片厚°8-10μm。
将干净的载玻片平放于切出的组织片上方即可将组织贴于载玻片上。
-20°保存备用。
注意事项1、组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2气（-78℃）② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（-80℃）③ 液氮（-190℃）④ 液氮冷却的丙烷（-19℃）。
液氮适用于组织化学，较安全。
缺点：组织块易发生龟裂。
2、为防止水解酶和其他物质的移位、弥散，常用4℃、24小时的甲醛固定能很好地保存酶类。
但对许多脱氢酶和转移酶能灭活。
故不宜使用，低温，冷甲醛短时间固定（10分钟左右）固定，可显示琥珀酸脱氢酶。
3、电镜出现后，需要保存细胞的超微结构，以4%缓冲戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二甲胂酸（pH7.）84ml；蔗糖8g）固定较好。
这些固定液主要用于水解酶，而不适于许多氧化还原酶和转移酶。
冰冻切片制作方法与注意事项
冰冻切片制作方法与注意事项冰冻切片是一种常见的制备生物组织切片的方法，其原理是将生物组织迅速冷冻并切割成极薄的切片，用于研究组织的形态结构和组织学变化。
下面是冰冻切片的制作方法和注意事项。
一、冰冻切片的制作方法：1.组织采集：选择需要研究的组织，如动物器官或植物部位，通常用组织固定剂进行固定处理，以保持组织的形态结构。
2.组织预处理：将固定的组织转移到含有蔗糖或蔗糖与聚乙二醇的冰冻液中，浸泡一定的时间使组织与冷冻液充分均匀接触，便于组织快速冷冻。
3.冰冻：使用液氮或刀片冷冻架等快速冷冻设备，将组织迅速冷冻至-20℃以下，使组织中的水分迅速形成冰晶，避免组织的形态结构变化。
4.切割：将冷冻的组织置于切片机或切片微波机上，用冷冻刀片将组织切割成薄片，通常厚度为10-30μm。
5.将切割好的切片用刷子或微型镊子移至载玻片上，通常用蛋白质固定剂或聚甲醛进行固定处理，以保持切片的形态结构。
6.干燥：将固定好的切片置于干燥器中，用适当的温度和时间干燥切片，使其充分固定在玻片上。
7.染色：根据需要可对切片进行染色处理，常见的染色方法有HE染色、银染色、免疫组化染色等。
二、冰冻切片的注意事项：1.快速冷冻：为了保持组织的形态结构和避免变形，必须采用快速冷冻的方法，将组织迅速冷冻至-20℃以下。
液氮和刀片冷冻架是常用的设备。
2.切片设备：选择适合的切片设备，如切片机或切片微波机。
刀片的选择也十分重要，常见的冰冻刀片有钢刀、玻璃刀和蜡刀，选择合适的刀片可以提高切片质量。
3.切片厚度：切割时要控制好切片的厚度，通常为10-30μm。
切片太薄容易导致组织切面不完整，切片太厚则不能得到清晰的显微镜图像。
4.切片技巧：切片技巧也很重要，需要稳定的手部技巧和耐心。
在切割时要保持刀片的稳定，避免划伤或碎裂组织。
5.切片保存：切好的切片需要妥善保存，可以用普通干燥器或冷冻干燥器进行干燥，避免切片变形和水分损失。
6.染色方法：根据需要选择合适的染色方法。
划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~
划重点！冰冻切片流程和注意事项都在这了！快快get起来~冰冻切片定义冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在冰冻切片机上进行切片的一种方法。
冰冻切片特点：操作简单，耗时短，对组织抗原损伤小，对环境污染小。
冰冻切片流程（10-15min内即可完成）：取材→包埋（<30s）→冷冻（1-3min）→切片（2-5min）→固定（10-15s）→染色（4-5min）→封片（<1min）1、取材（1）新鲜组织取材不能遇水，如果组织自身带水较多，可用滤纸吸干（目的是为了防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生）；（2）取材的工具也要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域；（3）取材组织大小要合适，厚度尽量在3mm，最多不要超过5mm（组织过大切片时阻力加大，易产生刀痕和褶皱）。
2、包埋（1）包埋机一般使用OTC或普通胶水，OTC包埋剂质感细腻，对刀片损伤小，有利于切片；（2）包埋时要将包埋剂涂抹均匀，确定好组织的包埋方向，例如管腔、皮肤、囊壁等要竖立包埋；（3）包埋体积较小的组织，可以先挤压少许的包埋剂形成一个平台，再放入小组织进行包埋。
3、冰冻温度与时间（1）冰冻温度与时间是冰冻切片的关键步骤，要根据组织的类型和大小来调节；（2）冰冻温度过低，会造成组织过硬，切片碎裂；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片；（3）不同组织冰冻切片适宜温度：4、切片（1）在组织和包埋剂冷冻到发白后即可开始切片；（2）切片时右手摇动手轮要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度控制在5um左右，左手持毛笔在切片形成时轻按住组织边缘，使其不发生卷曲；（3）将切片展平粘贴在干净的载玻片上，应立即放入固定液中固定，如果固定不及时，会发生细胞退变，切片中细胞核模糊不清呈雾状。
5、染色流程：固定（95%乙醇）→苏木素→水洗→盐酸乙醇分化（0.5~1%）→水洗→温水返蓝→伊红→梯度酒精→二甲苯透明→封片6、注意事项（1）纤维及结缔丰富的组织，应顺着纤维纹理切片，否则容易崩裂；（2）较硬较脆的组织应尽量切的薄一些；（3）选择合适的固定液（95%乙醇、甲醛、甲醇、丙酮），且固定液要保持新鲜，及时更换固定液；（4）组织尽量快速冷冻，组织间隙的自由水易冷冻凝结形成冰晶，组织冷冻越缓慢，冰晶形成的数量越多，体积越大。
冰冻切片制作注意
冰冻切片时的注意事项1、防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。
有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。
因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。
2、多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。
3、放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。
4、组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。
临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。
如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。
这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也渗入组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。
5、当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。
另者，调高冰冻点。
6、用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。
因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。
如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。
7、冰冻切片的快速染色法冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。
以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。
根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。
冰冻切片注意事项
冰冻切片注意事项冰冻切片是一种常用的实验技术，在科学研究、医学诊断和药物开发中起着关键作用。
这种技术可以将组织样本以无损坏的方式保存，并用于后续的显微镜观察和分析。
然而，要获得高质量的冰冻切片需要注意一些重要的事项。
以下是一些关键的注意事项。
1.选择合适的切片仪器和材料：要获得最佳的切片效果，应选择高质量的切片仪器和材料。
切片仪器应具备高速度和高精度的切割能力，并且能够保持适宜的温度和湿度。
切片材料应选择具有较好的冷冻保护性能和切割性能的材料。
2.适当的标本处理：在进行冰冻切片前，标本应进行适当的处理。
首先，标本应被固定以保持其形态和结构的稳定性。
常用的固定方法包括冷冻固定、化学固定和生理盐水固定等。
其次，在进行冷冻切片前，标本应进行充分的去水处理，以使切片的质量更好。
3.适宜的切片温度：切片温度是决定切片质量的重要因素。
一般情况下，切片温度应尽量低，以减小标本的结构变形和切割的损伤。
通常，切片温度应控制在-20℃至-30℃之间。
4.适当的切片速度：切片速度是决定切片厚度和切片质量的关键因素。
切片速度过快会导致切片厚度不均匀，切片速度过慢则容易引起标本的变形和损伤。
一般情况下，切片速度应适中，并且应根据不同的标本类型进行调整。
5.切片后的处理：切片后，切片应立即进行处理，以防止切片的结构变形和氧化。
处理方法包括立即放入冷冻保存或石蜡包埋等。
6.切片的储存和保存：冰冻切片在使用前需要进行储存和保存。
一般情况下，切片应保存在低温环境中，以保持其形态和结构的稳定性。
冷冻切片的保存时间一般较短，通常为几天至几周。
7.切片质量的评估：为了确保冰冻切片的质量，应对切片进行适当的评估。
评估的方法包括显微镜观察和组织学染色等。
通过评估，可以发现切片中存在的问题，并采取相应的措施进行改进。
总之，冰冻切片技术在科学研究和医学诊断中具有重要的应用价值。
遵循上述的注意事项，可以获得高质量的冰冻切片，从而提高实验和诊断的准确性和可靠性。
冰冻切片机的使用指南及注意事项
冰冻切片机的使用指南及注意事项引言：冰冻切片机是一种常见的食品处理设备，广泛应用于餐饮业、食品加工厂和家庭厨房等场所。
它能够快速将食材切成均匀的薄片，提高烹饪效率和食品的美观度。
然而，使用冰冻切片机时需谨慎操作，以确保安全和提高工作效率。
本文将为您介绍冰冻切片机的使用指南及注意事项，以帮助您正确使用和保养该设备。
一、冰冻切片机的使用指南1. 准备工作在使用冰冻切片机之前，需要做好以下准备工作：- 清洁切片机：确保切片机表面和刀片都是干净的。
使用温水和少量洗洁精清洗，然后彻底冲洗干净，并用干净的布擦干。
- 准备食材：根据需要，选择合适的食材进行切割。
确保食材新鲜、干燥且无破损。
- 调整切片机设置：根据需要调整切片机的厚度和速度设置。
注意在操作过程中，确保切片厚度合适，以免造成浪费或食材过于薄片，影响食品质量。
2. 正确使用冰冻切片机下面是使用冰冻切片机的正确步骤：- 将食材放置在切片机上的进料口位置，并通过压力杆将其固定。
- 开启切片机的电源开关，并设置合适的切片机厚度和速度。
- 将手握在固定手柄上，并将切片机的刀片沿着食材轻轻移动，实现切片的过程。
- 使用完成后，关闭切片机电源开关，并等待刀片停止旋转后再进行下一步操作。
3. 清洁与维护冰冻切片机使用后需要进行清洁和维护，以延长其使用寿命和确保卫生。
- 关闭冰冻切片机电源，并拔掉电源插头，确保刀片停止旋转。
- 使用温水和少量洗洁精清洗切片机的外部表面和刀片。
避免使用金属刷或刮板，以免损坏切片机表面。
- 清洁完成后，用干净的布擦拭干燥。
- 定期检查和保养冰冻切片机的各个零部件，确保其正常运行。
如发现有磨损或松动的部件，及时修复或更换。
二、冰冻切片机的注意事项1. 注意安全使用冰冻切片机时，务必注意安全，避免发生意外伤害。
- 确保刀片停止旋转后再进行任何操作，以免被刀片切伤。
- 使用切片机时，避免将手指或其他物体靠近刀片，以免发生意外。
- 在清洁和维护切片机时，务必切断电源并拔掉电源插头。
冷冻切片方法及注意事项
冷冻切片方法及注意事项冷冻切片是一种常用的组织学研究方法，它能够帮助研究人员观察和分析生物组织的结构和功能。
下面将详细介绍冷冻切片的方法及注意事项。
1.组织采集：首先需要选择适当的生物组织样本，可通过手术切取、尸检或动物献体等方式获得。
2.组织处理：取出组织样本后，应立即进行处理，以防止样本脱水和坏死。
可将组织放入理化盐水或生理盐水中，避免干燥、坍塌或变形。
3.固定组织：使用适当的固定剂对组织进行固定，以保持组织结构的完整性。
常用的固定剂有福尔马林、戊二醛、乙醛等。
固定时间应根据组织大小和厚度进行调节，较小的组织可以固定2-4小时，而较大的组织可能需要24小时以上。
4.预冷冻：固定后的组织应在冷冻前进行预冷冻处理，以提高冷冻切片的质量。
预冷冻的方法包括放入冷冻剂中（如液氮、干冰等）或将其放入冰盒中进行冷藏，使组织完全冷却。
5.冷冻切片：使用冷冻切片机将预冷冻的组织切成薄片。
为了获得更好的切片结果，刀片的角度和厚度需要进行适当的调整。
同时，切制时需要快速而轻柔地移动切片机，以防止组织被拉伸或损坏。
6.切片收集：将切片收集在玻片上，通常使用细长形的切片夹或切片板来收集切片。
确保切片不受损并保持平整。
7.切片保存：将切片放入适当的保存溶液中，如PBS（磷酸盐缓冲液）或甘油等，以防止切片干燥和变形。
可以根据需要选择冷藏或冷冻保存。
冷冻切片需要注意以下事项：1.样本质量：选择新鲜、完整的组织样本，避免坏死、变性或损伤的组织。
2.固定剂选择：选择适当的固定剂进行组织固定，以保持组织结构的完整性。
3.冷冻速度：组织应尽快冷却，以避免组织脱水或破坏。
冷冻速度过慢可能会导致晶体形成，影响切片质量。
4.切片机状态：保持切片机的良好状态，定期检查刀片的锋利度和调整角度，以确保切片的质量。
5.切片技巧：需要轻柔、均匀地切片，避免组织被拉伸或扭曲。
同时，切片过程中需要快速操作，以减少冰晶对组织的破坏。
6.切片收集：收集切片时要避免切片叠加或悬浮，以免影响切片的观察和分析。
冰冻切片注意事项课件
THANK YOU
冷冻温度与时间控制
总结词
详细描述
切片厚度与刀片选择
总结词
切片厚度和刀片选择直接影响到冰冻切片的观察效果和制片质量。
详细描述
应根据检查目的和组织特性选择合适的切片厚度和刀片类型。对于较软的组织，应使用较薄的切片和锐利的刀片， 而对于较硬的组织，则应使用较厚的切片和钝刀片。此外，在制作过程中要保持刀片的清洁和锋利，并及时更换 刀片。
细胞固定与透化方法的应用
总结词
详细描述
05
冰冻切片制作实例分析
实验一：冰冻切片制作过程解析
冰冻切片制作的基本原理 实验步骤详解 常见问题及解决方案
实验 二
01
不同组织样本的特点
02
制作技巧与要点
03
实例分析
实验三：染色与观察方法优化研究
染色方法的选择
观察方法的优化
实例展示
实验四：细胞结构保护与固定方法研究
度或更换刀片。
切片易碎或断裂
01
总结词
02
详细描述
03
解决方案
染色不均匀或颜色不鲜艳
总结词 详细描述 解决方案
细胞结构不清晰或模糊
总结词 详细描述 解决方案
04
冰冻切片制作技巧与经验分享
冷冻时间与温度的掌握
总结词
合适的冷冻时间和温度是冰冻切片的关 键因素，可以影响切片的品质和染色效果。
VS
详细描述
冰冻切片的冷冻时间应该根据组织的类型 和厚度来确定，一般来说，较厚的组织需 要更长的冷冻时间。同时，冷冻温度应该 控制在-20℃以下，以确保切片的质量。
切片厚度与刀片角度的调整
冰冻切片机的使用指南及注意事项
冰冻切片机的使用指南及注意事项一、使用指南1.准备工作在使用冰冻切片机之前，需要进行一些准备工作。
首先，确保设备干净整洁，无杂物。
然后，检查冰箱和切片机的运行状态，确保其正常工作。
2.切片样本准备将生物组织样本置于切片盒中，并用注射器将组织浸泡在切片液中。
切片液可以是生理盐水、甘油或带有冰冻保存剂的缓冲液。
3.冰冻切片机设置根据需要调节冰冻切片机的温度和切片厚度。
通常，切片温度为-18°C至-20°C，切片厚度为5μm至20μm。
根据不同的样本类型和研究需求，可以进行相应的调整。
4.切片操作将切片盒放入切片机的切片台上，并将切片刀置于切片盒的顶部。
轻轻按下切片刀，开始切片操作。
切割的速度应适中，避免过快或过缓。
同时，可以根据需要调整切片盒和刀片的位置，以获得更好的切片效果。
5.切片收集切片完成后，定期检查切片质量。
可以用显微镜观察切片的清晰度和厚度，并进行调整。
一般来说，切片应具有适度的厚度和清晰的细胞结构，以便于后续的染色和分析。
二、注意事项1.安全操作在使用冰冻切片机时，应注意安全操作。
避免在操作过程中将手指或其他部位靠近切片刀，以防止意外伤害。
切片机工作时产生的低温也可能对皮肤造成损伤，因此应注意保护。
2.设备维护定期检查和维护冰冻切片机的状态，以确保其正常工作。
例如，清理切片机的内部和切片盒，检查切片刀的磨损情况，并及时更换。
3.样本处理在切片样本前，应对生物组织进行适当的处理。
例如，定期更换切片液，以防止细菌污染。
另外，如有需要，可以对样本进行染色和固定处理，以增加切片的清晰度和对比度。
4.隔离措施为避免交叉污染，应在使用冰冻切片机时采取隔离措施。
例如，使用专用的手套、口罩和实验室外套。
同时，定期消毒切片机和切片区域，以防止病菌的传播和污染。
5.数据记录总结：使用冰冻切片机需要一定的操作技巧和经验，同时还需要注意安全操作和设备维护。
正确的使用和维护冰冻切片机将能够提高切片的质量和效率，对于研究和诊断工作具有重要意义。
冰冻切片制作方法与注意事项固定：固定即借助化学试剂是组织和
冰冻切片制作方法与注意事项一、固定：固定即借助化学试剂是组织和细胞中的有机和无机成分凝固或沉淀，停止发生死后组织变化，尽量保持其活体状态的过程。
固定的方法有浸泡固定法，注射、灌注固定法，蒸汽固定法，本实验用的是注射、关注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难流入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定，就可采用灌注或灌流固定法。
固定时将固定液直接注入动物的血管，经血管分支到达整个组织或全身，从二十只得到充分固定。
固定液分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液有甲醛、乙醇、氯化汞、醋酸、苦味酸等，混合固定液包括Bouin液、Zenker液、Carnoy液、中性甲醛液等。
本实验用的固定液为4%甲醛（10%福尔马林）。
固定后的处理：用水配制的固定液固定后应用流水冲洗，可是组织中的固定液随时溢出和随时洗去。
对小动物和脑组织等，应以浸泡为主，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。
【注意事项】1.固定要及时。
2.组织块的大小要合适。
3.应有足够的固定液，一般与组织块的比例为20:1，容器勿过小，组织勿过多。
4.固定时间要合适，甲醛固定液一般固定两天左右，第一天要更换一次固定液。
5.要进行促使固定，在固定期间轻轻地搅动组织或摇动容器使组织移动有利于固定液的渗透，适当提高温度也可缩短固定时间。
6.选择合适的固定液。
7.一次取材数量过多时，应对取材部位和顺序进行编号，并及时做好记录。
二、脱水脱水就是用某些溶剂逐步将组织块内的水分置换出来的过程，使用的试剂称为脱水剂。
脱水剂有非石蜡溶剂的脱水剂如乙醇、丙酮等，和脱水兼石蜡的脱水剂如正丁醇等。
本实验所用的是乙醇脱水。
乙醇是最常用的脱水剂，其优点是脱水能力强，即能与水相混合，又能与透明剂相混，并可使组织硬化，便于切片。
缺点是穿透组织的速度快，且容易使组织收缩、变脆。
为克服这一缺点，在一般脱水中，应采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列不同浓度的乙醇，使组织中的水分逐渐被乙醇代替。
冰冻切片机使用规程
冰冻切片机使用规程1.安全操作规范1.1操作人员必须穿戴好安全防护用具，如手套、护目镜和防滑鞋。
1.2在操作之前，必须检查切片机的电源插头及线路是否完好无损。
1.3操作人员必须确保切片机的工作环境干燥，且没有明火存在。
1.4操作人员在操作切片机时，不得喧哗、奔跑或进行其他不相关的操作。
1.5操作人员必须经过专门培训，了解切片机的使用方法和安全规定。
2.设备准备2.1将切片机置于平稳的工作台上，并使用扣紧螺丝将其固定。
2.2检查切片机的刀片是否锋利，并及时更换已经磨损的刀片。
2.3检查冷冻室的温度是否保持在-18℃以下。
2.4检查冷冻室的密封性是否良好，避免冷气泄漏。
3.操作流程3.1打开冷冻室门，将待切片的食材放入冷冻室中，确保食材在切片前已经充分冷冻。
3.2打开切片机的电源开关，调整切片机的厚度和速度，根据需要进行个性化设置。
3.3轻轻按下食材推杆，将冷冻食材放入切片机，确保手指与刀片保持安全距离。
注意不要用手直接接触刀片，以免刀伤。
3.4慢慢推动杆，使食材通过切片机的刀片进行切割，切片完成后，及时拉回杆。
3.5当切片机使用完毕时，及时关闭电源开关，并关掉冷冻室门。
4.日常维护4.1使用完毕后，应将切片机清洁干净，并保持干燥。
4.2定期对刀片进行检查，确定是否需要磨刀或更换刀片。
4.3定期检查电源线路是否磨损，如有问题及时更换。
4.4定期清理冷冻室，避免冷冻时间过长导致冰层过厚。
4.5定期对切片机进行润滑，以确保切割的顺畅。
5.故障处理5.1若切片机出现异常噪音、震动或其他异常情况，应立即停止使用。
5.2关闭电源开关，并确保切片机完全停止运转后，检查是否有无法自行排除的故障。
6.注意事项6.1在操作切片机时，要保持专注，切勿分心或玩闹。
6.2操作人员切勿将手指或其他身体部位靠近刀片，在切片机运行期间更应小心谨慎。
6.3在操作切片机前，要确保周围没有人员或其他障碍物，以免发生意外。
6.4切片机使用完毕后，应及时关闭电源开关，避免出现不必要的安全隐患。
冷冻切片要注意什么
冷冻切片要注意什么冷冻切片是一种常见的切片方法，常用于生物组织的切片，以便于后续的检测和分析。
在进行冷冻切片时，需要注意以下几点：1. 样品的准备样品的准备是冷冻切片的首要步骤。
样品的处理方法可能会因为样品的来源和需要的扫描方法等因素而有所不同。
总的来说，常见的样品处理方式包括特定的固定液处理、涂覆有机材料等。
如果样品过于薄或过于厚，都会对切片效果产生影响。
因此，在切片前要确保样品质量良好，且符合所需要求。
2. 切片的温度在冷冻切片的过程中，样品温度是需要进行严格控制的，同时，也要保证切片设备的温度稳定。
一般情况下，冷冻切片的温度在-20到-50之间，具体温度要根据样品的情况进行调整。
在样品切割过程中，切片机要保持足够的冷却能力，以保证切片的质量。
如果切片机温度不足，可能会导致样品破裂或切片不均匀。
3. 切片机的选择不同的样品和切片要求需要不同的切片机。
对于较硬的样品或者需要制作大量薄切片的情况，选择稍微强一点的轮廓切片机。
对于一些细胞和肌肉等柔软的样品，可以使用冷冻微扫描切片机，以获得更高清晰度的切片效果。
4. 切片后的保存切片后要进行保存，以便后续进行染色和显微镜分析等操作。
不过，一定要注意样品的保存条件。
保存时，要避免温差过大、光、氧气或潮湿等环境影响，同时要遵循防止细菌和霉菌污染的措施，以确保样品的稳定性。
冷冻切片的现代CCD摄像机和显微镜能力很大程度上depends on 选择的样品制备方法。
为了实现这种高功率，必须注意上述几点的细节。
与传统切片技术相比，冷冻切片技术有更多精确测量的优势。
但由于这项技术的复杂性，需要耗费很多时间和精力来管理。
只有在细致的样品准备、精度正确的设备和适当的卫生条件下，才能获得最佳的冷冻切片效果。
冷冻切片操作指南
冷冻切片操作指南
随着科学技术的进步，冷冻切片技术被广泛应用于多个领域，包括生物学、医学和材料科学等。
冷冻切片技术可以帮助研究人员了解物质的微观结构和特性，为相关研究提供有力的支撑。
本文将为您介绍冷冻切片的操作指南。
一、准备工作
1. 准备好所需材料
在进行冷冻切片之前，您需要准备好以下材料：
- 组织样本：可以是动物组织、植物组织或其他材料。
- 冷冻切片仪：根据需要选择适当型号的冷冻切片仪。
- 切片刀：保持切片刀的锋利度，以确保切片质量。
- 冷冻剂：例如液氮或乙醇。
- 切片架：用于放置切片。
2. 样本固定和冷冻
首先，您需要对样本进行固定和冷冻。
固定样本的方法根据研
究目的的不同而有所差异。
对于生物组织，常用的固定剂包括甲醛、乙酸乙酯等。
接下来，将固定的样本放入冷冻剂中进行冷冻。
确保
样本充分冷冻，以提高切片质量。
二、冷冻切片操作步骤
1. 准备切片仪
根据切片仪的使用说明准备切片仪，确保各项设置都正确。
如
有需要，调整刀片的角度和速度，以获得最佳的切片效果。
2. 切片样本
将冷冻的样本置于切片仪的切片架上，并将切片架放入切片仪中。
调整刀片的位置，使其与样本接触。
启动切片仪，开始切片操作。
切片时应保持手部稳定，以避免切片变形或切片质量下降。
3. 收集切片
使用显微镜观察切片，将切片以适当的方式收集起来。
可以使
用刷子、针头或切片网格等工具收集切片。
注意切片的顺序和位置，以便后续的实验操作和图像分析。
冷冻切片方法及注意事项
一、试验前预备清理试验台及仪器。
开启冷冻切片机并将冷冻切片机预降至所需温度〔- 15~-20 ℃*〕。
预备好处理好的载玻片、刀片、胶水以及药品。
二、取材解剖之后快速取出所需的颖组织，用干纱布或滤纸擦干后不需固定直接取材〔24×24×2mm*〕,以防形成冰晶造成切片中形成外形不一的空泡,使细胞内构造移位。
〔注：取材中目的标本既要明确也要确保其构造的完整性，应避开不必要的脂肪及坏死组织附着;要尽量剔除毛发、硬骨或钙化物;保乳手术切缘由于脂肪组织较多,取材厚度最好不要超过3mm，厚者冰冻费时，大者难以切完整。
甲状腺及淋巴结组织要带全组织被膜并除去多余的脂肪组织。
〕三、冷冻切片1、取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上冰冻，用吸热器压住组织，至包埋剂与组织冻结成白色冰体即可切片〔1~3 分种〕。
2、将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
3、调好欲切的厚度，依据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10μm 间。
4、调好防卷板。
制作冰冻切片，关键在于防卷板的调整上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，以切出完整、平滑的切片为准。
切好的组织在干净的玻片上黏附时顺着一个方向略微用力轻轻一带,可避开组织摊片过程中皱折,保证组织构造的完整及切片的美观。
注：①包埋剂的选用：包埋剂是对冷冻切片质量一重要影响因素，包埋剂用量要适宜，过多或过少都会影响标本冷冻质量。
常用的有三种包埋剂OCT 剂、B 超藕合剂以及一般胶水。
B 超藕合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织,一般胶水或OCT 剂适用于纤维丰富质地偏硬组织。
〔OCT 包埋剂骤冷时固化，其冷冻速度和软硬韧度与组织相近，其还具有水溶性，不影响染色等优点。
〕②组织块过小：先将少量胶挤在托架上预先放在冰冻机中冷冻,约30 秒钟左右待胶凝固时将小组织放上, 组织四周再加一些胶,再次置于冷冻机中冷冻,这样组织被垫高,就能快速切出高质量的切片。
快速冰冻切片注意事项
快速冰冻切片注意事项快速冰冻切片是一种常用的实验技术，用于固定和保留生物样本的形态结构。
在进行快速冰冻切片时，需要注意以下几点，以确保实验的准确性和可靠性。
1. 选择适当的冷冻介质：在进行快速冰冻切片之前，需要选择适合的冷冻介质。
常用的冷冻介质包括液氮、液氮和乙醇混合物以及液氮和乙醇和干冰混合物。
选择合适的冷冻介质可以确保样本迅速冷冻并保持其形态结构。
2. 控制冷冻速度：快速冰冻切片的关键是控制冷冻速度。
较快的冷冻速度可以减少冰晶的形成，从而减少对样本结构的破坏。
为了实现快速冷冻，可以使用预冷的切片台、冷冻夹具或冷冻盒等设备。
3. 适当的样本固定：在进行快速冰冻切片之前，需要对样本进行适当的固定。
常用的固定方法包括化学固定和冷冻固定。
化学固定可以使用缓冲液、乙醛或戊二醛等，而冷冻固定则是将样本迅速冷冻在冷冻介质中。
4. 切片前的样本处理：在进行快速冰冻切片之前，需要对样本进行适当的处理。
这包括去除多余的组织、清洁样本表面以及调整样本的大小和形状等。
样本处理的目的是为了获得清晰的切片和减少切片过程中的伤害。
5. 使用适当的切片工具：选择适当的切片工具对于获得高质量的切片非常重要。
常用的切片工具包括冷冻切片机、超薄切片机和冷冻微扫描电镜等。
根据实验需求选择合适的切片工具，可以提高切片的准确性和可重复性。
6. 控制切片厚度：切片厚度的选择取决于实验的要求和样本的性质。
通常，快速冰冻切片的厚度在几微米到几十微米之间。
选择适当的切片厚度可以确保样本的结构和细节得到清晰显示。
7. 切片过程中的温度控制：在进行快速冰冻切片时，需要控制切片过程中的温度。
通常情况下，切片过程中的温度应低于样本的冰点，以避免样本的融化和变形。
可以使用冷冻夹具或冷冻盒等设备来控制切片过程中的温度。
8. 切片后的保存和处理：在完成快速冰冻切片后，需要对切片进行适当的保存和处理。
切片可以保存在冷冻盒中，或者进行染色、免疫标记等后续处理。
冰冻切片的原理、流程和注意事项
冰冻切片的原理、流程和注意事项1冰冻切片的原理冰冻切片是指新鲜组织不经过任何固定、脱水、透明等处理，不需要石蜡包埋，直接在低温恒冷切片机冷冻后马上进行切片的一种方法。
冰冻切片具有操作简单、对环境污染小和对组织抗原损伤小的特点。
又因制作时间和材料有限，保证高质量的冰冻切片非常重要，直接影响病理诊断的正确率。
2冰冻切片的操作流程整体流程：送检和取材要求：•送检标本及时新鲜，组织无需固定，不能遇水，防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生•取材的器械要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域•所取组织块大小应合适。
组织过大切片时阻力加大，难免产生刀痕及褶皱，加大了制片的难度包埋：•包埋剂一般使用OCT或普通胶水•包埋时将包埋剂涂抹均匀，并根据组织情况和医生的要求确定包埋方向，如管腔、皮肤、囊壁等要立埋•组织体积较小，可先挤入少许胶在包埋托上形成一个”平台“，再放入小组织进行包埋冰冻温度与时间：冰冻的温度与时间时制作冰冻切片的关键因素，需要根据组织的种类、厚度和大小来调节。
如果温度过低，会造成组织过硬、切片破碎；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片切片和染色：•在组织和包埋机冻到发白后可以开始切片•是否使用防卷板可根据操作者的习惯，如使用防卷板，一般将其调整到与切片呈5度夹角•切片时右手摇轮转要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度掌握在5微米，左手持毛笔在切片形成时按住组织边缘，使其不发生卷曲•将切片展平粘贴在结晶载玻片上后，应当立即放入固定液中加以固定，如固定不及时，会发生细胞蜕变，切片中细胞核显示不清，呈”云雾状“表现冰冻切片HE染色流程：3冰冻切片的注意事项1. 组织取材要规范冰冻切片的组织要尽可能新鲜，不触碰谁，取材要及时，动作要迅速。
2.取材大小要厚薄适中在确保渠道主要病变的前提下，尽量避开钙化、坏死、脂肪等。
3. 保持取材台面和器材的干净，防止污染4. 组织表示及编号要明确5. 切片固定要及时制片过程要求快速冷冻、快速切片、快速固定。
冰冻切片检查注意事项
冰冻切片检查注意事项 Revised by Petrel at 2021手术中冰冻切片检查规范一、手术中冰冻切片检查注意事项(一)手术中冰冻切片检查是临床医师在实施手术过程中，就与手术方案有关的疾病诊断问题，尤其需要临床医师与病理医师间的密切合作。
(二)手术中冰冻切片检查要求病理医师在很短时间内，根据对切除标本的巨检和组织块快速冷冻切片的观察，向手术医师提供参考性病理诊断意见，由于组织未得到充分有效的固定、脱水以及切片较厚等等，与石蜡切片病理诊断的准确率有一定的差距，一般仅限于良、恶性的鉴别。
与常规石蜡切片的病理诊断相比，手术中冰冻切片检查具有更多的局限性和误诊的可能性，误诊率5%以上。
有的病例难以快速诊断，需要等待常规石蜡切片进一步明确诊断。
(三)有关临床医师应于手术前向患者和／或患者授权人说明手术中冰冻切片检查的意义和局限性等，取得患者和／或患方的知情和理解。
患者和／或患者授权人应在由医院制定的《手术中冰冻切片检查知情同意书》签署意见和签名。
(四)主持手术的临床医师应在手术前一天向病理科递交手术中冰冻切片检查申请单，填写患者的病史，重要的影象学、实验室检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。
一般不接受电话预约和临时申请手术中冰冻切片检查。
（五）手术中冰冻切片检查的手术标本在切除后应立即送到病理科，并注明手术的部位，重点部位应做标记或加以说明。
同时手术标本应保持新鲜，不要加用固定液或用含水溶液清洗，以免影响制片和诊断。
（六）手术中冰冻切片检查诊断报告一般在手术标本送达病理科后30分钟内做出。
并以书面文字形式通知临床手术科室。
特殊情况（如标本过大，取材过多，或多个冰冻标本同时送检等），报告时间可以超过30分钟。
（七）工作开展时间：手术中冰冻切片检查的开展时间为周一至周五，周六和周日如有需要可提前预约。
（八）手术医师应在手术后及时填写常规石蜡病理检查申请单到病理科，以便病理科及时发出常规病理报告。
冰冻切片的雷区，你中招了吗？
冰冻切片的雷区，你中招了吗？一、取材动物麻醉后，解剖迅速取出所需的新鲜组织，立刻转到固定液中固定，此步应尽可能快速完成，防止组织暴露在外因此后续检测结果。
二、脱水固定好的组织，转到15%蔗糖中脱水至沉底，再转到30%蔗糖中沉底即可。
注意：所用的固定液和脱水剂均是用PBS缓冲液来配制，如果不是，会破坏细胞膜的结构。
三、速冻1、将组织块平放于冰冻切片塑料模具内，缓缓加入包埋剂OCT 到模具内，避免引起气泡。
注意：需要切片的位置放到模具底部。
另外值得注意的是：一般在进行速冻之前，先用包埋剂浸没组织1-2h，然后在进行速冻。
2、用夹子夹住包埋好的组织放到液氮中，此时开始气化沸腾。
注意：包埋模具切勿浸入液氮中，大约10-20s组织即迅速冰结成块。
注：要防止冰晶的产生，就是要控制组织的速冻过程，水的物理性质可知，水在-4度的时候，体积最大，这就说明了，如果水在-4度的停留时间越长，组织体内的冰晶体积就越大，数量就越多。
因此，我们要做好冰冻切片，防止组织出现空泡，就是要在速冻过程中，减少水停留在-4的的时间。
3、制成冻块后，即可置入恒冷冻切片机进行切片。
备注：若需要保存，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80℃冰箱贮存备用。
4、托台上涂一层OCT包埋胶，将速冻好的组织置于涂好OCT的托台上，放上铁压台，利用重力压平组织。
四、切片1、把冷冻好的组织承载器装到仪器的进退键上，手工旋转旋钮，观察是否固定好。
2、调好切片厚度，修片，修到需要的位置再切，恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，切片机置于低温密闭室内，切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-20μm，一般切10um既可。
3、切片时，低温室内温度以-15℃ ~ -22℃为宜，温度过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动。
注意：包埋剂的选择，包埋剂是对冰冻切片的质粒是一个重要的影响因素，常规的包埋剂有OCT剂，B超耦合剂和普通的胶水；其中B超耦合剂适用于细胞丰富质地较嫩的组织，普通胶水和OCT剂适用于纤维丰富质地偏硬的组织。
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冰冻切片注意事项
切片前准备的材料（冷冻剂在切片室保存）：
1、泡沫盒或其他盒子用于装所有材料
2、记号笔
3、纸巾（用于最后清理）
4、切片刀片（通用的日本产Accu-Edge）
5、镊子（用于将样品从保存袋中取出等）
6、小刀（用于将冰冻的样品从底托上割下）
7、无水乙醇（用于最后清理）
8、毛刷笔（一大两小，大的用于随时清理，小的两个用于取切片）
9、片盒（用于保存切片）
10、载玻片（Thermo 正电荷处理-粉色）
切片过程注意事项：
1、切片前检查机器运行状况是否正常。
2、调整刀片托架，安装刀片（注意刀片盒子的拉动，先退回之后推出刀片，之后不用退回），固
定刀片，注意刀片锋利小心操作，在不用切片的操作过程时将保护框推上去。
3、注意将需要在机器内用的镊子、小刀、毛刷笔等工具以及金属托放到机器内预冷。
4、样品装在金属托上固定后，装上并固定，调整位置时可先调整刀托架后，再调整样品托位置，
最后采用Trim/Feed方式调整位置，试切至样品水平。
5、正式切时可用两个小毛刷拉平褶皱的组织片。
6、切片完成后，及时收回组织样品，防止融化，组织样品保存尽量一直在干冰条件下。
7、彻底将所有残片扫入垃圾盒内，小心取出倒掉并用无水酒精擦拭干净，机器内部也注意用无水
酒精擦拭完全。
8、操作结束后登记。