革兰染色实验报告、抗酸染色法实验报告
实验二 细菌涂(抹)片的制备和革兰氏染色
胞壁脱水、网状结构孔径缩小，通透性降低，使得结晶紫—碘的复合物不
易被洗脱而保留在细胞内。虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色。 G细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄，类脂含量高，所以在脱色处理
时，类脂被乙醇溶解，细胞壁的通透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较
容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的颜色。
2、 细菌涂片的制备：讲解并示范涂片、干燥、固定的方法。
3、 细菌常用染色方法：革兰氏染色法
革兰氏染色法： 1. 制片：取待检病料或细菌培养物常规抹（涂）片、干燥、 固定。 2. 初染：滴加结晶紫，染色1-2分钟，水洗。 3. 媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1分钟，水洗。 4. 脱色：用滤纸吸取或甩去载玻片上的残水，将载玻片倾 斜，在白色背景下，用滴管流加95%乙醇脱色，直至流出的 乙醇无紫色时（20—30秒），立即水洗。
G+菌与G-菌细胞壁的区别
细胞壁
强 度 厚 度 肽聚糖层 肽聚糖量 糖类量 脂类量 磷壁酸80nm 可达50 层 50%~80% 约45% 1%~4% ﹢ ﹣
革兰阴性菌
较疏松 10~15nm 1~2层 5 %~80% 15%~20% 11~22% ﹣ ﹢
革兰氏染色法过程示意图
实验二细菌涂（抹）片的制备和革兰氏染色
目的要求：1、掌握细菌抹片的制备方法和常用染色方法。 2、认识革兰氏染色和抗酸性染色的反应特性。 实验内容： 1、 细菌抹片的制备：
细菌抹片
的制备
玻片准备：透明、洁净、无油渍。 抹片：液体材料、非液体材料、组织脏器材料的抹片方法讲解、示范。 干燥固定：火焰固定和化学固定的示范。讲解其目的及注意事项。
2. 脱色: 3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。
细菌的简单染色和革兰染色实验报告
实验二：细菌的简单染色和革兰染色一、实验目的1.掌握细菌涂片的制备方法。
2.掌握细菌简单染色和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。
3.巩固显微镜油镜的使用方法。
4.学习无菌操作技术。
二、实验原理1、染色原理：细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。
当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。
2、革兰染色法原理：革兰染色法可根据细菌细胞壁结构和成分的不同，将其分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。
革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。
另外，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果。
如酵母菌细胞壁的成份完全与细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。
三、实验仪器，材料和用具1、仪器及用具：显微镜、酒精灯、火柴、接种环、载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、镜油、无菌牙签2、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、牙垢、未知菌S1和S33、试剂：结晶紫染液、革氏碘液、洗脱液（95%乙醇溶液）、番红染液四、实验步骤（1）简单染色1、载玻片的处理：用纱布将取出的载玻片擦干，把要涂菌的部位在火焰上烤一下，冷却待用。
2、涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上烧灼灭菌，待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在洁净无脂的载玻片上涂一直径约2mm的均匀薄膜。
3、干燥：涂片后待其自然干燥。
4、固定：将以干燥好的涂片标本朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次，要求载玻片温度不能超过60度，以手背触载片不烫为宜。
5、染色：滴加一滴结晶紫染液，染色1min。
实验九-抗酸染色
临床病原生物学教研室
.
一、实验目的：
1.掌握抗酸染色的原理和方法 2掌握结核分支杆菌痰涂片的报告方 法。
.
二、实验原理：
❖ 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分 枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌 一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促 使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合 后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。
3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
.
五、实验结果：
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无 序，偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
.
.
.
六、注意事项：
1、无菌操作 2、涂片厚度要适中 3、固定 4、冲洗 5、染色时间 6、初染加热的温度，勿沸腾
❖ 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与 石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理 也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍 然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。
.
三、实验材料：
细菌：结核杆菌 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美
兰溶液 其它：接种环、酒精灯、载玻片等
.
四、实验方法：
1、细菌涂片的制备 1）涂片：20mm*25mm薄涂片或
20mm*15mm厚涂片 2）干燥：自然干燥 3）固定：火焰固定
.四、实验ຫໍສະໝຸດ 法：1、细菌涂片标本的制备
涂片
干燥
固定
2、染 色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热5-10分钟，待标本冷却后用水冲洗。
革兰氏染色和抗酸染色法
四、注意事项
1、注意涂片不宜过于浓厚。 2、火焰固定温度要适宜。 3、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如 脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳 性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多 少等因素的影响，难以严格规定。 4、染色过程中应吸去玻片上的残水，以免染色 液被稀释而影响染色效果。 5、选择幼龄的细菌。G+菌培养12-16h，E.coli 培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使 G+菌转呈阴性反应。
（4）用3%盐酸酒精脱色，直到流下的脱色剂无色为
止，水洗。 （5）用碱性美蓝染液复染30秒，水洗、干燥、镜检。
【结果观察】 1.结核杆菌染成红色，细长，直的或为微 弯曲，有的可表现出分枝特征，偶而有着 色不匀，成颗粒状者。亦可以见到有纵行 条索状排列。标本的其余部分及非抗酸性 细菌染成蓝色。必须逐一观察各个视野， 直待全部涂片找不到结核杆菌时，才可报 告阴性。
精处理也不易脱色，再经美兰复染，结核
杆菌及其它分枝杆菌仍呈红色，而非抗酸
菌和细胞杂质等呈蓝色。
【材料】
①结核病人的咳痰液：采取清晨第一口粘 痰，或浓缩集落菌法处理过的痰标本。 ②石炭酸复红染色液，3%盐酸酒精，碱性 美蓝染液 ③生理盐水
④载物玻片，滤纸片、接种环、玻片夹、 酒精灯、蜡笔等
2.涂片染色能查到结核杆菌者，一般需要
每ml痰液内含菌量至少应有500个以上， 甚至需达到5万以上。故材料多进行浓缩集 菌处理，以提高检出阳性率，也造成在染 色标本片观察中，不一定每个视野都能看 到结核杆菌。
3.结核杆菌易发生变异，在陈旧培养基或临
床治疗后标本材料中，结核杆菌往往菌体断 裂，或形成非抗酸性革兰氏阳性的短杆状、 球状颗粒，亦称Much颗粒。 4.标本经高压灭菌处理，不影响染色结果， 也保证操作者的安全。
细菌的简单染色和革兰染色实验报告
细菌的简单染色和革兰染色实验报告生32 程雨婧2013012406一、实验目的1、学习无菌操作技术，掌握细菌涂片的制备方法。
2、巩固显微镜油镜的使用方法。
3、掌握细菌简单染色法和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。
二、实验原理细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。
当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电荷的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。
简单染色法就是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法。
革兰氏染色法（Gram Staining）由丹麦病理学家Christian Gram于1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别分类为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）这两种类型，是细菌学中最常用的鉴别性染色法。
革兰氏染色法之所以能够将细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是因为这两类菌的细胞壁结构和成分不同。
一般认为革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色，再经番红复染就染成了红色；革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色。
除此之外，革兰染色的差异还应考虑物理结构的不同，例如酵母菌虽然是不是细菌，既不是革兰氏阴性菌，也不是革兰氏阳性菌，但具有革兰染色阳性反应。
三、实验器材1、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、酵母菌、待鉴定的未知菌S1和S2。
2、仪器及其他用品：显微镜、酒精灯、打火机、接种环、载玻片、盖玻片、擦镜纸、擦镜液、吸水纸、镜油、无菌牙签。
3、简单染液：结晶紫染液、番红染液。
4、革兰染液：结晶紫染液、革氏碘液、95%乙醇溶液、番红染液四、实验步骤（一）简单染色1、载玻片的处理：从乙醇溶液中取出洗干净的载玻片，用吸水纸擦干，将要涂菌的部位在酒精灯火焰上烤一下，可以去除油脂，冷却待用。
5-111121-抗酸染色
微生物实验（ 微生物实验（五）
痰标本抗酸染色 厌氧菌形态培养 分枝杆菌培养 麻风杆菌形态观察
2011-11-21
（一）厌氧菌的形态培养
• 经呼吸道、接触感染 经呼吸道、 • 引起麻风病 瘤型麻风（开放型）： ）：传染性强 瘤型麻风（开放型）：传染性强 结核样型（闭锁性）： ）：传染性弱 结核样型（闭锁性）：传染性弱 • 微检：标本涂片抗酸染色是诊断麻风的 微检： 主要依据
28
麻风杆菌的抗酸染色
29
抗酸染色
原理： 一、原理：
• 抗酸性杆菌（结核杆菌、麻风杆菌等）的细胞壁内含有 抗酸性杆菌（结核杆菌、麻风杆菌等） 大量的脂质(主要是分枝菌酸) 包围在肽聚糖的外面， 大量的脂质(主要是分枝菌酸)，包围在肽聚糖的外面， 所以分枝杆菌用一般染色不易着色，需用强染剂（5%石 所以分枝杆菌用一般染色不易着色，需用强染剂（5%石 炭酸复红溶液）加温或延长染时间才可着色。 炭酸复红溶液）加温或延长染时间才可着色。但分枝菌 酸与染料结合后，又很难被酸性脱色剂（3%盐酸酒精 盐酸酒精） 酸与染料结合后，又很难被酸性脱色剂（3%盐酸酒精） 脱色，因而被染成红色，故名抗酸染色。 脱色，因而被染成红色，故名抗酸染色。 • 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸 复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。 复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当 再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色， 再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细 非抗酸性菌）及背景中的物质为兰色。 菌（非抗酸性菌）及背景中的物质为兰色。
抗酸染色法实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除抗酸染色法实验报告篇一：抗酸染色法抗酸染色法目录1简介2抗酸染色的原理3抗酸染色一般步骤?1）初染?2）脱色?3）复染4抗酸染色的染液配制简介编辑抗酸染色法acid－faststainingmethod1882年由埃利希（F．ehrlich）首创并经F．齐尔（Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。
其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森（Ziehl－neelsen）染色法和齐尔-加贝特（Ziehl－gabbet）染色法。
用石炭酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。
抗酸染色的原理编辑分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
抗酸染色一般步骤编辑1）初染用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
2）脱色3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。
3）复染用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。
抗酸染色的染液配制编辑1、石炭酸复红碱性复红酒精饱和溶液10mL5%石炭酸90mL2、3%盐酸酒精浓盐酸3mL95%酒精97mL3、吕氏美兰液美兰酒精饱和液30mL氢氧化钾（1:10000）100mL篇二：实验二十四抗酸染色-jpkchnadlcn课程名称：微生物学检验技术授课专业：医学检验学时：2学时实验十七结核杆菌检验(m.TuberculosisTest)一、实验目的⒈掌握结核杆菌的菌落特征，镜下形态、染色特性⒉掌握抗酸染色的原理、操作步骤，结果报告二、实验器材与试剂⒈菌种：bcg⒉试剂：抗酸染液⒊其他：三脚架、铁片、木夹子等三、实验内容㈠微生物学诊断⒈标本采取根据病灶器官取材,包括痰,尿,脑脊液,粪便等。
革兰氏染色法实验报告共5篇
革兰氏染色法实验报告篇一革兰氏染色法是一种常用的细菌染色方法，可用于鉴定细菌的类型和形态。
以下是一份革兰氏染色法的实验报告范例，包含实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果和结论等部分。
实验目的： 1.了解革兰氏染色法的原理和步骤； 2.掌握细菌的革兰氏染色方法； 3.观察细菌在革兰氏染色中的反应，并进行鉴定。
实验原理：革兰氏染色法是根据细菌细胞壁的特性而设计的一种染色方法。
细菌细胞在染色过程中会根据细胞壁的结构不同，分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌具有较厚的细胞壁，含有较多的革兰氏染色阳性物质（如染色时用的紫檀碱），因此在染色后会呈现紫色。
革兰氏阴性菌细胞壁较薄，不含有革兰氏染色阳性物质，染色时使用的碘酒（革兰氏碘化酒）能使它产生复合革兰氏染色阳性物质（碘靛紫），再用酒精脱色，再用洋红着色，使其产生颜色变化，最终呈现红色。
实验步骤： 1.准备好菌液：选取需检测的菌株，用无菌盘收集少量菌落，用少量生理盐水悬浮，制备菌液。
2.片玻璃片：在清洁无菌玻璃片上滴上一滴菌液。
3.烘干：将玻璃片架起，自然风干。
4.固定：将玻璃片的细菌涂片在火焰上迅速烘烤，使其牢固地附着在玻璃片上。
5.染色：将烘烤后的玻璃片放入紫檀液中，染色1分钟。
6.脱色：用酒精脱色10-30秒。
7.洗净：用自来水清洗片上的超染色剂。
8.再染：将片浸入碘靛紫溶液中，染色1-2分钟。
9.脱色：用酒精脱色10-30秒。
10.洗净：用自来水清洗片上的超染色剂。
11.观察：利用显微镜观察和比较细菌的形态和染色情况。
12.记录：记录细菌的形态、颜色等观察结果。
实验结果：通过观察细菌的形态和颜色，我们可以得出以下结论：•革兰氏阳性菌在染色后呈现紫色；•革兰氏阴性菌在染色后呈现红色。
结论：革兰氏染色法是一种常用的细菌染色方法，通过染色反应可以初步鉴定细菌的类型。
本次实验中，我们成功地使用革兰氏染色法对细菌进行了染色和鉴定，观察到了不同细菌的染色结果，并且将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
实验三革兰氏染色
《微生物学》实验报告开课时间室：A区文科楼510 2012年11月29日学院生物工程学院年级、专业、班10级生工01班姓名吕亚慧成绩课程名称微生物学实验实验名称细菌简单染色法革兰氏染色法指导教师李苹教师评语教师签字：年月日实验目的：1．巩固油镜的使用方法；2．学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细菌的简单染色法；3．学习、掌握细菌的革兰氏染色法；4．建立“无菌操作”的概念，学习其技术。
实验原理简单染色法：是利用单一染料对细菌进行染色的方法，常用碱性染料。
只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。
复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。
常用的有：、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。
革兰氏染色法：G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。
G ＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。
光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器。
显微镜是利用凸透镜的放大成像原理，将人眼不能分辨的微小物体放大到人眼能分辨的尺寸，其主要是增大近处微小物体对眼睛的张角（视角大的物体在视网膜上成像大），用角放大率M表示它们的放大本领。
因同一件物体对眼睛的张角与物体离眼睛的距离有关，所以一般规定像离眼睛距离为25厘米（明视距离）处的放大率为仪器的放大率。
显微镜观察物体时通常视角甚小，因此视角之比可用其正切之比代替。
显微镜由两个会聚透镜组成，光路图如图所示。
物体AB经物镜成放大倒立的实像A1B1，A1B1位于目镜的物方焦距的内侧，经目镜后成放大的虚像A2B2于明视距离处。
实验器材变形杆菌、表皮葡萄球菌载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。
免疫学实验报告
实验一免疫学实验一、免疫细胞检测：1、淋巴细胞转化试验2、E花环形成试验3、大吞噬试验4、小吞噬试验二、凝集试验（玻片法）凝集+ 不凝集-细菌鉴定结果：三、酶联免疫吸附试验（ELISA）示教原理：结果：实验二细菌形态观察及革兰染色一、观察细菌的基本形态：1、球菌2、杆菌3、螺形菌葡萄球菌大肠杆菌霍乱弧菌（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）二、观察细菌的特殊结构：1、芽胞2、荚膜3、鞭毛破伤风杆菌肺炎链球菌伤寒杆菌（革兰染色）（荚膜染色）（镀银染色）三、革兰染色1、步骤：2、结果：葡萄球菌呈色，为革兰性菌；大肠杆菌呈色，为革兰性菌。
3、简述革兰染色的技术关键及医学意义。
实验三细菌人工培养及其代谢产物的观察一、常用培养基的制备：1、怎样配制100ml普通肉汤培基？2、含有%琼脂的培基为固体培基，制成平板用于；制成斜面用于。
3、含有%琼脂的培基为半固体培基，主要用于。
二、细菌在培养基中的生长情况1、平板划线分离培养结果（记录菌落形态）2、在液体培基中的生长情况：葡萄球菌：枯草杆菌：链球菌：3、在半固体培基中穿刺接种培养结果伤寒杆菌呈生长，运动；痢疾杆菌呈 生长， 运动。
三、细菌代谢产物的观察 1、糖发酵试验：产酸产气产酸不产气＋ 不分解－2、蛋白质分解试验：阳性＋阴性－3、细菌的色素：4、简述细菌代谢产物检查的意义。
实验四消毒灭菌与细菌分布试验一、记录并分析细菌分布检查的结果：根据上述检查结果，简述其在医学、药学工作中的实际意义。
二、高压蒸汽灭菌常用压力、温度及时间为：高压蒸汽灭菌器的使用要注意的是：三、紫外线杀菌试验1、培养后菌苔生长情况（绘图）：2、简述紫外线杀菌的特点及适用范围。
实验五药物的抗菌试验一、琼脂扩散法1、纸片法2、打孔法二、液体培养基连续稀释法（试管法）药物：浓度：菌种：结果：报告MIC：实验六病原性细菌一、观察下列细菌形态并绘图链球菌淋杆菌结核杆菌（革兰染色）（革兰染色）（抗酸染色）二、化脓性球菌1、葡萄球菌：阳性＋阴性－2、链球菌：3、抗链球菌溶血素“O”试验（简称抗“O”或ASO试验）：抗体效价为：简述其原理及临床意义：三、肠道杆菌：1、观察大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌在SS平板和双糖铁培养基中的菌落特点、生化反应、动力等。
细菌接种+革兰染色+抗酸染色+倍比稀释
结果
• 生长现象 – 仅沿穿刺线生长（动力试验-） – 向四周扩散（动力试验+）
平板分区划线(金大混合菌) 每人一个
液体接种（金/大） 两人一支
斜面接种（金/大）
两人一支
半固体穿刺（大/痢）
两人一支
革兰染色法
一、实验目的 掌握革兰染色的操作技术及油镜的使用。
二、实验原理 1、G+菌肽聚糖层数多，结构致密，不易脱色。
2、G+菌等电点较低，在碱性染料中带较多负 电荷，与碱性染料结合力牢固，不易脱色。
三、材料与器材
• 菌种： 大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 • 革兰氏染色液 • 载玻片、酒精灯、显微镜。
四、实验方法
1、制片（涂片，干燥，固定） 2、初染（革兰Ⅰ液 1 min，水洗）结晶紫 3、媒染（革兰Ⅱ液 1 min，水洗）卢戈碘液 4、脱色（革兰Ⅲ液 20s ，2次，水洗）
抗酸 I 液 覆盖标本，加热5 min。(注:至蒸汽产 生, 勿煮沸, 及时添加染料)
冷却后细水流冲洗。 3. 脱色 :
抗酸II液 30 sec，细水流冲洗。 4. 复染：
抗酸III液 1min，细水流冲洗。 5. 吸水纸吸干，油镜镜检。
3.方法
一、病毒血凝实验
– 以镊子击破鸡胚气室蛋壳，撕去绒毛尿囊膜，吸取
实验结果：单个菌落 描述（大小，形态，边缘，表面，颜色，透明度）
液体接种
目的：增殖细菌
实验方法：
1、接种环烧灼灭菌，取菌； 2、培养管去塞，倾斜； 3、接种环在上液面靠近管壁处研磨； 4、塞上塞子，标记，37℃培养24h。
液体接种
实验结果：表面生长或均匀混浊生长或沉淀生长
表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
抗酸染色+标片
干燥
固定
2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。
3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片 干燥 固定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染 脱色 复染
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’
冲洗
美蓝复染1 ’
用玻片夹夹持涂片标本滴加石炭酸复红23滴在火焰高处徐徐加热切勿沸腾出现蒸汽即暂时离开若染液蒸发减少应再加染液以免干涸加热35分钟待标本冷却后用水冲洗
医学微生物学实验
微生物学教研室
2011年12月
实验内容
一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法（操作） 二、标本片观察： （钩体 、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）
3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥
油镜观察
三、抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序，
偶呈分枝状生长。
背景及非抗酸性细菌呈兰色。
注意事项：
1、无菌操作 2、菌种管摇匀后取菌 3、涂片均匀 4、初染加热维持3~5分钟，勿沸腾烧干 5、冷却后冲洗 6、油镜下从视野中找色
材料：
标本：卡介苗
染液：石炭酸复红，3%盐酸酒精，美蓝
器具：同革兰氏染色
实验方法：
1、细菌涂片标本的制备 涂片 2、染色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。
目的要求
掌握抗酸染色技术 掌握钩体，白色念珠菌、曲霉、枯草杆
病原微生物玻片染色实验报告
病原微生物玻片染色实验报告实验报告：病原微生物的玻片染色实验一、实验目的1.了解病原微生物的常见染色方法和原理；2.掌握病原微生物玻片染色的操作步骤；3.观察和分析染色后的病原微生物的形态结构。
二、实验原理常见的病原微生物玻片染色方法有革兰氏染色、抗酸染色和假单胞杆菌染色等。
其中，革兰氏染色是应用最为广泛的染色方法，可通过染色的结果，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
三、实验材料和设备1.革兰氏染色试剂盒：包括革兰氏碘液、革兰氏解显染液等；2.玻片和载玻片夹；3.热水浴；4.显微镜。
四、实验步骤1.准备样本：根据需要选择疑似病原微生物的培养液，挑取一个细菌菌落，将其悬于生理盐水中，制成液悬液。
2.制备玻片：将玻片进行充分清洗，用无菌火针将少量悬液滴于玻片上，待干燥。
3.固定：用火针将玻片烘烤固定。
4.革兰氏染色：用革兰氏碘液浸泡玻片1分钟，然后用蒸馏水冲洗；再滴加革兰氏解显染液，待显色后，用流动水冲洗并用滤纸吸干水分。
5.显微镜观察：将玻片夹于载玻片夹中，放置在显微镜观察平台上，用100倍或1000倍的放大倍数观察病原微生物的形态结构。
五、实验结果与分析根据实际需要，我们选择了一种常见的革兰氏阳性菌进行病原微生物玻片染色实验。
经过革兰氏染色后，我们通过显微镜观察到了革兰氏阳性菌的形态结构。
革兰氏染色后的革兰氏阳性菌呈现出蓝色或紫色，在显微镜下观察，我们发现它们有圆形、椭圆形、链状等多种形态。
同时，革兰氏阳性菌还具有特殊的细胞壁结构，在显微镜下可以看到其细胞壁呈现出两层结构，并且在细胞壁上有许多颗粒状的染色物质。
根据革兰氏染色的结果，我们可以初步推测该革兰氏阳性菌可能属于革兰氏阳性球菌或梭菌等菌属。
六、实验总结和思考通过本次实验，我们掌握了病原微生物玻片染色的操作步骤，并成功观察到了革兰氏染色后的革兰氏阳性菌的形态结构。
同时，我们也意识到玻片染色的结果仅能帮助我们初步分析病原微生物的形态结构，对于准确鉴定病原微生物的种类还需要结合其他实验手段进行进一步的分析与鉴定。
革兰染色与抗酸染色操作规范
一、实验原理G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色。
G－菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄或稀释石碳酸复红复染后呈红色。
二、实验器材【载玻片、试管架、红蓝铅笔、接种环、记号笔、酒精灯、打火机、生理盐水、吸水纸、冲洗瓶】、钟表、显微镜、香柏油、擦镜纸、染色盘、染色架、消毒洗手液等。
三、实验试剂革兰染液：草酸铵结晶紫染液、碘液、脱色液（95%乙醇）、蕃红复染液。
四、实验标本痰液五、操作步骤1.标记选择玻片并正确编号（标本号）2.涂片用灭菌接种环挑取菌落与载玻片上预先滴加的生理盐水涂布成1cm2或蚕豆大小的半透明菌膜。
3.干燥涂片制成后，在空气中使其迅速干燥，以免菌体皱缩变形（若需加快干燥速度，将涂布面朝上，置于火焰上方，不烫手的位置，慢慢烘干，切勿紧贴火焰）。
4.固定玻片干燥后火焰加热法固定，即玻片（菌膜面向上）中速从火焰上端通过3次进行固定，以玻片反面接触手背皮肤，热而不烫为宜。
5.初染加结晶紫染液染60s，细流水冲洗，并倒去玻片上积水。
6.媒染加碘液染60s，细流水冲洗。
7.脱色加脱色液，不时摇动10s~30s，至无紫色逸出为止，细流水冲洗。
8.复染加复染液，染30s~60s，细流水冲洗。
9.镜检待已染色的细菌标本片自然干燥或用吸水纸吸干后，再用显微镜进行观察，先用低倍镜观察，再滴加一滴香柏油用油镜观察。
注意：染色时间不同试剂有所不同。
六、结果观察1、紫色：G+2、红色：G-一、实验原理：分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。
但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。
实验九抗酸染色
20mm*15mm厚涂片 2）干燥：自然干燥 3）固定：火焰固定
四、实验方法：
1、细菌涂片标本的制备
涂片
干燥
固定
2、染 色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热5-10分钟，待标本冷却后用水冲洗。
一、实验目的：
1.掌握抗酸染色的原理和方法
2掌握结核分支杆杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分 枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌 一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促 使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合 后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与 石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理 也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍 然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。
三、实验材料：
细菌：结核杆菌 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美
兰溶液 其它：接种环、酒精灯、载玻片等
四、实验方法：
2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。
3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。
3、油镜观察
五、实验结果：
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无 序，偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
六、注意事项：
1、无菌操作 2、涂片厚度要适中 3、固定 4、冲洗 5、染色时间 6、初染加热的温度，勿沸腾
实验二 细菌染色标本检查法
实验二细菌染色标本检查法第一节实验目的与实验材料一、实验目的1. 熟悉革兰染色法，掌握其意义。
2. 熟悉抗酸染色法，掌握其意义。
3. 了解革兰染色法、抗酸染色法的原理。
二、实验材料1. 菌种葡萄球菌、大肠埃希菌18～24小时培养物；痰液或卡介苗。
2. 器料仪器：普通光学显微镜；材料：革兰染色液（结晶紫染液、卢戈碘液、95﹪乙醇、稀释复红）、抗酸染色液（石碳酸复红、3﹪盐酸酒精、美蓝液）、蒸馏水、水槽、载玻片、盖玻片、酒精灯、接种环、香柏油、二甲苯、镜头纸、吸水纸、火柴等。
第二节实验项目与方法一、革兰染色法1. 标本片的制作取洁净载玻片一张，用接种环取生理盐水各一环于载玻片两端，以无菌操作，用接种环分别挑取葡萄球菌和大肠埃希菌菌落少许涂于载玻片两端的生理盐水中，并研成均匀混浊的菌液(如系液体标本，则不需加生理盐水，可直接涂于载玻片上)。
置室温中自然干燥，必要时，可将标本面向上，在火焰上方不烤手的高度略加烘烤，但切不可将涂膜烤焦。
干燥后将载玻片的背面，以钟摆速度通过酒精灯火焰温度最高处3次，将细菌固定在载玻片上。
2. 染色步骤包括初染、媒染、脱色及复染（实验图3-1）。
（1）初染：将结晶紫染液滴加在已固定的标本片上，染色1分钟，水洗。
（2）媒染：滴加卢戈碘液媒染1分钟，水洗。
（3）脱色：滴加95%乙醇脱色，摇动标本片至无紫色脱下为止，约20秒，水洗。
（4）复染：滴加稀释复红复染30秒，水洗，用滤纸吸干，油镜观察。
3. 流程涂片、干燥、固定+结晶紫染液（1分钟）水洗卢戈氏碘液（1分钟）水洗 95％酒精脱色（约0.5～1分钟）水洗稀释复红染液（1分钟）水洗吸干后镜检4. 结果葡萄球菌染成紫色，为革兰阳性(G+)菌；大肠埃希菌染成红色,为革兰阴性(G-)菌。
实验图3-1 革兰染色法操作示意图a. 初染b. 媒染c. 脱色d. 复染5．油镜使用注意事项包括：①使用油镜时，不能使用倾斜关节，以免香柏油流下，污染载物台。
革兰染色和抗酸染色的简单原理
革兰染色和抗酸染色的简单原理
革兰染色和抗酸染色是常用的细菌染色技术，用于区分细菌的结构和性质。
革兰染色的原理：
革兰染色是根据细菌的细胞壁组成不同而进行的染色方法。
革兰阳性细菌具有较厚的细胞壁，主要由多层的胞外多聚肽和多聚糖组成，而革兰阴性细菌则有较薄的细胞壁，主要由类脂质和蛋白质组成。
具体操作步骤如下：
1. 取一份细菌培养物，涂布在玻璃片上；
2. 用甲醇将菌液固定在玻璃片上，使细菌附着在玻璃片上；
3. 将固定的细菌培养物在火焰上加热，使细菌蛋白质被凝固，固定于玻璃片上；
4. 将细菌菌液滴加上碘液，使革兰阳性细菌形成紫色复合物；
5. 用酒精或乙醚洗去碘液，洗掉革兰阴性细菌上的紫色复合物；
6. 最后向细菌涂片上滴加壮酸红，使革兰阴性细菌变为红色。
抗酸染色的原理：
抗酸染色是通过染色剂表现出对酸的抵抗性来区分细菌的染色方法。
抗酸染色主要用于检测抗酸菌，如结核分枝杆菌等，因为这些菌种具有耐酸性。
操作步骤如下：
1. 取一份细菌培养物，涂布在玻璃片上；
2. 空气干燥或用加热固定；
3. 将固定的细菌涂片滴加热苏丹III染液，在低温下加热；
4. 用75％的盐酸洗去染色剂；
5. 再用甘氨酸（苏丹lu）洗去残余的盐酸和染色剂；
6. 用脱色剂和固定剂对细菌涂片进行漂白和固定；
7. 用水洗净后，在显微镜下观察细菌的形态和颜色。
总结来说，革兰染色和抗酸染色通过染色剂与细菌的不同结构反应，使细菌在显微镜下呈现不同的颜色和形态，从而进行区分分析。
革兰染色与抗酸染色
⾰兰染⾊与抗酸染⾊
在细菌常见的染⾊⽅法中最常⽤到的就是⾰兰染⾊与抗酸染⾊，所以需要同学们能熟练掌握两种染⾊⽅法。
通过⾰兰染⾊可以将细菌分成⾰兰阳性菌与⾰兰阴性菌两⼤类。
此法也是细菌学中最经典、最常⽤的染⾊⽅法。
具体在染⾊时分为四步操作，分别是初染、媒染、脱⾊、复染。
初染是⽤结晶紫染⾊，时间⼀分钟，洗掉染料后进⾏媒染，⽤碘液染⾊⼀分钟，冲洗之后进⾏脱⾊，脱⾊是⽤⼄醇，时间为30秒再冲洗，复染⽤⽯炭酸复红，染⾊30秒冲洗⼲燥之后再镜下观察。
观察的结果是⾰兰阳性菌呈现紫⾊外观，⾰兰阴性菌呈现红⾊外观。
⼤家可以记忆为“阳紫阴红”，帮助⼤家能够长时间记住此知识点。
通过⾰兰染⾊再结合细菌特殊形态结构及排列⽅式，鉴定结果可为临床早期诊断及治疗提供依据。
因⾰兰阳性菌与⾰兰阴性菌对⼀些抗⽣素表现出不同的敏感性，可为临床选择⽤药提供参考，帮助临床制订有针对性的治疗⽅案
抗酸染⾊也可将细菌分为两⼤类：即抗酸性细菌和⾮抗酸性细菌。
抗酸染⾊⼀共分三步，第⼀步先⽤⽯炭酸复红染⾊，再⽤3%盐酸酒精脱⾊，最后再⽤美蓝复染。
抗酸性细菌能够抵抗盐酸酒精的脱⾊作⽤，呈现红⾊外观，⽽⾮抗酸性细菌不能抵抗盐酸酒精脱⾊作⽤，呈现蓝⾊外观。
对于两种染⾊⽅式要求⼤家能够基本掌握染⾊步骤、所⽤染料、以及染⾊结果。
在做题时能够游刃有余，不要在细菌染⾊这⼀部分丢分。