植物的克隆(浙科版)2016

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植物基因定位与克隆技术

植物基因定位与克隆技术生命的基因组是由数以亿计的基因所组成，而每一个基因都拥有着许多重要的生物学功能。

在植物研究领域，基因定位与克隆技术被广泛应用于植物基因的分离、克隆和功能研究中，为科学家们提供了更深入的了解植物多样性和生命过程的机会。

植物基因定位技术是通过分析遗传连锁相连的遗传标记与感兴趣的基因间的关系来确定基因位置的一种方法。

这些遗传标记可以是单核苷酸多态性（SNP）、限制性片段长度多态性（RFLP）或微卫星标记（SSR）等。

定位分析过程需要建立一个遗传连锁图谱，并将基因的位置分配到该图谱中。

随着遗传标记和图谱的不断发展，越来越多的植物基因得以定位，这使得研究人员可以轻松地实现植物基因的图谱定位和深入研究。

植物克隆技术是一种通过DNA插入和选择筛选，使不含目标DNA片段的细菌自杀，从而获得含有目标基因DNA的单个细菌克隆的技术。

该技术的基本步骤包括DNA片段的制备、载体选择、DNA插入、转化和筛选。

利用克隆技术，科学家可以克隆任何感兴趣的植物基因，并进行进一步研究。

利用克隆技术，科学家们已经成功地枚举出了许多重要的植物基因。

植物基因定位和克隆技术的应用在植物育种和基因工程方面有着重要的地位。

研究植物基因定位可以提供植物多样性和特性的基本知识，帮助育种者选择最佳配对植物，促进多样性和适应性的提高。

另外，克隆技术提供了一个强有力的技术平台，使得研究者可以研究和使用各种巨大优势植物（比如转基因植物）来进行研究和创造。

植物基因定位和克隆技术在植物科学研究和开发中扮演着重要角色。

促进这些技术的进一步发展，将有助于进一步加强植物多样性、新型植物品种的开发和农业的发展。

我相信，我们只有更深入、更全面地了解植物基因定位与克隆技术的原理和应用，才能更好地掌握和运用这些技术。

植物克隆专题复习中的“点、线、面”三个维度

第37卷第5期2021 年中学生物学Middle School BiologyVol.37 No.52021文件编号：1003 -7586(2021)05- 0061 - 03植物克隆专题复习中的“点、线、面”三个维度申屠军(浙江省东阳市第二高级中学浙江东阳 322100)“点、线、面”是数学几何的概念，后来逐渐延伸到思维领域，表现为思维逻辑关系，其应用十分广泛，尤其在学科教学中具有举足轻重的地位。

下面以“植物克隆”的专题复习为例，具体阐述“点、线、面”3个维度的内涵。

“植物克隆”是浙科版生物学必修1、2、3和选修 1、3五本教材中均有涉及的内容，也是浙江省生物学科选考的常考点，而且是二轮复习的一个重点专题。

在二轮专题复习中，教师一定要注意知识的“点、线、面”三个维度，理好知识点的部分和整体关系,促进形成网络化、系统化的知识体系，促使学生实现从知识向能力的转变。

这也是新课程倡导的“单元教学设计”和“深度学习”理念的具体体现。

这里的“点”就是具体的知识点;“线”则是植物克隆某一技术过程;“面”又是以点、线为基础，结合其他模块知识，并作适当的拓展和延伸，形成连贯的知识体系铺就成面，达到由点向线、面转变的专题复习的最终目标。

1“点”是考点和知识点，夯实基础，查漏补缺经过一轮的复习，学生对“点”己较为熟悉，但掌握的知识是零散的、不系统的。

专题复习应该重点讲学生模糊、不会的知识点，讲学生目前还不具备的知识点。

所以，在植物克隆二轮专题复习教学时，教师首先要根据《浙江省普通高校招生选考科目考试说明》列出每个考点，并整理出近年来浙江省选考试卷中出现的情况，让学生知道需要掌握哪些知识点，做到复习时能把握正确的复习方向，还要回归教材，对每个考点进行细化和梳理，让学生能明白教材中的分布情况（表1)，灵活设计教学方案，通过选择题、判断题等形式进行微专题训练，巩固复习的内容。

最后，教师要让学生写出哪些内容会了，哪些内容还没准确地掌握，如植物克隆的技术基础和理论基础、器官发生途径和胚胎发生途径、继代培养、胚性细胞、次生代谢产物等，从而帮助教师清楚地了解学情，进行有针对性的教学，达到夯实基础、查漏补缺的功能。

高中生物选修3(浙科版)知识点总结

第一章基因工程一、工具酶的发觉和基因工程的诞生1、基因工程的概念：（1）广义的遗传工程：泛指把一种生物的遗传物质（细胞核、染色体脱氧核糖核酸等）移到另一种生物的细胞中去，并使这种遗传物质所带的遗传信息在受体细胞中表达。

（2）基因工程：就是把一种生物的基因转入另一种生物体中，使其产生我们须要的基因产物，或者让它获得新的遗传性状。

基因工程的核心是构建重组DNA分子。

由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA 重组技术。

（3）基因工程诞生的理论基础：DNA是遗传物质的发觉过程、DNA双螺旋结构的确立、遗传信息传递方式的认定。

2、基因工程的基本工具（1）“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）①来源：主要是从原核生物中分别纯化出来的。

②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并能切割（使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开），因此具有专一性。

例如：某种限制性核酸内切酶能识别的序列是GAATTC,能在G和A之间切割DNA，如下图所示。

黏性末端黏性末端③结果：能将DNA分子切割成很多不同的片段。

备注：不同DNA分子用同一种限制性核酸内切酶切割形成的黏性末端都相同；同一个DNA分子用不同限制性核酸内切酶切割，产生的黏性末端一般不相同。

（2）“分子缝合针”——DNA连接酶①作用：将具有末端碱基互补的2个DNA片段连接在一起（缝合磷酸二酯键）形成的DNA分子称为重组DNA 分子。

因此，DNA连接酶具有缝合DNA片段的作用，可以将外源基因和载体DNA连接在一起。

（3）“分子运输车”——载体——质粒①载体具备的条件：1）能在受体细胞中复制并稳定保存。

2）具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

3）具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

②最常用的载体——质粒：质粒在细菌中以独立于拟核之外的方式存在，是一种特殊的遗传物质，并具有自我复制实力的双链环状DNA分子。

植物基因克隆的策略及方法

植物基因克隆的策略及方法首先，PCR是植物基因克隆的重要策略之一、PCR（聚合酶链反应）是一种体外复制DNA片段的方法，可以在短时间内扩增大量的特定DNA序列。

通过PCR可以快速准确地克隆植物基因。

PCR的基本原理是利用DNA 聚合酶酶学合成原理，在DNA片段两侧设计引物，将其与DNA片段的两侧结合，在适当的条件下进行DNA的聚合酶链反应，从而扩增目标基因。

PCR方法主要包括加热解性、引物连接、扩增和酶切等步骤。

其次，限制性酶切也是植物基因克隆的重要方法。

限制性酶切是指利用特定的限制性酶将DNA分子切割成特定序列的片段。

通过限制性酶切，可以将目标基因从植物DNA中剪切出来，然后进行进一步处理。

限制性酶切的基本原理是将特定的限制性酶加入反应体系中，该酶能识别和切割DNA的特定序列，从而将目标基因从DNA中剪切出来。

限制性酶切方法主要包括选择合适的限制性酶、反应条件的优化、酶切产物的回收和检测等步骤。

连接是植物基因克隆的另一种重要方法。

连接是指将目标基因连接到特定的载体DNA上，以便在目标植物中稳定地表达。

连接方法主要包括两个步骤：首先，需要处理载体DNA和目标基因的末端，以便它们能够相互连接；其次，利用DNA连接酶将载体和目标基因连接起来。

连接步骤中的处理涉及到DNA末端的修饰和处理，可以通过多种方法如限制性内切酶切割、引物扩增、酶切等进行。

最后，转化是植物基因克隆的最后一步。

转化是指将连接好的目标基因插入到目标植物的基因组中，使其能够在植物体内稳定表达。

转化的方法有多种，包括农杆菌介导的转化、基因枪转化、电穿孔转化等。

其中，农杆菌介导的转化是最常用的方法之一、农杆菌介导的转化是利用农杆菌作为载体将外源DNA导入到目标植物细胞中，通过农杆菌的自然寄生习性以及在植物细胞中特定的植物基因的活性表达，实现目标基因的稳定表达。

总的来说，植物基因克隆的策略和方法包括PCR、限制性酶切、连接和转化。

通过这些方法，可以快速准确地克隆植物基因，实现对植物遗传特性的改变和优化，为农业生产和植物遗传研究提供有力的技术支持。

(浙科版)普通高中课程标准实验教科书《生物》目录

（浙科版）普通高中课程标准实验教科书《生物》目录（浙科版）普通高中课程标准实验教科书《生物》目录必修一第一章细胞的分子组成第一节分子和离子第二节无机物第三节有机化合物及生物大分子综合学习与测试第二章细胞的结构第一节细胞概述第二节细胞膜和细胞壁第三节细胞质第四节细胞核第五节原核细胞综合学习与测试第三章细胞的代谢第一节细胞与能量第二节物质出入细胞的方式第三节酶第四节细胞呼吸第五节光合作用综合学习与测试第四章细胞的增殖与分化第一节细胞的增殖第二节细胞的分化第三节细胞的衰老和凋亡必修二第一章孟德尔定律第一节分离定律第二节自由组合定律综合学习与测试第二章染色体与遗传第一节减数分裂中的染色体行为第二节遗传的染色体学说第三节性染色体与伴性遗传综合学习与测试第三章遗传的分子基础第一节核酸是遗传物质的证据第二节DNA的分子结构和特点第三节遗传信息的传递第四节遗传信息的表达—RNA和蛋白质的合成综合学习与测试第四章生物的变异第一节生物变异的来源第二节生物变异在生产上的应用综合学习与测试第五章生物的进化第一节生物的多样性、统一性和进化第二节进化性变化是怎样发生的第三节探索生物进化的历史综合学习与测试第六章遗传与人类健康第一节人类遗传病的主要类型第二节遗传咨询与优生综合学习与测试第三节基因治疗和人类基因组计划第四节遗传病与人类未来必修三第一章植物生命活动的调节第一节植物激素第二节环境信号第二章动物生命活动的调节第一节内环境与稳态第二节神经系统的结构与功能第三节高等动物的内分泌系统与体液调节第三章免疫系统与免疫功能第一节人体对抗病原体感染的非特异性防卫第二节特异性反应(免疫应答)第三节免疫系统的功能异常第四章种群第一节种群的特征第二节种群的增长方式第三节种群的数量波动及调节第五章群落第一节群落的物种组成和优势种第二节植物的生长型和群落结构第三节物种在群落中的生态位第四节群落的主要类型第五节群落演替第六章生态系统第一节生态系统的营养结构第二节生态系统中的生产量和生物量第三节能量流动和物质循环第四节生态系统的稳态及其调节第七章人类与环境第一节生物圈第二节全球人口动态第三节人类对全球环境的影响选修一第一部分微生物的利用实验1 大肠杆菌的培养和分离实验2 分离以尿素为氮源的微生物实验3 观察土壤中能水解纤维素的微生物第二部分酶的应用实验4 果汁中的果胶和果胶酶实验5 加酶洗衣粉的使用条件和效果实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测第三部分生物技术在食品加工中的应用实验7 用蒸汽蒸馏法从芳香植物中提取精油实验8 果酒及果醋的制作实验9 腐乳的制作试验10 泡菜的腌制和亚硝酸的测定第四部分浅尝现代生物技术实验11 植物的组织培养实验12 乳酸脱氢酶同功酶的分离实验13 DND片段的PCR扩增选修二第一章生物科学与农业第一节设施农业第二节植物病虫害和动物疾病的防治第三节优良品种的培育和繁殖第四节绿色食品的生产第二章生物科学与工业第一节微生物发酵与食品生产第二节酶在工业生产中的应用第三节生物工程药物和疫苗第三章生物科学与健康第一节疾病与诊断第二节疾病治疗中的生物科学第三节生殖健康本章小结第四章生物科学与环境第一节生物性污染第二节生物净化第三节合理使用生物资源选修三第一章基因工程第一节工具酶的发现和基因工程的诞生第二节基因工程的原理和技术基因工程的应用第三节基因工程的应用第四节基因工程的发展前景第二章克隆技术第一节什么是克隆第二节植物的克隆第三节动物的克隆第三章胚胎工程第一节从受精卵谈起第二节胚胎工程第四章生物技术的安全性和伦理问题第一节来自生物技术的忧虑第二节现代生物技术对人类社会的.第五章生态工程第一节生态工程的主要类型第二节生态工程在农业中的应用第三节水利工程中的生态学问题第四节生态工程的前景。

从植物抗病基因的克隆看其基因结构、功能和进化

基金珥目：国家自然科学基金资助项目（９７４７３９０６）作者赫卉：俞志华（９７）男，江宁被＾，教授．１５，浙副在
ＪｕｎｌｆｈｊｎｉｅｓｔＡｇｉｏｒａｅｉｇＵｎｖｒｉｏＺａｙ（ｒ．＆ＬｆＳｉ）０２２（）１７１３ｃｉｃ．２０，８１：０ — １ｅ．
Ａｂｔａｔｎｔｉｒｖｅｍｅｈｄｆｄｓａｅｒｓｓａｃｅｅｒｍｌｎｓａｄｔｅｋｏｌｓｅｓｒｃ｛Ｉｈｓｅｉｗｔｏｓｏｉｅｓｅｉｔｎｅｇｎｓｆｏｐａｔｎｈｎｗｎｃａｓｓ，ｓｒｔｔｕ — ｔｒｌ｛ａｕｅｎｕｃｉｎｆｄｓａｅｒｓｓａｃｅｅｒｅｃｉｅ．ｅｐｓｉｌｌｃｌｒｍｅｈｎｓｕａｅｔｒｓａｄｆｎｔｓｏｉｅｓｅｉｎｅｇｎｓａｅｄｓｒｂｄＴｈｏｓｂｅｍｏｅｕａｃａｉｍｏｔｏｉｅｓｅｉｔｎｅｇｎｖｌｔｎｉｄｓｕｓｄｆｄｓａｅｒｓａｃｅｅｅｏｕｉｓｉｃｓｅ．ｓｏ
中圈分类号：Ｑ９３２４．
文献标识码：Ａ
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【创新设计】(浙江专版)2014届高三生物二轮冲刺专题查补专题8第1讲基因工程和克隆技术课件

必考点一基因工程
【典例1】
浙江大学农学院喻景权教授课题组研究发现，一种植物激
素 —— 油菜素内酯能促进农药在植物体内的降解和代谢。用
油菜素内酯处理后，许多参与农药降解的基因 ( 如 P450基因和红霉素抗性基因 ) 表达和酶活性都得到提高，在这些基因 “指导”下合成的蛋白酶能把农药逐渐转化为水溶性物质或低毒甚至无毒物质，有的则被直接排出体外。某课题组进一
第1讲基因工程和克隆技术
考纲点击 1. 基因工程的诞生 (Ⅰ) 。 2. 基因工程的原理和技术
(Ⅱ ) 。
隆 (Ⅰ )。
3.基因工程的应用(Ⅰ)。4.植物的克隆(Ⅰ)。5.动物的克
限制性核酸内切酶细胞的全能性载体植物体细胞杂交培育作物新品种
重组DNA分子
细胞增殖
动物细胞核克隆动物个体基因工程药物细胞膜流动性
解析
进行基因工程操作时，首先要获
在构建基因表达载体的过程中，用到的工具酶有限制酶和DNA 连接酶。图中的受体细胞是细菌，故用转化法导入表达载体，导入后，需检验和筛选。从图中可以看出，最终是通过对照实验来检验转基因细菌对土壤中残留农药的分解能力。
基因治疗
思维激活
1．基因工程和克隆技术涉及哪些工具酶？
提示：基因工程的工具酶是限制性核酸内切酶和 DNA 连接酶，克隆技术的工具酶是纤维素酶、果胶酶、胰蛋白酶。 2 ．限制性核酸内切酶、 DNA 连接酶、载体的化学本质一样吗？DNA连接酶和DNA聚合酶有怎样的区别？
提示：不一样。限制性核酸内切酶和DNA连接酶的化学本质
常用方法有：①化学合成法：已知核苷酸序列的较小基因，
直接利用 DNA合成仪用化学方法合成，不需要 (需要，不需要)模板。②人工合成法：以 RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。③利用 PCR 技术获得。

植物克隆的原理和技术应用

植物克隆的原理和技术应用1. 植物克隆的原理植物克隆是指通过非性系繁殖方式，从一个植物体的一部分获得新的个体，具有与母体完全相同的基因组成。

植物克隆的原理主要包括以下几个方面：1.1 组织培养组织培养是通过外植体培养技术，利用植物组织的特殊分化能力，通过组织再生和分化形成新的植物个体。

常用的组织培养技术有悬浮培养、植株培养和愈伤组织培养等。

1.2 茎段扦插茎段扦插是将茎段插入培养基中，利用茎段的再生和分化能力形成新的植株。

通过茎段扦插可以实现大量繁殖和快速繁殖。

1.3 芽分化芽分化是通过芽的再生和分化来实现植物克隆。

可以通过不定芽发生或唇瓣调控等方式实现芽的形成，再通过培养和分化形成新的植株。

1.4 子种子繁殖子种子繁殖是指利用种子体内的胚乳、胚尖或胚乳的一部分进行培养和再生形成植株。

子种子繁殖可以避免传统种子繁殖过程中的性别的随机分化。

2. 植物克隆的技术应用植物克隆技术在农业、园林、医药等领域有着广泛的应用。

以下是植物克隆技术的一些主要应用：2.1 农业领域植物克隆技术可以用于农作物的繁殖和改良。

通过植物克隆，可以快速繁殖优良的经济作物，提高农作物的产量和质量。

另外，还可以利用植物克隆技术进行基因工程，创造抗病虫害、耐逆性强的农作物品种。

2.2 园林景观设计植物克隆技术可以用于园林景观设计，通过无性繁殖，可以制作出大规模相同的植物个体，保持园林景观的一致性和美观性。

同时，植物克隆技术还可以用于保存和繁殖珍稀濒危植物种类，保护自然生态环境。

2.3 医药领域植物克隆技术在医药领域有着重要的应用价值。

通过植物克隆，可以快速繁殖药用植物，以满足大规模生产药物的需求。

例如，通过植物克隆可以大量生产出重要的药用植物如中药材，提高中药的疗效和临床应用。

2.4 研究基因功能植物克隆技术可以用于研究植物的基因功能，通过对克隆植物的比较和分析，可以深入了解植物的基因调控机制和信号转导途径，为植物遗传学和植物生理学的研究提供了重要手段。

高三生物克隆技术试题答案及解析

高三生物克隆技术试题答案及解析1.下图表示菊花的嫩枝和月季的花药离体培养过程，请据图回答下面的问题。

（1）对菊花来说，要选取的嫩枝来进行组织培养。

对月季来说，小孢子母细胞形成精子首先要经过“小孢子四分体时期”，这里的“四分体”是指________________。

为确定该花粉是否处于该时期，最常用的方法是。

（2）在培养嫩枝组织和花粉的培养基中都要加入一定的植物激素，常用的植物激素有。

（3）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。

若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌。

为了避免微生物对培养造成的影响，所以在进行接种时应注意。

①接种室要消毒②只要戴口罩，操作时便可说话③外植体可预先用体积分数为70%的酒精浸泡，取出用无菌水冲洗后，再用0．1%的氯化汞溶液消毒，并用无菌水冲洗干净④接种操作要在酒精灯火焰旁进行⑤接种完毕应立即盖好瓶盖A．①②③④⑤B．①②③④C．①③④⑤D．②③④⑤（4）进行菊花组织培养的基本实验操作步骤是：制备MS固体培养基、________、接种、培养、移栽、栽培。

（5）不同植物对各种条件的要求往往不同，进行菊花组织培养一般将温度控制在℃，并且对光照的控制为【答案】（1）生长旺盛四个小孢子连在一起醋酸洋红法（2）细胞分裂素和生长素（3）酚红 C（4）外植体消毒（5）18-22 每天12小时光照【解析】（1）因为生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化，所以对菊花来说，要选取生长旺盛的嫩枝来进行组织培养；对月季来说，小孢子母细胞形成精子首先要经过“小孢子四分体时期”，这里的“四分体”是指四个小孢子连在一起。

确定该花粉发育时期的最常用的方法有醋酸洋红法．（2）决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要．因此在培养嫩枝组织和花粉的培养基中都要加入细胞分裂素和生长素．（3）在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌。

植物克隆技术

植物克隆技术
植物克隆技术是指通过非性生殖方式繁殖植物，使子代与母体有相同的遗传信息。

常用的植物克隆技术有以下几种：
1. 剪接：将一段健康植物的茎或叶片插入培养基中，通过分裂再生形成新的植物。

2. 组织培养：将植物的一小段组织（如茎尖、花器官等）放入含有植物激素的培养基中，培养出新的植株。

3. 胚胎培养：从植物的胚胎中取出细胞，通过体外培养让其分化为新的植株。

4. 种子分离：通过人工处理种子，使其发育成为植株。

植物克隆技术可以用于繁殖精良的杂交品种、保存稀有植物、加速苗木生产以及修复受损环境等方面。

然而，植物克隆也存在一些问题，比如由于缺乏遗传多样性，植物容易受到疾病和逆境的侵袭。

植物的克隆

以诱导芽的分化. （
）
6.植物细胞工程技术就是在原生质体培养的基础上的原生质
体融合技术。
（
）
1、细胞分化是生物界普遍存在的一种生命现象，下列不正确的是
A．分化发生在生物体的整个生命进程中
B．分化是基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果
C．未离体的体细胞不会表现出全能性 D．分化过程中遗传物质发生了改变
① 含N物质：包括维生素和氨基酸 ② 碳源：2%—5%的蔗糖 ③ 琼脂：起支持作用 • 激素：生长素，细胞分裂素和赤霉素 • PH值： 5.0－6.0 ②切取小组织块（消毒的根茎叶芽）
——外植体 ③接种，获得愈伤组织（创伤组织）
④诱导愈伤组织，再生出新植株
条件：
• 含有全部营养成分的培养基、 • 无菌环境、 • 适合的PH、 • 一定的温度、 • 空气、 • 适时光照等。
2、体现：（1）受精卵的全能性最高
受精卵＞生殖细胞＞体细胞（2）植物细胞的全能性﹥动物细胞（3）不同植物或同一植物的不同基因型
的个体，细胞的全能性表达程度不同。
4、全能性的表达条件：
离体状态、营养物质、激素、其它外界条件
5. 培养物胚胎发生和器官形成能力下降原因？
6. 植物克隆成功的条件：
愈伤组织或创伤组织：
是一种由相对没有分化的活的薄壁细胞团组成的的新生细胞（细胞排列疏松、无规则）。
想一想：产生的愈伤组织细胞与叶细胞相比
（1）染色体的数目是否相同？
相同
（2）染色体上所含的遗传物质是否相同？相同
（3）细胞的形态结构是否相同？不同
愈伤组织胚性细胞胚状体
应用1：
培养过程中，在培养基上需加入蔗糖，培养时需要照光，那么，培养的植物到底是自养型还是异养型？光的作用是什么？对于上述疑问，某研究性学习小组进行了下列实验：一组在培养基中加30%的蔗糖，另一组不加蔗糖，接种后，每组再分成两个小组，分别在光下和暗中培养。1个月后，观察植物体生长、分化情况，结果为下表：

植物分子生物学植物基因的同源克隆PowerPoint 演示文稿

18
植物总RNA提取的难点 1.内外源RNase的污染。 2.多酚类物质的干扰 3.蛋白质的干扰 4.多糖的干扰
19
创造一个无RNase的环境
20
1.器械的消毒：用0.1%DEPC—二乙基焦碳酸盐（Diethyl Pyrocarbonate )浸泡处理2hr以上，然后高压灭菌去除DEPC；或高温（250℃）干热消毒4hr以上或200℃干热消毒过夜。
9
植物DNA提取的难点
1.多酚类物质的干扰:多酚类物质被氧化后，与DNA 分子发生不可逆的结合，使提取的DNA样品呈棕褐色。
2.多糖类物质的干扰：多糖与DNA形成粘稠的胶状复合物，DNA被包埋在这种复合物中难于溶解。
3.其它次生物质的干扰：乳胶、树脂等，与DNA共沉淀。这种褐色、粘稠的DNA不易被限制性内切酶和Taq DNA聚合酶所识别，从而导致PCR扩增和酶切的失败。
29
植物RNA提取过程中蛋白质污染的排除
30
1.在冷冻条件下研磨植物材料，以抑制 RNase的活性。 2.在提取缓冲液中加入蛋白质变性剂（苯酚、胍、SDS、CTAB等）。 3.利用蛋白酶K降解蛋白质。 4.利用苯酚、氯仿抽提。 5.用70%高氯酸钠溶液沉淀蛋白质。
31
植物DNA和RNA的检测
5.研磨时加入大分子聚合物或吸附剂除多酚： PVP、PVPP：2-6.0%（W/V）；活性炭： 0.1-0.3%（W/V）。
13
6.高盐去多糖法：在氯仿/异戊醇的抽提后的水相中加入0.5V的5MNaCl混匀，然后加入2V的无水乙醇沉淀DNA，大部分多糖留在上清液中；在DNA的水溶液中，加入5MNaCl使其终浓度为0.5-3.0M，以2.0M除糖效果最好。
植物基因的同源克隆

植物基因克隆实验总结

2015-2016第二学期生物科学实验（植物基因克隆）实验总结班级：13级生物科学2班学号：1312022005 姓名：邓伟强日期：2016年6月10日一、实验原理及方法：实验原理：基因的克隆就是利用体外重组技术，将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。

基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关系。

通过几十年的努力由于植物发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使人们掌握了大量有关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识，再运用先进的酶学和生物学技术已经克隆出了与植物抗病、抗虫、抗除草剂、抗逆，育性、高蛋白质及与植物发育有关的许多基因。

实验方法及过程：1. CTAB法提取水稻基因组DNA配制CTAB溶液：(2g CTAB ,3.17g Nacl,1mol/L TrisHcl 10ml(PH 8.0),EDTA 4ml,最后定容至100ml.)配制TBE溶液：（24gTrisHcl, 1.488gNa2EDTA.2H2O,11g 硼酸，最后定容至200ml.）2. 配置琼脂糖缓冲液：10×TBE Buffer配制方法：每组需要：称量下列试剂，置于1 L烧杯中Tris：108 gNa2EDTA·2H2O：7.44 g硼酸：55 g向烧杯中加入约800 ml的无菌水，充分搅拌溶解。

加无菌水将溶液定容至1 L后，室温保存。

用时稀释。

3. 开发设计引物LOC_Os02g42310Chromosome 2: 25,442,875-25,450,093OsSCP8 - Putative Serine Carboxypeptidase homologue, expressedOryza sativa JaponicaGCA TA TGTCAACA TCTCA TCTCCGTGTTTCTCTTTAGAAAAAAA TCAGAACGAGAGTAACAAAACACAACTAGAGGACACA TACA TA TGTAGCTGCTCTGAGGCGCCGTCCCAGTCGAAAOryza sativa IndicaGCA TA TGTCAACA TCTCA TCTCCGTGTTTCTCTTTAGAAAAAAA TCAGAACGAGAGTAACAAAACACAACTAGAGGACACA TACA TA TGTAGCTGCTCTGAGGCGCCGTCCCAGTCGAAAOryza sativa JaponicaGCGCCGGAGACGAAGAGTTGGAAAA TTGAAGGGTTGGAAAGTAACTAGCTAGTTTGTTCTCTTTAGGAGAAAGTTTGCACGGTCCAGAGTA TAA TTTGTGGTGCCTCAGTTTTTTGCTA TOryza sativa IndicaGCGCCGGAGACGAAGA-----------------A TTGAAGGGTTGGAAAGTAACTAGCTAGTTTGTTCTCTTTAGGAGAAAGTTTGCACGGTCCAGAGTA TAA TTTGTGGTGCCTCAGTTTTTTGCTA TOLIGO start len tm gc%any3'seqLEFT PRIMER 9 22 59.60 45.45 4.00 0.00 AACATCTCATCTCCGTGTTTC RIGHT PRIMER 168 20 59.77 50.00 5.00 3.00 ACTCTGGACCGTGCAAACTTLength：201 japonica, 193 Indica4. PCR反应体系10×扩增缓冲液：每管：2 ul 共需：24uldNTP混合物：每管：0.8 ul 共需：9.6ul模板DNA ：每管3 ul，共需36ulTaq DNA聚合酶：每管0.3 ul，共需3.6ul引物1、2 ：每管：2 ul（前引物1ul、后引物1ul）共需24ul。

浙江生物高考专题二轮课件专题三第2讲克隆技术和胚胎工程

(2)原代培养和传代培养含义。
①原代培养:从培养,图中属于原代培养的是 ②传代培养:将取出后立即进行的细胞或组织过程。细胞分成若干份,接种到
若干份培养基中,使其继续生长、繁殖,即将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶。提示:①机体丙 ②原代培养
【解析】选C。本题综合考查了动物细胞培养相关操作过程和
3.(2011江苏高考·T18B)受精卵发育到原肠胚阶段才能进行
胚胎移植。 (×)
分析:适于移植的胚胎应是桑椹胚或囊胚,原肠胚不宜进行胚胎移植。 4.(2009浙江高考·T1B)用动植物成体的体细胞进行离体培养都须用液体培养基。 (×)
分析:动物成体的体细胞离体培养用液体培养基,而植物成体的
体细胞离体培养一般用固体培养基。
B.克隆培养法培养过程中多数细胞的基因型会发生改变 C.二倍体细胞的传代培养次数通常是无限的 D.恶性细胞系的细胞可进行传代培养
【解析】选D。动物细胞在培养过程中有接触抑制现象,细胞在
培养瓶中会贴壁生长,形成一层细胞,相互接触后停止生长。克隆培养法培养过程中,仅有极少数细胞的基因型会发生改变。二倍体细胞的传代培养一般传至10代后就不易传下去了。恶性细胞系的细胞具有不死性,可以进行传代培养。
种类有限细胞细胞株连续细胞株
来
源传代次数有限可连续
特
点
通过一定的选择或纯化方法, 从原代培养物
一般具有恒定的染色体组型、同功酶类型、病毒
株
或细胞系中获
得
多次
传代
敏感性和生化特
性等
【变式训练】(2013·丽水模拟)下列关于动物细胞培养的叙述, 正确的是 ( )
A.培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞

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植物体细胞杂交
(1)
植物体细胞杂交过程示意图
(2) (3)
(1) (5)
(4)
植物体细胞杂交过程示意图
植物A细胞去壁植物ห้องสมุดไป่ตู้细胞杂种植株原生质体B 愈伤组织原生质体A
原生质体融合
植物细胞融合
融合体再生壁细胞分裂杂种细胞
植物组织培养去壁的常用方法：酶解法（纤维素酶、果胶酶等）物理法：离心、振动、电刺激等原生质体融合方法：化学法：聚乙二醇（PEG）在克服远源杂交不亲和的障碍、培育作物新品种方面取得了重大突破。
3、全能性的比较
1）受精卵＞生殖细胞＞体细胞 2）植物细胞全能性一般比动物细胞
强
植物组织培养是怎样进行的？
植物组织培养程序
配制培养基接种外植体愈伤组织再分化胚状体再生新植株
营养物质、植物生长调节剂、琼脂等灭菌
经过消毒的根、茎、叶等组织
脱分化激素诱导教材22页第5行定义
适当配比的营养物质和生长调节剂诱导
植物的克隆
通过什么技术来实现？
技术基础：植物组织培养
为什么植物组织可以培养成完整的植物体？
植物细胞具有全能性 1、基本含义：植物体的每个生活细胞都具有遗传上的全能性，因而都具有发育为完整植株的潜能。
2、遗传角度：从理论上讲，每个细胞都包含该物种的全部遗传物质（全部基因），所以每原因
个活细胞都应具有全能性。
具有芽和根的顶端分生组织
愈伤组织诱导生成完整植物还可以通过其他方式吗？愈伤组织放在摇床上通过液体悬浮培养可以分散成适宜的培养基单细胞发育胚状体
植株继续发育
这种单细胞细胞质丰富，液泡小而细胞核大，这是胚性细胞的特征
还可以通过什么方式把植物细胞培养成植物体呢？
去壁
植物细胞
原生质体
植物细胞工程的应用：
1、培育抗性和优质高产作物新品种
2、原生质体的培养结合基因工程操作，也为许多遗传学、植物生理学和细胞生物学问题提供了良好的研究系统。
五、多途径的植物克隆实践
1、将外源遗传物质DNA导入宿主细胞，可以培育出抗逆、高产及优质转基因植株 2、植物细胞培养的其他多种研究和应用广泛开展植物克隆实践的若干事例： 5点，见书本
例：适当的生长素和细胞分裂素配比可以诱导芽的分化；适量的吲哚乙酸及适当减除其他某些激素，则可以诱导生根
根据以上知识，请判断：生长素的比值与根芽分化有何关系细胞分裂素
3、植物细胞培养和器官培养的主要意义：
（1）可以在实验室、试管等器皿中进行植物受精过程和自受精卵进行的植物胚胎发育过程。以及调节控制这些过程的环境因素、遗传基础和分子及生理生化机理研究；（2）可以进行遗传工程的操作，完成与植物生长发育有关的重要基因或影响因素的研究；（3）可以方便地通过实验手段培育植物新品种。
原生质体培养：
为什么？
0.5-0.6mol/L的甘露醇原根尖、叶片、（较高渗透压）生愈伤组织或悬纤维素酶和果胶酶球形的原生质体质浮培养细胞体培养培新植株养与受体外源基转基因植物具有特定性植细胞因导入细胞组培状的新植株物细植物细与基因工程结合起胞胞工程来工程原生质重组植物具有特定性体融合细胞组培状的新植株（植物体细胞杂交）
适当的培养条件
芽和根的分生组织
完整植株完整植株
单细胞（胚性细胞）类似于受精卵发育成胚的过程
适当的液体培养条件
细胞团、球形胚、心形胚和胚状体
有的植物：愈伤组织直接发育花器官（风信子）
2、如何诱导器官发生和组织分化呢？
2、如何诱导器官发生和组织分化呢？主要通过平衡的植物激素配比进行调控
4、长期培养中培养物胚胎发生和器官形成能力下降的可能原因有哪些？见书本23页3点。 5、要获得植物克隆的成功需要什么条件？（1）深入探讨特定植物细胞全能性的表达条件；（满足相应的条件）（2）在植物克隆试验研究中，尽量选择性状优良、细胞全能性表达充分的基因型。
三、细胞培养和器官培养 1、植物克隆的方法有哪几种？愈伤组织
完成课后练习
用适当方法培养
新植株
用什么温和的方法去壁，不会伤害细胞的活性？纤维素酶和果胶酶
二、植物细胞全能性的体现
1、植物体的每个生活细胞，都具有遗传上的全能性吗？为什么？植物体的每个生活细胞，即使是已经高度成熟和分化的细胞，都保持了恢复到分生状态的能力，具有遗传上的全能性。 2、植物组织培养与动物比较哪个方便，为什么？由于植物细胞的全能性更容易体现，植物组织培养比动物更方便。 3、不同种类植物或同种植物的不同基因型个体之间细胞全能性的表达程度相同吗？请举例说明。大不相同，例子见书上。