TSK凝胶色谱法测定头孢地尼中高分子杂质含量_朱美容

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·2011 年 04 月第 21 卷第 04 期· 今日药学
结果表明， 当流动相 A2 中加入 3% 的乙腈， 头孢地 尼对照品溶液色谱峰的峰形得到改善， 柱效提高， 且头 孢地尼主峰保留时间缩短， 头孢地尼主峰与其前的高 分子杂质峰完全分离， 故确定流动相为 0． 05 mol / L 磷 0． 05 mol / L 磷酸氢二钠溶液 － 酸盐缓冲液 （ pH7． 0） ［
测定方法， 选择以下浓度的磷酸盐缓冲液进行试验， 结 果见表 1 。
表1 不同浓度磷酸盐缓冲液为流动相试验结果 A1 38． 889 3． 41 1 549 1． 64 A2 27． 313 3． 32 1 511 1． 51 A3 20． 327 2． 35 1 449 1． 41 流动相 头孢地尼主峰保留时间 （ min） 分离度 理论板数 拖尾因子
表3 不同检测波长高分子杂质测定结果 杂质个数 5 5 5 总峰面积 147 021 166 101 319 626 162 571 043
0． 05 mol / L 磷酸二氢钠溶液（ 61∶ 39） ］－ 乙腈（ 97∶ 3 ） 。 4． 4 检测波长的确定 取供试品溶液 20 μl 进样， 检测器为二极管阵列检 224 和 280 nm ） 记录色谱图。 测器， 在 3 个波长下（ 254 、 结果见表 3 。
朱美容， 张
Determination of High Molecular Weight Impurities in Cefdinir by TSK Gel Permeation Chromatography
ZHU Meirong，ZHANG Li，LIU Junhua，LIU Cui （ Zhuhai United Laboratories Co． ，Ltd，Zhongshan，Guangdong 528467 ，China） Abstract： Objective To establish an HPLC method for the determination of high molecular weight impurities in cefdinir． Methods The TSK GEL 2500PW XL （ 7． 8 mm × 300 mm，TOSOH，Japan） analytical column was used． The mobile phase （ 0． 05 mol / L disodium hydrogen phosphate and 0． 05 mol / L sodium was 0． 05 mol / L phosphate buffer （ pH7． 0 ） ［ dihydrogen phosphate（ 61∶ 39） ］ acetonitrile（ 97∶ 3 ） ． The detective wavelength was 254 nm，and the flow rate was about 0． 8 ml / min． Results Cefdinir had good linearity in the range of 1． 999 ～ 59． 98 μg / ml． RSD was 3． 2% （ n = 6 ） ． Conclusion The established method is simple，specific accurate，reproducible，and reliable． It can be used to determine the high molecular weight impurities in cefdinir． Key words： TSK Gel permeation chromatography； cefdinir； high molecular weight impurities
结果表明， 流动相的离子强度可以影响样品中高 分子杂质与主峰的分离度及保留时间。 在保证分离度 符合要求的前提下， 尽量缩短分析时间。 虽然 A3 流动 相主峰保留时间短， 但高分子杂质与主峰的分离度较 低， 且高分子杂质峰之间的分离度也不高， 综合考虑， 选择 pH7． 0 的 0． 05 mol / L 磷酸盐缓冲液 （ A2 ） 为流动 相进行以下试验。 4． 2 流速的选择 以 0． 05 mol / L 磷酸盐缓冲液 （ pH7． 0 ） 为流动相， 分别以流速为 1． 0 和 0． 8 ml / min 进行试验， 结果均能 使头孢地尼主峰与其前的高分子杂质峰完全分离， 但 当流速为 1． 0 ml / min 时， 色谱柱柱压较高， 为保护色谱 柱， 选择流速为 0． 8 ml / min。 4． 3 流动相的优化 以 0． 05 mol / L 磷酸盐缓冲液 （ pH7． 0 ） 为流动相， 取对照品溶液 20 μl 进样， 记录色谱图。结果色谱峰的 峰形较宽， 柱效低， 为改善峰形， 考虑加入一定比例的 乙腈， 并对乙腈比例进行优化。结果见表 2 。
别注入液相色谱仪， 记录色谱图； 按外标法以峰面积计 算保留时间小于头孢地尼的杂质总量 。
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4． 1
结果与讨论
磷酸盐缓冲液浓度的选择 《中国药典 》 2005 年版二部同类品种聚合物 参考
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仪器与试药
LC10Avp 型高效液相色谱仪 （ 日本 SHIMADZU 公 SPDM10Avp 紫 外 检 测 器 （ 日 本 SHIMADZU 公 司） ， 司） ； AE240 型电 子 天 平 （ 瑞 士 METTLER TOLEDO 公 司） 。 200401 ， 头 孢 地 尼 对 照 品 （ 批 号： 130502含 量： 98. 3% ） 由中国药品生物制品检定所提供； 头孢地尼由 珠海联 邦 制 药 股 份 有 限 公 司 研 制 （ 批 号： 400809001 、 400809002 、 400809003 ） ； 头孢地尼胶囊由日本安斯泰 广州白云山光华制药 来富山株式会社高冈工厂生产， 股份有限公司分装， 商品名为全泽 复 （ 批 号： 2241 ， 规 格： 0． 1 g） 。 乙腈为色谱纯， 水为本公司自制超纯水， 其他各试 剂均为国产分析纯。
头孢地尼为头孢菌素类抗菌药物， 对革兰阳性菌 和革兰阴性菌有广泛的抗菌谱， 临床主要用于治疗呼 ， 该类抗 生素导致过敏反应的原因是药物中存在高分子杂质。 吸系统及泌尿系统感染。 已有研究表明 因此， 控制产品中高分子杂质的含量是减少本品过敏 2005 年版二部同 反应的重要途径。 参考《中国药典 》 ， 10 凝胶色 采用 Sephadex G谱系统测定本品中高分子杂质， 头孢地尼对照品在流 类品种聚合物测定方法
表2 流动相的优化试验结果 A2 28． 674 1 144 1． 56
流动相 头孢地尼主峰保留时间 （ min） 理论板数 拖尾因子
A2 － 乙腈（ 99∶ 1 ） 28． 364 1 128 1． 57
A2 － 乙腈（ 98∶ 2 ） 25． 910 1 441 1． 38
A2 － 乙腈（ 97∶ 3 ） 24． 007 1 511 1． 46
Tel： 076086655310 ， Email： zhumeirong@ 163． com 作者简介：朱美容， 制药工程师，
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Pharmacy Today ·2011 04 Vol． 21 No． 04 ·
孢地尼样品及头孢地尼胶囊市售品中高分子杂质的含 量， 确定了 TSK GEL2500PWXL 凝胶色谱法测定本品高 分子杂质的方法。
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3． 1
测定方法
对照品溶液的制备
取头孢地尼对照品适量， 精密称定， 加流动相溶解 1 ml 20 g 并稀释制成每 中约含 μ 的溶液， 作为对照品 溶液。 3． 2 供试品溶液的制备 取本品适量， 精密称定， 加流动相溶解并稀释制成 每 1 ml 中含头孢地尼 2 mg 的溶液， 作为供试品溶液。 3． 3 测定法 取对照品溶液 20 μl 注入液相色谱仪， 调节检测灵 敏度， 使主 成 分 色 谱 峰 的 峰 高 约 为 满 量 程 的 20% ～ 25%， 再精密量取供试品溶液与对照品溶液各 20 μl， 分
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色谱条件
采用 TSK GEL2500PWXL （ 7． 8 mm × 300 mm， TOSOH， Japan） 色谱柱， 0． 05 以磷酸盐缓冲液（ pH7． 0） ［ mol / L 磷酸氢二钠溶液 － 0． 05 mol / L 磷酸二氢钠溶液 （ 61∶ 39） ］－ 乙腈（ 97∶ 3 ） 为流动相， 流速为 0． 8 ml / min， 检测波长 254 nm， 柱温为 30℃ 。
·2011 年 04 月第 21 卷第 04 期· 今日药学
TSK 凝胶色谱法测定头孢地尼中 高分子杂质含量
莉， 刘俊华， 刘 翠 （ 珠海联邦制药股份有限公司， 广东 中山 528467 ）
摘要：目的 建立 TSK G2500PW XL 凝胶色谱法测定头孢地尼中高分子杂质含量的方法 。方法 采用 TSK GEL2500PW XL 凝胶色谱柱（ 7． 8 mm × 300 mm， TOSOH， Japan） ， 0． 05 mol / L 磷酸氢二钠溶液– 0． 05 mol / L 磷酸二氢钠溶液 （ 61 以 0． 05 mol / L 磷酸盐缓冲液（ pH7． 0） ［ ∶ 39） ］－ 乙腈（ 97∶ 3 ） 为流动相， 检测波长为 254 nm； 流速为 0． 8 ml / min。结果 头孢地尼对照品溶液在 1． 999 ～ 59． 98 μg / ml 浓度范围 内， 溶液浓度和峰面积线性关系良好 。重复性的 RSD 为 3． 2% （ n = 6 ） 。结论 本凝胶色谱法操作简便 ， 专属性强， 重复性好， 结果准确 可靠， 可用于头孢地尼中高分子杂质的测定 。 关键词：TSK 凝胶色谱法； 头孢地尼； 高分子杂质 中图分类号： R927． 2 文献标志码： A 文章编号： 1673 － 4610 （ 2011 ） 04 － 0213 － 04
检测波长（ nm） 224 254 280
主峰面积 146 550 307 100 985 190 162 318 701
总杂面积 470 859 334 436 252 342
总杂含量 （ % ） 0． 32 0． 33 0． 16
结果表明， 不同检测波长检出高分子杂质个数一 致； 以 224 nm 为检测波长， 高分子杂质及主峰响应值 均较高， 但总高分子杂质百分含量与在 254 nm 波长检 出结果基本一致； 以 280 nm 为检测波长， 主成分响应 高分子杂质响应值低， 总高分子杂 质 百 分 含 量 值高， 低。综合考虑， 检测波长选择为 254 nm。 4． 5 溶剂的选择 根据头孢地尼的溶解性， 在磷酸盐缓冲液 （ pH7. 0 ） 中微溶， 在水中不溶。取头孢地尼约 30 mg， 分别用 10 ml 的 pH7． 0 磷酸盐缓冲液（ 《中国药典 》 2005 方法配 0. 1 mol / L 磷酸盐缓冲液（ JP15 方法配制） 及流动相 制） 、
基金项目：2009 年粤港关键领域重点突破项目 （ 编号： TC09B863 － 4 ）
［4 ］ ［1 － 3 ］
动相 B （ 水或 0． 01% 的十二烷基硫酸钠溶液） 中不能完 全缔合， 需选择替代对照品， 以及头孢地尼不溶于水， 在流动相 A （ 不同浓度的磷酸盐缓冲液 ） 中不易被洗 脱， 分析时间过长等问题， 本品高分子杂质测定未见文 ，建 立 了 TSK 献报 道。 为 此，本 文 参 照 文 献 ［5 ］ GEL2500PWXL 凝胶色谱系统分离分析本品高分子杂 质的方法， 以中检所提供的头孢地尼对照品作为对照， ［6 ， 7 ］ ， 采用外标法对高分子杂质进行定量 并考察自制头
0． 1 mol / L 注： 流动相 A1 为 0． 1 mol / L 磷酸盐缓冲液 （ pH7． 0） ［ ； 流动 磷酸氢二钠溶液– 0． 1 mol / L 磷酸二氢钠溶液 （ 61∶ 39 ） ］ 0． 05 mol / L 磷酸氢 相 A2 为 0． 05 mol / L 磷酸盐缓冲液（ pH7． 0） ［ ； 流动相 A3 二钠溶液– 0． 05 mol / L 磷酸二氢钠溶液 （ 61 ∶ 39 ） ］ 0． 025 mol / L 磷酸氢二 为 0． 025 mol / L 磷酸盐缓冲液 （ pH7． 0） ［ 钠溶液 － 0． 025 mol / L 磷酸二氢钠溶液（ 61∶ 39） ］