苯酚-硫酸法测定润和津露的粗多糖含量

张贞良 1, 高 毅 2* , 范积平1, 吕本强 1, 曹 洋 1 ( 11 中国人民解放军第 421医院, 广东广州 510318; 21中国人民解放军杭州疗养院, 浙江杭州 310002)
匀, 沸水浴 2 m in, 冷却, 于 485 nm 处以试剂空白溶 浓缩液和分别缺失苹果浓缩汁、蜂蜜、百砂糖样品的
液为参比, 测定吸光度。
吸光度值, 每批平行测定 3 次, 计算多糖含量。百
214 标准曲线的绘制 量取葡聚糖标准使用液 0、 合、无花果是本品的主要功效性成分, 从实验结果可
0110、0120、0140、0160、0180、1100 m l分 别置于 25 判断, 其粗多糖成分为本品粗多糖的主要来源。而
关键词 粗多糖; 紫外分光光度法; 硫酸-苯酚法; 百合 中图分类号: R 286102 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2007) 11-1470-03
/ 润和津露 0是以无花果、百合、白茅根等药食 两用原料, 配以蜂蜜精制而成。百合含多种活性多 糖, 具有镇静、消炎、抗疲劳、改善呼吸功能、增强机 体免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、降血糖等作 用112; 无 花果主 要 含 有 有 机 酸、生 物 碱、苷 类、多 糖 等 成 分 122, 具有增强免疫、抗肿瘤活性132; 白茅根则主要 含淀粉及糖类, 粗糖类混合物含量高 142, 具有止血、 利尿、抑菌消炎等生理功能152。 / 润和津露 0是以中 医药基础理论为组方依据, 经现代技术提取研制而 成的中草药健康饮料, 实验证明有清热润肺的功效。 1 仪器与材料
表1
五批样品的吸光 度及多糖含量 ( n= 3)
样品批号
01070206103 01070319101 01070320104 01061219102 01060712101
平均 值
多糖含量 (m g /100m l)
401 2
4 21 4
4 01 5
491 6
481 2
441 2
表2
原料样品与辅料缺失 样品的粗多糖含量 ( n= 3)
样品类型
样品
百合浓缩液 无花果浓缩 液 缺苹果样品 缺蜂蜜样品 缺白砂糖样品
多糖含量 (m g /100m l)
441 2
1291 1
1001 5
411 2
391 8
411 9
3 讨论 保健食品的粗多糖测定至今尚无国家标准, 目
前常用的粗多糖检测方法包括硫酸-苯酚法、硫酸蒽酮法及滴定法 162。使用前两种检 测方法测定中
还含有生物碱、皂苷、萜类等活性成分, 可考虑作为 质量控制因素, 有待日后进一步的实验验证。
参 考文 献
[ 1] 周静华, 李芬, 汪祖芳 1 大理百 合中多糖 的提取 与总糖 含量的测定 1 临床和试验医学杂志, 2006, 5( 6): 7351
[ 2] 徐希科, 胡疆, 柳润辉, 等 1 无花 果根化学成分研究 1 药 学服务与研究, 2005, 5( 2): 1381
213 样品处理与测定
连续测定 5次, RSD值为 0139% 。
21311 提取粗多糖: 量取样品 1010 m ,l 置 于 100 216 稳定性实验 准确吸取样品测定液 210 m ,l
m l离心管 中, 加入 40 m l无 水乙 醇, 混 匀, 静置 5 在 5 h内每隔 015 h分别取同一测定液样品, 测定吸
[ 4] 赵国华, 李志孝, 陈宗道 1 百合 多糖的化 学结构 及抗肿 瘤活性 1 食品与生物技术, 2002, 31( 1): 62-661
[ 5] 赵骏, 连娜, 王跃飞, 等 1 AB-8树脂和 D 101树脂纯化桑 叶多糖的比 较 1 天津 中医 学院 学报 , 2003, 22 ( 2): 21221
合多糖 的含 量 1 中 国 中 医药 信 息杂 志, 2004, 11 ( 8 ): 70 4-70 51 [ 8] 张慧芳, 蔡宝吕, 张志杰, 等 1 百合不同炮制品中多糖的 测定 1 中草药, 2006, 37( 11) : 1675-16771
( 2007- 05- 27收稿 )
清热解毒胶囊的质量标准研究
品溶液 分别在 200~ 800 nm 范围内进行全波长扫 m g范围内, 葡聚糖含量与吸光度呈良好线形关系, r
描, 结果显示, 二者均在 485 nm 处有最大吸收, 杂质 = 019996。
无干扰。因此, 本实验选择 485 nm 为测定波长。
215 精密度实验 准确吸取样品测定液 210 m ,l
m in, 以 3000 r /m in离心 5 m in, 弃去上清液。残渣用 光度, 结果显示, 样品测定液在 5 h内稳定, RSD 值
80% 乙醇溶液 15 m l洗涤, 离心后弃去上清液, 重复 为 217% 。
操作 3次。残渣用水溶解并定容至 10 m ,l 混匀。
217 加样回收实验 称取 513 mg 葡聚糖对照品,
[ 3] 莫少红 1 无花果 研究进展 1 基层中药杂志, 1998, 12( 2) 54-5 51
[ 4] 王明雷, 王素贤, 孙启时, 等 1 白茅根化学 成分的研 究 1
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中 药 材 Journa l of Ch inese M edicina lM ater ia ls 第 30卷第 11期 2007年 11月
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结果表明, 树脂在重复使用 3次后, 其吸附性能 大为减弱, 故确定最佳的重复利用次数为 3次。 213 多糖纯化工艺的扩大化考察 将净化好的树 脂装柱。将浓度为 013 g /m l的样品溶液上样, 共上 样 3500 g桑叶。本实验扩大 48 倍, 纯化得到淡黄 色多糖粉末 60 g, 产率 1172% 。 3 讨论 311 以葡萄糖为对照品绘制曲线, 计算桑叶多糖 含量, 对桑叶多糖进行水解纸层析分析, 使用的展开 剂为正丁醇-吡啶-水 ( 6B4B3 ), 显色剂为苯胺-邻苯 二甲酸。结果显示, 多糖组分中含有阿拉伯糖、鼠李 糖、葡萄糖、果糖。所以选用葡萄糖为标准品。 312 在多糖纯化时, 首先考虑筛选一种合适的树 脂。因为多 糖为 极性物 质, 故考 虑采 用非极 性的 D101型和弱极性的 AB-8型大孔吸附树脂来吸附多 糖中的杂质。实验表明, 弱极性的 AB-8 型大孔吸 附树脂对多糖的纯化效果更好。 313 本实验确定的桑叶多糖纯化条件为采用 AB-
样品为南方 李锦 记有限 公司生 产的 / 润和 津 露 0成品, 棕 褐色液 体, 批 号分别 为: 01070206103、 01070319101、01070320104、01061219102、01060712101。 2 方法与结果 211 标准溶液的配制 21111 葡聚糖标准储备液: 称取干燥至恒重的葡 聚糖对照 015000 g, 加水溶解, 定容至 50 m ,l 混匀, 冰箱保存备用。 21112 葡聚糖标准使用液: 量取 110 m l储备液定
m l比色管中, 准确补水至 210 m ,l 加入苯酚溶液 110 苹果、蜂蜜、白砂糖等原辅料 主要含有单糖 及低聚
m ,l 混匀, 再 加入 浓硫 酸 1010 m ,l 混 匀, 沸 水浴 2 糖, 对成品的粗多糖测定影响不大。结果见表 2。
m in, 冷却, 于 485 nm 处以试剂空白溶液为参比, 测
药原料的粗多糖, 常见于文献报道中。而本产品的 主要原料 (如百合 ) , 在文献报道中 则主 11、7、82 要使用 硫酸-苯酚法测定其粗多糖。
实验表明, 使 用硫酸-苯 酚法测 定本品 的粗多 糖, 方法可行。测定 5个批次的产 品, 粗多糖含量 4412 m g / 100m ,l 可为制定该产品的质量标准提供依 据。本品中的主要原料百合、无花果等, 除粗多糖外
参 考文 献
[ 1] 赵骏, 钟蓉, 王洪章, 等 1 桑叶多 糖提取工艺优选 1 中草 药, 2000, 源自文库1( 5): 347-3581
[ 2] 邹盛勤, 陈武 1 桑叶的化学成分、药理活 性及应 用研究 进展 1 林产化工通讯, 2003, 37( 1): 22-251
[ 3] 友田正司 1 生物中生物活性多糖 ( 3) 1 国外医学中医中 药分册, 1990, 12( 5): 201
匀。
4412 m g /100 m ,l RSD 值为 9196% 。结果见表 1。
21313 样品测定: 量取上 21312项终溶液 210 m ,l 219 主要原 料与主要辅料 缺失样品 的测定 按
加入苯酚溶液 110 m ,l 混匀, 加入浓硫酸 1010 m ,l 混 213项下方法, 分别 测定样品、百合浓缩液、无花果
中国药物化学杂志, 1996, 6( 3): 192-1931 [ 5] 全红, 周涛, 方东海, 等 1 白茅根的研究概况 1 中医药学
报, 1999, 1: 60-621 [ 6] 王光亚 1 保健食品功效成分 检测方法 1 北京: 中国轻工
业出版社, 2002: 11 [ 7] 杨林莎, 李玉 贤, 李 明丽, 等 1 苯酚-硫酸 比色 法测定 百
UV-2800型紫外可见分光光度计 ( 尤尼柯上海 仪器有限公司 )。葡聚糖对照品 ( A1R1 ) ( 分子量为 5 @ 105, Sigm a) , 其他 试剂均 为分析 纯。铜 试剂溶 液: 取 310 g 五水硫酸铜、3010 g 柠檬酸钠, 加水溶
解并稀释至 1 L, 混匀, 取 25 m ,l 加水 25 m ,l 混匀, 加 入固体无水 硫酸钠 6125 m l溶解, 当天 配制使 用。 洗涤剂: 取铜试剂溶液、100 g /L 氢氧化钠溶液各 10 m ,l 加水 50 m ,l 混匀, 当天配制使用。苯酚溶液: 称 取 510 g 精制苯酚, 加水溶解并 稀释至 100 m ,l 混 匀, 冰箱保存备用。
21312 沉淀粗多糖: 量取 21311项终溶液 210 m ,l 加入到 1210 m l饮料样品中, 混匀, 按 213项下方法
置于 20 m l离心管中, 加入 100 g /L 氢氧化钠溶液、 进行样品处理及测定, 计算多糖含量。平均回收率
铜试剂溶液各 210 m ,l 沸水浴 2 m in, 冷却, 以 3000 为 9014% , RSD值为 4128% 。
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容至 100 m ,l 混匀, 冰箱保存备用。
定吸光度。以葡聚糖含量 ( m g) 为横坐标, 吸光度值
212 最大吸收波长的选择 将葡聚糖标准液、样 为纵坐标, 绘制 标准曲线。结果显 示, 在 0 ~ 0110
r /m in离心 5 m in, 弃去上清液。残渣用少量洗涤剂 218 样品粗多糖含量测定 按 213项下方法, 分
洗涤, 离心后弃 去上清液, 重复操作 3 次。残渣用 别测定 5批样品的吸光度值, 每批平行测定 3次, 计
10% 硫酸溶液 210 m l溶解并加水定容至 50 m ,l 混 算多糖 含量。结果 显示, 样品 粗多 糖平 均含量 为
8型大孔 吸附树脂, 上样 浓度 013 g /m l( 折合 原药 材 ) , 流速 115 d / s, 上样 量 240 m l ( 柱: 2 cm @ 40 cm )。产率为 119% ~ 117% , 纯化度为 ( 71 ? 2) % 。 树脂可重复使用 3 次。扩大实验良好, 本实验对中 药桑叶的纯化条件是可行的。
( 2007- 07- 18收稿 )
苯酚- 硫酸法测定 / 润和津露 0的粗多糖含量
邹士玉 1, 马方励1, 丁 博 2 ( 11 南方李锦记有限公司研发中心, 广东广州 510665; 21广州中医药大学, 广东广州 510405)
摘要 本实验选用苯酚-硫酸 紫外分光 光度 法测定 / 润和津 露 0的粗 多糖 含量。结 果表明 , 本 测定 方法 可行, / 润和津露 0粗多糖含量为 4412 mg /100m l。实验结果为该产品质量标准的制定提供科学依据。