苯酚-硫酸法测定润和津露的粗多糖含量
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
５．试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量之相礼和热创作1、试剂配制1.浓硫酸：分析纯，95.5%2. 5%苯酚：取苯酚5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用.3.尺度葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖.精确称取20m g经105℃干燥至恒重的葡萄糖尺度品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容.2、制造尺度曲线精确称取尺度葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分别汲取0.2、0.3、0.4、、、、及ml，各以蒸馏水补至1.0ml，然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min当前于490nm测光密度，以1.0ml水按异样显色操纵为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得尺度曲线.1 2 3 4 5 6 7 8 0 尺度葡萄糖溶液0 （mL）蒸馏水（mL）5%苯酚（mL）浓硫酸（mL）3 留意事项（1）此法简单、快速、灵敏、反复性好，对每种糖仅制造一条尺度曲线，颜色持久.（2）制造尺度线宜用相应的尺度多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数.（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成等到次要组分单糖的尺度曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量.光密度值最好在0.1——0.3之间.比方：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定.（5）正常的反应溶液是深棕色.糖越多颜色越深.留意硫酸的纯度.空白的颜色很深，阐明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话阐明你的酚的难度过大，一样平常是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时分颜色很浅，颜色深点也有肯能.操纵的时分有几条你必要留意的，这些对你的检测结果影响极大1、苯酚必要重蒸，配制的苯酚溶液必要妥善保管.2、样品检测的时分，向样品中加了苯酚溶液必要迅速摇匀，加入硫酸基本操纵：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下.3、加完硫酸必要马上摇匀，前提是塞子要配套，不怕烫热、冷水浴，要精确.。
苯酚-硫酸法测多糖含量[新版]
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苯酚-硫酸法测多糖含量000原理000多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
000试剂0001．浓硫酸：分析纯，95.5% 0002． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
0003． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）00 04．标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
0005． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
0006． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
0007． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
0008． 6mol/L 盐酸000操作0001．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
000 2．样品含量测定：000①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
000②离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。
因为其脂肪含量大容易夹带残渣。
）000③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
苯酚-硫酸比色法测定多糖含量
苯酚-硫酸比色法测定多糖含量
苯酚-硫酸法是常用的多糖含量测定方法之一。
该方法基于多糖在硫酸的作用下，与苯酚产生颜色反应的原理，利用光度计测定反应产物的吸收值，从而计算出多糖的含量。
步骤如下：
1. 取样品0.1g，在50ml锥形瓶中加入5ml去离子水，振荡
20min溶解。
2. 加入2ml 5%苯酚水溶液，振荡均匀。
3. 加入5ml浓硫酸，使用磁力搅拌器搅拌1-2min。
4. 将混合物放置在冷水中冷却10min。
5. 用紫外分光光度计在490nm处测定吸光度A，同时以含有相同试验液体积的去离子水为对照。
6. 计算样品中多糖含量。
该方法测定简便，精度高，适用于多糖含量较高的样品。
但此法不能区分多糖的种类及其组成，不能应用于含非多糖的样品中。
硫酸苯酚法测多糖原理
硫酸苯酚法测多糖原理硫酸苯酚法是一种常用的测定多糖含量的方法。
它基于多糖与硫酸在高温下反应生成脱水缩合物的原理。
本文将详细介绍硫酸苯酚法的测定原理及操作步骤。
一、原理多糖与硫酸在高温下反应生成脱水缩合物，同时伴随着苯酚的生成。
苯酚在测定中以红色产物的形式存在，其吸光度与多糖的含量成正比。
因此，通过测定红色产物的吸光度，就可以确定多糖的含量。
二、操作步骤1. 样品处理：将待测的多糖样品溶解于适量的水中，并进行适当的稀释，使得多糖浓度在硫酸苯酚法的线性范围内。
确保样品中没有其他干扰物质的存在。
2. 反应体制：将样品溶液与硫酸苯酚试剂混合，加入适量的浓硫酸，混匀后放置于水浴中加热。
加热时间一般为5-10分钟，加热温度为100-110摄氏度。
3. 冷却与测定：将反应体系冷却至室温后，使用紫外可见光谱仪或分光光度计测量红色产物的吸光度。
根据预先建立的标准曲线，可以计算出多糖的含量。
三、注意事项1. 操作过程中要注意安全，避免与浓硫酸直接接触，避免产生有毒气体。
2. 硫酸苯酚试剂需保存在避光的环境中，避免暴露于阳光下。
3. 加热过程中要控制温度，避免过高温度导致产物分解。
4. 测定前要校准光谱仪或分光光度计，确保准确测量吸光度。
四、优缺点硫酸苯酚法作为一种测定多糖含量的方法，具有以下优点：1. 简单易行：只需准备少量试剂和仪器设备，操作简便。
2. 灵敏度高：对于大多数多糖具有较高的灵敏度，可以检测到低浓度的多糖。
3. 可靠性好：经过多次验证，该方法的准确性和可重复性较高。
然而，硫酸苯酚法也存在一些局限性：1. 只适用于含有醛基的多糖：该方法只对具有醛基的多糖有效，对于其他类型的多糖则不适用。
2. 反应条件严格：反应温度和时间需要严格控制，否则会影响测定结果的准确性。
3. 有干扰物：一些其他物质可能与硫酸苯酚反应产生类似红色产物，从而干扰多糖的测定。
硫酸苯酚法是一种常用的测定多糖含量的方法，其原理基于多糖与硫酸在高温下反应生成脱水缩合物的特性。
苯酚-硫酸法测多糖含量
苯酚-硫酸法测多糖含量原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
试剂1．浓硫酸：分析纯，95.5%2． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）4．标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8． 6mol/L 盐酸操作1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2．样品含量测定：①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
②离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。
因为其脂肪含量大容易夹带残渣。
）③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
④定容取样。
水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。
实验硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求2．测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量3．2．方法原理4．糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
5．3．主要实验仪器及材料6．浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
7．４．掌握要点8．硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
9．５．试剂配制10．1）葡萄糖标准液的配制11．准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
12．2）90%苯酚液的配制13．准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤7.管号 0 1 2 3 4 5 6 78.葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.09.苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.510.浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.011.取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸-苯酚法测多糖含量1. 目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2•方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3•主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
4.掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
5 .试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL,即得90 %苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1标准曲线的制作步骤AvV 口吕号0 1 2 3 4 5 6葡萄糖0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表 2方法在操作，先在冰水浴中加入 0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20mi n, 取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零，在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用 exceL软件求得回归方程2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量 1、试剂配制1. 浓硫酸：分析纯，95.5%2. 5%苯酚：取苯酚5 g ，置100 ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。
3. 标准葡聚糖（Dextr a n,瑞典Pharm a cia ）或分析纯葡萄糖。
准确称取20m g 经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml 容量瓶中，蒸馏水溶解定容。
2、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）10mg 于250ml 容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml ，各以蒸馏水补至1.0ml ，然后加入5%苯酚1ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min 以后于490n m 测光密度，以1.0ml 水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
12 3 4 5 6 7 8 0 标准葡萄糖溶液（mL ） 0.20.30.40.50.60.70.80.9蒸馏水（mL ） 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 5%苯酚（mL ） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸（mL ） 2.52.52.52.52.52.52.52.52.5葡萄糖标准曲线y = 54.353x + 0.0018R 2 = 0.999400.10.20.300.0010.0020.0030.0040.0050.006葡萄糖浓度（mg/ml）吸光值3 注意事项（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg 数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
实验一硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸苯酚法测多糖含量The pony was revised in January 2021实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求? 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2．2．方法原理3．糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
4．3．主要实验仪器及材料5．浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
6．４．掌握要点7．硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
8．５．试剂配制9．1）葡萄糖标准液的配制10．准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
11．2）90%苯酚液的配制12．?准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤7.管号 0? 1 2 3 4 5 6 78.葡萄糖9.10.苯酚液11.浓硫酸?12.取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL 软件求得回归方程13.2）待测样品多糖的测定与计算14.将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
硫酸苯酚法测多糖含量
硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量，如1型。
2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
５．试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存可达半年。
3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6. 实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
硫酸苯酚法测多糖原理
硫酸苯酚法测多糖原理硫酸苯酚法是一种常用的测定多糖含量的方法，其原理是利用硫酸和苯酚与多糖发生反应，在酸性条件下生成有色产物，通过测定产物的吸光度来计算多糖含量。
硫酸苯酚法测多糖的原理及操作步骤如下：1. 原理。
多糖是一类碳水化合物，其分子中含有多个糖基，如葡萄糖、果糖、半乳糖等。
硫酸苯酚法利用硫酸的强酸性和苯酚的还原性，与多糖发生反应生成有色产物，然后通过比色法测定产物的吸光度，从而计算出多糖的含量。
2. 操作步骤。
（1）将待测样品溶解于水中，得到适当浓度的溶液。
（2）取一定量的样品溶液，加入硫酸混合均匀，然后在冰水浴中冷却至4℃左右。
（3）加入苯酚溶液，再次混合均匀，放置在水浴中加热10分钟。
（4）冷却后，用稀释的硫酸稀释至恒定体积，摇匀后，测定产生的有色产物的吸光度。
（5）根据标准曲线，计算出多糖的含量。
3. 注意事项。
（1）在操作过程中要注意安全，硫酸具有强腐蚀性，苯酚具有毒性，操作时需戴防护眼镜和手套。
（2）操作过程中需严格按照操作步骤进行，特别是加入硫酸和苯酚时，要注意避免溅出。
（3）测定吸光度时，要选择合适的波长，并校准好光度计，确保测定结果准确可靠。
4. 应用范围。
硫酸苯酚法测多糖是一种简便、快速、准确的方法，适用于各种多糖的测定，如淀粉、糖类、藻多糖等。
在食品、医药、生物化学等领域有着广泛的应用。
5. 结论。
硫酸苯酚法测多糖原理简单，操作方便，准确可靠，是一种常用的多糖测定方法。
在实际应用中，需要严格按照操作步骤进行，并注意安全和准确性。
通过该方法测定多糖含量，可以为相关领域的研究和生产提供重要的参考数据。
粗多糖测定方法
苯酚-硫酸法测定多糖一、原理：多糖或寡糖在浓硫酸作用下水解产生单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚缩合，生成橙黄色物质，在波长490nm 处和一定浓度范围内，其吸光度与糖浓度呈线性关系，可通过比色法测定其含量。
二、溶液的配制：①80%苯酚储备液：精密称取20.0g苯酚，加入5.0mL蒸馏水，60℃水浴溶解，过滤，备用。
②6%苯酚试剂：由80%的苯酚溶液配制（现用现配）。
③葡萄糖标准溶液的配制：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品12.0mg，置小烧杯中，加蒸馏水溶解，定容至200mL，配成标准葡萄糖浓度为60.0 ug/mL，过滤，备用。
三、标准曲线的绘制：按下表中的配制分别置于20mL具塞试管中，每管加入葡萄糖标准液和水后混匀，加入0.4mL 6%苯酚试剂后，混匀，立即置冰水浴中，加入4.5mL浓硫酸（自然流下），混匀，置于80℃水浴中加热10min，取出水浴冷却10min，于波长492nm处测其吸光度。
以吸光度（A）对葡萄糖浓度（C）作标准曲线。
编号0 1 2 3 4 50 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 标准葡萄糖溶液（mL）蒸馏水（mL） 2.0 1.8 1.4 1.0 0.6 0.2 葡萄糖浓度0 6 18 30 42 54 （ug/mL）6%苯酚（mL）0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 浓硫酸（mL） 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 4.5 总体积(mL) 6.9 6.9 6.9 6.9 6.9 6.9 OD值0.0000 0.1034 0.3258 0.5445 0.7600 0.9812四、样品的测定：按下表添加各溶液，按照标准曲线的测定方法进行测定。
编号空白样品蒸馏水（mL） 2.0 0多糖溶液（mL）0 2.06%苯酚（mL）0.4 0.4浓硫酸（mL） 4.5 4.5总体积(mL) 6.9 6.9\。
苯酚-硫酸法测定多糖的含量
多糖浓度测定及标准曲线谭夕东苯酚-硫酸法1. 对照品的溶液的制备取干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
供试品的溶液的制备精密量取本品50ml，置250ml量瓶中，加30%硫酸锌溶液5ml，在水浴中加热5分钟后，在振摇下立即加入亚铁氰化钾试液5ml，冷却后加水至刻度，摇匀，滤过，弃取初滤液，取续滤液25ml，置500ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
测定方法精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置10ml量瓶中，各加2%苯酚溶液0.5ml，硫酸5ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法测定。
2.标准曲线的绘制：精密称取千燥恒重的葡萄糖100mg，用水溶解并稀释至100ml，备用。
精密吸取备用液10ml加水稀释至100ml定容，得葡萄糖标准液。
精密吸取标准液100、200、…700微升，分别置于试管内，各加水使成2ml，再各加5%苯酚试剂1.0ml，各管迅速滴加浓硫酸5.0ml，立刻摇匀。
沸水加热15分钟，迅速冷却，另取2ml水，同法操作加入试剂作空白对照．用紫外可见分光光度计在入=490nm测定吸光度。
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程海藻酸钠样品1g,用100mL蒸馏水溶解并定容。
壳聚糖溶液的配制：①先将50mL冰醋酸溶于1000mL的蒸馏水中制成5%的乙酸水溶液1000mL待用。
②称取壳聚糖5g溶于500mL5%的乙酸水溶液中配成10g/L的壳聚糖乙酸溶液。
或精密称取壳聚糖40 mg于100 mL量瓶中，用0. 5 mol·L-1’醋酸溶解并定容。
几丁质不溶于水、稀酸、稀碱及绝大部分溶剂中，据目前所知，几丁质仅能溶于少数溶剂，如六氟异丙酮，六氟丙酮水合物、吡咯烷酮的氯化锂溶液，一些氯醇和浓酸等。
1。
苯酚硫酸法测多糖含量
苯酚硫酸法测多糖含量 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】一、硫酸苯酚法测多糖含量1、试剂配制1.浓硫酸：分析纯，%%苯酚：取苯酚5g，置100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。
3.标准葡聚糖（Dextran,Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
准确称取20mg经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容。
2、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取、、、、、、及，各以蒸馏水补至，然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸,摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
1 2 3 4 5 6 7 8 0标准葡萄糖溶液（mL）蒸馏水（mL）5%苯酚（mL）浓硫酸（mL）3注意事项（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
光密度值最好在——之间。
比如：小于之下可以考虑取样品时取2克，仍取样品液，如大于可以减半取的样品液测定。
（5）正常的反应溶液是深棕色。
糖越多颜色越深。
注意硫酸的纯度。
空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。
操作的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。
2、样品检测的时候，向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下。
苯酚硫酸法测多糖原理
苯酚硫酸法测多糖原理
苯酚硫酸法是一种常用的测定多糖含量的方法，其原理是利用苯酚与
硫酸的混合物将多糖分解成糖酸，然后使用精确浓度的碘液进行滴定，通过测算滴定液的消耗量来计算出样品中多糖的含量。
具体实现过程如下：首先将待测样品溶于开水中，加入预先混合的苯
酚-浓硫酸混合物中，然后在混合液中加入恒定浓度的碘液，开始实时记录消耗的滴定液的数量。
当滴定液中的碘消耗完时，混合液将变成
蓝色，这时就可以计算出样品中多糖的含量了。
这种方法的优点是快速方便，可适用于大量样品的测定，且有较高的
灵敏度和准确度，常常用于食品糖的测定以及多糖的生产和质量控制。
虽然苯酚硫酸法测定多糖的原理相对简单，但仍需要在操作时严格控
制实验条件、仔细检查每一步的操作是否正确，以确保测定结果的准
确可靠。
同时还需要注意避免硫酸对人体的危害，做到防护措施上的
全面。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量1、试剂配制1. 浓硫酸：分析纯，95.5%2. 5%苯酚：取苯酚5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。
3. 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
准确称取20m g经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml容量瓶中，蒸馏水溶解定容。
2、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml，各以蒸馏水补至1.0ml，然后加入5%苯酚1ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min以后于490nm测光密度，以1.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
1 2 3 4 5 6 7 8 0 标准葡萄糖溶液0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 （mL）蒸馏水（mL）0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 5%苯酚（mL）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸（mL） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 3 注意事项（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
光密度值最好在0.1——0.3之间。
比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
（5）正常的反应溶液是深棕色。
糖越多颜色越深。
注意硫酸的纯度。
空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色颜色过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。
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m in, 以 3000 r /m in离心 5 m in, 弃去上清液。残渣用 光度, 结果显示, 样品测定液在 5 h内稳定, RSD 值
80% 乙醇溶液 15 m l洗涤, 离心后弃去上清液, 重复 为 217% 。
操作 3次。残渣用水溶解并定容至 10 m ,l 混匀。
217 加样回收实验 称取 513 mg 葡聚糖对照品,
r /m in离心 5 m in, 弃去上清液。残渣用少量洗涤剂 218 样品粗多糖含量测定 按 213项下方法, 分
洗涤, 离心后弃 去上清液, 重复操作 3 次。残渣用 别测定 5批样品的吸光度值, 每批平行测定 3次, 计
10% 硫酸溶液 210 m l溶解并加水定容至 50 m ,l 混 算多糖 含量。结果 显示, 样品 粗多 糖平 均含量 为
UV-2800型紫外可见分光光度计 ( 尤尼柯上海 仪器有限公司 )。葡聚糖对照品 ( A1R1 ) ( 分子量为 5 @ 105, Sigm a) , 其他 试剂均 为分析 纯。铜 试剂溶 液: 取 310 g 五水硫酸铜、3010 g 柠檬酸钠, 加水溶
解并稀释至 1 L, 混匀, 取 25 m ,l 加水 25 m ,l 混匀, 加 入固体无水 硫酸钠 6125 m l溶解, 当天 配制使 用。 洗涤剂: 取铜试剂溶液、100 g /L 氢氧化钠溶液各 10 m ,l 加水 50 m ,l 混匀, 当天配制使用。苯酚溶液: 称 取 510 g 精制苯酚, 加水溶解并 稀释至 100 m ,l 混 匀, 冰箱保存备用。
( 2007- 07- 18收稿 )
苯酚- 硫酸法测定 / 润和津露 0的粗多糖含量
邹士玉 1, 马方励1, 丁 博 2 ( 11 南方李锦记有限公司研发中心, 广东广州 510665; 21广州中医药大学, 广东广州 510405)
摘要 本实验选用苯酚-硫酸 紫外分光 光度 法测定 / 润和津 露 0的粗 多糖 含量。结 果表明 , 本 测定 方法 可行, / 润和津露 0粗多糖含量为 4412 mg /100m l。实验结果为该产品质量标准的制定提供科学依据。
匀。
4412 m g /100 m ,l RSD 值为 9196% 。结果见表 1。
21313 样品测定: 量取上 21312项终溶液 210 m ,l 219 主要原 料与主要辅料 缺失样品 的测定 按
加入苯酚溶液 110 m ,l 混匀, 加入浓硫酸 1010 m ,l 混 213项下方法, 分别 测定样品、百合浓缩液、无花果
还含有生物碱、皂苷、萜类等活性成分, 可考虑作为 质量控制因素, 有待日后进一步的实验验证。
参 考文 献
[ 1] 周静华, 李芬, 汪祖芳 1 大理百 合中多糖 的提取 与总糖 含量的测定 1 临床和试验医学杂志, 2006, 5( 6): 7351
[ 2] 徐希科, 胡疆, 柳润辉, 等 1 无花 果根化学成分研究 1 药 学服务与研究, 2005, 5( 2): 1381
[ 3] 莫少红 1 无花果 研究进展 1 基层中药杂志, 1998, 12( 2) 54-5 51
[ 4] 王明雷, 王素贤, 孙启时, 等 1 白茅根化学 成分的研 究 1
14 72
中 药 材 Journa l of Ch inese M edicina lM ater ia ls 第 30卷第 11期 2007年 11月
匀, 沸水浴 2 m in, 冷却, 于 485 nm 处以试剂空白溶 浓缩液和分别缺失苹果浓缩汁、蜂蜜、百砂糖样品的
液为参比, 测定吸光度。
吸光度值, 每批平行测定 3 次, 计算多糖含量。百
214 标准曲线的绘制 量取葡聚糖标准使用液 0、 合、无花果是本品的主要功效性成分, 从实验结果可
0110、0120、0140、0160、0180、1100 m l分 别置于 25 判断, 其粗多糖成分为本品粗多糖的主要来源。而
21312 沉淀粗多糖: 量取 21311项终溶液 210 m ,l 加入到 1210 m l饮料样品中, 混匀, 按 213项下方法
置于 20 m l离心管中, 加入 100 g /L 氢氧化钠溶液、 进行样品处理及测定, 计算多糖含量。平均回收率
铜试剂溶液各 210 m ,l 沸水浴 2 m in, 冷却, 以 3000 为 9014% , RSD值为 4128% 。
中 药 材 Journa l of Ch inese M edicina lM ater ia ls 第 30卷第 11期 2007年 11月
14 71
容至 100 m ,l 混匀, 冰箱保存备用。
定吸光度。以葡聚糖含量 ( m g) 为横坐标, 吸光度值
212 最大吸收波长的选择 将葡聚糖标准液、样 为纵坐标, 绘制 标准曲线。结果显 示, 在 0 ~ 0110
14 70
中 药 材 Journa l of Ch inese M edicina lM ater ia ls 第 30卷第 11期 2007年 11月
结果表明, 树脂在重复使用 3次后, 其吸附性能 大为减弱, 故确定最佳的重复利用次数为 3次。 213 多糖纯化工艺的扩大化考察 将净化好的树 脂装柱。将浓度为 013 g /m l的样品溶液上样, 共上 样 3500 g桑叶。本实验扩大 48 倍, 纯化得到淡黄 色多糖粉末 60 g, 产率 1172% 。 3 讨论 311 以葡萄糖为对照品绘制曲线, 计算桑叶多糖 含量, 对桑叶多糖进行水解纸层析分析, 使用的展开 剂为正丁醇-吡啶-水 ( 6B4B3 ), 显色剂为苯胺-邻苯 二甲酸。结果显示, 多糖组分中含有阿拉伯糖、鼠李 糖、葡萄糖、果糖。所以选用葡萄糖为标准品。 312 在多糖纯化时, 首先考虑筛选一种合适的树 脂。因为多 糖为 极性物 质, 故考 虑采 用非极 性的 D101型和弱极性的 AB-8型大孔吸附树脂来吸附多 糖中的杂质。实验表明, 弱极性的 AB-8 型大孔吸 附树脂对多糖的纯化效果更好。 313 本实验确定的桑叶多糖纯化条件为采用 AB-
关键词 粗多糖; 紫外分光光度法; 硫酸-苯酚法; 百合 中图分类号: R 286102 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2007) 11-1470-03
/ 润和津露 0是以无花果、百合、白茅根等药食 两用原料, 配以蜂蜜精制而成。百合含多种活性多 糖, 具有镇静、消炎、抗疲劳、改善呼吸功能、增强机 体免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、降血糖等作 用112; 无 花果主 要 含 有 有 机 酸、生 物 碱、苷 类、多 糖 等 成 分 122, 具有增强免疫、抗肿瘤活性132; 白茅根则主要 含淀粉及糖类, 粗糖类混合物含量高 142, 具有止血、 利尿、抑菌消炎等生理功能152。 / 润和津露 0是以中 医药基础理论为组方依据, 经现代技术提取研制而 成的中草药健康饮料, 实验证明有清热润肺的功效。 1 仪器与材料
中国药物化学杂志, 1996, 6( 3): 192-1931 [ 5] 全红, 周涛, 方东海, 等 1 白茅根的研究概况 1 中医药学
报, 1999, 1: 60-621 [ 6] 王光亚 1 保健食品功效成分 检测方法 1 北京: 中国轻工
业出版社, 2002: 11 [ 7] 杨林莎, 李玉 贤, 李 明丽, 等 1 苯酚-硫酸 比色 法测定 百
213 样品处理与测定
连续测定 5次, RSD值为 0139% 。
21311 提取粗多糖: 量取样品 1010 m ,l 置 于 100 216 稳定性实验 准确吸取样品测定液 210 m ,l
m l离心管 中, 加入 40 m l无 水乙 醇, 混 匀, 静置 5 在 5 h内每隔 015 h分别取同一测定液样品, 测定吸
药原料的粗多糖, 常见于文献报道中。而本产品的 主要原料 (如百合 ) , 在文献报道中 则主 11、7、82 要使用 硫酸-苯酚法测定其粗多糖。
实验表明, 使 用硫酸-苯 酚法测 定本品 的粗多 糖, 方法可行。测定 5个批次的产 品, 粗多糖含量 4412 m g / 100m ,l 可为制定该产品的质量标准提供依 据。本品中的主要原料百合、无花果等, 除粗多糖外
样品类型
样品
百合浓缩液 无花果浓缩 液 缺苹果样品 缺蜂蜜样品 缺白砂糖样品
多糖含量 (m g /100m l)
441 2
1291 1
1001 5
411 2
391 8
411 9
3 讨论 保健食品的粗多糖测定至今尚无国家标准, 目
前常用的粗多糖检测方法包括硫酸-苯酚法、硫酸蒽酮法及滴定法 162。使用前两种检 测方法测定中
合多糖 的含 量 1 中 国 中 医药 信 息杂 志, 2004, 11 ( 8 ): 70 4-70 51 [ 8] 张慧芳, 蔡宝吕, 张志杰, 等 1 百合不同炮制品中多糖的 测定 1 中草药, 2006, 37( 11) : 1675-16771
( 2007- 05- 27收稿 )
清热解毒胶囊的质量标准研究
表1
五批样品的吸光 度及多糖含量 ( n= 3)
样品批号
01070206103 01070319101 01070320104 01061219102 01060712101
平均 值
多糖含量 (m g /100m l)
401 2
4 21 4
4 01 5
491 6
481 2
441 2
品为南方 李锦 记有限 公司生 产的 / 润和 津 露 0成品, 棕 褐色液 体, 批 号分别 为: 01070206103、 01070319101、01070320104、01061219102、01060712101。 2 方法与结果 211 标准溶液的配制 21111 葡聚糖标准储备液: 称取干燥至恒重的葡 聚糖对照 015000 g, 加水溶解, 定容至 50 m ,l 混匀, 冰箱保存备用。 21112 葡聚糖标准使用液: 量取 110 m l储备液定