微生物的实验室培养导学案(含答案)教学文案

微生物的实验室培养导学案(含答案)

课题1 微生物的实验室培养

基础知识

一、培养基

1．概念：人们按照微生物对__营养物质_的不同需求，配制出的供其___生长繁殖___的营养基质。

2.种类：按照培养基的物理性质划分

（1）___液体____培养基：配制成的____液体___状态的基质。

（2）__固体______培养基：在_____液体___培养基中加入___凝固剂__，如琼脂后，配制成的____固体___状态的基质，是实验室中最常用的培养基之一，微生物在其上面生长，可形成肉眼可见的_____菌落____。

3.组成成分：各种培养基的具体配方_不同____，但一般都有_____水______、

_____碳源______、_____氮源______、____无机盐_______，此外培养基还需要满足微生物生长对___PH________、_ ___特殊营养物质_______ 以及____氧气_______的需求。

二、无菌技术

获得纯净培养物的关键是_____防止外来杂菌的入侵________。

1．消毒是指使用____较为温和_____的物理方法或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分__ __对人体有害______的微生物（不包括__芽孢__和__孢子____）。实验室常用的消毒方法有____煮沸消毒法______、____巴氏消毒法_____、____化学药剂消毒法

____。 2.灭菌是指使用____强烈_____的理化因素杀死___物体内外所有_____的微生物，包括_____芽孢_____和_____孢子_____。常用的灭菌方法有____灼烧灭菌___、__干热灭菌__、___高压蒸汽灭菌____。

3.实验操作中避免杂菌的污染，主要包括四方面的内容：

（1）对实验操作的__空间____、操作者的___衣着和手_____进行清洁和消毒。

（2）将用于微生物培养的__器皿__、___接种用具____和___培养基____等进行灭菌。

（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在____酒精灯火焰____附近进行。

（4）实验操作时应避免______已经灭菌处理____的材料用具与周围物品相接触。

4.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被_____微生物污染____。使用后的培养基丢弃前一定要进行____灭菌____处理，以免污染环境。

三、分离纯化大肠杆菌

本实验使用的培养基为_____牛肉膏蛋白胨_____培养基。进行大肠杆菌的纯化培养，可分为__ _制备培养基_____和______纯化大肠杆菌_________两个阶段。

1.制备培养基的一般步骤为：_____计算_____、____称量___、_____溶化_____、____灭菌______、_____倒平板______。

2.纯化大肠杆菌：微生物接种最常用的方法是____平板划线法_____和____稀释涂布法____。

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（1）平板划线法通过_____接种环______在琼脂固体培养基表面连续___划线____的操作，将_____聚集_____的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

（2）稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的_____梯度稀释______，然后将不同稀释度的菌液_____分布涂布______到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

3.菌落的概念：_____由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体________。

4.结果分析：

（1）如果接种了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明_______接种符合要求_______；

（2）若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中_______有杂菌未消化

___________；

（3）未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中若长出菌落，则说明____培养基灭菌______不彻底，实验失败。

四、菌种保存

1.对于频繁使用的菌种，可以采用_______临时保藏________的方法。

（1）过程：首先将菌种接种到试管的_______固体斜面培养基上_____，合适温度下培养，菌落长成后，放于____4℃__冰箱中保藏，每隔3—6个月，都要将菌种从旧的培养基上转移到新的培养基上。

（2）缺点：保存时间_____短________，菌种容易被___污染________或产生_____变异____。 2.对于需要长期保存的菌种，可以采用______甘油管藏_______的方法，将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混匀于____-20℃____的冷藏箱内保存。

随堂练习

1．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(C)

①可以用相同的培养基②都需要使用接种针进行接种③都需要在火焰旁进行接种④都可以用来计数活菌

A．①②B．③④ C．①③D．②④

2．下列有关微生物培养与应用的说法正确的是(C)

A．天然培养基是指直接取自自然界不需加工的培养基

B．接种前需对培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手等进行严格的灭菌处理

C．大肠杆菌的纯化培养过程包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段

D．分离分解尿素的细菌时，尿素是培养基中唯一的氮源和碳源

3．下列对灭菌和消毒的理解不正确的是(B)

A．灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B．消毒和灭菌实质上是完全相同的C．接种环用灼烧法灭菌 D．常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法

4．用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是(C)

A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基

C．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D．接种了的选择培养基

5．下列关于微生物的分离和培养的有关叙述，错误的是 (A)

A．微生物培养前，需对培养基进行消毒 B．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度C．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法

D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源

6．三个培养皿中分别加入10 mL不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36 h后，计算菌落数，结果如下表。下列选项正确的是(D)

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